牛病毒性腹泻病毒E2蛋白的真核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为建立检测牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)抗体的间接ELISA方法,利用昆虫细胞真核表达系统成功表达E2蛋白,将纯化后的E2蛋白作为包被抗原,用方阵滴定方法对影响ELISA的各个因素进行优化,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果表明,在昆虫细胞中表达了BVDV E2蛋白,Western blot证实目的蛋白可与BVDV阳性血清发生特异性反应。ELISA优化结果显示,E2蛋白最佳包被浓度为0.5μg/mL,最佳封闭液为1%明胶,最佳血清稀释度为1∶400,最佳血清作用方式为37℃作用30 min,酶标抗体的最佳作用方式为1∶2000稀释、37℃作用30 min,最佳底物作用时间为室温20 min,阳性临界值为OD 450≥0.423。与血清中和试验法进行比较,总符合率为97.8%,板内和板间重复性试验的变异系数均小于10%。该方法与牛常见病毒阳性血清均无交叉反应。说明建立的间接ELISA抗体检测方法特异性、敏感性和重复性良好,可用于大批量样本的临床检测和流行病学研究。

牛病毒性腹泻病毒E^(rns)-ELISA抗体检测试剂盒的制备

为建立快速检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的血清学方法,本试验以BVDV NADL毒株结构蛋白E^(rns)作为包被抗原,优化反应条件并组装BVDV酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒,通过重复性试验、灵敏性试验、符合率试验和保存期试验验证该试剂盒的准确性、灵敏性和稳定性。结果显示,抗原包被浓度为4μg/mL,1%酪蛋白溶液37℃封闭45 min,被检血清以1∶400稀释孵育30 min,兔抗牛HRP标记二抗以1∶20000稀释孵育30 min,TMB底物反应5 min时,ELISA的反应背景下降,区分度最好。优化后方法的批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数均在10%以内,表明该试剂盒具有较好的稳定性;灵敏性试验结果显示,当阳性血清稀释度达到1∶6400时仍可以检测为阳性,说明该试剂盒灵敏度较高;该试剂盒与美国爱德士生物科技公司(IDEXX)BVDV总抗体检测试剂盒共同检测466份临床血清样品,两者总符合率为89.1%;保存期试验结果显示,第4个月时该试剂盒仍能检测到阳性血清,说明稳定性较好。综上表明,本试验利用E^(rns)蛋白建立的BVDV间接ELISA抗体检测试剂盒灵敏度高且重复性好,可为BVDV抗体检测和流行性调查提供新的方法。

2017—2022年浙江省其他感染性腹泻病ARIMA模型预测精度分析

目的 比较分析2017—2022年浙江省其他感染性腹泻病自回归移动平均(autoregressive integrated moving average, ARIMA)模型预测精度,探索更为精准的预测模型以指导传染病防控。方法 收集2011年4月—2022年12月的浙江省其他感染性腹泻病发病率资料,将2011年4月—2021年的数据分为6个时间段,拟合优选出各数据段的最优ARIMA模型,分别对2017—2022年浙江省其他感染性腹泻病的发病率进行预测,以对应年度实际发病率验证模型,比较各数据段最优模型的年平均相对误差和月相对误差。结果 2011年4月—2022年12月,浙江省总计报告其他感染性腹泻病1 272 546例,年均发病率为186.97/10万。拟合的6个最优ARIMA模型对2017—2022年预测值与实际值的年平均相对误差分别为19.27%、28.59%、12.46%、77.87%、16.53%、40.21%,最小的月相对误差分别为0.69%、1.16%、0.57%、3.27%、0.45%、8.07%。结论 虽然ARIMA模型预测其他感染性腹泻病有时会存在较大误差,但短期预测仍可以为该病的早期精准防控提供参考依据。

