山羊地方性鼻内肿瘤病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor, ENT)是山羊的病毒性传染病,由山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus of goats, ENTV-2)所引起,感染后可以导致山羊的鼻道筛骨上皮细胞发生不可逆的癌变,已在世界范围内广泛存在,对山羊养殖业造成严重的经济损失。为建立快速、准确且能定量分析ENTV-2的检测方法,本研究根据GenBank上发布的ENTV-2 env基因(MT254061.1)保守区域设计引物和TaqMan探针,建立ENTV-2 TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、灵敏性、重复性与临床检测效果进行验证。结果显示,重组质粒标准品模板浓度为6.30×10^(2)~6.30×10^(7) copies·μL^(-1)呈现良好的线性关系,相关系数R^(2)为0.996 5,扩增效率为110%,线性方程的斜率为-2.953,最低检测限度为6.30×10^(1) copies·μL^(-1);组内变异系数和组间变异系数均小于2%,重复性好;与口蹄疫病毒((foot-and-mouth disease virus, FMDV)、小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)、蓝舌病毒(bluetongue virus)、羊内源性逆转录病毒(endogenous retroviruses)等均无交叉反应,表明该方法具有很好的特异性。利用本研究所建立的TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法对29份临床样品进行检测,该方法较普通PCR方法的检出率更高。综上表明,本研究成功建立了ENTV-2 TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法,为ENTV-2的快速诊断和流行病学调查提供技术手段。

肺癌发生发展与肿瘤病毒的关系

肺癌作为全世界癌症相关死亡的主要原因之一,有着多种多样的病理类型,不同病理类型的肺癌与肿瘤病毒的关系也各有差异。病毒在肿瘤的发生发展过程中占有着十分重要的地位,越来越多的肿瘤病毒致癌性及致癌机制被确认,但与肺癌关系密切的肿瘤病毒尚未发现,有关肿瘤病毒在各病理类型肺癌的发病机制中起到的具体作用的研究还较少。本文以肺癌主要亚型:肺腺癌、鳞状细胞癌、肺大细胞癌及小细胞肺癌为例,将常见的肿瘤病毒在肺癌发生发展过程中所起到的作用进行综述。

核基质与肿瘤病毒

核基质对维持细胞核形态结构和功能非常重要 ,在DNA复制、转录 ,RNA加工转运等过程中起支持作用。细胞恶变以及肿瘤细胞由低度变成高度恶性的过程中 ,都会发生恶性转化。多少年来 ,关于恶性转化时细胞核形态及生化改变的分子机理一直未阐明 ,最近这方面的研究取得了显著进展。现就恶性转化过程中 ,核基质与肿瘤病毒的关系 ,以及它自身所发生的生化变化作一阐述 ,这对探讨细胞恶性转化的分子机制有着重要的生物学意义。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒的研制及其应用

建立了快速鉴别诊断鸡肿瘤病的PCR技术 ,研制鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒。应用该试剂盒在两年多时间里 ,对来源于广西养鸡业发达地区的 13 9个鸡群共 5 0 5只病、死鸡的 15 70份肿瘤及可疑肿瘤组织病料进行了检测 ,马立克氏病、网状内皮增生症和禽白血病的阳性率分别为 74.0 6%、11.49%和 6.73 % ,肿瘤病的混合发生率为 16.83 %。结果表明 ,应用PCR技术建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒具有操作简便快捷、结果准确可靠、保存方便等特点 ,不仅适用于临床肿瘤病的鉴别诊断 。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断技术的建立

根据病毒基因组特征,以聚合酶链反应(PCR)为基础,建立一种能快速鉴别马立克氏病(MD)、禽白血病(AL)和网状内皮增生症(RE)3种常见鸡肿瘤病的诊断技术。研究确定以MDV的132 bpr及ALV和REV的LTRs作为PCR扩增的特异性基因片段,改进样品DNA的提取程序,优化PCR及三重PCR的反应条件及参数,并对该诊断技术的特异性、敏感性进行研究。结果表明:建立的诊断技术具有特异、敏感、快速、经济的优点,为开发鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒奠定了基础。

