脐血浆神经营养活性蛋白成分对CD34^+细胞增殖分化的影响

背景:迄今为止,人们对于脐血浆中是否存在活性成分及其对于神经发育及神经损伤修复的作用认识尚不足,有待深入研究。目的:检测脐血浆生物活性成分,观察其在神经发育及神经损伤修复中的作用。方法:采用抗体芯片技术对脐血浆和健康青年女性静脉血浆活性成分进行对比分析,采用免疫磁珠从脐血中分选出CD34+细胞,经体外培养计数观察CD34+细胞增殖能力,通过免疫组化法观察细胞分化情况。结果与结论:脐血浆中有31种蛋白分子的含量显著高于静脉血浆,其中具有促进神经再生和神经修复潜能的活性蛋白10种,包括FGF4、Frizzled-3、IL-3、RAGE、CRIM-1、Neuritin、Neuropilin-2、Neurturin、SFRP-3、Tomoregulin-1;在CD34+细胞培养液中加入脐血浆能显著促进细胞增殖,促进细胞向神经细胞分化。

脐血浆中硫化氢与分娩宫缩发动关系的探讨

目的:研究脐血浆中硫化氢(H2S)在分娩宫缩发动中的意义。方法:在新生儿娩出后采集脐带静脉血浆60例,根据分娩时有否发动宫缩分为两组,用敏感硫电极检测脐血浆中硫离子的浓度,并换算出H2S的含量;免疫组织化学方法检测胎盘中胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和胱硫醚-β-合成酶(CBS)的表达程度。结果:未发动宫缩组脐血浆中H2S含量高于发动宫缩组,差异有统计学意义(P=0.017)。免疫组化见CSE表达于胎盘绒毛的细胞滋养层胞浆中,未发动宫缩组的表达明显高于发动宫缩组,CBS在两组中均未见表达。结论:胎盘绒毛的细胞滋养层胞浆中含有CSE,不含CBS;脐血浆中H2S由细胞滋养层细胞参与调控生成;孕产妇脐血浆中H2S与宫缩发动有密切关系。

脐血浆治疗大鼠实验性肝衰竭及其机制的研究

本文采用脐血浆治疗实验性肝衰竭大鼠模型，并与成人血浆的疗效进行了比较。结果表明，脐血浆降低大鼠死亡率、血谷丙转氨酶水平，总胆红素浓度及使甲胎蛋白水平升高均明显高于成人血浆的作用（Ｐ＜０．０５）．肝脏病理组织学也显示脐血浆具有减轻病理损害和较快修复坏死组织的作用。提示脐血浆中含有促进肝细胞再生的因子，具有显著提高实验性大鼠肝衰竭的存活率。

子宫癌、卵巢癌患者应用脐血浆治疗血小板减少的疗效分析

目的:通过对应用脐血浆治疗子宫癌、卵巢癌患者因放/化疗所致血小板减少的疗效的统计、分析、评价,为血小板减少的女性患者提供一种有效、廉价、安全的治疗方法。方法:将脐血浆按A与B、O与AB或3种或4种不同血型混合后,制备混合脐血浆,用于150例因放/化疗所致血小板减少的子宫癌、卵巢癌患者,静脉输注,每日1单位(U),连用3～4天后,检测血小板数值变化情况并统计分析其有效率。结果:总有效率为74.7%,其中显效32.7%,有效42.0%,无效率仅为25.3%,且无1例不良反应。结论:静脉输注混合脐血浆,治疗子宫癌、卵巢癌等患者因放/化疗所致血小板减少症安全、有效,且脐血来源丰富,可以将其变废为宝造福于人类。

脐血浆培养的脐血树突状细胞对胃癌细胞的特异杀伤作用

目的尝试用脐血浆代替胎牛血清培养脐血树突状细胞(DCs),并使之负载胃癌抗原,观察其对胃癌细胞的特异杀伤作用。方法分离脐血单个核细胞(CBMCs)并在含10%同源脐血浆的培养体系中诱导培养,部分细胞加入胃癌冻融抗原冲击。流式细胞仪检测细胞表面抗原CD1a和CD83表达,MTT法检测DCs体外刺激淋巴细胞增殖活性,LDH法检测DCs诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTLs)对胃癌及肝癌细胞的细胞毒作用。结果CBMCs能分化为表型正常的未成熟DCs,并进而吞噬胃癌细胞冻融抗原成熟,刺激淋巴细胞增殖并诱导对胃癌细胞株特异的CTLs毒性。结论脐血浆培养的脐血DCs能有效捕获胃癌冻融抗原,激发针对胃癌细胞的特异杀伤效应。本实验采用的DCs制备方法具有方法简单、成本较低、瘤苗制备时间较短等优点。

