脱氢卡维丁对CCl_(4)诱导的肝纤维化大鼠的改善作用

目的探讨脱氢卡维丁对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl_(4))诱导的肝纤维化大鼠的改善作用及可能机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组(30 mg/kg)、脱氢卡维丁组(50 mg/kg),每组6只。除正常组外,其他各组采用30%CCl_(4)橄榄油溶液(1 mL/kg)腹腔注射复制肝纤维化模型,每周2次,连续14周。各给药组于造模第13、14周每天按设定剂量灌胃相应药物进行干预。正常组与模型组大鼠灌胃等体积的生理盐水。末次给药12 h后,测定各组大鼠肝脾指数;采用HE染色与Masson染色观察肝组织病理学变化,比色法检测大鼠血清丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;采用ELISA检测血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(typeⅢprocollagen,PCⅢ)及Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ,ColⅣ)的表达水平;Western blot法检测肝组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达情况。结果与正常组相比,模型组大鼠肝脾指数显著增加(P<0.001),肝组织纤维化进展明显,胶原容积分数明显增加(P<0.001),血清中ALT、AST、MDA、LN、HA、PCⅢ和ColⅣ水平显著升高(P<0.001),SOD明显下降(P<0.001);肝组织TGF-β1、α-SMA及N-cadherin蛋白表达水平明显上升(P<0.001),E-cadherin蛋白表达明显下降(P<0.001)。与模型组比较,脱氢卡维丁组大鼠肝脾指数明显降低(P<0.001),肝组织病理学损伤和纤维增生有效改善,胶原容积分数明显下降(P<0.001),血清ALT、AST、MDA含量显著降低(P<0.001),血清SOD的表达水平明显升高(P<0.001),LN、HA、PCⅢ、ColⅣ的表达明显下调(P<0.05,P<0.001),肝组织TGF-β1、α-SMA和N-cadherin蛋白表达显著下降(P<0.001),而E-cadherin蛋白表达明显升高(P<0.001)。结论脱氢卡维丁对肝纤维化大鼠具有良好的改善作用,其机制可能与调节氧化应激反应、下调N-cadherin、α-SMA、TGF-β1蛋白表达及上调E-cadherin蛋白表达有关。

高效液相色谱法测定岩黄连药材不同部位脱氢卡维丁的含量

目的:旨在开发一项高效液相色谱技术,用于检测岩黄连中脱氢卡维丁有效成分的含量。方法:采用Shiseido Spolar C18色谱柱(粒径5μm,规格250mm×4.6mm),流动相为乙腈-0.05moL·L^(-1)磷酸二氢钠溶液=25:75(取6g无水磷酸二氢钠加超纯水配置成1L的溶液),流速可达1.0mL·min^(-1),波长设置为347nm,柱温维持在30℃。结果:岩黄连药材中有效成分脱氢卡维丁在0.0241~0.3856μg(r=0.9999,n=5)范围内呈现良好线性关系,平均回收率为99.48%,RSD=1.44%。根部脱氢卡维丁含量高于其他部位。结论:这项技术快速准确,专属性强,为开发岩黄连药材和质量控制提供技术支撑。

不同产地岩黄连中总生物碱和脱氢卡维丁的比较研究

目的建立岩黄连中总生物碱和脱氢卡维丁的含量测定方法,并探讨不同产地岩黄连二者含量。方法以脱氢卡维丁为对照,分光光度法测定总生物碱含量;RP-HPLC法测定脱氢卡维丁含量,以Lichrosopher-C18柱为分析柱,0.01mo1/LKH2PO4水溶液(用磷酸调pH=3)-乙腈(75∶25)为流动相,检测波长347 nm,柱温30℃,流速1.0 ml/min。结果广西和贵州产的岩黄连药材总生物碱和脱氢卡维丁含量较高,且广西产的药材两者含量较稳定。结论所建立的方法操作简便快速,结果准确可靠。测定的不同产地样品中,以广西产的药材质量较好且稳定。

高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维丁的含量

目的:建立高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氧卡维丁含量的方法,为完善质量评价提供依据。方法:Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.01 mol·L^(-1)磷酸二氢钾水溶液(调pH至5.0)(25:75)为流动相,流速1.0 ml·min^(-1),检测波长347 nm,柱温30℃。结果:脱氢卡维丁在0.1966～1.1796μg(r=0.999 7)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为99.80%,RSD为1.35%。结论:所建立的方法简便、准确、重复性好。

高效液相色谱法测定不同来源岩黄连中不同部位脱氢卡维丁含量

目的 建立岩黄连中有效成分脱氢卡维丁的高效液相色谱（HPLC）含量测定方法,并对2种不同来源药材的不同部位进行分析,为岩黄连质量标准的制定提供参考.方法 采用SHISEIDO-SPOLAR C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,流动相为乙腈0.05 moL·L^-1磷酸二氢钠溶液（25∶75）,检测波长347 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温：30℃.结果 脱氢卡维丁进样量在0.024 1～0.482 0 μg范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9）;平均回收率99.48％（RSD=1.44％,n=6）.不同生长方式的岩黄连脱氢卡维丁的含量差异较大,以野生含量较高;药材不同部位中以根部含量最高.结论 建立的脱氢卡维丁含量测定方法简便,准确,重复性好,可用于岩黄连中类似生物碱成分的质量控制.

