活性氧对尘肺患者肺泡巨噬细胞凋亡信号转导途径的作用

目的探讨活性氧(ROS)对Fas/FasL信号转导途径致肺泡巨噬细胞凋亡作用。方法以中国北戴河煤炭工人疗养院无其他肺部疾病的Ⅰ期、Ⅱ期尘肺患者共45例为研究对象,将支气管肺泡灌洗液(BALF)中的肺泡巨噬细胞(AM)分两组培养,即对照组、超氧化物歧化酶(SOD)组。采用TUNEL技术检测AM凋亡情况,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA片段,W estern b lot法检测AM的Fas、FasL、caspase-8、caspase-3表达水平。结果SOD组的凋亡指数(9.50±2.76)显著低于对照组(19.18±2.83,P<0.05);SOD组的Fas、FasL、caspase-8、caspase-3蛋白表达水平(分别为0.107±0.065、0.115±0.047、0.231±0.139、0.312±0.114)均低于对照组(分别为0.209±0.084、0.210±0.097、0.374±0.071、0.441±0.095,P<0.05);对照组出现凋亡细胞特征性"梯状带",而SOD组未出现。结论Fas/FasL信号转导途径介导的AM凋亡可能与ROS上调Fas/FasL系统的表达有关。

川芎嗪对依托泊苷诱导小细胞肺癌细胞凋亡的增敏作用

目的 观察低浓度 (10μg/ m l)的中药钙拮抗剂川芎提取物川芎嗪 (tetramethylpyrazine,TMP)与化疗药物依托泊苷 (etoposide,VP- 16 )合用对人小细胞肺癌 (sm all cell lung cancer,SCL C)细胞的影响。方法 用 MTT法观察药物对体外培养的人小细胞肺癌 H4 4 6细胞存活率的影响 ;用吖啶橙 /溴乙啶双荧光染色法检测凋亡细胞 ;采用流式细胞术分析药物对 H4 4 6细胞周期的影响。结果 TMP和 VP- 16合用与单用 VP- 16相比细胞存活率明显下降 ,VP- 16的浓度在 0 .1、1、10、10 0 μg/ ml时 ,细胞存活率分别为 (93.85± 2 .5 1) %、(91.90± 2 .10 ) %、(6 6 .6 4± 3.73) %和 (8.2 1± 1.84 ) %。 VP- 16与低浓度的 TMP联用后 ,上述浓度细胞存活率分别降为 (90 .80± 1.2 0 ) %、(78.96± 1.94 ) %、(5 1.4 8± 2 .5 2 ) %和 (2 .5 6± 1.4 4 ) % ,其合并指数为 0 .85 ,增效倍数为 4 .32。双荧光染色法证实TMP可增强 VP- 16的凋亡诱导作用 ;细胞周期分析表明低浓度 TMP对细胞周期无明显影响 ,VP- 16半数抑制浓度使细胞生长停滞在 S期 ,抑制细胞有丝分裂及 DNA合成 ,两者合用主要表现为 VP- 16的作用。结论 低浓度的TMP与 VP-

Caspase-3融合蛋白基因的构建及其对HeLa细胞凋亡的诱导作用

目的 观察重构型 caspase- 3及其 N-端融合蛋白的表达对 He L a细胞的凋亡诱导作用 .方法 用反转录 PCR获取人 caspase- 3基因 ,用重组 PCR方法构建人重构型 caspase-3及其融合蛋白基因 ,将基因克隆入表达载体 pc DNA3,脂质体法转染 He L a细胞 ,通过细胞计数、电镜观察、MTT法等检测被转染细胞的生长及其凋亡状况 .结果 成功获得了 cas-pase- 3基因 ,构建了重构型 caspase- 3基因和重构型 caspase- 3与绿脓杆菌外毒素 (PE)转膜结构域部分肽段的融合蛋白基因及其表达载体 ,与对照组相比 ,在转染后 1～ 4d内 ,两种基因的表达均导致 He L a细胞存活数减少 ,大量细胞发生凋亡 ,且二者活性相当 .结论 重构型 caspase- 3及其融合蛋白可以诱导转染的 He L

