膜结合型前列腺素E2合酶1抑制剂MK886对白血病HL-60／A细胞周期的影响

目的探讨膜结合型前列腺素E2合酶1（mPGES-1）抑制剂MK886对人类急性髓系白血病耐药细胞HL．60／A细胞周期的作用。方法采用流式细胞术、Western blot、酶联免疫吸附（ELISA）等方法，检测HL-60／A及健康人单个核细胞（MNC）、敏感细胞株HL．60的细胞周期、mPGES-1蛋白、细胞周期素D1（cvctinD1）的差异，检测不同浓度的MK886对HL-60／A细胞周期的作用及对cyclinD1、mPGES-1、PGE2、P-Akt、c—myc蛋白的影响。结果与健康人MNC及敏感细胞株HL-60比较，HL-60／A细胞cyclinD1、mPGES-1表达最高，G0～G1期细胞比例为（30．53±2．15）％，较正常MNC[（62．63±6．58）％]及HL-60细胞[（38．86±2．25）％]减少（均P〈0．05）；S期比例为（57．56±1．54）％，较正常MNC]（12．18±4．43）％]及HL-60细胞[（47．70±1．88）％]明显增多（均P〈0．05）。MK886作用后，被阻滞于Go～G。期的细胞增多，同时mPGES-1表达下调，合成PGE2减少，cyclinD1、P—Akt、c-myc蛋白表达下降。结论MK886对白血病HL-60／A细胞有细胞周期阻滞作用，其机制与抑制mPGES-1表达，减少PGE2的合成，抑制cyclinD1、P—Akt、c—myc表达有关。

环氧化酶-2／膜结合型前列腺素E2合酶-1／前列腺素E2信号通路在足细胞损伤中的作用研究进展

足细胞损伤是肾小球疾病常见病理特征之一，与儿童肾脏疾病密切相关。足细胞病指足细胞结构或功能异常的肾小球疾病，病理轻重程度不一，有进展至慢性肾脏病的可能，因此找到有效的治疗方法是临床研究的重点。近期研究发现环氧化酶-2（COX-2）／膜结合型前列腺素E2合酶-1（mPGES-1）／前列腺素E2（PGE2）信号通路参与足细胞损伤过程，阻断该通路有望成为治疗足细胞病的新切入点。现就COX-2／mPGES．1／PGE2通路在足细胞损伤中的作用作一简要综述。

2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌中膜结合型前列腺素E_2合酶1的表达及意义

目的探讨2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌中膜结合型前列腺素E_2合酶1(m PGES-1)的表达及意义。方法将36只雌性SD大鼠随机分成糖尿病组与对照组,每组18只。使用链脲佐菌素(STZ)建立2型糖尿病大鼠动物模型。造模成功后12周,观察并比较两组大鼠一般生理体征;在光镜下观察膀胱逼尿肌组织HE染色结果,在透射电镜下观察组织超微结构变化,采用免疫组化法检测组织中m PGES-1表达水平,并使用前列腺素E_2(PGE_2)酶联免疫试剂盒检测24h尿液中PGE_2含量,所得结果进行组间比较。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠终末体重明显降低(P<0.05),终末血糖、膀胱湿重和24h尿量均明显增加(均P<0.05)。与对照组比较,糖尿病组大鼠在光镜下可见逼尿肌肌束结构排列紊乱,肌束间隙变宽;在透射电镜下可见逼尿肌细胞间距变宽,胞质内线粒体肿胀破裂呈空泡状。糖尿病组大鼠24h尿液PGE_2含量、膀胱逼尿肌组织中m PGES-1表达水平较对照组均明显下降(P<0.05)。结论2型糖尿病大鼠膀胱逼尿肌组织中m PGES-1表达水平及尿液PGE_2含量均明显降低,可能与糖尿病性膀胱病的进展有关。

肺癌组织中胞浆型磷脂酶A2和前列腺素E2合酶-1的表达及其与临床病理参数的关系

目的探讨肺癌组织中胞浆型磷脂酶(c PL)A2和前列腺素E2合酶(m PGES)-1的表达及其与临床病理参数的关系。方法选择58份肺癌组织标本(肺癌组)及其周边正常组织(距离所切肺癌组织超过5 cm,癌旁组),采用RT-PCR和免疫组化方法检测样本中c PLA2和m PGES-1 m RNA和蛋白的表达,分析其在肺癌组及不同临床病理参数中的差异。结果肺癌组m PGES-1和c PLA2 m RNA表达水平显著高于癌旁组(P<0.05);肺癌组m PGES-1和c PLA2蛋白的总表达阳性率,均显著高于癌旁组(P<0.05)。肿瘤分化程度较低、存在淋巴结转移以及临床分期越高,m PGES-1蛋白表达阳性率越高(P<0.05),而不同肿瘤直径、病理类型、分化程度、临床分期以及是否存在淋巴结转移与肺癌组织的c PLA2蛋白的表达阳性率无统计学意义(P>0.05)。结论肺癌组织中c PLA2和m PGES-1呈现高表达,c PLA2表达与临床病理参数无关,而m PGES-1表达与分化程度、是否存在淋巴结转移以及不同临床分期有关,两者检测对肺癌的早期诊断和靶向治疗有一定的临床意义。

