脐血血浆对K562细胞增殖抑制作用研究

目的 研究脐血血浆 (CBP)对人红白血病细胞株K5 6 2增殖影响及可能机制。方法 台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;MTT法检测CBP对K5 6 2细胞的抑制作用 ;流式细胞术分析细胞周期变化 ;免疫细胞化学方法检测增殖相关核抗原 (PCNA ,Ki 6 7)表达。结果 细胞生长曲线可见CBP作用 2 4h即观察到抑制作用 ,随时间增加 ,抑制作用更加明显 ,有非常显著性差异 (P <0 .0 1 )。MTT法结果与生长曲线结果相符。CBP作用 3d后 ,S期细胞数减少 ,G0 /G1 期细胞增多 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,并出现G0 /G1 期凋亡细胞。CBP作用后 ,K5 6 2细胞增殖相关核抗原PCNA、Ki 6 7表达阳性程度降低 ,有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 CBP对K5 6 2细胞增殖有明显抑制作用 ,与浓度、时间正相关 ;其机制可能与诱导凋亡、下调PCNA、Ki 6 7表达 。

脐血血浆支持造血祖细胞体外集落培养的研究

10份去血小板的脐血血浆混合后用于研究其对造血细胞培养的支持作用。发现按10％的终浓度加入粒-巨噬细胞集落(CFU-GM)琼脂培养体系时,集落产率稍高于用GM-CSF作刺激因子组。当按30％终浓度加入含EPO的甲基纤维素培养体系时,可支持CFU-GM、爆式红系集落(BFU-E)、巨核细胞集落(CFU-Meg),粗-巨噬细胞与红系细胞混合的集落(CFU-GEM),粒-巨噬细胞与红细胞、巨核细胞混合的集落(CFU-GEMM)生长,而混合成人血浆则无此作用。植物血凝素刺激的单个核细胞条件液(PHA-MNCCM)对大部分集落有促进作用,但均无统计学意义。国产IL-3可提高CFU-GEM产率,但似乎不利于含巨核细胞的集落生长。研究结果提示,脐血血浆含有丰富的造血刺激活性,利用脐血血浆进行造血祖细胞体外集落培养可能为简化并推广体外造血细胞培养提供新的途径。

脐血血浆输注对急性白血病患者化疗后血象恢复的影响

目的 :开发脐血血浆的临床应用价值 ,探讨脐血血浆输注对急性白血病患者化疗后血象恢复的影响。方法 :设脐血血浆治疗组和对照组 ,治疗组在急性白血病化疗后第 2天和第 4天各输注脐血血浆 6 U ,对照组仅采用一般的对症支持治疗 ,观察两组病例化疗后血象和骨髓象的恢复情况。结果 :治疗组外周血白细胞恢复较快 ,平均为 (11.83± 4.2 6 ) d,对照组平均为 (18.92± 5 .75 ) d(P<0 .0 5 ) ;治疗组骨髓恢复至增生活跃需 (11.2 4± 4.6 8) d,对照组骨髓恢复至增生活跃需 (19.15± 6 .76 ) d,两组差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;且无一例出现输血反应及其它不良现象。结论 :急性白血病患者化疗后脐血血浆输注具有刺激骨髓生长和促进外周血白细胞恢复的功能 。

恶性血液病患者化疗后输注脐血血浆的研究

目的 探讨脐血血浆 (CBP)输注对恶性血液病患者化疗后细胞因子的变化和血像恢复的影响。方法 恶性血液病患者 78例化疗后治疗组于第 2、4天分别输注CBP 6个单位 ,或注射基因重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF) 15 0 μg ,对照组采用对症支持治疗 ,观察三组病例化疗后粒细胞集落刺激因子 (G CSF)和红细胞生成素 (Epo)的水平变化及骨髓和血像的恢复情况。 结果 CBP和rhG CSF治疗组外周血白细胞恢复较对照组快 (P <0 0 5 ) ,CBP输注后第 2天外周血G CSF和Epo水平达到高峰。且无输血反应及其它不良现象。 结论 恶性血液病患者化疗后输注CBP具有促进外周血白细胞恢复的功能 。