鸡三种肿瘤病在广西的流行病学研究

对采自广西20个鸡场106群鸡的360只病、死鸡共1126份组织样品进行检测。结果马立克氏病的群阳性率为84.91%、个体阳性率为73.33%,网状组织增生症的群阳性率为25.47%、个体阳性率为13.61%,禽白血病的群阳性率为16.98%、个体阳性率8.89%;肿瘤病二重及三重感染率为21.92%;在有肿瘤病变和无肿瘤病变的病例中,马立克氏病的阳性率分别为77.85%和47.17%,其中60日龄以上鸡的阳性检出率显著高于60日龄以下的鸡(P<0.05),对马立克氏病和网状组织增生症而言,腺胃是最理想的检测组织。

恶性肿瘤病人合并感染抗菌药物的应用进展

肿瘤病人随着手术、放疗、化疗和免疫疗法的改善,死亡率逐渐有所下降。但内于细胞毒性药物、放疗及免疫抑制剂的应用,加上手术创伤等因素致使肿瘤病人免疫功能降低,因而肿瘤病人合并感染已成为最常见的死亡原因。抗菌药物在肿瘤病人感染的治疗中日益显示其重要性,本文拟就肿瘤病人合并感染抗菌药物的应用进展作一综述。

山羊地方性鼻内肿瘤病毒Shaanxi株前病毒全基因组克隆及生物信息学分析

为研究山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV)Shaanxi株前病毒全基因组序列,本研究根据Gen Bank中收录的ENTV前病毒基因组序列设计5对引物,通过PCR方法从肿瘤组织中分段扩增获得了ENTV前病毒全基因组的5个片段,测序并分析。结果显示该病毒基因组全长7 275 bp,包含相互重叠的gag-pro-pol-env编码区及5'端非编码区;ENTV Shaanxi株基因组全序列与NC004994.2、AY197548.2、ENTV-SC株(HM104174.1)核苷酸同源性分别为89%、89%、99%。本研究为ENTV的分子生物学特性研究提供资料,为进一步研究其检测方法与致病机理奠定了基础。

肿瘤病患者医院感染的分析与预防措施

目的 探讨肿瘤病患者医院感染的原因和预防措施。方法 对我院 2 0 0 2年 1～ 12月肿瘤科所发生的医院感染 178例进行回顾性统计分析。结果 肿瘤病患者医院感染多见于肺癌、肝癌 ,好发部位为呼吸道、胃肠道、泌尿道 ;引起医院感染常见病原菌为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、克雷伯菌属、白色念珠菌。结论提高机体免疫力、控制内源性感染 ,是预防肿瘤感染的主要措施。

鸡肿瘤病快速鉴别诊断试剂盒及其应用研究

建立快速鉴别诊断鸡肿瘤病的聚合酶链式反应技术并研制成配套的诊断试剂盒。应用该试剂盒及其配套的操作程序 ,在 2 0 0 0年 5月～ 2 0 0 4年 7月检测来源于广西 6个地区 2 0 2个禽群共 6 85羽病、死鸡和火鸡的肿瘤和可疑肿瘤组织病料以及来源于安徽省不同地区的 4 6个鸡群的疑似肿瘤病、死鸡 30 5羽 ;同时 ,检测广西、安徽、山东、河南主要养鸡地区临床表现为生长缓慢、消瘦、贫血、疫苗免疫应答不佳、发病率和死亡率偏高等疑为免疫抑制状态的 15 4个鸡群中的 6 4 4羽病、死鸡。结果 ,在肿瘤和可疑肿瘤病料的检测中 ,马立克氏病、网状内皮增生症和禽白血病的阳性率分别为 5 7.17%、11.84 %和 5 .4 7% ,其中二重、三重混合感染总检测率为 16 .2 5 %。在疑似免疫抑制性疾病病料的检测中 ,3种鸡肿瘤病的阳性率分别为 2 8.2 6 %、7.4 5 %和 4 .19% ,其中二重、三重肿瘤病以及与其它免疫抑制性疾病的混合感染率达 35 .92 %。建立的鸡肿瘤病快速鉴别诊断程序及试剂盒 ,操作简便快捷、结果准确可靠、保存方便、检测成本低 ,适用于临床鸡肿瘤病的鉴别诊断 ,对鸡肿瘤病的流行病学调查、免疫抑制病检测以及兽医检疫有重要价值。