HPLC法测定岩黄连中不同部位脱氢卡维丁的含量

目的:建立岩黄连中不同部位脱氢卡维丁的高效液相色谱定量测定方法。方法:采用ZorbaxODSC18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(用10%KOH调pH至5.0)(85:15)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长为347nm,柱温为室温。结果:脱氢卡维丁在2.51～75.36μg/mL(r=0.99999,n=7)范围内线性关系良好,平均回收率为99.86%,RSD为0.58%。结论:该法简单、快速、重现性好,适用于岩黄连中脱氢卡维丁的定量分析。

广西各地岩黄连药材中脱氢卡维丁含量考察

目的考察广西10个县产岩黄连中脱氢卡维丁的含量,为控制岩黄连药材的质量提供参考。方法将岩黄连药材全草粉碎,加入无水乙醇,经索氏提取至无色,取药液过滤、稀释,采用高效液相色谱(HPLC)法测定脱氢卡维丁含量。色谱柱为Platisil-ODS柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾(80∶20,V/V),流速为0.5mL/min,检测波长347nm。结果脱氢卡维丁质量浓度在2.50～20.96μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.99995),最低检测质量浓度为0.25μg/mL(以S/N>4计)。平均加样回收率为98.63%,RSD=0.89%(n=6)。广西各县产的岩黄连药材含脱氢卡维丁有差异,其中乐业、靖西、东兰、都安、环江等县的药材含量较高。结论HPLC法测定脱氢卡维丁含量简便可行,可用于控制岩黄连药材质量。

HPLC测定广西4个产地野生岩黄连药材中脱氢卡维丁的含量

目的考察广西4个不同县市野生岩黄连中脱氢卡维丁的含量,为控制岩黄连药材的质量提供依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法测定脱氢卡维丁含量,色谱柱为Ultimate C18(250mm×4.6mmⅹ5μm),流动相为0.1%三乙胺水溶液(磷酸调pH=3)-乙腈(75∶25),流速1.0mL/min,检测波长347nm,柱温30℃。结果脱氢卡维丁浓度在12～120μg/mL(r=0.9994,n=6)范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.85%,RSD=0.91%(n=6),广西4个不同县产岩黄连药材脱氢卡维丁含量差异明显。结论所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于控制岩黄连药材质量。

岩黄连脱氢卡维丁体外抑制Tca8113增殖及对端粒酶活性影响的研究

目的:研究中草药岩黄连脱氢卡维丁(Tetradehydroscoulerine,YHL-1)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增埴的抑制作用,及其对端粒酶活性和端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响,探讨其抗癌机制。方法:采用噻唑蓝比色法(MTF法)检测不同浓度的YHL-1对Tca8113细胞增殖的影响,同时以TRAP-ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性改变情况,并用Western blotting法半定量检测端粒酶hTERT的表达。结果:YHL-1能明显抑制Tca8113细胞增殖,且随时间延长和药物浓度的增高,抑制作用增强。72h时,0.200、0.100、0.050、0.025 g/L YHL-1组细胞增殖抑制率分别为(64.1±1.5)%、(47.3±3.3)%、(35.6±5.0)%、(31.8±5.87)%。72h时,0.100、0.050 g/L组端粒酶活性和hTERT蛋白含量均低于空白对照组(P<0.05)。结论:岩黄连脱氢卡维丁可以明显抑制Tca8113细胞的增殖,并显著降低其端粒酶活性及hTERT的表达,这可能是其抗舌癌的机制之一。

HPLC-MS/MS法测定岩黄连提取物中脱氢卡维丁的含量

采用高效液相色谱电喷雾离子化质谱法分离并测定岩黄连提取物中脱氢卡维丁的含量．色谱采用XTerra MS C18柱（100mm×2．1mm，5μm），以0．1％甲酸水溶液-甲醇为流动相，梯度洗脱，流速为0．2mL/min．质谱采用三重四级杆的质谱仪，电喷雾离子源，正离子扫描方式，以多反应离子监测（MRM）模式进行定量检测．结果表明，脱氢卡维丁在0．2～200ng／mL（r=0．9995）范围内呈良好线性关系，平均加样回收率为99．29％，相对标准偏差（RSD）为2．4％．