脐血浆输注配合中西医治疗儿童再生障碍性贫血

目的 观察脐血浆配合中西医治疗再生障碍贫血 (再障 )的疗效。方法 随机将 49例再障分为治疗组和对照组 ,前者脐血浆配合中西医治疗 ,后者不输脐血浆 ,余同治疗组。观察治疗前后血象变化 ,比较两组疗效。结果 两组治疗后疗效均优于治疗前 (P <0 .0 1) ;两组治疗后同期比较 ,治疗组优于对照组 (P <0 .0 5 )。

混合脐血浆治疗化疗后血小板减少的临床分祈

我们从１９９９年起应用混合脐血浆治疗因化疗引起血小扳减少的患者２００余例，并对１９９９年１０月—２００１年１１月的２００例患者应用后的效果进行了统计与分析，报告如下。

人脐血造血祖细胞与脐血浆依赖性的研究

人脐带血中含有较骨髓细胞更原始更早期的造血干细胞群,使人们对脐血替代骨髓移植寄予极大的关注。本文通过造血祖细胞体外培养,观察来自人脐带血、外周血、骨髓的粒-单系祖细胞（CFU-GM）不同的生物学特性。材料与方法 1.标本采集脐带血来自本院产房正常孕妇足月分娩后脐静脉采血、肝素20u/ml抗凝。骨髓、外周血采自正常献髓者。 2.实验方法依照本室各系祖细胞体外培养常规方法。培养体系:粒单系集落刺激因子（GM-CSF）20ng/ml,20％脐血浆（CB）,5×105单个核细胞/ml。将培养皿置于37℃、5％CO2、饱和湿度的培养箱中培养。第14天计数CFU-GM集落（】40个细胞为一个集落）。

脐血浆体外对肿瘤细胞的生长及端粒酶活性的影响

目的 探讨脐血浆对 K5 6 2、SMC细胞的生长及端粒酶活性的影响。方法 采用 MTT法检测脐血浆对 K5 6 2、SMC细胞生长的影响 ;采用 PCR- EL ISA检测脐血浆及 AFP对 K5 6 2、SMC细胞端粒酶活性的影响。结果 脐血浆对 K5 6 2、 SMC细胞有促生长作用 ,脐血浆及 AFP能增强 K5 6 2、 SMC细胞的端粒酶活性。结论 脐血浆能促进 K5 6 2、 SMC细胞的生长及增强这两种细胞的端粒酶活性 ,脐血浆对 K5 6 2、 SMC细胞的促生长作用可能与

脐血浆白细胞介素3的表达水平

新生儿造血与免疫功能不成熟，但脐血浆具有刺激造血的活性。IL－3是对造血与免疫系统均有调节作用的造血因子。为了解IL－3表达水平对新生儿造血免疫功能及脐血浆造血活性的影响，本实验用双抗体夹心ELISA法检测了IL－3在33例正常足月新生儿脐血浆和9例成人外周血浆的表达水平。脐血浆IL－3浓度为0－35ng/L，只位数3ng/L，成人血浆IL－3浓度为0－28ng/L，中位数4ng/L，二者差别无统计学意义（P＞0．05）。健康足月新生儿脐血浆中IL－3表达水平不低于成人，可支持新生儿正常造血。脐血浆含有低水平的IL－3，在体外的造血刺激作用需要多种造血因子的协同。

脐血浆在CIK细胞培养中的应用

目的观察脐血浆体外培养脐血细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)的增殖情况,探讨其替代AB血浆的可行性。方法无菌采集脐血并分离血浆,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,用脐血浆培养脐血CIK细胞,并与人AB血浆进行对照。计数培养不同时间CIK细胞数,流式细胞仪进行表型分析,以K562细胞为靶细胞,CCK-8法计算杀伤活性。结果脐血浆体外培养脐血CIK 21 d后,CD 3+CD 5+6细胞扩增倍数、表达率、对白血病K562细胞的杀伤率与人AB血浆相比无显著性差异(P>0.05)。结论脐血浆可以代替AB血浆进行脐血CIK培养。