小儿腹泻病的诊治：小儿慢性感染性腹泻病

腹泻是以大便性状异常这一特殊症状命名的一种疾病。一般认为，粪便量超过每天每平方米体表面积200mL以上即为腹泻。小儿腹泻病是我国儿科的常见疾病。临床上，根据病因分为感染性和非感染性2类，以感染性为主。根据腹泻症状持续时间将腹泻病分为3型：①急性腹泻病。病程≤2周，如小儿轮状病毒性肠炎病程一般在5～8d。②迁延性腹泻病。急性起病后，病程迁延〉2周，但≤2个月。⑥慢性腹泻病。腹泻经久不愈，病程迁延〉2个月，甚至多达数年或十余载。在小儿腹泻病中，急性腹泻病的患病率和病死率已明显减少。急性腹泻病主要是由细菌、病毒和寄生虫等感染所引起，由于我国人民的营养和卫生状况有了显著改善，过去多由志贺菌属等引起的中毒性菌痢和中毒性消化不良已较少见。目前，小儿普遍流行的是由轮状病毒引起的急性肠炎，大多病情较轻，容易治疗，且有自愈倾向。而慢性腹泻病是由多种病因引起，发病机制复杂，防治比较困难。除腹泻外，或多或少会影响患儿的营养吸收，重者影响生长发育；还会削弱小儿防御其他疾病的能力，预后欠佳，甚至引起死亡。以下将专题讨论小儿腹泻病的诊治问题，与同行商榷。

小儿肠胃康颗粒联合蒙脱石散剂辅助治疗儿童急性细菌性腹泻病的疗效

目的:探讨小儿肠胃康颗粒联合蒙脱石散剂辅助治疗儿童急性细菌性腹泻病的临床疗效。方法:选取2021年3月至2022年2月我院门诊收治的96例急性细菌性腹泻病患儿按简单随机化分组法分为对照组和联合组各48例。两组患儿均给予对症治疗(依据细菌培养及药敏试验结果选择敏感性抗菌药物、调整饮食结构、纠正电解质紊乱及菌群失调等),在此基础上,对照组给予蒙脱石散剂治疗,联合组在对照组治疗基础上给予小儿肠胃康颗粒,疗程为2周。比较两组患儿胃肠道不适症状改善时间,检测治疗前后两组患儿血清胃肠激素及免疫功能变化情况,统计不良反应发生情况。结果:治疗后,联合组治疗总有效率高于对照组(100.00%vs.91.67%),但差异无统计学意义(P>0.05),联合组疗效等级优于对照组(Z=2.691,P<0.05)。治疗后,两组患儿大便次数较同组治疗前减少(P均<0.01),联合组大便次数较对照组更少(t=5.771,P<0.05),且联合组腹泻、脱水、食欲减退、腹痛、腹胀缓解时间及大便性状改变时间均较对照组更短(P均<0.05)。治疗后,联合组胃动素(MOT)、胃泌素(GAS)水平低于对照组,生长抑素(SS)、P物质(SP)水平高于对照组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。治疗后,联合组CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+)水平高于对照组(P均<0.05)。两组患儿不良反应发生率比较差异无统计学意义(χ^(2)=0.546,P=0.460)。结论:小儿肠胃康颗粒联合蒙脱石散剂治疗儿童急性细菌性腹泻病整体价值优于单用蒙脱石散剂治疗,可缩短患儿胃肠道不适症状缓解时间,改善胃肠道动力学及免疫功能,安全性较高。

穴位贴敷与推拿联合西医治疗小儿腹泻病的效果观察

目的观察穴位贴敷与推拿联合西医治疗小儿腹泻病的效果,为临床治疗提供参考。方法选取2021年9月至2023年6月聊城市人民医院收治的160例小儿腹泻患儿的临床资料,进行回顾性分析。根据治疗方法不同分为常规组和联合组,各80例。常规组患儿采用常规西药治疗,联合组患儿在常规组基础上联合中医穴位贴敷与推拿治疗。比较两组患儿临床疗效、症状缓解时间、中医证候积分、舒适状况量表(GCQ)评分、匹茨堡睡眠质量指数(PSQI)。结果联合组患儿临床疗效优于常规组,治疗总有效率高于常规组,止泻时间、腹痛缓解时间、发热消退时间、呕吐缓解时间均短于常规组(均P<0.05)。治疗后,两组患儿中医证候积分、PSQI均降低,且联合组均低于常规组;两组患儿GCQ评分均升高,且联合组高于常规组(均P<0.05)。结论中医穴位贴敷与推拿联合西医治疗小儿腹泻病的效果较好,可快速改善患儿临床症状,提升患儿日常生活舒适度及睡眠质量,值得临床应用。