脱氢卡维丁的肠道转运特性研究

目的研究岩黄连生物碱中主要活性成分脱氢卡维丁的肠道转运特性。方法采用外翻肠囊模型,以单位面积渗透量及表观渗透系数为指标,研究不同质量浓度岩黄连生物碱中脱氢卡维丁在大鼠不同肠段的转运特性;采用Ca-co-2细胞单层模型研究脱氢卡维丁的双向跨膜转运行为及盐酸维拉帕米对其转运的影响。结果脱氢卡维丁在大鼠不同肠段部位的离体肠囊上均有转运,试验质量浓度下同一部位肠段的表观渗透系数无显著性差异;脱氢卡维丁在Ca-co-2细胞单层的双向转运存在显著性差异,加入盐酸维拉帕米后,吸收渗透系数显著增大。结论脱氢卡维丁的肠黏膜转运存在转运蛋白的外排机制,但在较高浓度范围内呈现被动转运特征。

脱氢卡维丁对H2O2处理成骨前体细胞MC3T3-E1增殖及凋亡的影响

目的:探讨脱氢卡维丁对过氧化氢(H2O2)诱导下MC3T3-E1细胞凋亡和氧化应激损伤的影响及其潜在作用机制。方法:取处于对数生长期的MC3T3-E1细胞,优化H2O2氧化损伤细胞模型的工作液浓度,采用500μmol/L H2O2作用MC3T3-E1细胞建立体外氧化应激损伤细胞模型,以不同浓度(0.001、0.01、0.1μmol/L)脱氢卡维丁进行干预,1 mmol/L N-乙酰半胱氨酸作阳性对照组,使用噻唑蓝(MTT)比色法检测其对于细胞活力的影响,生化法测定细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)水平,利用流式细胞技术检测细胞氧化损伤的凋亡程度,RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组细胞存活率显著降低,细胞MDA、ROS水平及Bax表达显著升高,Bcl-2表达显著降低。与模型组比较,各给药组对H2O2诱导的氧化应激损伤得到有效抑制,Bcl-2表达升高,Bax表达降低。结论:脱氢卡维丁能有效减弱H2O2诱导的MC3T3-E1细胞凋亡及氧化损伤,增强细胞清除MDA和ROS的能力,发挥抗H2O2氧化损伤的保护作用。

高效液相色谱法测定毛黄堇不同部位脱氢卡维丁含量

目的建立测定毛黄堇中有效成分脱氢卡维丁的高效液相色谱(HPLC)法,并对毛黄堇药材的不同部位进行分析,为毛黄堇质量标准的制订提供参考。方法色谱柱采用Agilent C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为磷酸盐缓冲溶液(每1 L含20 mmol磷酸二氢钾,10 mmol二乙胺,0.1%磷酸)-乙腈(72∶28),流速为1.0 m L/min,柱温为35℃,检测波长为347 nm。结果脱氢卡维丁进样量在0.040 08～2.404 80μg(r=0.999 1,n=7)范围内与峰面积线性关系良好;平均回收率为97.71%,RSD为1.78%(n=9)。药材不同部位中根部含量最高。结论该方法快速、准确,可用于毛黄堇中类似生物碱成分的质量控制。

脱氢卡维丁大鼠在体肠吸收与体外经β-葡萄糖醛酸苷酶代谢的研究

目的评价脱氢卡维丁的大鼠在体肠吸收与经β-葡萄糖醛酸苷酶(GUS)的代谢特性。方法采用LC-MS/MS法检测脱氢卡维丁的含量,并进行方法学验证;采用大鼠单向肠灌注模型研究脱氢卡维丁的在体肠吸收,以体外代谢法研究其经GUS的代谢行为。结果所用方法专属性强、结果准确、精密度高,1~100 ng·mL^(-1)脱氢卡维丁与峰面积的线性关系良好(r=0.9966)。脱氢卡维丁在大鼠的不同肠段均有吸收,其中,十二指肠与空肠的吸收速率常数(K_(a))和有效渗透系数(P_(eff))均高于回肠与结肠,但两个肠段间的差异均无统计学意义。此外,在十二指肠与空肠段,脱氢卡维丁中、高浓度组的K_(a)、P_(eff)相较于低浓度组有一定下降,且差异具有统计学意义。脱氢卡维丁经GUS代谢的K_(m)为10.3±1.63μg·mL^(-1),Vmax为8.325±0.524 ng·mL^(-1)·min-1/KU GUS。结论脱氢卡维丁主要在大鼠十二指肠与空肠被吸收,其次是回肠,结肠吸收最少。吸收机制以被动扩散为主,但在十二指肠与空肠部位的吸收可能同时存在主动转运过程;脱氢卡维丁可经GUS代谢,该过程可能会影响其在机体中的吸收。

