新型脑膜炎奈瑟球菌X群荚膜多糖单克隆抗体及其潜在应用

针对脑膜炎奈瑟球菌X群荚膜多糖（Men X）研制的一种新型鼠杂交瘤细胞单克隆抗体（MAb）可用于酶联免疫法对脑膜炎球菌多糖进行定量。该单克隆抗体只对X群发生反应,对于脑膜炎奈瑟菌A群C群Y群和W群均不反应。由非竞争性ELISA测定的单克隆抗体的亲和常数值（Ka）为7.25×107/M。

超滤液用量对C群脑膜炎奈瑟球菌精制多糖质量的影响

目的:研究不同的超滤液用量对C群脑膜炎奈瑟球菌精制多糖质量的影响。方法:对C群脑膜炎奈瑟球菌多糖苯酚法去蛋白后的多糖液进行超滤,超滤液为0.5 mol/L氯化钙溶液,反复浓缩超滤。当超滤液用量达到20 L、30 L、40 L和50 L时,分别从截留管处取多糖液5 mL用于苯酚残留量的检测。对比超滤液用量为20 L和50 L时精制多糖的分子量、回收率、细菌内毒素和收率结果。结果:随着超滤液用量的增大,苯酚残留量逐渐降低;超滤液用量为50 L时,多糖分子量升高,精制多糖收率略有提高;细菌内毒素没有明显变化。结论:当超滤液用量为50 L时,多糖液中苯酚残留量降为0 g/L,多糖分子量升高,精制多糖收率略有增加,从而提高了多糖产品的质量。

槲皮素对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠继发内毒素血症的抑制作用及机制研究

目的:分析槲皮素对奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠继发内毒素血症的抑制作用影响。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机数字表法将大鼠分成6组,分别是模型组、正常组、阳性对照组、低剂量槲皮素组、中剂量槲皮素组及高剂量槲皮素组,每组各10只,除正常组大鼠外,其他大鼠制备奈瑟球菌感染脑膜炎模型,造模后阳性对照组灌胃2mL剂量为100mg/L的地塞米松药液,低、中、高剂量槲皮素组灌胃2mL剂量为50、100、200mg/L的槲皮素药液,正常组与模型组大鼠灌胃等剂量生理盐水,各组大鼠给药间隔12h,共给药5次。观察各组大鼠给药12、24、36、48及60h时其存活率状况,同时间隔12h检测大鼠体温一次,ELISA法检测血清IL-6、TNF-α、脂多糖、IL-1β、IL-8含量,Western blot检测p65与IκBα蛋白表达,RT-PCR检测脑组织Toll样受体4(TLR4)mRNA、CD68mRNA相对表达量。结果:造模24h内模型组大鼠全部死亡,模型组大鼠存活率低于正常组,中剂量及高剂量槲皮素组大鼠存活率优于模型组、阳性对照组及低剂量槲皮素组,差异有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠血清IL-6、TNF-α、IL-1β及IL-8含量显著高于正常组(P<0.05),其他各给药组血清IL-6、TNF-α、IL-1β及IL-8含量显著低于模型组。其中,中、高剂量槲皮素组大鼠降低显著,和模型组、阳性对照组对比差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠IκBα蛋白表达比正常组下降,p65蛋白表达比正常组上升,中、高剂量槲皮素组大鼠IκBα蛋白表达比模型组、阳性对照组上升,p65蛋白比模型组、阳性对照组下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:槲皮素可抑制奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠机体NF-κB炎症通路,降低血清炎性因子含量,提高大鼠存活率。

穿心莲内酯对经抗生素治疗引发内毒素血症奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠存活率影响及作用机制