紫杉醇对K562细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用

目的 探讨紫杉醇体外抑制 K5 6 2细胞株及诱导凋亡的作用。方法 体外培养 K 5 6 2白血病细胞株 ,以不同浓度紫杉醇处理 12～ 72小时后 ,用 MTT法测定细胞生长抑制作用 ,用细胞形态学观察和 DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡 ,用流式细胞仪 (FCM)检测细胞 DNA含量及细胞周期。结果 K5 6 2细胞经紫杉醇处理后细胞生长受抑 ,对 K5 6 2细胞的半数抑制浓度 IC50 为 0 .84μg/ ml。经药物作用后可见细胞染色质浓聚和凋亡小体形成 ,FCM显示细胞凋亡率明显增加 ,但电泳检测未见 DNA裂解。结论 紫杉醇能抑制 K5 6 2细胞的生长 。

bcl-2核酶对SMMC7721细胞端粒酶活性的影响作用

目的 观察 bcl- 2核酶对 SMMC- 772 1细胞的作用 ,探讨 bcl- 2表达水平的改变对细胞端粒酶活性的影响 .方法 经脂质体介导的方法将 PMTr- neo(正向 bcl- 2核酶真核表达载体 )导入 SMMC772 1细胞中 ,细胞克隆转移扩大培养后 ,采用 TU NEL,TRAP- PCR- EL ISA,免疫组化技术结合图像分析技术检测 SMMC772 1/ PMTr- neo细胞凋亡、细胞端粒酶活性及 P16 ,P2 1的改变 .结果 较对照组 SMMC772 1/PMTr- neo细胞 Bcl- 2表达水平显著下降 ,伴有显著细胞凋亡现象 ;同时端粒酶活性下降 ,P16 ,P2 1表达水平显著增加 .结论 bcl- 2核酶可促进 SMMC772 1细胞发生凋亡 ,并降低细胞端粒酶活性 ,提示 Bcl- 2表达水平的改变对细胞端粒酶活性有一定的影响 .

阿司匹林对脑缺血-再灌注损伤大鼠神经保护作用的机制

目的探讨阿司匹林对脑缺血-再灌注损伤大鼠神经保护作用的机制。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型。将48只W istar大鼠分为对照组(A组)和小剂量组(B组,阿司匹林20 mg/kg)、中等剂量组(C组,阿司匹林80 mg/kg)、大剂量组(D组,阿司匹林320 mg/kg),每组12只。实验组于脑缺血-再灌注术后连续3 d腹腔注射相应剂量的阿司匹林。脑缺血-再灌注后当日始连续4 d对每组动物进行Bederson评分并记录。第4天处死各组大鼠,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定梗死灶体积,用缺口末端标记(TUNEL)技术原位标记凋亡细胞,用免疫组化法检测凋亡调节基因相关蛋白BCL-2和BAX的表达。结果用阿司匹林干预后,B、C、D组大鼠肢体功能改善,与A组相比,神经功能缺损评分明显降低,梗死体积显著缩小(分别较A组缩小16.3%、19.2%和12.8%);缺血周边区凋亡细胞阳性率A组为58%,B组为37%,C组为35%,D组为40%;缺血区BCL-2蛋白表达A组为38%,B组为55%,C组为60%,D组为50%;BAX蛋白表达A组为50%,B组为34%,C组为33%,D组为42%。三个药物组间进行比较,小、中等剂量阿司匹林组对脑梗死的疗效优于大剂量组。结论早期应用阿司匹林可减轻大鼠脑缺血-再灌注后的神经功能缺损,具有神经保护作用。

隔药灸对溃疡性结肠炎大鼠中性粒细胞凋亡的调节作用(英文)

