^(A)γ-珠蛋白基因启动子区域-114~-102缺失突变导致非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的研究

目的:研究^(A)γ-珠蛋白基因启动子区域-114~-102缺失突变病例的基因突变特点、血液学表型及临床表型。方法:选取2022年3月至2023年12月在广西医科大学第一附属医院检查地中海贫血的病例4例。血红蛋白(Hb)分析仪和血细胞分析仪检测全血样本,分析Hb和血常规。Sanger测序法与荧光PCR熔解曲线法检测γ-珠蛋白基因启动子区突变和β-珠蛋白基因突变。结果:共检出^(A)γ-114~-102缺失杂合子4例,Hb分析显示血红蛋白F(Hb F)水平为11.2%~37.8%,血红蛋白A2(Hb A2)水平为2.0%~3.3%,血常规分析显示Hb水平为67~114 g/L,红细胞计数(RBC)为(2.33~4.1)×10^(12)/L,平均红细胞体积(MCV)为84.02~91.9 fL,平均红细胞血红蛋白(MCH)为27.8~29.7 pg。γ-珠蛋白基因及β-珠蛋白基因突变检测结果表明:4例病例含有^(A)γ-114~-102缺失杂合子,其中2例合并有^(G)γ-158C>T突变杂合子;4例病例均合并有β-珠蛋白基因突变,基因型分别为Codon 41-42(-TTCT)杂合子突变、Codon 41-42(-TTCT)纯合子突变、IVS-Ⅱ-654(C>T)复合Codon 41-42(-TTCT)突变和Codon17(A>T)复合Codon 71-72(+A)突变。结论:首次在中国人群中发现^(A)γ-114~-102缺失杂合子,且复合β-地中海贫血的病例,临床表现为轻度或中度贫血。^(A)γ-114~-102缺失突变导致非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(nd-HPFH),能够减轻β-地中海贫血患者的贫血程度。

外周血胎儿血红蛋白、胎盘生长因子及子宫动脉搏动指数对早发型子痫前期病史患者再次妊娠发病的预测价值

目的探讨外周血胎儿血红蛋白(HbF)、胎盘生长因子(PLGF)及子宫动脉搏动指数(PI)联合检测对有早发型子痫前期病史患者再次妊娠发生早发型子痫前期的预测价值。方法选择2010年1月~2017年8月在唐山市妇幼保健院就诊的有早发型子痫前期病史再次妊娠的患者94例作为研究对象。观察患者血清胎盘生长因子、外周血HbF水平和子宫动脉搏动指数对早发型子痫前期的预测价值。结果94例患者发生早发型子痫21例,发生率为22.34%。早发型子痫前期患者PLGF水平低于非早发型子痫前期患者(P<0.05),HbF和PI水平高于非早发型子痫前期患者(P<0.05)。PLGF阳性或HbF阳性或PI阳性预测子痫前期的敏感度高于单纯PLGF、HbF和PI阳性(P<0.05);PLGF阳性和HbF阳性和PI阳性预测子痫前期的特异性高于单纯PGIF、HbF、PI阳性(P<0.05)。结论PLGF、HbF和PI均阳性作为预测标准有助于降低误诊率,有利于早发型子痫前期的诊断,PLGF、HbF或PI阳性作为预测标准可降低漏诊率,有利于早发型子痫前期的排除。

利用胎儿血红蛋白表型分选、检测母血中胎儿有核红细胞

目的:建立高纯度、高得率、高特异性的分选技术,富集纯化母血中胎儿有核红细胞(FNRBC).方法:70例孕妇外周血,经密度梯度离心初步富集后行血红蛋白γ链免疫组化染色,以显微操作术挑取阳性细胞.采用单细胞PEP-PCR技术检测SRY基因,并进行荧光原位杂交分析.结果:胎儿NRBC具有鲜明的形态学、免疫学特征.每例母血FNRBC数5～27个,平均0.82±0.37/ml.PEP-PCR检测的灵敏度、特异度分别为95.35%、100%.4例FISH结果均与实际核型相符.结论:以γ-血红蛋白为分选标志,结合显微操作技术,可以有效地获取高纯度、高浓度研究模板,保证后继分析的准确性,为无创性产前诊断发展奠定基础.