目的观察穿心莲内酯对经氨苄西林钠治疗奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠存活率的影响,并探讨其作用机制。方法将48只出生2周的大鼠随机分为正常组、模型组、氨苄西林钠组、氨苄西林钠+穿心莲内酯组,每组12只。除正常组外,其余组均通过大鼠小延髓池进针注射脑膜炎奈瑟球菌悬液制备脑膜炎模型。模型制备成功后,正常组和模型组大鼠给予生理盐水灌胃,氨苄西林钠组给予200 mg/L氨苄西林钠皮下注射,氨苄西林钠+穿心莲内酯组在氨苄西林钠组基础上灌胃50 mg/L穿心莲内酯,每12 h 1次,共5次。统计各组小鼠存活率及平均最高体温增量,采用脂多糖检测试剂盒测定血浆脂多糖水平,采用ELISA法测定血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,Western blot法检测大鼠脑膜中p65、IκBα蛋白表达情况。结果氨苄西林钠+穿心莲内酯组大鼠存活率高于氨苄西林钠组(P<0.05);氨苄西林钠组和氨苄西林钠+穿心莲内酯组大鼠体温增高平均值均明显低于模型组(P均<0.05),且氨苄西林钠+穿心莲内酯组明显低于氨苄西林组(P<0.05);氨苄西林钠+穿心莲内酯组血浆脂多糖、TNF-α、IL-6水平和脑膜中p65蛋白表达量均明显低于氨苄西林钠组(P均<0.05),脑膜中IκBα蛋白表达量明显高于氨苄西林钠组(P<0.05)。结论穿心莲内酯可明显提高氨苄西林钠治疗内毒素血症奈瑟球菌感染脑膜炎大鼠存活率,可能与抑制Nk-κB炎症通路相关。

A、C群脑膜炎奈瑟球菌免疫原性及毒性和传代稳定性研究

目的为保证疫苗质量的一致性和可控性，对A、C群脑膜炎奈瑟球菌结合疫苗生产用菌株CMCC（B）29201和CMCC（B）29205株进行毒性和抗原传代稳定性研究，并对30代次菌进行脑腔毒性、免疫原性和产糖质量分析。方法将A、C群脑膜炎奈瑟球菌工作种子批菌种分别连续传代至30代次并收获3、5、10、15、20、25及30代次菌液，小鼠腹腔注射观察各代次毒性，试管凝集试验和间接ELISA测定各代次抗原性。其中30代次菌液进行小鼠脑腔攻击观察是否引起脑组织病理改变，小鼠皮下免疫观察免疫原性，同时进行发酵培养提取荚膜多糖的质量分析。结果CMCC（B）29201株和CMCC（B）29205株工作种子批菌种的半数致死量（LD50）均≥10^9个／ml，30代次内的LD50也均≥10^9个／ml，30代次菌液脑腔毒性测定显示均无病理改变；抗原性试管凝集效价均达1：320，30代次内的试管凝集效价均达1：320，ELISA几何平均滴度（GMT）分别为1：4835和1：3915，且30代次内的ELISA效价分别为1：4315和1：3752以上；30代次菌液的血清杀菌抗体均≥1：32，用第30代次工作种子批菌种生产的A群和C群脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖各项检定指标均达到国家标准。结论A、C群脑膜炎奈瑟球菌结合疫苗生产用菌株CMCC（B）29201和CMCC（B）29205株毒性低、抗原性和免疫原性良好，连续传代至30代次仍保持较低的毒性和较好的抗原性及免疫原性，纯化的A群和C群脑膜炎奈瑟球菌荚膜多糖质量符合质控要求。

肺炎球菌—脑膜炎奈瑟球菌联合疫苗研究进展

肺炎球菌和脑膜炎球菌感染是引起婴幼儿肺炎、化脓性脑膜炎及爆发性败血症的主要致病菌。目前接种疫苗是预防肺炎球菌和脑膜炎球菌感染最为有效的方法。1938年研究人员首次进行了1型和2型肺炎球菌荚膜多糖双价疫苗大规模接种临床试验;1978年14价肺炎球菌荚膜多糖疫苗在美国正式上市;我国从1966年开始研制流脑疫苗,