背景:隔药灸治疗溃疡性结肠炎具有良好的干预效果,是否与溃疡性结肠炎发病过程中中性粒细胞的凋亡有关?目的:观察溃疡性结肠炎大鼠中性粒细胞凋亡情况及隔药灸的调节作用。设计:动物实验观察。单位:上海市针灸经络研究所。材料:实验于2002-08/2003-06完成。选择雄性清洁级SD大鼠30只,体质量(140±20)g,由上海中医药大学实验动物中心提供。按随机数字表法分为两组,造模组20只,正常对照组10只。方法:采用免疫学方法建立大鼠溃疡性结肠炎模型。随机抽取模型大鼠4只与正常组大鼠2只剖取远端结肠作组织病理学观察,在确定模型制备成功后,将剩余模型大鼠分为模型组和隔药灸组,每组8只,8只正常大鼠作为对照组。隔药灸组在双天枢及气海穴施以隔药灸,药饼以附子、肉桂等配制,艾炷约90mg置于药饼上施灸,1次/d,共灸10次。治疗结束后3组大鼠同时处死,分离外周血单个核细胞进行培养,取以上各组按1∶50稀释的培养上清液,以等体积RPMI-1640培养液作为空白对照组。分别与正常大鼠外周血中性粒细胞共同孵育,应用流式细胞术检测中性粒细胞的凋亡率。主要观察指标:各组大鼠外周血中性粒细胞凋亡率比较。结果:纳入大鼠造模组20只,正常对照组10只。造模组4只大鼠与正常组2只大鼠处死作组织病理学观察,进入结果分析造模组和正常对照组分别为16和8只。①溃疡性结肠炎大鼠中性粒细胞凋亡率显著低于空白对照组[(16.34±2.80)%,(52.33±9.94)%,(q=-35.99,P<0.01)],而正常对照组[(48.79±11.30)%]与空白对照组之间差异无显著性意义(P>0.05)。②经治疗后隔药灸组中性粒细胞凋亡率[(36.03±8.31)%]显著高于溃疡性结肠炎模型组(q=19.69,P<0.01),但仍低于正常对照组(q=-16.30,P<0.05)。结论:调节和/或减轻溃疡性结肠炎中性粒细胞凋亡被抑制的状态,可能是隔药灸治疗溃疡性结肠炎的主要机制之一。

左旋卡尼汀对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤的保护作用

目的 :探讨左旋卡尼汀 (L carnitine)对乳鼠心肌细胞在模拟缺血 (缺氧 )再灌注 (缺氧 复氧 )状态下发生损伤的保护作用及其可能的机制 .方法 :培养出生 1 3d的SD乳鼠心肌细胞 ,建立缺血再灌注损伤 (I/R)模型 ,实验分 3组 :①正常对照组 (Control) ;②I/R组 :缺氧 1 2 0min ,复氧 2 4 0min;③左旋卡尼汀组 :I/R之前 2h加入不同浓度左旋卡尼汀 ,使其终浓度分别为 1组 2 0mg/L ,2组 5 0mg/L ,3组 1 0 0mg/L ,4组2 0 0mg/L .观察指标包括 :①超氧化物酶 (SOD)活性 ;②丙二醛 (MDA)含量 ;③琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性 ;④流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡率 .结果 :I/R组心肌细胞内MDA含量明显升高 ,SOD活性显著下降 ,琥珀酸脱氢酶 (SDH)活性明显变低 ,而且细胞凋亡率也显著增加 ,与Control组比较具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;但是在药物治疗组 ,随给药浓度的增加 ,MDA含量逐渐恢复正常 ,SOD活性逐渐回升 ,SDH活性明显升高 ,而且细胞凋亡率呈下降趋势 ,各药物治疗组与I/R组比较各实验指标均具有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,表明心肌细胞在经左旋卡尼汀预处理之后 ,抗损伤能力加强 ,发生损伤的程度减少 .结论 :左旋卡尼汀对心肌细胞具有保护作用 。