抗胎儿血红蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的制备和鉴定抗胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)单克隆抗体(mAb),为相关疾病的研究提供支持与工具。方法用脐带血红细胞裂解物免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合制备杂交瘤,经筛选和三次克隆化,从制备的腹水中纯化单克隆抗体。用ELISA以及western blot等方法鉴定单克隆抗体的特性(效价、Ig亚类、特异性以及亲和力)。结果筛选到3株可稳定分泌抗HbF单克隆抗体的杂交瘤细胞6A5、5C8、2C8,腹水效价分别为1×10-6、2×10-6和4×10-6。单抗亚类均为IgG1,抗体亲和力分别为7.8×109、2.2×108和8.6×109。ELISA和western blot结果显示,6A5、5C8、2C8 mAb只与HbF的二聚体特异性结合,与其他类型血红蛋白不发生交叉反应。结论获得3株能特异性识别HbF的高亲和力mAb,可结合二聚体与单体HbF,为临床检测HbF水平及相关研究提供了有效的工具。

胎儿血红蛋白数量性状相关基因的研究进展

胎儿血红蛋白(HbF)是一种主要在胎儿期间大量存在的血红蛋白,但成年后含量极少,然而少量人群及部分镰刀型贫血和地中海贫血患者体内仍保留一定量的HbF,其存在对缓解贫血临床并发症具有重要益处。以往研究已经确定影响HbF数量性状的基因座定位于6q23和2p15,而最新的一系列研究表明,定位于6q23的HBS1L-MYB和2p15的BCL11A与HbF含量关联最高。这些研究一方面有助于理解HbF表达机理,另一方面也为镰刀型贫血的治疗提供了潜在的药物靶点。文章对HbF表达的数量性状相关基因的研究现状及潜在应用进行了综述。

MicroRNAs对胎儿血红蛋白表达的调控作用

微小RNA（microRNAs,miRNAs,miRs）是指一群小于22个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们可以在转录后水平调节靶基因、染色体构象改变、细胞增殖、分化以及凋亡。这些单链RNA分子在细胞质中与其它蛋白结合形成miRNA诱导沉默复合物（miRNA-induced silencing complex,miRISC）,再结合到靶基因mRNA的3’-UTR抑制其翻译,通过这种方式miRs对细胞功能产生巨大影响,参与调节了血液疾病、感染、子宫内膜病变及多种癌症等疾病稳态和病态之间的平衡.

KLF1基因对非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的修饰作用

目的:探讨KLF1基因对非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(HPFH)的修饰作用。方法:选择2017年6月1日至2018年4月30日广西医科大学第一附属医院门诊进行地中海贫血筛查且年龄大于2岁的患者,经血红蛋白(Hb)分析提示胎儿血红蛋白(HbF)升高,且β-地中海贫血基因检测无突变、β珠蛋白基因启动子测序有突变的73例患者进行KLF1基因测序,同时分析其血常规、Hb电泳等表型特征。结果:73例患者中52例有KLF1基因变异,共筛查出8种基因位点突变。有KLF1突变(52例)和无KLF1突变(21例)患者平均红细胞体积(MCV)、HbF、成人血红蛋白A2(HbA2)水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);KLF1基因-251C>G,c.304T>C纯合子(18例)较-251C/G,c.304T/C杂合子(24例)有更高的HbF水平(P<0.05)。结论:KLF1基因与非缺失型HPFH对升高HbF有协同作用;KLF1不同基因型对HbF升高作用不同。

胎儿血红蛋白改善β-珠蛋白生成障碍性贫血携带者贫血程度的研究

目的探讨胎儿血红蛋白(HbF)对携带β-珠蛋白生成障碍性贫血的育龄女性改善贫血程度的作用。方法采集289例基因确诊为β-珠蛋白生成障碍性贫血携带者的深圳地区育龄妇女静脉血,采用高效液相色谱法(HPLC)对HbF进行定量分析,并测定红细胞(RBC)参数,比较HbF增高组与HbF正常组RBC参数的差异,同时对HbF高表达率与基因突变类型的关系进行分析。结果与HbF正常组比较,HbF增高组血红蛋白(HGB)水平、红细胞平均体积(MCV)和红细胞平均血红蛋白含量(MCH)增高,RBC计数降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而两组红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)和红细胞体积分布宽度变异系数(RDW-CV)比较差异均无统计学意义(P>0.05);不同基因突变类型HbF高表达率与总体HbF高表达率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论携带β-珠蛋白生成障碍性贫血的育龄女性中HbF增高者较HbF正常者的贫血程度明显改善,且基因突变类型与HbF高表达无关。

高胎儿血红蛋白型β-地中海贫血一例及家系调查

高胎儿血红蛋白型β-地中海贫血国内尚未见报告,我们在血液专科门诊中发现1例,经实验室检查确诊,并进行了详细的家系调查,现报告如下。患儿,女,5岁,汉族,江苏省吴县人。