混合脐血浆在人脐静脉内皮细胞培养中的应用

目的：观察混合脐血浆在人脐静脉内皮细胞（ｈｕｍａｎｕｍｂｉｌｉｃａｌｖｅｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｓ，ＨＵＶＥＣ）培养中的作用。方法：在含２０％（体积分数）混合脐血浆的内皮细胞培养体系中进行ＨＵＶＥＣ的原代和传代培养，并对培养细胞进行纯度鉴定。同时用噻唑蓝试验观察不同体积分数的混合脐血浆对ＨＵＶＥＣ增殖活力的影响。结果：２０％（体积分数）的混合脐血浆对ＨＵＶＥＣ培养有明显支持作用，该体系培养的ＨＵＶＥＣ经第Ⅷ因子相关抗原（Ⅷ：Ａｇ）和Ⅰ型荆豆凝集素（ＵＥＡⅠ）鉴定纯度可达９３．１％。结论：２０份混合的脐血浆可以代替内皮细胞生长因子成功地用于ＨＵＶＥＣ的培养，以获得高纯度可传代的内皮细胞。

不同型混合脐血浆治疗肾性贫血

目的 探讨脐带血血浆输注治疗肾性贫血的特点。方法 将 40例规律性维持性血液透析的慢性肾功能衰竭患者随机分成 4组 ,分别输注普通成人血浆 (A组 )、同型脐血血浆 (B组 )、不同型脐血血浆 (C组 )和全血 (对照组 ) ,进行对照研究。结果 A组治疗后贫血加重 (P <0 0 1) ;B组和对照组 ,治疗前后贫血情况无明显变化 (P >0 0 5 ) ;C组治疗后贫血改善 (P <0 0 1)。输注普通成人血浆贫血加重与对照组 (输注全血组 )比较差异有显著性 (P <0 0 1) ,输注同型脐血血浆贫血情况与对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,输注不同型脐血血浆贫血情况改善与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 1)。结论 同型脐血血浆和血型不同的混合脐血血浆 ,均能刺激人体造血祖细胞造血功能 。

脐血浆对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察脐血浆(UC)对离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用并初步探讨其可能机制。方法取Wistar大鼠24只,随机分成正常对照组(Control)、缺血/再灌注损伤组(I/R)和脐血浆保护组(UC)。利用Langendorff离体灌流装置,复制大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型。观察冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、心肌组织匀浆中SOD活性及心肌超微结构等。结果与Control组相比,I/R组LDH活性明显增高,SOD活性降低,心肌超微结构损伤明显;脐血浆(1∶100)则明显减少LDH的漏出,同时使SOD活性升高及心肌超微结构损伤减轻。结论脐血浆能减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤,其机制可能与脐血浆具有抗氧化、清除自由基的作用有关。

脐血浆刺激造血活性研究

目的 研究脐血浆刺激造血活性。方法 检测脐血浆的造血因子水平及其扩增外周造血干细胞 (PBSC)作用和刺激生成CFU GM、CFU Mix、BFU E作用。结果 ① 33例脐血浆中 4例检测出GM CSF ,2 0例检测到IL 3和IL 6 ,33例检测到EPO ,各细胞因子之间不具相关性 ;②液体培养 6d后 ,脐血浆组有核细胞数为 (1.0 8± 0 .2 0 )× 10 6/ml,胎牛血清 (FCS)组为 (0 .72± 0 .0 5 )× 10 6/ml,脐血浆对体外培养维持PBSC活细胞数明显优于FCS(P <0 .0 5 ) ,但无明显扩增作用 (P >0 .0 5 ) ;甲基纤维素半固体培养PBSC 14d时 ,脐血浆组集落数为 (13± 11)× 10 5,而FCS组集落数为 0 ,二者比较有显著差别 (P <0 .0 1)。结论 脐血浆含有多种造血因子 ,其刺激造血活性与IL 3浓度成正相关 ,但与IL 6和EPO的相关性则较小。

脐血浆造血活性的研究

目的 研究脐血浆刺激造血细胞体外生长的作用及脐血浆造血因子的水平。方法 以ELISA法检测 33例脐血浆GM -CSF ,IL - 3和IL - 6水平 ,RIA法检测EPO水平 ,液体培养和甲基纤维素半固体培养方法检测脐血浆对外周造血干细胞 (PBSC)造血刺激活性 ,并分析二者的相关性。结果 ①脐血浆造血因子中位数和全距水平分别为 :GM-CSF为 0ng/L和 0～44ng/L ,IL - 3为 3ng/L和 0～ 35ng/L,IL - 6为 3ng/L和 0～ 2 1ng/L ,EPO为 1 6U/L和 5～ 72U/L ;②脐血浆刺激下PBSC半固体培养造血祖细胞集落数为 (1 3± 1 1 ) / 1× 1 0 5细胞 ,胎牛血清刺激下的集落数为 0 ,二者差异有显著性 (P <0 .0 1 )。脐血浆或胎牛血清刺激下PBSC液体培养有核细胞数分别为 (1 .0 8± 0 .2 0 )× 1 0 6 /ml与 (0 .72±0 .0 5)×1 0 6 /ml,二者差异有显著性 (P <0 .0 5) ;③脐血浆刺激下PBSC体外培养集落数和有核细胞数均与脐血浆IL -3水平成正相关 ,相关系数分别为 0 .660和 0 .397,与IL - 6和EPO则不相关。结论 脐血浆含有多种造血因子 ,在体外具有刺激造血细胞生长的作用。脐血浆刺激造血活性与其所含有的造血因子有关 ,造血活性的高低与IL - 3浓度成正相关。IL - 6和EPO所起的作用则相对较小。