丹参酮I抗肿瘤作用及作用机制的实验研究

目的 通过丹参酮 I(tanshinone I)对肿瘤细胞的体内外实验研究 ,探讨丹参酮 I抗肿瘤作用及作用机制。方法 人肝癌细胞 (Hep G2 )培养液中加入不同浓度的丹参酮 I,培养 72小时 ,观察 Hep G2细胞的增殖率 ;倒置显微镜下观察 Hep G2细胞的形态变化 ;流式细胞仪 (FCM)检测 Hep G2细胞周期及凋亡率 ;免疫组化检测 Hep G2细胞的增殖凋亡调控相关基因 (Bax、Bcl- 2 )的蛋白表达。用 Hep G2细胞制作 Balb/c裸鼠荷瘤模型 ,每天腹腔注射丹参酮 I1次连续 10天 ,观察抑瘤率。结果 丹参酮 I抑制 Hep G2细胞生长 ;阻滞 Hep G2细胞周期于 G0 /G1 期并诱导细胞凋亡 ;通过下调 Bcl- 2基因表达 (P<0 .0 1) ,上调 Bax基因表达 (P<0 .0 1)诱导 Hep G2细胞凋亡 ;抑制荷瘤裸鼠肿瘤生长 ,抑瘤率为 33.3%。结论 丹参酮 I具有抗肿瘤活性 ,其作用机制之一是诱导细胞凋亡。

氨茶碱治疗对哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞凋亡的作用

目的：探讨氨茶碱对哮喘肺内嗜酸性粒细胞（Eos）凋亡的作用。方法：以卵白蛋白致敏的过敏性哮喘豚鼠为模型，采用3’－末端标记原位细胞凋亡检测、光镜和电镜形态学方法，观察氨茶碱治疗对哮喘豚鼠肺内Eos凋亡的作用。结果：氨茶碱治疗导致哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液Eos数量显著降低，肺内Eos凋亡显著增加，凋亡Eos能被巨噬细胞吞噬。结论：诱导肺内Eos凋亡是氨茶碱治疗哮喘的一个重要机制。

土贝母皂苷对HL-60细胞周期作用的研究

目的:应用土贝母皂苷(下称皂苷)作用于人早幼粒白血病细胞(HL -60),研究皂苷抗肿瘤作用的分子机制。方法:采用流式细胞术等方法分析细胞周期及凋亡;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因 bcl- 2、cdc2 和 cy clinB1表达的变化。结果:15μmol/L皂苷作用 24 h 可将 HL -60 细胞阻滞于G2/M期,进而诱导凋亡,流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型的亚二倍体“凋亡小峰”。凋亡抑制基因bcl 2表达无明显变化,周期蛋白 cyclinB1 表达降低,而cdc2表达无明显改变。结论:皂苷导致HL- 60细胞 G2/M期阻滞,进而诱导凋亡;周期阻滞的分子机制与降低 cy clinB1蛋白水平有关,而凋亡的诱导与bcl- 2表达无关。

高、低剂量极化液对缺血/再灌注心肌保护作用的对比研究

目的 :探讨两种剂量葡萄糖 胰岛素 钾液 (GIK)对心肌缺血 /再灌注 (MI/R)后心功能和细胞凋亡的影响 .方法 :制备兔MI/R模型 ,分别用生理盐水 ,低剂量极化液(LGIK) ,高剂量极化液 (HGIK)干预 .观察心室压变化 ,再灌注结束后检测心肌梗死面积及心肌细胞凋亡指数 (AI) .结果 :MI/R造成明显的心脏功能障碍 ,心肌梗死和缺血区细胞凋亡 .HGIK具有减轻MI/R损伤作用 ,包括明显减轻心肌梗死范围 (P <0 .0 1 ) ,减少AI (P <0 .0 1 ) ,促进再灌注后心脏功能的恢复 .LGIK能亦减轻心肌梗死范围 (P <0 .0 5 ) ,减少AI(P <0 .0 5 ) .两组之间作用有显著差别 (P <0 .0 5 ) .结论 :GLK可能通过抑制MI/R心肌细胞凋亡而实现保护MI/R损伤的作用 .