金叶子中抑制膜结合型PGE_2合酶-1表达活性物质的分离与鉴定(英文)

在从天然产物筛选抗炎物质的过程中,应用有机溶媒萃取、浓缩及层析分离纯化后,从金叶子中得到三个化合物:槲皮素(1)、番石榴苷(2)、栎素(3)。化合物2为首次从此植物中分离鉴定,化合物1显示了强烈的抑制mPGES-1基因表达的活性,其IC50值为35.40μg/mL。

同型半胱氨酸对核因子-κB活性及白三烯E_4和前列腺素E_2合成水平的影响

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人结肠腺癌(Caco-2)细胞中白三烯E_4(LTE_4)、前列素E_2(PGE_2)合成水平和核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法在Caco-2细胞中加入不同浓度(0、10、20、50μmol/L)Hcy作用不同时间(1、3、6 h),采用MTT法和检测乳酸脱氢酶(LDH)活性,观察Hcy对Caco-2细胞生长活性的影响;通过检测Caco-2细胞跨膜电阻(TEER)和样品中荧光素-5-异硫氰酸酯(FITC)浓度,观察Hcy对Caco-2细胞通透性的影响;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定Caco-2细胞上清液中LTE_4和PGE_2合成水平;采用凝胶迁移实验(EMSA)测定Caco-2细胞中NF-κB活性变化。结果随Hcy作用时间延长及作用浓度增加,Caco-2细胞活性明显受到抑制;随Hcy作用浓度增加,Caco-2细胞TEER明显降低,FITC跨膜转运量明显增加,细胞上清液中LTE_4和PGE_2水平明显升高(P<0.05);Hcy(50μmol/L)处理组细胞中NF-κB活性增强,且呈时间依赖性(1、3、6 h)。结论 Hcy通过激活NF-κB信号通路,促进Caco-2细胞肠黏膜LTE_4和PGE_2合成,引起肠黏膜炎症损伤。

载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)促进单核细胞源性巨噬细胞产生前列腺素E_2(PGE_2)和前列腺素D_2(PGD_2)

目的探讨人单核细胞THP-1源性巨噬细胞产生的Lipocalin型前列腺素D合酶(lipocalin typeprostaglandin D synthase,L-PGDS)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)和前列腺素D2(PGD2)与载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用之间的关系。方法采用MTT法确定合适的给药浓度。用不同浓度(0、12.5、25、50、100和200μg/mL)apoA-Ⅰ处理体外培养的THP-1细胞源性巨噬细胞24 h后,逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测L-PGDS mRNA表达的变化,酶联免疫测定法(ELISA)检测PGE2和PGD2蛋白表达的变化。结果 apoA-Ⅰ处理24 h的巨噬细胞中L-PGDS mRNA、PGE2和PGD2蛋白的表达均显著高于未用apoA-Ⅰ处理的巨噬细胞(P均<0.001);apoA-Ⅰ浓度为50μg/mL时,作用效果最明显。结论 apoA-Ⅰ的抗AS作用可能与上调THP-1细胞源性巨噬细胞中L-PGDS mRNA以及PGE2和PGD2蛋白的表达有关。

进展性前列腺癌中mPGES-1及雄激素受体的表达及其意义

目的研究微粒体前列腺素E合成酶-1(mPGES-1)在进展性前列腺癌中的表达特征及其与雄激素的相关性,探讨mPGES-1高表达在进展前列腺癌中可能的临床意义。方法采用免疫组织化学法检测50例前列腺癌组织标本中mPGES-1和雄激素受体(androgen receptor,AR)蛋白表达水平;进行DU-145细胞培养,分别采用不同浓度(0,0.1,1 nmol/L)Testosterone对DU-145细胞进行干预,Western blot技术检测雄激素干预后的DU-145细胞中mPGES-1蛋白表达水平。结果 50例前列腺癌标本中,mPGES-1阳性表达36例,阴性表达14例,阳性表达率为72%,AR阳性表达50例。mPGES-1和AR在前列腺癌中的表达与TNM分期、Gleason评分及骨转移相关(P<0.05),与血清PSA值无关(P>0.05),mPGES-1与AR在前列腺癌组织中表达无相关性(r=0.105,P=0.466);经不同浓度(0,0.1,1 nmol/L)Testosterone干预24 h后,DU-145细胞中的mPGES-1蛋白表达量显著上调(P<0.05)。结论雄激素对mPGES-1表达可能具有上调作用,mPGES-1及AR的表达强度与前列腺癌的分期及骨转移有关。mPGES-1的高表达提示前列腺预后差及可能存在骨转移。