非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征的研究

目的:探讨广西地区非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(non-deletional hereditary persistence of fetal hemoglo-bin,nd-HPFH)的基因突变和临床表型特点。方法:对2011年12月至2012年6月在广西医科大学第一附属医院就诊的患者进行血常规检测;应用高效液相色谱法进行Hb分析;应用DNA测序方法分析g珠蛋白基因突变;用反向斑点杂交和Gap-PCR方法检测地中海贫血基因突变。结果:在胎儿血红蛋白(Hb F)增高的病例中检测出6例Ag-158C→T突变杂合子,其中有5例合并Gg-158C→T突变,1例同时伴有杂合子β地中海贫血CD 41/42突变,1例伴有-α3.7缺失型α地中海贫血。血常规检测显示6例病例的Hb为108～129g/L,MCV 66.4～85.4fL,MCH为23.4～30.7pg。血红蛋白分析结果显示Hb F均升高,为4%～18%。5例Hb A2正常,1例复合β地中海贫血杂合子的Hb A2为5.7%。结论:首次在中国人群中检出Ag-158C→T突变导致nd-HPFH,其杂合子无临床症状,Hb F升高,血常规正常或MCV、MCH降低。当合并杂合子β地中海贫血或α地中海贫血时,MCV,MCH降低。

药物诱导胎儿血红蛋白(HbF)治疗β地中海贫血研究进展

地中海贫血是β珠蛋白基因缺陷所致的遗传性血红蛋白病,近年的研究重新提及了药物诱导胎儿血红蛋白(HbF)的治疗意义,主要通过增加γ链的表达,减轻α、β链的不平衡,从而改善贫血严重程度。药物试验,如羟基脲、沙利度胺和地西他滨,均显示治疗后血红蛋白升高,输血依赖降低,贫血以外的症状减轻。另外,体外实验则提示,其他药物亦具有诱导HbF的潜能,这为安全有效的HbF诱导剂提供了重要线索。本文就目前的研究进展作一综述,以期有助于临床治疗。

广西重型β地中海贫血HBS1L-MYB基因多态性与胎儿血红蛋白的相关性研究

目的研究HBS1L-MYB基因rs35959442、rs4895441和rs9399137位点多态性与胎儿血红蛋白(Hb F)的相关性。方法通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性,DNA测序技术检测广西籍64例重型β地中海贫血患者(病例组)及64例健康对照组HBS1L-MYB基因rs35959442、rs4895441和rs9399137位点多态性,并分析它们与Hb F水平的相关性。结果病例组HBS1L-MYB基因rs4895441和rs35959442位点G等位基因频率均明显高于健康对照组(P<0.05),而两组rs9399137位点等位基因频率及基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。rs4895441位点、rs35959442位点与Hb F水平呈正相关关系(P<0.0167),rs9399137位点与Hb F无相关关系(P>0.0167)。结论广西重型地中海贫血HBS1L-MYB基因多态性与Hb F水平有关,rs35959442和rs4895441位点基因突变可能有助于提高Hb F的水平。

BCL11A在胎儿血红蛋白表达调控中的作用

人类血红蛋白在个体发育不同阶段有种类和数量上的变化,这些变化使红细胞功能得以很好地适应各时期的生理需要.珠蛋白肽链编码基因的选择性表达决定血红蛋白合成的种类和数量.

广西重型β-地中海贫血BCL11A基因多态性与胎儿血红蛋白的相关性研究

目的:探讨我国广西重型β-地中海贫血(地贫)BCL11A基因rs11886868、rs1427407及rs766432多态性与其胎儿血红蛋白(HbF)水平的相关关系。方法:应用PCR扩增、PCR-RFLP及DNA测序技术,对我国广西重型β-地贫患者BCL11A基因3个位点多态性检测并统计基因型频率,分析上述位点与正常对照者分布频率的差异,并分析重型β-地贫患者三位点多态性与HbF水平的相关关系。结果:重型β-地贫组BCL11A基因rs1427407和rs766432位点突变基因的频率明显高于正常对照组(均P<0.001),rs11886868位点各基因型分布两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在重型β-地贫患者中,基因型分布与3个多态性位点有较大关联(P<0.001,Cp=0.497)。rs11886868位点基因型与HbF水平无相关性(P>0.05),rs1427407和rs766432与HbF水平有关(rp=0.931,P<0.001;rp=0.915,P<0.001)。结论:重型β-地贫患者BCL11A基因基因多态性与HbF水平有关,rs1427407和rs766432位点基因突变可能提高HbF水平。

非缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征复合β地中海贫血的研究进展

遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征（hereditary persis-tence of fetal hemoglobin，HPFH）是由于β珠蛋白基因簇中DNA序列的碱基替换或缺失导致出生后胎儿血红蛋白（fetal hemoglobin，HbF）持续增高的遗传性血红蛋白病［1］。 HPFH可分为缺失型HPFH和非缺失型HPFH（nd-HPFH）。 nd-HPFH是由于γ珠蛋白基因启动子区点突变或小片段缺失所致［2］。正常成人体内血红蛋白主要是HbA，HbF含量小于总血红蛋白的1％［3］。β地中海贫血（β地贫）是由于β珠蛋白基因缺陷或缺失使β珠蛋白肽链合成减少或缺如，导致血红蛋白组分改变的遗传性溶血性贫血，可分为轻型、中间型和重型，临床表现从几乎无症状到严重贫血［4－5］。 nd-HPFH复合β地贫的HbF明显升高，高水平HbF可通过平衡珠蛋白链合成而改善贫血症状［6］。广西、广东等南方地区是国内β地贫高发区，本文就nd-HPFH复合β地贫的基因突变类型和临床表现作一综述，为β地贫诊治提供理论依据。

双抗体夹心ELISA检测人胎儿血红蛋白体系的建立

目的建立一种定量检测人胎儿血红蛋白(HbF)的双抗体夹心ELISA方法。方法用抗人HbF单抗作为捕获抗体,加入待测抗原,检测抗体为兔抗人HbF多克隆抗体,最后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG。结果本检测体系灵敏度约为0.039μg/ml,测量范围0.039-24.66μg/ml,特异性强,重复性好,100份血标本的检测结果与高效液相色谱法结果符合率高。结论建立了一种可用于检测人外周血HbF的双抗体夹心ELISA方法,有望为临床上诊断某些与HbF有关的疾病提供帮助。

贵州地区57例遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症遗传因素分析

目的探讨遗传性持续性胎儿血红蛋白增高症(HPFH)患者存在的珠蛋白基因突变类型及相关单核苷酸多态性(SNP)位点的基因型,分析HPFH中血红蛋白F(HbF)水平升高的分子机制。方法收集HPFH标本,提取全血基因组DNA,采用Gap-PCR检测常见缺失型HPFH;采用PCR扩增与HbF水平升高相关的SNP位点,Sanger测序进行基因分型检测。结果57份HPFH标本中,缺失型HPFH复合β珠蛋白生成障碍性贫血2份(均为SEA-HPFH/CD17);在非缺失型HPFH标本和对照标本中,rs4671393、rs3817621位点基因型分布比较,差异有统计学意义(P<0.05),rs7482144、rs4527238、rs28384513、rs9399137、rs2072597、rs117351327、rs10128556等SNP位点基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SEA-HPFH/CD17、BCL11A基因rs4671393和KLF1基因rs3817621位点多态性可能是导致HPFH发生的遗传因素之一。

胎儿血红蛋白的表达调控

胎儿血红蛋白是胎儿体内主要的血红蛋白类型,是由两条α肽链和两条γ肽链组成的四聚体。出生后胎儿血红蛋白在人体中的表达急剧降低至1%,由两条α肽链和两条β肽链组成的成人血红蛋白取而代之成为主要的血红蛋白类型。β地中海贫血和镰刀型细胞贫血发病原因均基于β-珠蛋白基因发生突变,致使β-珠蛋白合成不足或异常,进而引起一系列临床症状。诸多实验结果及临床疗效表明,提高患者体内γ-珠蛋白的表达可部分替代异常β-珠蛋白从而有效缓解患者的临床症状。随着基因治疗的发展,如何安全高效的再激活胎儿血红蛋白的表达成为治疗β型地中海贫血和镰刀型细胞贫血患者的重要科学命题。本文重点回顾近年来γ-珠蛋白表达的调控机制,以期对寻找更加有效激活胎儿血红蛋白的方法提供参考。

血清胎儿血红蛋白/总血红蛋白比值作为预测子痫前期患病风险的价值

目的 :检测正常妊娠和子痫前期孕妇在早期妊娠时血清胎儿血红蛋白(HbF)、总血红蛋白(HbT)水平,探讨母血HbF/HbT比值是否可作为预测孕妇发生子痫前期的标志物。方法:ELISA检测38例正常妊娠妇女、51例子痫前期孕妇妊娠早期血清HbF和HbT水平,比较两组血清HbF和HbT的水平。结果:子痫前期组血清HbF浓度明显高于正常妊娠组[(1.41±0.92)μg/L vs(0.53±0.76)μg/L,P<0.01)];血清HbF/HbT明显高于正常妊娠组(0.008 1±0.005 2 vs 0.002 5±0.001 6,P<0.01)。在妊娠早期,HbF/HbT比值>0.003 0时,预测子痫前期的敏感性为82.4%,特异性为78.9%。结论:妊娠早期血清HbF/HbT比值可以作为预测子痫前期的标志物。