混合稀土常乐对孕鼠胚胎细胞的DNA损伤作用

为评估农用稀土常乐对人体胚胎的影响 ,采用微核试验和单细胞凝胶电泳技术检测混合稀土常乐能否通过胎盘屏障造成胎儿细胞DNA损伤。于雌鼠妊娠第六天开始染毒 ,每天分别以 0 .3 ,2 ,5和 2 0mg·kg- 1 混合稀土常乐灌胃 ,直至妊娠第 18d。结果显示 :除 0 3mg·kg- 1 剂量组外 ,其他各剂量组微核细胞率显著高于对照组 ,呈剂量—反应关系。单细胞凝胶电泳结果显示 ,随着染毒剂量的增加 ,彗星细胞率增加 ,也呈剂量—反应关系 ,由此得出结论 :农用稀土常乐在 2 ,5和 2 0mg·kg- 1 剂量下可不同程度地通过胎盘屏障 ,并引起胚胎肝细胞和多染红细胞DNA损伤。

甲基丙烯酸环氧丙酯对金仓鼠胚胎细胞的转化作用

应用金仓鼠胚胎（ＳＨＥ）细胞的转化试验的结果表明：当甲基丙烯酸环氧丙酯（ＧＭＡ）浓度在０．９～１４．２ｍｇ／Ｌ时，可诱发细胞的形态学转化，转化率范围是（０．８４～２．１８）×１０－５，最高的转化率与阳性对照３－甲基胆蒽（ＭＣＡ）转化率相近并呈剂量－效应关系；转化细胞对刀豆素凝集反应的能力增强；有在软琼脂中形成集落的能力。形态学转化的细胞已获得恶性转化的特征。

家兔胚胎细胞核移植的研究

兔超排后收集卵母细胞和１６细胞胚，以Ｍｃ－Ｇｒａｔｈ－Ｓｏｌｔｅｒ和Ｗｉｌｌａｄｓｅｎ两种去（注）核方法，将１６细胞胚细胞核经电融合植入去核成熟卵母细胞内，经体外培养或中间受体培养，使移核胚发育．结果表明：（１）兔胚核移植中上述两种去（注）法的成功率无差异；（２）ｈｃＧ注射后１３～１５ｈ，６７．８％的卵母细胞保留有第一极体；（３）强度为０．６３ｋＶ／ｃｍ，持续１６０μｓ的一次电脉冲可使７０．８％的注核胚融合，同样的电脉冲刺激卵母细胞的活化率为６１．１％；（４）兔移核胚在中间受体内或体外均可发育，在中间受体内有２３．０％可以发育到桑椹胚或囊胚．

小鼠早期胚胎细胞超薄切片制备法

[目的 ]探讨小鼠早期胚胎细胞超薄切片的制备方法 ,观察不同时期小鼠早期胚胎细胞的超微结构变化。 [方法 ]在体视显微镜下固定、清洗小鼠早期胚胎细胞 ,3%～ 4 %琼脂预包埋 ,常规脱水、渗透、包埋 ,超薄切片后 ,透射电镜下观察。 [结果 ]准确性高 ,只需几个胚胎细胞即能做出超薄切片。 [结论

家蚕胚胎细胞系BmE-SWU2的建立及其生物学特性研究

家蚕反转期胚胎组织经过一年多的原代培养,建立了BmE-SWU2细胞系。该细胞系细胞呈短梭形或圆形,细胞较小,属上皮型贴壁生长细胞系;细胞生长速度快,铺平率高于80%,繁殖力强,细胞群体倍增时间为51·8h。BmE-SWU2细胞系的二倍体细胞(2n=56)比例达到89·76%,属二倍体细胞系,其染色体具有鳞翅目昆虫染色体的典型特征,中期染色体呈短杆状或颗粒状。BmE-SWU2细胞系对BmNPV高度敏感,TCID50为1·581×10-7。

影响家蝇胚胎细胞系建立的相关因素研究

目的探讨家蝇胚胎细胞系建立的影响因素。方法取不同发育时间的家蝇卵(胚胎),用不同培养基将细胞培养于玻璃培养瓶和塑料培养瓶中,观察细胞生长。结果产出约6h的家蝇胚胎细胞能生长增殖,并成功建立贴壁生长细胞。其它时间段产出卵的家蝇胚胎不能建立贴壁细胞;家蝇胚胎细胞在TC-199培养基中不能生长,在TC-199加酵母提取液和水解乳蛋白的培养基中,家蝇胚胎细胞生长缓慢。在M3培养基中迅速生长,其中在15%胎牛血清(FBS)、20%FBS的M3培养基中,细胞生长迅速并可传代。细胞在玻璃培养瓶中不能贴壁生长,而在塑料培养瓶中能迅速贴壁生长。结论取产出后约6h的家蝇胚胎细胞接种于含15%～20%FBS的M3培养基的塑料培养瓶中,家蝇胚胎细胞能贴壁生长,成功传代。