脐血血浆化疗增敏作用的实验研究

目的:研究脐血血浆(CBP)对急性髓细胞性白血病(AML)细胞的体外化疗增敏作用。方法:以AML细胞株HL鄄60细胞为实验对象,培养体系中分别加入CBP或人重组粒鄄巨噬细胞集落刺激因子(rhGM鄄CSF)作为实验组或阳性对照组,不加CBP和rhGM鄄CSF的HL鄄60细胞作为阴性对照组。培养48h后进行细胞周期动力学检测;各组细胞再加入阿糖胞苷(Ara鄄C)培养,24h后进行细胞增殖测定。结果:经过48h孵育,CBP组S期细胞比例明显增高,再与Ara鄄C作用,细胞的生长较阴性对照组明显受抑。实验组和阳性对照组之间无明显差异。结论:CBP与rhGM鄄CSF相似,可通过促进HL鄄60细胞进入S期增强对Ara鄄C的敏感性。

脐血血浆输注对急性白血病患者化疗后血象恢复的影响

目的研究脐血血浆对急性白血病患者化疗后促进血象恢复的影响。方法设脐血血浆治疗组和对照组,治疗组患者化疗后第2天及第4天各输注同型脐血血浆300m l,对照组仅采用一般的对症支持治疗。观察两组病例化疗后血象和骨髓象的恢复情况以及患者身体状况的变化,包括精神、食欲、感染及出血等情况。结果治疗组外周血白细胞恢复较快,平均为(12.53±4.34)天,对照组平均为(19.42±5.45)天,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);治疗组骨髓恢复至增生活跃需(11.54±5.38)天,对照组骨髓恢复至增生活跃需(18.89±5.74)天,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);且无1例出现输血反应及其它不良现象。结论急性白血病患者化疗后输注脐血血浆具有刺激骨髓生长和促进外周血白细胞恢复的功能,脐血血浆具有很好的开发利用价值。

儿童急性白血病化疗后输注脐血血浆的临床研究

目的 探讨脐血血浆在儿童白血病的临床应用价值。方法 选择健康妊娠孕妇、足月顺产儿的脐血 ,每个胎盘提取 5 0mL左右血浆 ,在白血病患儿化疗后输注血浆 2次 ,观察患儿外周血WBC、Hb、PLT及骨髓造血功能的恢复情况 ,同时动态观察患儿AFP含量变化。结果 输注脐血血浆的患儿外周血WBC恢复、骨髓增生活跃均提前 ,P <0 .0 5 ,差异有显著性。Hb、PLT亦提前恢复 ,同时AFP含量仅呈暂时性升高 ,一个半月后恢复正常。结论 脐血血浆能促进儿童急性白血病病儿化疗后骨髓造血功能的恢复 ,由于资源广泛 ,价格低 ,具有推广价值。

混合脐血血浆对植物血凝集素诱导的脐血源性T淋巴细胞增殖、分化的影响

目的:探讨混合脐血血浆(CBP)在植物血凝集素(PHA)诱导脐血源性T淋巴细胞中的作用。方法:收集脐血血浆和脐血单个核细胞;将脐血单个核细胞分为CBP+PHA和PHA两组,检测两组细胞增殖率及免疫表型。结果:CBP+PHA组细胞增殖指数低于PHA组,但无统计学意义;两组细胞表型都以CD3+、CD4+为主,两组差异无统计学意义。结论:混合脐血血浆对脐血源性T淋巴细胞增殖、分化影响不明显,可能与RPMI1640培养体系具有相似的效果。

胎盘间充质干细胞脐血血浆培养体系的建立

目的建立并优化适用于临床级胎盘源间充质干细胞的脐血血浆体外培养体系。方法采用酶消化法分离胎盘间充质干细胞,分为胎牛血清组(10%胎牛血清+DMEM/F12)、脐血血浆组(10%脐血血浆+DMEM/F12+1 000 IU/L肝素)和无血清组(Stem ProMSC SFM CTSTM);经培养扩增后,采用流式细胞术检测间充质干细胞表面标志,并诱导细胞向成脂肪、成骨分化,比较3组培养扩增所得间充质干细胞的差异。结果 3组细胞的增殖速度并无明显差异;脐血血浆组、胎牛血清组及无血清组培养扩增所得的细胞均表达CD90、CD29、CD44、CD49e、CD105、CD73,不表达CD34、HLA-DR、CD45;而且均具有向成脂、成骨分化的能力。结论脐血血浆可取代胎牛血清或无血清培养基用于胎盘间充质干细胞的培养扩增,以此获取可供临床应用的胎盘间充质干细胞。