HPLC测定岩黄连生物总碱中脱氢卡维丁、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱

目的:建立高效液相色谱法测定岩黄连生物总碱中脱氢卡维丁、盐酸巴马汀及盐酸小檗碱含量的方法,为完善岩黄连生物总碱的质量评价提供依据。方法:采用高效液相色谱法,以Agilent XDB C18(4.6 mm×150 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.01 mol.L-1磷酸二氢钾水溶液(18.5∶81.5)为流动相,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测波长347 nm。结果:脱氢卡维丁进样量在15.375～92.25 mg.L-1(r=0.999 9)呈良好的线性关系,平均加样回收率96.43%,RSD 1.13%;盐酸巴马汀进样量在14.91～89.46 g.L-1(r=0.999 9)呈良好的线性关系,平均加样回收率96.28%,RSD 1.22%;盐酸小檗碱进样量在3.525～28.2 mg.L-1(r=0.999 7)呈良好的线性关系,平均加样回收率为103.02%,RSD 1.35%。结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可以用于控制岩黄连生物总碱的质量。

RP-HPLC法测定岩黄连注射液中脱氢卡维丁的含量

目的:建立以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定岩黄连注射液中脱氢卡维丁含量的方法。方法:色谱柱为Dikma Diamonsil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(40∶60,每1L流动相加3.4g磷酸二氢钾和1.7g十二烷基磺酸钠),检测波长为345nm,流速为1mL·min-1,柱温为25℃。结果:脱氢卡维丁进样量在0.142～2.840μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9991);平均回收率为99.70%,RSD=1.68%(n=9)。结论:本方法准确、可靠、重现性好,可用于岩黄连注射液的质量控制。

超滤法测定脱氢卡维丁的血浆蛋白结合率

目的:测定脱氢卡维丁的血浆蛋白结合率。方法:采用超滤法和高效液相色谱法对脱氢卡维丁的血浆蛋白结合率进行测定。结果:脱氢卡维丁与牛血清白蛋白、人血浆和大鼠血浆的蛋白结合率分别为(22.91±1.40)%、(54.35±2.95)%及(52.11±2.31)%。结论:脱氢卡维丁与血浆蛋白具有较低强度的结合。

岩黄连总碱和脱氢阿卟卡维丁对Tca8113中NF-kappa B表达活性的影响

目的:研究中草药岩黄连总碱(YHL-TA)和脱氢阿卟卡维丁(YHL-2)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞中NF-kappaB表达活性的影响,并进一步探讨其抗癌机制。方法:采用PCR法和Western-blotting法检测经YHL-TA和YHL-2作用后的Tca8113细胞中NF-kappa B核酸水平以及蛋白水平的表达活性变化。结果:YHL-TA和YHL-2均能抑制Tca8113细胞增殖,并在核酸水平和蛋白水平抑制NF-kappa B P50、P65亚基的表达活性。其中YHL-2抑制作用最强;并且随作用时间延长和药物浓度的增高,抑制作用增强。结论:YHL-TA和YHL-2可以明显抑制Tca8113细胞的增殖,并显著降低其NF-kappa B的表达,其中YHL-2作用最明显。这可能是岩黄连抗癌作用机制之一。

岩黄连中生物碱的分离和结构鉴定

目的对中草药岩黄连中的生物碱类成分进行研究。方法运用高效制备液相色谱技术对岩黄连总碱进行分离纯化,通过波谱数据结合理化性质对所得化合物进行结构鉴定。结果从岩黄连总碱中分离得到6个单体生物碱,分别是去氢碎叶紫堇碱(1)、脱氢甲卡维丁(2)、药根碱(3)、脱氢卡维丁(4)、盐酸巴马汀(5)和盐酸小檗碱(6)。结论药根碱为首次从岩黄连中分离得到。

野生与人工栽培岩黄连药材的比较

目的研究野生与人工栽培岩黄连中总生物碱及脱氢卡维丁量的差异。方法采用紫外分光光度法对药材中总生物碱进行定量测定,用高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维丁的量,并对测定方法进行了系统的方法学考察。结果人工栽培的岩黄连药材中总生物碱的量达到3.20%以上,脱氢卡维丁的量在0.80%以上。野生的岩黄连药材中总生物碱的量在0.75%左右,脱氢卡维丁的量均在0.20%左右。结论野生岩黄连药材中总生物碱及脱氢卡维丁的量比人工栽培的要低。