电压敏感染料DiBAC4(3)用于检测胚胎细胞膜电位变化的研究

目的:探讨电压敏感染料DiBAC4(3)用于检测胚胎细胞膜电位变化的可行性。方法:分别取单细胞期胚胎、二细胞期胚胎、囊胚期胚胎,用M16孵育0.5 h后加入终浓度5μmol/L的DiBAC4(3)溶液,每隔10min在荧光显微镜下或激光共聚焦显微镜下观察胚胎细胞荧光强度变化,0.5 h后实验组加入终浓度100mmol/L的KCL溶液,对照组加入与KCL溶液等量的M16,每隔5 min观察胚胎细胞荧光强度变化。结果:每个时期的胚胎细胞都可以被DiBAC4(3)染色,没加KCL前半小时荧光强度随时间缓慢增强,加KCL后即刻荧光强度显著增强,且在15 min内荧光强度随时间增强。结论:电压敏感染料DiBAC4(3)可以用于胚胎细胞膜电位变化的检测。

猪2-细胞胚胎细胞的电融合

为了探索猪胚胎细胞核移植技术中细胞融合参数，进行了猪２－细胞胚胎细胞的电融合。电融合时，直流电场强度为２ｋＶ／ｃｍ，脉冲时程选４０μｓ时，可获得７０．４％的融合率和６８．４％的发育率。非电解质融合液（甘露醇）对于融合率和融合胚的发育均优于电解质融合液（ＤＰＢＳ）。在直流电脉冲前的交流脉冲是必要的，可以显著提高融合率（Ｐ＜０．０５）。

印楝素对小菜蛾胚胎细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨印楝素对小菜蛾Plutella xyllostella胚胎细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。【方法】将体外培养的小菜蛾胚胎细胞分为印楝素处理组和未处理组,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖的抑制率,激光共聚焦镜检PI染色后的细胞死亡和DAPI染色后的凋亡小体,通过Western-blotting检测各组细胞Caspase-3的表达情况以及通路蛋白Akt的磷酸化水平。【结果】印楝素对小菜蛾胚胎细胞有明显的增殖抑制作用,且呈现浓度依赖性,24 h的IC_(50)为4.4μg·mL^(-1)。印楝素处理后的细胞经PI染色后能明显观察到死亡细胞,DAPI染色后可见凋亡小体;Caspase-3蛋白发生剪切,并且抑制Akt的磷酸化水平。【结论】印楝素对小菜蛾胚胎细胞的增殖有明显的抑制作用,并通过抑制Akt信号通路的活化,诱导细胞产生依赖于Caspase-3的Ⅰ型凋亡。

紫外线诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1的凋亡研究

UVB诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1不同时间后,用四氮唑盐法(MTT)和Hoechst染色及DNA-Ladder法分别检查BmE-SWU1细胞的增殖活性和凋亡情况.该实验研究了紫外线诱导对家蚕胚胎细胞BmE-SWU1凋亡的影响,建立了紫外线诱导家蚕细胞凋亡的简单模型,为家蚕变态发育过程中细胞凋亡的研究奠定了基础.结果表明:UVB处理家蚕BmE-SWU1细胞后,细胞增殖活性随着照射剂量的增加而逐渐降低;光学显微镜下可见细胞膜表面突出或出现小泡,经Hoechst染色后,凋亡小体在荧光显微镜下清晰可见,细胞DNA电泳条带呈梯形分布,这是凋亡细胞典型的生化特征.

中华鳖胚胎细胞体外培养的研究

:研究中华鳖胚胎细胞体外培养适宜培养渗透压、培养基和培养温度等条件 ,并进行传代试验。结果表明 ,胚胎原代细胞在 2 5～ 2 8℃ ,渗透压 2 50mmol/kg ,RPMI - 16 4 0 +10 %小牛血清培养液及无CO2 的条件下 ,生长良好 ,72h长满单层 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1～ 3代为适应期、4～ 6代为旺盛期、7～ 9代为衰退期。第 6代细胞染色体组型分析 ,其染色体为整二倍体 。