多囊卵巢综合征患者子宫内膜mPGES-1和COX-2表达的研究

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者膜结合型前列腺素合酶-1(mPGES-1)和环氧合酶-2(COX-2)在子宫内膜组织的表达及临床意义。方法:选择2005年6月至2007年6月华北煤炭医学院生殖内分泌门诊诊断为PCOS的患者21例为PCOS组,卵巢功能正常的不孕患者20例为对照组。PCOS组采用二甲双胍/达英-35联合治疗。病例均测体重、身高、性激素六项及75g葡萄糖耐量试验(OGTT)和胰岛素释放试验(IRT)。并于月经干净3～5天(闭经患者确认为卵泡期)取子宫内膜组织,采用免疫组织化学技术检测PCOS组治疗前后及对照组中mPGES-1和COX-2的表达。结果:PCOS组患者BMI、HOMA-IR、空腹胰岛素(I0)、75g葡萄糖负荷后2h胰岛素(I120)及T均明显高于对照组患者(P均<0.05);治疗前PCOS组mPGES-1和COX-2在子宫内膜的表达显著高于对照组(P<0.01),治疗后两因子的表达与治疗前比较明显下降(P<0.01)。结论:PCOS患者子宫内膜可能处于一种慢性炎症状态,子宫内膜mPGES-1和COX-2过度表达可能是导致患者子宫内膜异常增生和不孕的原因之一,二甲双胍/达英-35联合应用可逆转该炎症状态,可能有利于孕卵着床和预防子宫内膜癌发生。

前列腺癌组织mPGES-1表达及其与COX-2的相关性

目的探讨膜结合型前列腺素E合成酶1(mPGES-1)在前列腺癌(PCa)及前列腺增生(BPH)组织中的表达,并进一步分析其与环氧合酶2(COX-2)的相关性。方法采用免疫组化SP法检测30例PCa和20例BPH组织中mPGES-1和COX-2的表达,用图像分析软件分析阳性表达的灰度和面积,并采用直线相关方法分析mPGES-1和COX-2的相关性。结果BPH组织中mPGES-1和COX-2表达呈阴性(14/20)或弱阳性(6/20);PCa组织中mPGES-1和COX-2均呈现阳性表达(30/30)。在PCa中,mPGES-1和COX-2的阳性面积表达水平与Gleason评分呈正相关(r=0.633、0.607,P<0.01);mPGES-1与COX-2也呈正相关(r=0.959,P<0.01)。结论mPGES-1和COX-2在PCa中均为高表达,且与PCa的Gleason评分呈正相关;mPGES-1和COX-2的表达呈正相关,提示两者在PCa发生发展中共同发挥重要作用。

链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠肾脏COX-2/PGE2/EPs的表达

【目的】探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病小鼠肾脏COX-2/PGE2/EPs的表达情况。【方法】多次小剂量腹腔注射STZ诱导1型糖尿病小鼠模型,实验分为两组:正常对照组(NC)和糖尿病组(DM)。ELISA法检测血清和尿液中前列腺素E2(PGE2)的表达水平;RT-q PCR法检测肾组织环氧合酶-2(COX-2)、膜结合型前列腺素E2合成酶-1(m PGES-1)、各型EP受体(EP1、EP2、EP3、EP4)的m RNA表达水平;Westernblot法检测相应蛋白表达水平。【结果】随着周龄增加,DM组小鼠逐渐出现明显多饮、多尿、体质量下降等糖尿病消耗症状;与NC组小鼠相比,DM组小鼠空腹血糖(FBG)和24 h尿蛋白排泄量均显著增加(P<0.05);肾脏COX-2和EP4表达水平明显上调(P<0.05)、而m PGES-1、EP1、EP2、EP3 m RNA表达无显著变化(P>0.05);同时,DM组小鼠24 h尿PGE2定量显著高于NC组(P<0.05)。【结论】1型糖尿病小鼠肾脏组织中,早期即可检测到COX-2和EP4表达上调,伴24 h尿PGE2定量增加,提示COX-2/PGE2/EP4信号轴激活可能参与了糖尿病肾病的发生发展。