我国3种犊牛腹泻病原体调查汇总分析

为了解和掌握我国犊牛腹泻的病因,文章对2017—2022年涉及BVDV、BRV、BCoV 3种病原体引起犊牛腹泻的国内调查文献数据进行汇总分析,旨在找出这3种病原体在腹泻犊牛中的流行规律,用以指导犊牛腹泻的临床防治工作。结果表明,(1)犊牛BVDV的病原学阳性率为0~34.58%,平均阳性率为14.61%;血清学阳性率为18.75%~65.00%,平均阳性率为47.28%;分别累计不同类别样品(粪便或肛拭子、血液)、腹泻牛与非腹泻牛样品的BVDV病原学检测数据,免疫牛与非免疫牛的BVDV病原学与血清学检测数据,发现上述各组的检测数据均存在极显著差异。(2)犊牛BRV的病原学阳性率为0~56.74%,平均阳性率为10.42%;腹泻牛与非腹泻牛样品的累计检测数据存在极显著差异;犊牛BRV的血清学阳性率为0~25.00%,平均阳性率为15.15%(5/33);各组犊牛的BRV病原学和血清学累计的检测数据无显著差异。(3)犊牛BCoV的病原学阳性率为0~33.33%,平均阳性率为12.87%;血清学阳性率为0~25.00%,平均阳性率为9.09%;各组腹泻牛与非腹泻牛样品的BCoV病原学和血清学累计的检测数据无显著差异。

河北省廊坊市牛主要病毒性腹泻病原感染状况检测及牛冠状病毒演化分析

牛病毒性腹泻病原严重危害畜牧业生产,BVDV、BoAstV、BCoV、MRV、BKoV、BoNeV、BNoV、BRV、BToV被认为是引起牛群腹泻的病原,不仅如此,BVDV、BCoV和BToV除了能引起消化道症状外还能引起呼吸道症状,BVDV不仅能引起消化道和呼吸道症状,还会导致母牛生殖功能异常,这些疾病对畜牧业造成巨大的经济损失。为了解牛主要病毒性腹泻病原流行情况,本次试验通过PCR检测方法对我国河北地区323份腹泻牛粪样品进行常见9种病毒性牛腹泻病原进行检测。结果显示,BVDV阳性检出率1.85%(6/323)、BCoV阳性检出率14.24%(46/323)、BRV阳性检出率57.89%(187/323)、BoAstV阳性检出率0.31%(1/323)、BoNeV阳性检出率10.84%(35/323)、BNoV阳性检出率4.33%(14/323)、MRV阳性检出率2.48%(8/323)、BToV阳性检出率4.64%(15/323)、BKoV阳性检出率11.76%(38/323)。混合感染共有76份,占比23.53%(76/323)。HBLF2302株的全基因序列、S、HE、N、M和E基因进行同源性和遗传进化分析发现,HBLF2302与BCoV/NMG1/2022基因同源性最高,为GIIb亚型。基于氨基酸序列比对和HBLF2302的S蛋白三级结构预测发现,在S蛋白中157号位突变为157T,854号位点突变为854I。318V为独特突变,改变了与侧链残基的作用力,与631C形成氢键连接。并发现中国株区别于其它地区的GⅡb亚型,位于ORF1a区域有三个独特位点。本研究丰富了牛腹泻病原的流行病学数据,为牛腹泻病的防控奠定基础。

2017—2022年上海市嘉定区其他感染性腹泻病流行特征及病原学分析

目的:了解2017—2022年上海市嘉定区其他感染性腹泻病流行病学及病原学特征,为辖区其他感染性腹泻病防治提供科学依据。方法:通过中国疾病预防控制信息系统获取2017—2022年嘉定区其他感染性腹泻病的相关资料,采用描述性流行病学方法对数据进行统计分析。结果:2017—2022年嘉定区共报告1576例其他感染性腹泻病,年均发病率为15.40/10万。时间分布上,7—9月和12月—次年1月为全年发病高峰期。病例年龄以0~5岁为主(占55.14%);职业分布上,散居儿童占比最高(占51.14%)。男性发病数多于女性,性别比为1.28∶1。明确感染病原体的病例占74.87%,病毒感染以轮状病毒(占35.53%)为主,细菌感染以沙门氏菌(占20.43%)为主。夏秋季(5—10月)以细菌感染为主,差异有统计学意义(χ^(2)=30.87,P<0.05),冬春季(12月—次年3月)以病毒感染为主,差异有统计学意义(χ^(2)=56.02,P<0.05)。结论:嘉定区其他感染性腹泻病具有季节性特征,发病人群以低年龄段人群为主,轮状病毒感染为主要病原学病因,建议在该病流行季节前对居民开展针对性的健康教育,降低发病风险。