脐血血浆对正常骨髓CFU—GM生长影响的研究

目的 探讨脐血血浆对正常骨髓CFU－GM（粒－巨噬系集落形成单位） 生长的影响，为临床应用脐血提供可靠的实验依据。方法 在体外用半固体甲基纤维素培养法观察了脐血血浆、成人血浆、GM－CSF和GM－CSF＋IL－3对正常骨髓CFU－GM生长的影响。结果 脐血血浆、成人血浆GM－CSF和GM－CSF＋IL－3刺激（2×10^5MNC）产生CFU-GM的量分别是：232．61±29．74、82．85±18．26、210．44±31．59和307．28±24．65。结论 脐血血浆具有较高的刺激CFU－GM生长的活性，并且可以维持CFU－GM生长。

脐血浆刺激造血活性研究

目的 研究脐血浆刺激造血活性。方法 检测脐血浆的造血因子水平及其扩增外周造血干细胞 (PBSC)作用和刺激生成CFU GM、CFU Mix、BFU E作用。结果 ① 33例脐血浆中 4例检测出GM CSF ,2 0例检测到IL 3和IL 6 ,33例检测到EPO ,各细胞因子之间不具相关性 ;②液体培养 6d后 ,脐血浆组有核细胞数为 (1.0 8± 0 .2 0 )× 10 6/ml,胎牛血清 (FCS)组为 (0 .72± 0 .0 5 )× 10 6/ml,脐血浆对体外培养维持PBSC活细胞数明显优于FCS(P <0 .0 5 ) ,但无明显扩增作用 (P >0 .0 5 ) ;甲基纤维素半固体培养PBSC 14d时 ,脐血浆组集落数为 (13± 11)× 10 5,而FCS组集落数为 0 ,二者比较有显著差别 (P <0 .0 1)。结论 脐血浆含有多种造血因子 ,其刺激造血活性与IL 3浓度成正相关 ,但与IL 6和EPO的相关性则较小。

脐血浆造血活性的研究

目的 研究脐血浆刺激造血细胞体外生长的作用及脐血浆造血因子的水平。方法 以ELISA法检测 33例脐血浆GM -CSF ,IL - 3和IL - 6水平 ,RIA法检测EPO水平 ,液体培养和甲基纤维素半固体培养方法检测脐血浆对外周造血干细胞 (PBSC)造血刺激活性 ,并分析二者的相关性。结果 ①脐血浆造血因子中位数和全距水平分别为 :GM-CSF为 0ng/L和 0～44ng/L ,IL - 3为 3ng/L和 0～ 35ng/L,IL - 6为 3ng/L和 0～ 2 1ng/L ,EPO为 1 6U/L和 5～ 72U/L ;②脐血浆刺激下PBSC半固体培养造血祖细胞集落数为 (1 3± 1 1 ) / 1× 1 0 5细胞 ,胎牛血清刺激下的集落数为 0 ,二者差异有显著性 (P <0 .0 1 )。脐血浆或胎牛血清刺激下PBSC液体培养有核细胞数分别为 (1 .0 8± 0 .2 0 )× 1 0 6 /ml与 (0 .72±0 .0 5)×1 0 6 /ml,二者差异有显著性 (P <0 .0 5) ;③脐血浆刺激下PBSC体外培养集落数和有核细胞数均与脐血浆IL -3水平成正相关 ,相关系数分别为 0 .660和 0 .397,与IL - 6和EPO则不相关。结论 脐血浆含有多种造血因子 ,在体外具有刺激造血细胞生长的作用。脐血浆刺激造血活性与其所含有的造血因子有关 ,造血活性的高低与IL - 3浓度成正相关。IL - 6和EPO所起的作用则相对较小。

人脐血血浆外泌体提取方法的比较

为探寻高效且稳定的提取人脐血血浆外泌体的方法,利用超高速离心法、蔗糖垫密度梯度离心法、改良超速离心法和聚乙二醇(polyethylene glycol, PEG)沉淀法提取人脐血血浆外泌体,并比较4种方法的优劣。利用透射电镜、动态光散射技术观察外泌体的形态、结构及大小;聚氰基丙烯酸正丁酯(bicinchoninic acid, BCA)法测定外泌体蛋白总量;Western blotting检测外泌体表面标志蛋白CD63、HSP70以及外泌体阴性蛋白GM130 (高尔基标志蛋白)的表达。结果表明,与提取外泌体的“金标准”,即超高速离心法相比,蔗糖垫密度梯度离心法稳定性好,获取的外泌体粒径较均一,但操作较复杂,耗时长;改良超速离心法操作较简单,纯度较高;PEG沉淀法提取的外泌体蛋白量最高,操作时间最短,但杂质较多。结果表明,4种方法均能从人脐血血浆中获取外泌体,但在操作时间、纯度、提取量等方面存在一定差异。因此,应根据实验目的和具体要求选择合适的提取人脐血血浆外泌体的方法。