木犀草素对LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1表达的影响

目的:探讨木犀草素对脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1表达的影响。方法:酶免疫测定法(EIA)检测木犀草素对PGE2生成的影响,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测COX-2及mPGES-1 mRNA的表达。免疫印迹法(Western blotting)检测COX-2及mPGES-1蛋白的表达。结果:木犀草素抑制LPS诱导的RAW264.7细胞PGE2的生成,同时下调LPS诱导的RAW264.7细胞COX-2及mPGES-1 mRNA和蛋白的表达。结论:木犀草素可以抑制PGE合成途径中两个诱导酶COX-2和mPGES-1的表达。

“调气”电针远端腧穴对神经根型颈椎病大鼠PGE2含量、COX-2蛋白及其mRNA表达的影响

目的：观察＂调气＂电针远端腧穴对神经根型颈椎病模型大鼠PGE2含量、COX-2蛋白及其mRNA表达的影响,探讨＂调气＂电针远端腧穴治疗神经根型颈椎病可能的镇痛机制。方法：取Wistar大鼠60只,随机分为正常组、模型组及电针组,每组20只。除正常组外均采用颈椎插线法构建神经根型颈椎病模型大鼠,电针组于造模后第3天开始电针治疗,取双侧合谷、太冲穴,1次/d,每次20 min,连续治疗7 d后处死。治疗后检测3组大鼠外周神经机械性痛阈,并采用ELISA法、RT-PCR法、免疫组化法分别检测大鼠脊髓及神经根组织PGE2含量、COX-2mRNA表达及COX-2蛋白表达。结果：模型组痛阈显著低于正常组（P〈0.05）;电针组痛阈显著高于模型组（P〈0.05）。模型组与正常组对比,脊髓及神经根组织PGE2含量,COX-2蛋白及COX-2mRNA表达均显著升高（P〈0.05）。电针组与模型组比较,脊髓及神经根组织PGE2含量,COX-2蛋白及COX-2mRNA表达均明显降低（P〈0.05）。结论：＂调气＂电针远端腧穴可有效降低神经根型颈椎病大鼠脊髓及神经根组织PGE2含量、COX-2蛋白及其mRNA表达,从而减轻其介导的炎症反应和疼痛,发挥镇痛作用。

基于mPGES-1表达调控的药物筛选模型的建立

聚合酶链式反应扩增mPGES-1上游调控序列并插入到已预先在pGL3-Basic载体的Sal Ⅰ位点插入真核筛选基因新霉素抗性基因（neomycin）形成的质粒pGL3B—neo中，构建重组报告基因载体pGL3B-neo／mPGES-1，转染人肺癌细胞A549，通过G418筛选，建立了稳定的mPGES-1表达下调剂筛选细胞株SPGES1。通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人mPGES．1表达下调剂，并优化了其筛选条件，优化的条件是每孔细胞接种数目为1×10^4-3×10^4个，溶剂DMSO终浓度为1％，底物用量为20μL。利用该模型可有效地进行人mPGES-1表达下调剂的筛选。

同型半胱氨酸对实验性结肠炎模型中COX-2及5-LOX表达的影响

同型半胱氨酸（homocysteine,Hey）是-种含巯基氨基酸,是甲硫氨酸去甲基化过程中的产物,可通过多种途径促发炎症反应,启动由细胞免疫所介导的局部和全身慢性炎症.研究发现[1,Hcy可激活核因子-KB（nuclearractor-kappaB,NF-κB）,导致多种炎症基因转录,参与炎症的发生.