蜘蛛毒素对食管癌细胞株作用机制的初步研究

目的探讨雷氏大疣蛛毒素对人食管癌细胞株作用机制。方法采用不同浓度的雷氏大疣蛛毒素处理食管癌细胞株TE-1,经MTT法测定蜘蛛毒素对人食管癌细胞株TE-1增殖的影响,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞仪检测细胞增殖周期的分布,免疫组化法与ELISA法检测经蜘蛛毒素作用食管癌细胞株TE-1的VEGF表达情况。结果雷氏大疣蛛毒素能够抑制人食管癌细胞株TE-1的增殖,形态学观察到凋亡现象,流式细胞仪检测显示蜘蛛毒素作用后凋亡峰明显,出现G2/M期阻滞,对VEGF表达有抑制作用。结论雷氏大疣蛛毒素可抑制食管癌细胞株TE-1的增殖和VEGF表达,诱导凋亡,有可能是一种具有抗肿瘤作用的天然药物,其抗肿瘤作用的机制有待进一步研究。

纳米羟基磷灰石溶胶对人舌癌细胞株的作用研究

目的 观察纳米羟基磷灰石溶胶 (Hap- sol)对人舌癌细胞株 Tca8113生长的影响 ,并探讨其可能机制。方法 将 Hap- sol加入 Tca8113细胞培养液 ,Hoechst33342荧光染色观察细胞形态 ;DNA抽提琼脂糖凝胶电泳观察 DNA“梯状”条带 ;测定细胞 DNA断裂百分率 ;细胞酸性磷酸酶染色观察溶酶体活性。结果 不同浓度 Hap- sol(10～ 6 0μl/孔 )作用于 Tca8113细胞 5天及 5 0μl/孔作用不同时间 (1～ 6天 )后 ,荧光显微镜观察细胞出现典型凋亡形态学改变 ;DNA抽提琼脂糖电泳出现凋亡细胞特征性“梯状”条带 ;DNA断裂百分率及细胞酸性磷酸酶着色深度随 Hap- sol浓度增大或处理时间延长而逐渐增高或明显。结论 Hap- sol能诱导体外培养的人舌癌细胞株Tca8113发生凋亡 。

聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子对异种移植猪肝细胞凋亡的抑制作用

目的:观察聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子对猪肝细胞异种移植后移植肝细胞凋亡的抑制作用。方法:实验于2004-03/2005-03在南通大学神经再生实验室完成,选用中国实验用小型猪(n=5)及SD大鼠(n=123)。①实验分组及方法:采用原位胶原酶循环灌注法分离猪肝细胞。D-氨基半乳糖腹腔内注射制作大鼠急性肝衰竭模型,按随机数字表法分成3组(n=41),分别在单纯肝细胞移植组、胶原肝细胞移植组、纳米胶原肝细胞移植组急性肝衰竭大鼠腹腔内移植震荡培养24h的猪肝细胞悬液、Ⅰ型胶原凝胶固定培养24h的猪肝细胞、Ⅰ型胶原凝胶包埋的聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子培养24h的猪肝细胞。②实验评估:观察移植肝细胞的病理变化、培养和移植肝细胞的凋亡率、坏死率及活率。结果:①各组移植肝细胞的活率及凋亡率:纳米胶原肝细胞移植组移植肝细胞的存活时间最长。肝细胞体外培养1d后,3组肝细胞均存在不同程度的凋亡,以单纯肝细胞移植组凋亡率最高,纳米胶原肝细胞移植组最低。胶原肝细胞移植组、纳米胶原肝细胞移植组的移植肝细胞凋亡率随着移植时间的延长呈缓慢上升趋势,但较单纯肝细胞移植组为低;移植后1,2d,胶原肝细胞移植组、纳米胶原肝细胞移植组的移植肝细胞活率明显高于单纯肝细胞移植组(P<0.05);移植后3,5d时,纳米胶原肝细胞移植组移植肝细胞凋亡率明显低于胶原肝细胞移植组(P<0.05),活率则明显高于胶原肝细胞移植组(P<0.05)。②各组移植肝细胞的坏死率:移植后1d,胶原肝细胞移植组移植肝细胞坏死率明显上升;移植后2d,3组肝细胞坏死率均有不同程度的上升,胶原肝细胞移植组、纳米胶原肝细胞移植组明显高于单纯肝细胞移植组(P<0.05),胶原肝细胞移植组高于纳米胶原肝细胞移植组(P<0.05)。移植后3d,单纯肝细胞移植组肝细胞坏死率大幅度上升,胶原肝细胞移植组、纳米胶原肝细胞移植组无明显变化,但显著低于单纯肝细胞移植组(P<0.05),胶原肝细胞移植组、纳米胶原肝细胞移植组之间差异无显著性意义(P>0.05)。移植后5d,胶原肝细胞移植组、纳米胶原肝细胞移植组肝细胞坏死率进一步上升,纳米胶原肝细胞移植组显著低于胶原肝细胞移植组(P<0.05)。结论:聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子有抑制培养和移植肝细胞凋亡、提高移植肝细胞活率的作用,聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子和Ⅰ型胶原结合可增强抗培养和移植肝细胞凋亡的能力,延长移植肝细胞的生存时间。