脐血血浆中IL-3、IL-12、TNF-α含量的测定

目的 :测定脐血血浆中 IL- 3、 IL- 12、 TNF- α的含量 ,了解脐血造血干 /祖细胞(HSC/ HPC)的造血微环境。方法 :收集 2 0份脐血 ,常规分离血浆。结果 :2 0份脐血血浆 TNF- α含量为 (2 9.14 6± 17.4 5 0 ) pg/ m L,明显低于成人外周血 (P<0 .0 0 0 1) ,IL- 3、IL- 12含量分别为 (44 .6 6 0± 9.879) pg/ m L 和 (15 72 .36 1± 785 .74 3) pg/ m L,均显著高于成人外周血 (P<0 .0 1)。结论 :脐血中富含各种造血生长因子 ,有良好的造血微环境 。

脐血移植临床应用研究

脐血移植在临床上的应用,主要依赖于对脐血造血细胞的基础研究工作,包括脐血的生物学活性、采集、保存和输注等。近年来,单份和多份脐血移植、体外扩增后脐血移植、非清髓脐血移植、脐血血浆输注等多方面的应用研究已经取得了长足的进步。但目前仍有许多问题尚待解决。随着脐血移植新手段的涌现和技术的不断完善、脐血库规模的扩大、相关体系的逐步规范化以及现存问题的最终解决,脐血作为造血干细胞移植的重要来源,将展示广阔的临床应用前景。

人脐带血研究现状及其临床应用

人脐带血是造血干祖细胞的丰富来源,特别是近年来临床移植结果表明,脐带血除了具有来源丰富,采集方便、对供者不造成损害、并富含增殖能力很强的造血干/祖细胞以外,脐带血移植容易找到HLA相合的无关供者,且易于保存,而且移植物抗宿主病(GVHD)的发生率明显比骨髓和外周血移植低。最近,脐带血的研究发展很快,特别是欧美一些国家相继建立了脐血库,国际脐血移植登记处也应运而生。

人脐血临床应用的基础研究通过鉴定

人脐血临床应用的基础研究通过鉴定西安医科大学第一临床医学院血液内科韩丽教授主持完成的科研项目“人脐血临床应用的基础研究”通过了由陕西省卫生厅组织并主持的科技成果鉴定。该课题是１９９３年陕西省自然科学基础研究计划资助的项目。韩丽教授带领其科研小组自１９...