脐血浆内源性类洋地黄物质的部分纯化与鉴定

选用Ｃ１８预处理柱分离脐血浆内源性类洋地黄物质（Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｄｉｇｉｔａｌｉｓ－ｌｉｋｅｓｕｂｓｔａｎｃｅ，ＥＤＬＳ），应用高效液相色谱分析法（ＨＰＬＣ）对其进行部分纯化，观察部分纯化的ＥＤＬＳ对红细胞摄取８６Ｒｂ的抑制作用，并比较其与哇巴因在高效液相色谱图上的特点。结果表明：脐血浆第二份ＨＰＬＣ洗脱液（滞留时间４～６ｍｉｎ）对红细胞摄取８６Ｒｂ具有强烈的抑制作用；其抑制率为（８９±３）％，明显高于其它洗脱物份别及孕妇、健康成人对照组血浆第二份洗脱物的抑制率［分别为（７３±５）％和（４３±３）％，Ｐ值均＜０．０１］；部分纯化的ＥＤＬＳ、哇巴因及两者混合物的滞留时间基本一致，提示ＥＤＬＳ与哇巴因的结构相似。

胎儿缺氧对脐血浆心钠素浓度的影响

本文采用胎儿脐血浆测定心钠素（ＡＮＰ），发现胎儿缺氧组和对照组有显著差异。缺氧组观察１５例，实测范围３９２．２１～５７０．２３ｐｇ／ｍｌ，对照组１７例实测范围１６３．９８～２９９．８０ｐｇ／ｍｌ。缺氧组血浆心钠素呈正比。检测胎儿脐血浆心钠素对胎儿缺氧的诊断和治疗有重要指导意义。

混合脐血浆在人脐静脉内皮细胞培养中的应用潜力研究

采用0.25%胰蛋白酶与0.1%Ⅱ型胶原酶等体积混合灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),相差显微镜下,通过细胞形态学及Ⅷ因子免疫组织化学方法对培养的细胞进行鉴定,并测定不同配比的(5%、10%、15%、20%、30%)混合脐血浆(HUP)与20%胎牛血清(FBS)混搭对HUVEC增殖活性及细胞周期的影响。培养至7 d的HUVEC呈现出典型的铺路石状镶嵌生长,Ⅷ因子免疫组织化学染色阳性,20%HUP,15%HUP+20%FBS和20%HUP+20%FBS组较20%FBS对照组更有利于提高HUVEC的增殖活性。相反,30%HUP+20%FBS,则会引起细胞周期的阻滞,进而显著抑制HUVEC的增殖。结果证实,虽作用有限,尚不可完全替代血管内皮生长因子(VEGF),但作为培养液的添加成分之一,HUP不失为FBS的理想替代品。

脐血血浆支持造血祖细胞体外集落培养的研究

10份去血小板的脐血血浆混合后用于研究其对造血细胞培养的支持作用。发现按10％的终浓度加入粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)琼脂培养体系时,集落产率稍高于用GM-CSF作刺激因子组。当按30％终浓度加入含EPO的甲基纤维素培养体系时,可支持CFU-GM、爆式红系集落(BFU-E)、巨核细胞集落(CFU-Meg),粗-巨噬细胞与红系细胞混合的集落(CFU-GEM),粒-巨噬细胞与红细胞、巨核细胞混合的集落(CFU-GEMM)生长,而混合成人血浆则无此作用。植物血凝素刺激的单个核细胞条件液(PHA-MNCCM)对大部分集落有促进作用,但均无统计学意义。国产IL-3可提高CFU-GEM产率,但似乎不利于含巨核细胞的集落生长。研究结果提示,脐血血浆含有丰富的造血刺激活性,利用脐血血浆进行造血祖细胞体外集落培养可能为简化并推广体外造血细胞培养提供新的途径。