新疆某规模化肉牛场牛病毒性腹泻病毒分离与基因型鉴定

新疆许多规模化牛场存在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染,且因病毒基因型具有多样性,给该病的防控、疫苗选择、净化带来了一定的困难,开展新疆地区规模化牛场BVDV基因分型鉴定,对BVDV防控具有重要的指导作用。采集BVDV胶体金抗原检测卡确定为阳性的犊牛抗凝血样品并分离淋巴细胞,在MDBK单层细胞上进行病毒分离,盲传5代,提取培养物RNA,以BVDV5′-UTR、N^_(pro)特异性引物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测分析。结果显示,获得BL分离株1株,属于BVDV-1m亚型,研究结果丰富了新疆南疆地区规模牛场BVDV分子流行病学数据库。

一例规模化猪场流行性腹泻病的诊断与防控风险分析

2022年2月4日,广西壮族自治区某规模化猪场妊娠母猪陆续出现水样腹泻、不吃或少吃料的临床症状,2022年2月6日,产房仔猪出现呕吐、水样腹泻,怕冷扎堆,脱水严重,且传播速度快。通过试剂盒快速检测和实验室检测,诊断为猪流行性腹泻病。针对检测结果对猪群进行紧急疫苗接种和药物治疗,并对此次疫情的发生和发展过程进行防控风险点分析,发现养猪场在生物安全方面存在较大的风险点,通过整改并采取严格的生物安全管理措施后,母猪群发病情况得到缓解,仔猪腹泻窝数下降,猪群趋于稳定,生产成绩逐步恢复。通过对此次案例的分析探讨,为规模化猪场对猪流行性腹泻病的发现和防控提供临床经验,同时增强对流行性腹泻病的风险预警意识,健全规模化猪场对流行性腹泻病的风险预警机制。

山东地区1株牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】了解并掌握山东地区牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)流行毒株的生物学特性和遗传变异情况,为BVDV防控提供理论依据和技术支持。【方法】采集养牛场疑似BVDV感染样品制备组织上清液,利用RT-PCR方法进行病原鉴定,接种MDBK细胞进行病毒分离培养,采用间接免疫荧光试验(IFA)和电镜观察对分离毒株进行鉴定,对分离毒株全基因组进行分段扩增、克隆和测序,并采用Lasergene等软件分别对全基因组序列、N^(pro)和E2基因进行比对和遗传演化分析。【结果】病料样品BVDV特异性引物RT-PCR扩增得到大小约504 bp的目的条带,与预期大小一致。IFA结果显示特异性绿色荧光;电镜下可见直径约50 nm的病毒粒子,表明分离到1株非致细胞病变型BVDV毒株,命名为SDNF9株。分离株基因组全长为12232 nt,与BVDV参考毒株的全基因组核苷酸相似性为79.1%~93.8%,其中,与中国分离毒株22AH-1和澳大利亚毒株Bega-like的相似性最高,为93.8%;N^(pro)和E2蛋白氨基酸存在多个位点变异;SDNF9分离毒株与BVDV2型毒株和BVDV3型毒株处于遗传演化的不同分支,而与BVDV 1型毒株处于同一分支,属于BVDV 1c基因型。【结论】本研究成功分离到1株BVDV 1c流行毒株,并进行基因组和遗传演化分析,与中国分离毒株22AH-1亲缘关系最近,为山东地区牛病毒性腹泻的防控和疫苗研制提供数据和材料支持。