穿心莲内酯对脑膜炎奈瑟球菌感染大鼠继发内毒素血症的影响

目的:观察穿心莲内酯对脑膜炎奈瑟球菌感染大鼠经抗生素治疗后的内毒素血症的治疗效果及其作用机制。方法:新生11天大鼠,经小脑延髓池进针,注射浓度为3×108cfu/ml的脑膜炎奈瑟球菌混悬液,复制脑膜炎模型。实验分为正常组、模型组、抗生素治疗组(氨苄青霉素钠200 mg/kg)、穿心莲内酯组(50 mg/kg)、激素组(地塞米松1 mg/kg)。连续给药6天后观察各组的存活率、平均最高体温增量、血浆脂多糖水平、血清TNF-α、IL-6水平,Western印迹法测定脑膜组织p65和IκBα表达水平。结果:50 mg/kg穿心莲内酯和激素治疗组存活率明显高于抗生素组,平均最高体温增量、血浆脂多糖水平、血清TNF-α和IL-6水平显著低于抗生素组;p65表达水平低于模型和单用抗生素组,而IκBα的表达水平高于模型和单用抗生素组。结论:穿心莲内酯对脑膜炎奈瑟球菌感染大鼠经抗生素治疗后的内毒素血症具有一定的治疗效果,其机制可能是通过抑制NF-B炎症通路,进而抑制炎症反应有关。

流脑与脑膜炎奈瑟球菌

从微生物学、病理学和免疫学的角度,就流脑与脑膜炎奈瑟球菌的生物学特点、病原学、致病机理、疾病的症状和传播、流行规律、免疫性、预防的研究进展作了综合评述。

脑膜炎奈瑟球菌免疫组合物的制备及其免疫效果的检测

目的利用不同的载体对脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis,Nm)A群、B群、C群、W135群和Y群进行偶联,比较不同的免疫组合物的免疫效果。方法将Nm A群、W135群和Y群多糖与CRM197偶联;将B群Nm菌种进行传代、培养、提取并纯化外膜蛋白,将外膜蛋白与C群多糖偶联。采用冻干水化法将蛋白质-多糖偶联物与脂质体(以明矾作为对照)混合后,免疫豚鼠,对不同Nm免疫组合物的杀菌滴度进行检测。结果各免疫组合物针对相应的Nm血清群具有不同的免疫作用,与C群多糖和B群外膜蛋白直接混合后免疫相比,C群多糖与B群外膜蛋白以共价键偶联后形成的免疫复合物免疫豚鼠,可引发更高滴度的杀菌抗体;而与以明矾作为佐剂相比,以脂质体作为佐剂均具有更好的免疫促进作用,其中以A群和Y群的免疫增强效果明显(P<0.05)。结论以不同抗原共价键偶联的方式较抗原直接混合后制备的Nm免疫组合物具有更高的杀菌滴度,同时以脂质体作为佐剂有利于增强脑膜炎疫苗的免疫效果。

2013-2015年北京市门头沟区健康人群脑膜炎奈瑟氏球菌带菌率分析

目的了解北京市门头沟区健康人群脑膜炎奈瑟氏球菌（Neisseriameningitides,Nm）带菌情况,为制定防控措施提供依据。方法 2013-2015年在门头沟区分层整随机抽取不同年龄组健康人群进行咽拭子采样,分离、鉴定Nm。结果在756例健康人群中,检出Nm 41株,带菌率为5.42%。在分离到的41株Nm菌株中,B群7株,不可分群24株,自凝菌10株。结论北京市门头沟区健康人群Nm带菌者主要集中在15~39岁,检出的菌株以不可分群为主。