家蚕胚胎细胞系的DNA指纹图谱分析

在建立可靠的家蚕细胞系基因组DNA制备和PCR扩增技术体系的基础上,筛选具有稳定多态性位点的RAPD和ISSR引物,建立家蚕细胞系基因组DNA的ISSR和RAPD分子标记技术体系,检测家蚕细胞系的DNA分子标记多态性,构建细胞系的DNA指纹图谱。筛选出了26个ISSR引物和43个RAPD引物,通过PCR扩增在家蚕胚胎细胞系和传代昆虫细胞系等9个样品中分别获得了797条和1205条多态性条带,多态性达到89．9%和76．6%,不同细胞系的DNA多态性有较大差异,三个家蚕胚胎细胞系具有各自特有的DNA标记。测定了9个样品间的Nei's相似系数和遗传距离,构建了系统发育树,结果表明本实验室建立的3个家蚕胚胎细胞系和家蚕“夏芳×秋白”聚为一簇,亲缘关系较近,而来自不同物种的五个传代昆虫细胞系聚为一簇,它们之间的遗传距离比3个家蚕胚胎细胞系之间的遗传距离更小。

漠斑牙鲆胚胎细胞系的建立与鉴定

漠斑牙鲆（Paralichthyslethostigma）是中国近年新开发的重要海水养殖鱼类，本研究以漠斑牙鲆囊胚期胚胎为材料，探索了鱼类胚胎细胞分离和培养的条件，建立了漠斑牙鲆胚胎细胞培养技术。建立的漠斑牙鲆胚胎细胞系（SFEC）至今已经培养了240多天，传至80多代。SFEC的完全培养基采用添加抗生素、胎牛血清（FI强）、花鲈血清（sPS）、成纤维生长因子（bF（正）的DMEM。SFEC形态小而呈圆形、多边形，在培养基中生长迅速。本实验检测了温度、胎牛血清浓度、成纤维生长因子对SFEC生长的影响。在24--30℃之间SFEC生长良好，但当温度低于18℃时细胞生长速度明显减慢。在含15％FBS的培养基中，SFEC生长速度明显比在含7．5％FBS的培养基中快，在培养基中添加bFGF可以使细胞生长速度显著提高。SFEC的二倍体核型为2n=6st＋42t。将GFP报告基因通过脂质体介导的方法转入SFEC中并成功地获得了表达，转化率为20％。[中国水产科学，2007，14（4）：579—583]

共聚焦激光扫描显微术研究天花粉蛋白对小鼠胚胎细胞的作用机制

天花粉蛋白是从中草药禾古楼根中提取的一种核糖体失活蛋白 ,具有致流产、抗肿瘤和抗 HIV功能。本文应用共聚焦激光扫描显微术结合特异性荧光探针 2′,7′-二氯荧光黄双乙酸酯和 Fluo3- AM,观察了天花粉蛋白作用于小鼠胚胎细胞过程中活性氧自由基和细胞内钙离子浓度的变化。实验结果表明 ,天花粉蛋白能诱导小鼠胚胎细胞钙浓度升高和产生活性氧自由基 ,并且天花粉蛋白能有效抑制小鼠胚胎细胞的分裂 。

家蚕胚胎细胞系BmE-SWU1的建立及其生物学特性

对家蚕反转期胚胎组织进行一年多的原代培养,分离筛选出了高繁殖细胞群体,建立了BmE-SWU1细胞系。该细胞系以梭形和近圆形细胞为主,杂以少量多突起和巨型细胞。细胞系的倍增时间在28℃时为57.6h,染色体呈短杆状或颗粒状,染色体数目异倍化,具有典型鳞翅目昆虫细胞系的染色体特征。BmE-SWU1细胞系对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)高度敏感,半数组织培养感染剂量(TCID50)为2.92415×10-7。