硒酸酯多糖诱导人骨肉瘤细胞凋亡作用的体外实验

目的 :探索有机硒在体外对人骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用。方法 :以硒酸酯多糖为实验药物 ,通过MTT法检测细胞活力 ,荧光显微镜、扫描电镜观察凋亡细胞形态 ,流式细胞仪分析凋亡峰及细胞周期等 ,研究其对骨肉瘤细胞的诱导凋亡作用。结果 :硒酸酯多糖作用骨肉瘤细胞 1、2、4、6d及浓度为 0、3 0、60、12 0μg/mL后细胞生长曲线呈明显下降趋势 ,差异有统计学意义 ,P <0 0 5。形态学观察可见早期和晚期凋亡细胞 ,细胞周期主要受阻于S期。结论 :硒酸酯多糖可在体外诱导人骨肉瘤细胞凋亡。

儿茶素单体EGCG诱导胃癌MGC-803细胞凋亡和不同浓度作用效果的比较

目的:探讨EGCG体外诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用。方法:以不同浓度EGCG分别处理MGC-803细胞,用琼脂糖凝胶电泳、电镜、MTT法观察MGC-803细胞DNA带型、形态和抑制率的变化。结果:琼脂糖凝胶电泳呈典型的DNA“梯状带”,但高浓度的EGCG(1×10^(-3)mol/L)作用MGC-803细胞33小时后,电泳显示细胞坏死后模糊的DNA呈弥散的“膜状带”。电镜观察可见染色质凝集呈新月状附在核膜周边,细胞变成数个大小不等的由膜包裹的凋亡小体。MTT法测定1×10^(-3)mol/L、1×10^(-4)mol/L、1×10^(-5)mol/L、1×10^(-6)mol/L、1×10^(-7)mol/L EGCG对MGC-803细胞生长抑制率分别为68.39%、20.38%、20.30%、16.99%、13.22%。结论:EGCG有明显的诱导胃癌MGC-803细胞凋亡作用,高浓度的EGCG直接导致细胞坏死。

脑损伤大鼠皮质神经细胞凋亡过程中细胞外调节激酶通路的作用

目的:细胞外调节激酶通路在凋亡信号转导中具有重要作用,观察细胞外调节激酶信号转导通路在颅脑损伤中的作用。方法:实验于2004-09/2006-01在华北煤炭医学院中心实验室完成。选用SD大鼠70只,按随机数字表法分为2组,即对照组(n=28)和模型组(n=42),每组又分为伤后10min,30min,3h,6h,24h,48h和72h7个时相点,对照组每个时相点4只大鼠,模型组每个时相点6只大鼠。按照Mamarou方法建立大鼠重型弥漫性颅脑损伤模型,在不同时相点采用免疫组化、Western-blot法分别检测两组大鼠颅脑损伤后皮质细胞外调节激酶的表达情况,另外分别应用原位杂交方法、原位末端标记法检测半胱氨酸天冬氨酸酶3及凋亡细胞,并进行比较。结果:70只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①模型组大鼠皮质p-细胞外调节激酶1/2蛋白在伤后10min时已较对照组明显升高(P<0.05),逐渐增强,伤后6h达高峰,24h仍有大量表达,明显高于对照组(P<0.01),至伤后48h降至对照组水平(P>0.05)。②模型组大鼠皮质半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA杂交阳性信号表达在伤后3h开始升高,48h达高峰,72h仍明显高于对照组(P<0.01)。③模型组大鼠皮质伤后3h偶见原位末端标记阳性细胞,6h开始增加,明显高于对照组(P<0.01),48h达高峰。④p-细胞外调节激酶1/2蛋白与半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA及原位末端标记阳性细胞均主要分布于损伤中心区及其周围,在分布区域上呈现很大的相似性。结论:脑损伤时p-细胞外调节激酶1/2蛋白表达呈一种过度激活状态,而且与半胱氨酸天冬氨酸酶3mRNA及原位末端标记阳性细胞在分布区域上呈现很大的相似性,推测大鼠脑损伤后细胞外调节激酶通路的过度激活是导致神经细胞凋亡的作用途径之一。