流行性脑脊髓膜炎患者脑脊液中脑膜炎奈瑟球菌的菌群分布与药物敏感性分析

流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）是由脑膜炎奈瑟菌引起的一种急性呼吸道传染病，主要的致病血清群是A、B、C、Y和W135群。近几年发生了由A群向B群及W135群变迁的趋势，我们分析了流行性脑脊髓膜炎患者脑脊液中脑膜炎奈瑟氏球菌菌群分布及药物敏感性。

酵母浸出粉在奈瑟脑膜炎双球菌培养中的比较观察

目的探索A群,C群奈瑟脑膜炎双球菌(简称流脑)多糖疫苗生产中奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。方法在培养基配制中用增减酵母浸出粉的方法制备相应的培养基,8h收菌,通过菌体的收获量并参考多糖量来确定较好的培养基配比。结果不同培养基用于A群、C群奈瑟脑膜炎菌培养8h后均有收获,其中2号培养基(酵母浸出粉)培养的菌体的浓度明显高于1号和3号培养基,它们之间有显著性差异(P<0.05)此种培养基能提高奈瑟脑膜炎双球菌的产量。结论添加酵母浸出粉的培养基可作为A群、C群奈瑟脑膜炎双球菌培养的最适培养基。

南宁市儿童流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和脑膜炎奈瑟菌所致脑膜炎流行病学特征分析

目的 了解广西南宁市 5岁以下儿童流感嗜血杆菌 (Hi)、肺炎链球菌 (Sp)和脑膜炎奈瑟菌 (Nm)所致脑膜炎流行病学特征 ,为制订该病的预防对策提供依据。方法 2 0 0 0年 11月至 2 0 0 2年 12月对广西南宁市市区、市郊 15个乡镇、武鸣县 10个乡镇和邕宁县 14个乡镇的凡符合“疑似脑膜炎筛检标准”的 5岁以下患儿进行以病原学为依据的细菌性脑膜炎流行病学监测。结果 共评估了12 72例疑似脑膜炎患儿 ,发现Hi脑膜炎 3例、Sp脑膜炎 4例 ,未发现Nm脑膜炎病例 ;Hi、Sp脑膜炎年均发病率分别为 0 98/10万、1.30 /10万 ;Hi和Sp脑膜炎病例分布于邕宁县和南宁市区 ;Hi、Sp脑膜炎平均发病年龄分别为 11 7、5 8月龄 ;发病季节较分散 ;临床症状体征均较重 ,Hi和Sp脑膜炎各有 1例并发症发生 ,Sp脑膜炎病死 1例 ,均无后遗症发生 ;所分离的Hi和Sp菌株有对青毒素和复方新诺明耐药的现象 ;确诊患儿绝大多数居住于农村 ,均未接种过相应的疫苗。结论 虽然本次监测南宁市 5岁以下儿童Hi、Sp和Nm所致脑膜炎发病率均较低 ,但除采取针对呼吸道传染病的预防措施外 ,仍主张采取针对性的疫苗接种。

B群脑膜炎奈瑟球菌感染的流行现状及耐药状况

随着多种脑膜炎奈瑟菌(Nm)菌种对应疫苗的问世,各型流行性脑脊髓膜炎(简称"流脑")的流行情况发生着变化,近几年B群Nm构成增多,健康人群中B群Nm带菌者占比上升,我国部分地区也出现由于密切接触B群Nm带菌者从而致病的情况。了解B群Nm感染的流行现况,明确B群株耐药情况,更新预防性治疗药品方案,可有效降低流脑的发病率和死亡率。本文针对B群Nm感染的流行和耐药现状作一综述,为防治提供参考。