含人脐血来源富血小板血浆的三维生物打印墨水在裸鼠全层皮肤缺损治疗中的应用

目的探讨含人脐血来源富血小板血浆(HUCB-PRP)的海藻酸钠-明胶(AG)生物墨水(称为HUCB-PRP-AG生物墨水)的可打印性能和细胞相容性,及该生物墨水的三维打印组织治疗裸鼠全层皮肤缺损创面的效果。方法采用实验研究方法。制备含体积分数2.5%、5.0%、10.0%HUCB-PRP的HUCB-PRP-AG生物墨水,分别命名为1P-AG、2P-AG、4P-AG。取AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG,观察室温下外观,采用旋转流变仪检测黏度、储能模量和损耗模量。利用以上4种生物墨水分别进行三维生物打印并观察打印组织外观(后续使用交联后打印组织),将4种打印组织分别与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在Transwell小室内用HUVEC专用培养基共培养24 h,采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平(样本数为3);将4种打印组织分别用DMEM培养基培养12、24、48 h,进行干燥称重并计算降解率(样本数为3);将1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织分别用磷酸盐缓冲液培养0.5、24.0、48.0 h,采用酶联免疫吸附测定法检测培养上清液中血管内皮生长因子(VEGF)的表达(样本数为5)。取16只6~8周龄雌性BALB/c-NU裸鼠建立背部全层皮肤缺损创面模型,分为创面仅覆盖医用水胶体敷料的常规对照组和另予HUCB-PRP滴加的HUCB-PRP组、AG打印组织覆盖的AG组、4P-AG打印组织覆盖的4P-AG组(每组4只),观察每组3只裸鼠伤后4、8、14 d创面愈合情况并计算创面愈合率;取每组剩余裸鼠伤后8 d创面组织,行苏木精-伊红染色后观察组织病理学改变,行免疫组织化学染色后观察CD31阳性新生血管情况。对数据行重复测量方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果在室温下,AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG均呈半透明液态;AG为淡黄色,1P-AG、2P-AG、4P-AG均为淡红色但颜色依次逐渐加深。在温度10℃和剪切率0.1~10.0 s-1范围内,AG、1P-AG、2P-AG、4P-AG的黏度均随着剪切率的增加而减小;在温度10℃和角频率1~100 rad/s范围内,4种生物墨水的储能模量均大于损耗模量。4种生物墨水打印组织的分辨率与形态均相近。与1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织共培养24 h的HUVEC增殖水平分别为0.885±0.030、1.126±0.032、1.156±0.045,均明显高于与AG打印组织共培养的HUVEC的0.712±0.019(P<0.01);与2P-AG、4P-AG打印组织共培养24 h的HUVEC增殖水平均明显高于与1P-AG打印组织共培养的HUVEC(P<0.01)。1P-AG、2P-AG、4P-AG打印组织培养12、24、48 h的降解率均明显高于AG打印组织(P<0.01);2P-AG、4P-AG打印组织培养24、48 h的降解率均明显高于1P-AG打印组织(P<0.01);4P-AG打印组织培养12 h的降解率明显高于1P-AG打印组织(P<0.01),培养24、48 h的降解率均明显高于2P-AG打印组织(P<0.01)。培养0.5、24.0、48.0 h,2P-AG打印组织培养上清液中VEGF表达量均明显高于1P-AG打印组织(P<0.01),1P-AG和2P-AG打印组织培养上清液中VEGF表达量均明显低于4P-AG打印组织(P<0.01)。常规对照组与HUCB-PRP组裸鼠伤后8 d创面较伤后4 d干燥且缩小,HUCB-PRP组裸鼠伤后14 d创面较常规对照组缩小且无结痂;AG组、4P-AG组裸鼠伤后4 d创面上打印组织明显降解且创面无明显渗出,伤后8 d创面明显上皮化且缩小,伤后14 d创面无结痂;4P-AG组裸鼠伤后14 d创面完全上皮化。与常规对照组比较,AG组裸鼠伤后4 d创面愈合率明显降低(P<0.05),HUCB-PRP组、4P-AG组裸鼠伤后各时间点及AG组裸鼠伤后8、14 d创面愈合率均明显升高(P<0.01);与HUCB-PRP组比较,AG组裸鼠伤后4、8 d及4P-AG组裸鼠伤后4 d创面愈合率均明显降低(P<0.01),AG组裸鼠伤后14 d及4P-AG组裸鼠伤后8、14 d创面愈合率均明显升高(P<0.01);4P-AG组裸鼠伤后各时间点创面愈合率均明显高于AG组(P<0.01)。伤后8 d,常规对照组裸鼠创面组织可见大量炎症细胞浸润、少量新生微血管以及少量CD31阳性新生血管,HUCB-PRP组裸鼠创面组织可见大量炎症细胞浸润、丰富新生微血管以及较多CD31阳性新生血管,AG组裸鼠创面组织可见轻度炎症浸润、少量新生微血管以及少量CD31阳性新生血管,4P-AG组裸鼠创面组织可见轻度炎症浸润、大量新生微血管以及大量CD31阳性新生血管。结论HUCB-PRP-AG生物墨水具备良好的可打印性能和细胞相容性,其三维打印组织可促进裸鼠全层皮肤缺损创面血管化,加速创面愈合。

人脐静脉血衍生的富血小板血浆增强脂肪间充质干细胞改善大鼠卵巢自体移植效果的作用

目的 研究人脐静脉血衍生的富血小板血浆(ucPRP)对脂肪间充质干细胞改善大鼠卵巢自体移植效果作用的影响。方法 8周龄SD大鼠分为3组:自体移植组、自体移植+ADSCs组(ADSC组)及自体移植+ADSCs+ucPRP组(ADSC+ucPRP组),移植术后4周,H-E染色卵泡分类计数,免疫组化检测新生血管数量,Masson染色检测其纤维化面积,同时检测大鼠性激素水平。结果 ADSCs+ucPRP组原始卵泡和生长卵泡数量均高于ADSC组;ADSC+ucPRP组大鼠血清激素水平较ADSC组理想。ADSC+ucPRP组移植卵巢组织新生血管数量高于ADSC组,卵巢纤维化程度低于ADSC组(P<0.05)。结论 ucPRP增强ADSCs改善大鼠卵巢自体移植效果的作用,从而提高移植效率。