银杏叶提取物对海马注射淀粉样β蛋白致阿尔茨海默病大鼠模型神经元凋亡的保护作用

目的:观察具有神经保护作用的银杏叶提取物对海马注射淀粉样β蛋白的阿尔茨海默病模型大鼠神经元凋亡的影响。方法:实验于2002-03/2003-10在河北医科大学第二医院、解放军总医院老年医学研究所、北京大学蛋白质工程国家重点实验室完成。取清洁级成年雌性SD大鼠共30只,随机分为3组,各10只。其中两组大鼠以淀粉样β蛋白25～353μL(4g/L)注射于海马齿状回,10只于当日起给予银杏叶提取物(购自德国威玛舒培博士药厂)2mL腹腔注射,连续7d,为银杏叶提取物组;10只以等量生理盐水腹腔注射7d,为淀粉样β蛋白组;另外10只动物以生理盐水3μL注射于海马齿状回,为对照组;行脱氧核苷酰转移酶法亦即脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记和免疫组化染色(Bcl-2和Bax)及双向凝胶电泳观察。结果:30只动物全部进入结果分析,无脱失。①淀粉样β蛋白组及银杏叶提取物组神经元均有凋亡发生。其细胞核被染成棕黄色。典型的凋亡细胞表现为染色质凝集,呈新月形聚集于核膜下。由于切面的不同,凝集的染色质可以不同形态散在于核切面的任意位置,有的以圆形位于核膜下,有的位于核中央,但不象坏死那样边界不清,呈絮状。细胞内有棕黄色粗颗粒分布或棕黄色细腻颗粒弥漫分布者为Bcl-2或bax阳性反应细胞。②淀粉样β蛋白组神经元凋亡率高于银杏叶提取物组(55%,21%);淀粉样β蛋白组Bcl-2反应阳性细胞率低于银杏叶提取物组(15%,47%);淀粉样β蛋白组Bax反应阳性细胞率高于银杏叶提取物组(49%,17%)。③通过分析比较得到的双向凝胶电泳图谱,淀粉样β蛋白组与对照组比较,有26个蛋白质点的体积百分含量发生显著性变化(P<0.05)。而在银杏叶提取物组上述26个发生变化的蛋白点有11个出现回调。结论:银杏叶提取物可使海马注射淀粉样β蛋白组对发生变化的蛋白点回调,对大鼠神经元凋亡有保护作用。

顺铂作用下沙鼠耳蜗螺旋神经节神经元和Corti器细胞的凋亡

目的 探讨顺铂是否可引起沙鼠耳蜗螺旋神经节 (spiralganglion ,SG)神经元和Corti器细胞的凋亡。方法 对沙鼠进行顺铂连续腹腔注射 ,每日 4mg kg体重 ,分别于健康对照组及给药 4、5、6、7d各处死沙鼠 12只 ,取左侧耳蜗 ,每组动物取 10只耳蜗做平行蜗轴的石蜡切片 ,另 2只耳蜗做底回蜗轴及基底膜超薄切片。通过末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术 (terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickendlabelingmethod ,TUNEL)及透射电镜检测连续用药不同时间后底回SG及Corti器的细胞凋亡情况。结果 连续应用顺铂 5～ 7d ,在透射电镜下可以观察到底回SG神经元及外毛细胞中出现凋亡特征性病理改变 ,TUNEL标记的石蜡切片中可见给药 5d后SG和Corti器出现的阳性细胞明显高于健康对照组 ,给药 6～ 7d阳性细胞进一步增加。