大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)逆转录病毒周期蛋白(OrfA)相互作用蛋白的酵母双杂交筛选

大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤(WDS)在秋季发生春季萎缩的季节性生长特点与大眼狮鲈鱼皮肤肿瘤病毒(WDSV)辅助基因的表达有关.其中辅助基因orfA的表达产物OrfA蛋白可能是1个潜在的肿瘤相关因子,OrfA与细胞周期蛋白cyclin A和cyclin D同源,也被称为逆转录病毒周期蛋白(retroviral-cyclin).为了深入研究OrfA的作用和功能,我们构建了诱饵表达载体pGBKT7-orfA,采用酵母双杂交技术,从HeLa cDNA文库中筛选与其相互的蛋白因子.通过2轮高强度压力的筛选、β-半乳糖苷酶活性验证、回转验证以及测序分析,最终获得了1个与OrfA相互作用的转录因子E2F5.OrfA C端78个氨基酸的多肽或者缺失C端78个氨基酸的OrfA突变体均不能在酵母双杂交系统中与E2F5相互作用.这些发现为进一步研究OrfA在肿瘤萎缩中的功能奠定了基础.

应用PCR技术对家禽病毒性肿瘤病进行鉴别诊断的研究进展

概述聚合酶链反应 (PCR)技术应用于家禽马立克氏病、禽白血病和网状内皮增生症鉴别诊断的研究进展 ,主要内容包括病毒的基因组结构特征 ,各病毒的特异性基因或序列及其 PCR引物的位置和序列 ,以及 PCR技术对肿瘤病特异鉴别诊断的应用。将 PCR技术与其它传统的技术进行比较 ,PCR技术具有敏感性高、特异性好、快速、简便的特点 ,是目前鉴别诊断家禽病毒性肿瘤病最有效的。

2009～2011年广西肉鸡病毒性肿瘤病的检测报告

由马立克氏病病毒（MDV）引起的鸡马立克氏病（MD）、由禽白血病病毒（ALV）引起的禽白血病（AL）和由网状内皮组织增生症病毒（REV）引起的禽网状内皮增生症（RE）都能引起鸡的内脏肿瘤,是常见的临床肿瘤病,且肉眼观察肿瘤形态非常相似,

肿瘤病毒致癌机理的分子生态学

自1988年分子生态学的概念被提出以来,我们相继讨论了“关于病毒生态的几个问题”和几种病毒病的分子生态失调问题。病毒为分子生物,其所在的生态环境,主要限于允许性宿主细胞之内。若处于细胞之外的环境条件下。

山羊地方性鼻内肿瘤病毒的gag基因克隆及分析

安徽省某山羊场内部分羊只发生羊鼻漏,面部一侧肿胀,进行病理剖检观察后,取面部皮下肿瘤组织研磨,提取RNA,用特异性引物通过RT-PCR方法扩增获得目的片段并测序。序列比对分析表明,获得的目的基因和山羊地方性鼻内肿瘤病毒的同源性最高,达99%。结果显示,此羊场的山羊感染了由山羊地方性鼻内肿瘤病毒引起的山羊地方性鼻内肿瘤。