2017年登封市儿童青少年脑膜炎奈瑟球菌带菌抽样调查

目的了解河南省登封市儿童青少年中脑膜炎奈瑟菌(Nm)的菌群分布特征与变迁趋势,为流行性脑脊髓膜炎(流脑)的防控工作提供有效的信息。方法按照分层分组随机抽样的方法,将调查对象分为7个年龄组,每个采样对象采集1支咽拭子,共采集210份样本,运用细菌培养和实时荧光(real-time PCR)的方法对标本进行菌群的鉴定。结果儿童青少年中检出脑膜炎奈瑟菌47株,儿童青少年Nm的带菌率为22.38%;血清分群中,C群占51%,W135占群21%,Y群占15%,B群占2%,X群占4%,不可分群的占6%。0～6岁带菌率为0,14～19岁的带菌率最高为90.0%。结论登封市儿童青少年中脑膜炎奈瑟菌带菌率较高,菌群分布广,存在流行性脑脊髓膜炎的暴发风险。

湖南省C群及W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征分型

目的了解湖南省C群和W135群脑膜炎奈瑟菌的流行病学及病原学特征。方法收集2006—2016年湖南省流行性脑脊髓膜炎患者的血液或脑脊液、患者密切接触者以及健康人群的咽拭子标本中分离到的脑膜炎奈瑟菌菌株,进行生化检测、血清学分群。选取其中的C群和W135群部分菌株进行药敏试验,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型以及多位点序列分型(MLST)方法对菌株进行分子分型,分析其流行病学特征。结果经生化和血清学确认后,选取22株C群脑膜炎奈瑟菌和9株W135群脑膜炎奈瑟菌进行药敏试验,结果显示对大部分检测抗菌药物全部敏感,但对复方磺胺甲口恶唑C群菌株全部耐药,而W135群菌株的耐药率为55.56%,两者比较差异有统计学意义(χ~2=7.61,P=0.006)。经PFGE分型后,22株C群脑膜炎奈瑟菌共分为5种PFGE带型,其中5株HNC-01带型和13株HNC-02带型属同一亚型;2006年湖南省第1例C群患者分离菌株的PFGE带型为HNC-02,与2012、2013年患者以及患者密切接触者分离菌株的图谱完全一致,与带型为HNC-01的2008、2010、2013年的患者分离菌株仅有一个带型的差异,均属于优势带型。9株W135群脑膜炎奈瑟菌PFGE分型后共分为2个带型,其中首例患者与2013、2016年患者分离菌株的带型一致,均为HNW-01型。选取其中优势带型菌株经MLST后,结果 C群脑膜炎奈瑟菌为ST4821型,W135群脑膜炎奈瑟菌为ST11型,均属于脑膜炎奈瑟菌的高致病性克隆群。结论湖南省C群流脑和W135群流脑自首例病例出现后,各自都成为了该群病例的优势流行克隆群,C群流脑近年有减少态势,但出现了新的流行型别;W135群自2012年起成为我省新的流脑流行株,其优势菌株与国际上侵袭性的W群分型一致,可能引起新的大流行,应及时制定相应的防控政策。

汶川大地震后绵竹灾民安置点灾民脑膜炎奈瑟菌带菌率调查

目的:了解汶川地震绵竹灾区灾民流行性脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm)的带菌现状,提高防治水平。方法:于2008年6月份采集咽拭标本321份,现场接种于巧克力双抗平板分离培养,通过生化鉴定、染色镜检、血清学鉴定、PCR鉴定分群。结果:调查的321名灾民中,分离到Nm2株,均为B群,阳性率为0.62%。结论:绵竹灾区灾民流脑带菌状况以B群为主,带菌率相对较低。卫生防疫、卫生监督取得了阶段性成果。

B群奈瑟脑膜炎球菌引起休克型流行性脑脊髓膜炎1例报道

患者，女，16岁，学生，因发热、恶心、呕吐17h，手足发绀3h，于2006年12月9日10：30入院。患者开始发病时，感觉全身酸痛不适，发热，体温39．0℃左右，双眼眶胀痛，恶心、呕吐2次，偶有右下肢抽搐。在校医务室治疗，静脉滴注克林霉素，症状无好转。后发现颜面及躯干散在淤点，阴道有少量出血（非经期）；入院前3h患者逐渐出现四肢厥冷，