金黄色葡萄球菌对奶牛中性粒细胞PGE_(2)的分泌及其合成酶COX-2和mPGES-1的影响

为了阐明金黄色葡萄球菌感染奶牛中性粒细胞过程中炎症介质PGE_(2)分泌的变化及机制,本试验以体外培养的奶牛中性粒细胞为研究对象,应用金黄色葡萄球菌对其进行感染,采用RT-PCR、Western-blot检测COX-2、m PGES-1基因和蛋白的表达,ELISA检测细胞上清PGE_(2)的分泌量。结果显示,与空白对照组(CON)相比,金黄色葡萄球菌(SA113)组感染奶牛中性粒细胞中COX-2、m PGES-1基因和蛋白的表达明显增高(P<0.001),细胞上清中PGE_(2)的分泌量在感染后第3小时无明显变化(P>0.05),但在第6小时和第9小时分泌量明显上升(P<0.05,P<0.01),在第12小时和第24小时分泌量极显著升高(P<0.001)。为进一步证明COX-2和m PGES-1是否对PGE_(2)的分泌产生影响,本试验加入COX-2抑制剂CAY10404和m PGES-1抑制剂MF63,使用ELISA和RT-PCR检测细胞上清中PGE_(2)的分泌和细胞中PGE_(2)基因的表达。结果显示,在感染后第12小时和第24小时与金黄色葡萄球菌(SA113)组相比,加入CAY10404、MF63和同时加入CAY10404、MF63抑制剂时细胞上清和细胞中PGE_(2)的分泌及其基因的表达明显降低(P<0.001)。结果表明:在24 h内金黄色葡萄球菌感染奶牛中性粒细胞过程中COX-2和m PGES-1合成酶的基因和蛋白的表达及炎症介质PGE_(2)的分泌都是随着细菌感染时间的增加逐渐升高且PGE_(2)的合成和表达受COX-2和m PGES-1合成酶的影响。本试验证明了金黄色葡萄球菌可通过提高奶牛中性粒细胞COX-2和m PGES-1合成酶的表达进而促进炎症介质PGE_(2)的分泌。

mPGES-1——一个新的药物开发靶点

综述膜结合型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)的生物学性质、生理和病理作用,以及将其作为一个新的药物作用靶点用于药物开发的可能性。mPGES-1是3种前列腺素E2合酶之一,属于诱导型表达的酶,能被致炎因子诱导而大量表达,在多种疾病,如关节炎、炎症相关性发热和疼痛、动脉粥样硬化及癌症的病理生理过程中均发挥着重要作用。

mPGES-1、NF-κB p65在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

【目的】检测膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)和核转录因子κB p65(NF-κB p65)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中的表达,探究两者与主要临床特征及预后关系,分析它们的潜在的临床价值。【方法】采用免疫组织化学方法,检测83例DLBCL组织中mPGES-1和NF-κB p65的表达,分析两者与临床特征及预后关系。【结果】DLBCL组织中mPGES-1、NF-κB p65高表达所占的比例分别为65.1%(54/83)和73.5%(61/83),且两者的表达水平呈正相关(P<0.05)。这两个蛋白的高表达与B淋巴细胞瘤/白血病蛋白-2(BCL-2)、高Ki-67、高乳酸脱氢酶(LDH)、淋巴结外侵犯、临床晚期和国际预后指数(IPI)评分高有关(P<0.05)。此外,NF-κB p65与多发性骨髓瘤癌基因1(MUM1)、病理类型也有关(P<0.05)。生存分析提示,mPGES-1和NF-κB p65是总生存期(OS)的不良因素,其中NF-κB p65是OS的独立预后因素(P<0.05)。【结论】mPGES-1和NF-κB p65在DLBCL高表达,且两者之间呈正相关,这两种蛋白与DLBCL患者的肿瘤进展和不良预后密切相关。

缺氧状态下人颞下颌关节滑膜成纤维细胞环氧合酶2的表达及意义

目的研究缺氧对人颞下颌关节滑膜成纤维细胞环氧合酶2(COX2)表达的影响,并探讨其在颞下颌关节紊乱病(TMD)中的生物学作用。方法应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和Western印迹检测缺氧不同时间段滑膜成纤维细胞COX2基因与蛋白质表达水平。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)以及明胶酶谱法分别测定缺氧组、缺氧与COX2特异性抑制剂塞来昔布二者联合作用组前列腺素E2(PGE2),金属基质蛋白酶2、9(MMP2、MMP9)分泌量的变化,以常氧组为对照。结果(1)RTPCR测定细胞缺氧4、8hCOX2mRNA分别为1.51±0.34和1.39±0.57,与常氧组0.65±0.24和0.71±0.15比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。(2)Western印迹测定细胞COX2蛋白表达,缺氧6h为0.29±0.06,12h为0.51±0.09,24h为0.68±0.11,而常氧组检测不出COX2蛋白(均P<0.01),表明缺氧条件下,细胞COX2蛋白表达呈时间依赖性增加。(3)ELISA测定细胞缺氧12h,释放的PGE2(7.6ng/ml±0.8ng/ml)显著高于常氧组(2.5ng/ml±0.4ng/ml,P<0.01);联合药物处理组(4.3ng/ml±0.4ng/ml)也显著低于缺氧组(P<0.05),表明细胞PGE2释放受抑制。(4)明胶酶谱法测定细胞缺氧12h,分泌的MMP2、MMP9高于常氧组,但在药物联合作用下,分泌能力减弱。结论组织缺氧是导致TMD的一个重要因素;缺氧状况下,人滑膜成纤维细胞可能通过增加COX2的表达来影响缺氧所致颞下颌关节病变进程。