长效核黄素在预防肿瘤病人化疗后口腔溃疡中的作用

目的 观察长效核黄素在全身化疗前应用对口腔溃疡的预防作用及毒副作用。方法 在全身化疗前一次性肌肉注射长效核黄素 15 0mg,每周期化疗后统计口腔溃疡的发生率及其他不良反应 ,共统计 3个周期。结果 除保持口腔清洁、加强骨髓功能的保护以外 ,实验组在每次全身化疗前加用长效核黄素显著地降低了化疗后口腔溃疡发生率 ,在该剂量下未见任何毒副作用。结论 长效核黄素在化疗前应用对口腔溃疡的预防疗效确切 ,在该剂量下未见任何毒副作用。

山羊内源性鼻内肿瘤病毒enENTV-FJ1株全基因组测序及生物信息学分析

为了丰富山羊内源性鼻内肿瘤病毒(enENTV)全基因组序列资源,本研究从1份患羊地方性鼻内肿瘤(ENT)病羊的肾脏中经PCR扩增了1株enENTV全基因组序列,命名为enENTV-FJ1,分别对其全基因组、5’端长末端重复序列(5’LTR)基因、gag基因、env基因及其编码的氨基酸序列进行同源性分析并构建系统进化树,对enENTV的5’LTR进行酶切位点分析,并分析该株病毒的gag、env序列与enENTV、山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)、绵羊鼻内肿瘤病毒1型(ENTV-1)等相关病毒参考株相应序列的差异性。结果显示,enENTV-FJ1基因组结构为LTR-gag-pro-pol-env-LTR,长度为7923 bp;全基因组同源性分析结果显示,enENTV-FJ1株与enENTVCHN1~enENTV-CHN66个参考株的同源性为95.7%~97.3%,同源性最近;与ENTV-2参考株的同源性为87.0%~93.2%;enENTV-FJ1的5’LTR基因序列、gag基因及其编码的氨基酸序列与enENTV参考株相应序列的同源性分别为92.8%~99.1%、92.6%~97.5%、92.2%~97.7%;enENTV-FJ1 env基因及其编码的氨基酸序列与内源性绵羊肺腺瘤病毒(enJSRV)参考株相应序列的同源性分别为93.3%~93.8%、94.3%~94.8%。全基因组进化树结果显示,enENTV-FJ1与enENTV-CHN1~enENTV-CHN6处于同一个进化分支;5’LTR进化树结果显示,enENTV-FJ1株与enENTV-CHN2处于同一进化分支;gag基因进化树结果显示enENTV-FJ1与ENTV-CHN9处于一个小的进化分支,与enENTV-CHN6同处于一个较大的进化分支;env基因进化树结果显示,enENTV-FJ1株与ENTV-2/Spain株处于同一进化分支;所有enENTV的5’LTR区均无ENTV-2参考株所含有的Hpy188Ⅰ、NlaⅣ、MowⅠ这3个酶切位点。gag基因序列分析结果显示,与enJSRV、外源ENTV-2、ENTV-1及绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的gag基因相比,enENTV-FJ1株在697 bp^705 bp有9个核苷酸的插入,该基因编码的氨基酸在aa229~aa232处插入3个脯氨酸。env基因编码的氨基酸结果显示,enENTV-FJ1株与ENTV-2株在aa1~aa7处插入了7个氨基酸(MFVFFRR)。与外源性病毒相比,enENTV-FJ1株在跨膜蛋白(TM)胞质尾区无YXXM基序。上述结果表明,enENTV-FJ1与enENTV属于同种病毒,其5’LTR、gag基因、env基因与来自山羊的ENTV-2病毒株亲缘关系更近;其全基因组序列与外源性ENTV和JSRV的差别主要在5’LTR区、gag基因和env基因。本研究明确了enENTV-FJ1株全基因组序列,为鉴定内外源鼻内肿瘤病毒(ENTV)以及研究ENTV-2的致瘤机制奠定了基础。