不同基因型牛病毒性腹泻病毒对BALB/c小鼠致病性研究

牛病毒性腹泻病毒(BVDV)是危害养牛业的重要病原。2021年本实验室从患有肺炎的牛肺中分离出1株BVDV(毒株编号为JS2201),经鉴定为1b亚型。为了评价该分离株的毒力与致病性,分别建立了分离株与参考株BVDV-1型Oregon C24V株、BVDV-2型C1602株BVDV感染BALB/c小鼠模型,通过检测攻毒后小鼠临床症状、体重变化、病毒血症情况、血液中白细胞与淋巴细胞的变化、组织器官的病理组织学变化及病毒载量,比较了分离株JS2201与1型和2型参考株的致病性差异。结果显示:BVDV分离株JS2201与参考株均能够成功感染BALB/c小鼠,攻毒BALB/c小鼠均形成病毒血症,导致血液中白细胞数量、淋巴细胞数量以及淋巴细胞百分比短暂下降;BVDV分离株JS2201株攻毒组小鼠肝脏、肾脏、肺脏、脾脏中BVDV载量要高于C24V、C1602株攻毒组;攻毒组小鼠均表现为间质性肺炎病变,JS2201株攻毒组与1型参考株C24V株攻毒组小鼠肺脏病理组织学变化相似,BVDV-2型参考株C1602株攻毒组小鼠肺脏病变更为严重。综上,本研究成功建立了不同亚型BVDV急性感染BALB/c小鼠的模型,且比较分析了分离株与参考株之间的致病性差异,为BVDV疫苗的研制以及致病机制的研究奠定了基础。

牛病毒性腹泻病毒陕西分离株的鉴定及E2基因的克隆与序列分析

为分析陕西省牛病毒性腹泻病毒(BVDV)分子变异情况,采集陕西省某牛场腹泻患牛粪便样品,经处理后接种至MDBK细胞后,进行病毒分离鉴定并对分离的BVDV进行E2基因的克隆和遗传进化分析。结果显示,样品经过RT-PCR鉴定后接毒,第4天出现明显的细胞病变(CPE),通过设计特异性引物对收获的病毒成功扩增出BVDV E2基因,证明分离的病毒为BVDV。对该病毒的E2基因进行序列分析,所得序列与GenBank上已发表的BVDV毒株的核苷酸序列同源性为84.5%~100%,氨基酸序列同源性为82.1%~100%。结果表明,成功分离到牛病毒性腹泻病毒并进行了E2基因的克隆与序列分析,研究结果可为陕西地区BVDV的流行病学、致病性及生物学特性研究提供依据,为BVDV的区域流行及有效防控提供参考,为新疫苗的研发提供地方种毒。

牛病毒性腹泻病毒遗传多样性与防控研究进展

牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea)是由黄病毒科瘟病毒属的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染引起牛的一种传染病,在全球范围内广泛流行,导致严重的经济损失。BVDV可分为BVDV-1、BVDV-2和BVDV-3基因型和众多的基因亚型,宿主范围比较广泛,而且可形成持续感染,抑制宿主固有免疫和适应性免疫应答,给防控带来困难。虽然在北欧一些国家利用监测淘汰实现了BVD净化,但在BVD流行率较高的地区,免疫控制策略现实可行。目前我国各地均有BVD报道,基于BVDV-1毒株的灭活疫苗已用于该病的防控,但用于预防多病原引起牛腹泻或牛呼吸道综合征的联合疫苗匮乏,多联多价疫苗的创制将有助于我国BVD防控和净化。

宿主蛋白Rab11a对牛病毒性腹泻病毒复制的影响

为了探索宿主蛋白Rab11a在感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)后,对细胞增殖的影响。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术构建Rab11a基因稳定敲除的MDBK细胞株,设计靶向Rab11a基因的向导RNA表达载体,采用Western blot检测Rab11a基因敲除后的蛋白表达情况;使用实时荧光定量qPCR、免疫荧光染色试验、Reed-Muench法等技术检测BVDV感染Rab11a KO细胞后病毒RNA水平、双链RNA(dsRNA)积累水平、病毒滴度及致细胞病变(CPE)情况等。Western blot检测结果显示,成功构建出Rab11a基因敲除的细胞Rab11a KO;Rab11a基因敲除显著抑制BVDV 5'UTR mRNA和dsRNA水平的积累,感染36 h后,Scramble细胞明显有大量细胞病变,出现皱缩、碎裂、形成空泡后脱落等现象,Rab11a KO细胞的CPE现象明显低于Scramble细胞;在BVDV感染细胞12 h后,与Scramble细胞相比,Rab11a KO细胞的病毒滴度显著性降低,结果证明了敲除MDBK细胞的Rab11a基因对BVDV在胞内复制起到抑制作用。本研究结果为了解宿主蛋白Rab11a与BVDV的相互作用,以及Rab11a对病毒的复制增殖的作用提供了新的科学依据。