家蝇胚胎细胞抗菌蛋白对人髓样白血病细胞K562选择性杀伤作用的研究

目的利用脂多糖刺激家蝇胚胎细胞产生并提取抗菌蛋白,对比研究家蝇胚胎细胞抗菌蛋白和高三尖杉酯碱(HHT)对人髓样白血病细胞K562和正常人体细胞的抑制杀伤作用。方法采用含20mg/L脂多糖的无血清M3培养基作用于处于对数生长期的家蝇胚胎细胞16h,提取上清液中的抗菌蛋白,将抗菌蛋白配制为40、80、160、320和640μg/mL 5个浓度组,采用MTT法测定各浓度抗菌蛋白对K562和人脐静脉血管内皮细胞的抑制作用。将处于对数生长期的K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞配制成相同浓度的HHT组、家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组,两种细胞均采用自身设置对照组。采用流式细胞术测定K562细胞和人脐静脉血管内皮细胞3组药物的有效杀伤率。结果 MTT法检测显示,5种浓度抗菌蛋白对K562细胞均具有明显抑制作用,各浓度抗菌蛋白对人脐静脉血管内皮细胞均无抑制作用。对照组、HHT组及家蝇胚胎细胞抗菌蛋白组对K562细胞的有效杀伤率分别为(28.16±2.14)%、(81.41±1.95)%和(82.90±3.03)%;对人脐静脉血管内皮细胞的有效杀伤率分别为(41.13±2.51)%、(82.20±2.57)%和(36.68±1.86)%。结论家蝇胚胎细胞抗菌肽与常用的白血病化疗药物相比,优点在于能有效杀伤白血病细胞又不损伤正常人体细胞。

移植非洲爪蟾胚胎细胞核引起花背蟾蜍成熟卵单性发育的研究

将非洲爪蟾胚胎细胞核移入花背蟾蜍成熟未受精卵后 ,得到了发育至各期的胚胎。对发育不同时期的胚胎 ,进行了乳酸脱氢酶同工酶谱及染色体组型分析 ,结果显示其均与受体一致。根据实验分析认为 ,非洲爪蟾的胚胎细胞核进入花背蟾蜍成熟卵后 。

中华鲟胚胎细胞的冷冻保存及其核移植

为了保存濒危鱼类中华鲟种质资源,对其囊胚细胞和原肠细胞进行了冷冻保存和核移植试验。用二甲亚砜(DMSO)、1,2-丙二醇(PG)、羟乙基淀粉(HES)3种抗冻剂,配制4种冷冻保护液:CP1(12%D)、CP2(10%P)、CP3(8%D+6%E)、CP4(7%P+6%E),冷冻细胞存活率分别为47.4%±4.7%、64.4%±3.6%、54.7%±4.7%、76.7%±5.7%,CP4保存效果最好,说明添加非渗透型抗冻剂羟乙基淀粉能提高冷冻保存细胞的存活率。比较了两种冷冻方法,发现细胞在-7℃平衡30min之后直接投入液氮的一步冷冻降温法是可行的。对不同发育时期的胚胎细胞冷冻存活率进行了比较,结果表明原肠细胞冷冻存活率(64.4%±11.8%)明显比囊胚细胞的(57.1%±11.2%)高(P<0.05)。用冷冻复苏后的囊胚细胞和原肠细胞作供体,以中华鲟未受精卵作受体进行核移植,各移植了469和392枚卵,分别获得了5尾和2尾克隆鱼,核移植成功率分别为1.1%和0.5%。表明可通过冷冻保存胚胎细胞结合核移植技术保存鱼类种质资源。

家兔胚胎细胞核移植的研究

研究改进了兔胚胎细胞核移植的技术体系 ,并对核移植胚胎的体外培养以及克隆胚胎的体内发育进行了试验。结果表明 :卵母细胞去核率为 88.9% (8/ 9) ,重组胚融合率为 76 .7% (176 / 2 2 9) ,将融合的重组胚与兔胎儿成纤维细胞共同培养 ,其 2～ 4细胞发育率、8～ 16细胞发育率以及桑椹胚和囊胚的发育率分别为 6 5 .7% (2 3/35 )、2 8.6 % (10 / 35 )、2 2 .9% (8/ 35 ) ,显著高于“TCM - 199+10 %FCS”系统培养的 43.3% (13/ 30 )、2 6 .7% (8/30 )、16 .7% (5 / 30 )。 16及 32细胞期卵裂球的重组胚可发育到产仔 ,将 111枚重组胚移植给 9只同期处理的受体母兔 ,2只妊娠 ,其中 1只产出 2只足月克隆仔兔 ,1只在产前 1周 (妊娠 2 2d)

灭多威对家蝇胚胎细胞系细胞色素C及Caspase 3的影响

为寻找家蝇防治新靶点提供新的思路,研究灭多威作用于家蝇胚胎细胞系MDEC-07114细胞后对细胞色素C和Caspase 3的影响。用4 mg/mL灭多威干预MDEC-07114后,分别于加药后2、6、12、24 h收集细胞,用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞色素C和Caspase 3的表达。结果表明,细胞色素C随作用时间的延长释放增多,Caspase 3随作用时间的延长活性增强。根据试验结果,推测灭多威可能是通过损伤线粒体膜,引起细胞色素C的释放,进而激活Caspase 3,发生蛋白酶级联反应,从而导致MDEC-07114细胞凋亡。