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白p20的原核表达

牛病毒性腹泻是由黄病毒科、瘟病毒属中的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染牛引起的一种传染病,是一种全球性牛传染病。为了在原核表达系统表达BVDV非结构蛋白p20,并分离纯化蛋白进行晶体学研究。首先对BVDV-1 p20蛋白基因进行密码子优化,合成后克隆到pET30表达载体上。测序鉴定成功的pET30-p20表达质粒转化大肠埃希氏菌表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导获得的p20蛋白经过Ni柱、分子筛纯化。最终,经过多重缓冲溶液的筛选,p20蛋白可以稳定存在于含有5 mmol/Lβ-巯基乙醇、5%甘油、150 mmol/L氯化钠(pH8.0)的Tris-HCl缓冲液中。高纯度均一性的p20蛋白获得,为后续p20晶体学研究以及单克隆抗体的制备提供原核表达纯化方案。

一例奶牛犊牛腹泻病例的诊断与治疗

奶牛特牛腹泻为奶牛场常见多发病,一年四季均可发生。犊牛腹泻常发生在2月龄以内,如果未及时治疗将对犊牛的发育、生长产生很大影响。在大群饲养时,特牛腹泻发生率较高死亡率最高可达50%以上,对奶牛场威胁很大。牛腹泻主要由传染性因素或非传染性因素造成,传染性因素又可分为病毒性、细菌性和寄生虫性腹泻。病毒性腹泻致病病原包括轮状病毒、冠状病毒、牛病毒性腹泻病毒等;细菌性腹泻致病病原包括大肠杆菌和沙门氏菌等;寄生虫性腹泻病原包括隐孢子虫和球虫等。非传染性因素包括饲养环境(温度、湿度、消毒等)、初乳饲喂不及时、营养不良等因素。

牛病毒性腹泻病毒检测方法研究进展

牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)对养牛业具有重大经济影响,而快速准确检测对于早期发现牛BVDV感染以便迅速采取针对性预防措施至关重要。常见的BVDV检测方法包括病毒分离鉴定、血清中和试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)、环介导等温扩增(LAMP)等。本文分别从病原学、血清学和分子生物学检测方面,对多种BVDV检测方法研究进展进行综述,分析每种检测方法的优势和局限性,提出了在实际应用中应根据不同需求选用不同的方法或综合应用多种检测技术的建议,以期为建立更加快速、实用和准确的BVDV检测方法及其应用提供参考。

1株进口胎牛血清源牛病毒性腹泻病毒的分离鉴定及小鼠致病性分析

【目的】对进口胎牛血清中的牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)进行分离鉴定和遗传进化分析。【方法】通过RT-PCR方法检测到实验室购买的某进口胎牛血清中存在BVDV核酸污染,将污染血清接种MDBK细胞,传代培养至第7代,对每一代细胞的培养物进行BVDV 5′-UTR扩增,PCR扩增产物连接pMD19-T载体并测序,对测序结果进行遗传进化分析;利用间接免疫荧光试验(IFA)进行分离株抗原检测和病毒滴度测定;将分离株接种BALB/c小鼠,采集眼眶血进行血常规检测和RT-PCR检测。【结果】该病毒分离株在培养MDBK细胞时未能引起细胞病变效应,细胞培养物RT-PCR扩增为阳性;基于5′-UTR序列的相似性分析表明,该分离株与BVDV UDEC-COY7-17(OL860952.1)毒株5′-UTR序列相似性为99.6%,同属BVDV-1e亚型;IFA检测到感染分离株的MDBK细胞细胞质中出现特异性绿色荧光信号,而对照组无信号;半数培养感染剂量(50%tissue culture infectivedose,TCID 50)为10-4.7/0.1 mL;接种BALB/c小鼠后第7天血常规检测其血液中白细胞(WBC)和淋巴细胞(LYM)数量极显著低于对照组(P<0.01)。提取血液总RNA进行5′-UTR RT-PCR检测,检测结果为阳性,扩增产物大小为298 bp,与预期相符。【结论】本研究在进口胎牛血清中分离得到1株非致细胞病变型BVDV-1e亚型毒株,证明进口胎牛血清中存在BVDV抗原污染,为进一步研究BVDV的相关分子机制提供试验材料。