脑胶质瘤自杀基因疗法研究进展

自杀基因疗法是近年来备受关注的一种治疗胶质瘤的方法 ,可分为单自杀基因疗法和融合基因疗法 .本文对这两种自杀基因疗法的原理及其在治疗胶质瘤中的运用进行综述 ,并介绍了其临床运用和进一步发展方向 .胶质瘤 (glioma)是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤 ,其传统治疗以手术为主 ,辅以放疗、化疗等辅助治疗 ,疗效欠佳 .基因治疗 (genetherapy)作为治疗胶质瘤的一种新的辅助手段 ,逐渐受到人们的重视和关注 .自杀基因疗法 (suicidegenetherapy)是众多基因治疗策略中疗效最明显的一种 ,也是最有前途的治疗策略之一 .

自杀基因疗法治疗黑色素瘤的研究进展

综述了自杀基因疗法的种类及作用机制,以及自杀基因联合疗法治疗黑色素瘤的研究现状。目前治疗黑色素瘤的自杀基因疗法主要有双自杀基因治疗、自杀基因疗法联合免疫治疗、自杀基因联合细胞因子治疗以及中药联合自杀基因治疗,中药联合自杀基因疗法治疗黑色素瘤展示着较好的应用前景。

腺病毒介导的肝癌自杀基因疗法的实验研究

本文观察了胞嘧啶脱氨酶(CD)基因／5-氟胞嘧啶（5FC)自杀基因疗法对肝癌模型的治疗作用。以CMV启动子调控CD基因的重组腺病毒载体AdexCMV．CD在体外能有效转染人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2，转染后的细胞体外生长能力无明显变化．对5FC的敏感性明显增高。当以AFP上游调控序列驱动CD基因的重组腺病毒载体AdexAFP．CD分别转染SMMC-7721和HepG2时，CD基因能在HepG2中表达，使HepG2对5FC的敏感性增高，但不能使SMMC-7721的生长受到5FC的抑制．[^3H]TdR掺入法观察体外旁观者效应时发现，当细胞总数中转染细胞数超过20％时，其生长明显被5FC抑制。将Adex CMV．CD直接注射入裸鼠接种SMMC-7721细胞形成的皮下肿瘤中．井全身应用5FC后．与对照组相比．肿瘤大小在开始治疗后第8天约缩小3倍，第18天约缩小4倍，以上结果表明，腺病毒介导的CD／5FC自杀基因系统能在体内．外有效地抑制肝癌的生长。以AFP上游调控序列驱动CD基因的脓病毒载体介导的基因转染能在AFP阳性的肝癌细胞中特异表达。

中医药与自杀基因疗法结合治疗肝癌的思路

肝癌的发生和演进是典型的多因素（肝炎病毒慢性感染％黄曲霉素AFB1暴露，过量饮酒和遗传性肝病肝硬化等）多基因和多阶段、多途径（Rb、p53和Wnt途径等）的复杂过程，是遗传与环境因素相互作用的结果，其中因遗传学、表遗传学改变引起的原癌基因的活化和抑癌基因的灭活，是癌变的中心生物学过程。肝细胞癌变到形成肝肿瘤的发生是一个多阶段、多步骤、

胰腺癌的自杀基因疗法

胰腺癌起病隐匿,一旦发现多数已是晚期,手术切除困难,而放射治疗和全身化学疗法效果也不理想,基因治疗的问世给胰腺癌的治疗提供了一条新的途径。自杀基因治疗作为一种重要的基因治疗方法,已显示了广阔的前景,胰腺癌的自杀基因治疗研究虽然起步较晚,但取得了令人鼓舞的结果。

肿瘤自杀基因疗法的靶细胞

自杀基因疗法是利用转基因方法将自杀基因转导入目的细胞,该基因表达的产物可以将无毒的药物前体转化为毒性药物,从而影响细胞DNA的合成,引起该细胞的死亡。尽管只有一部分细胞转染了自杀基因,但由于其特有的旁观者效应,在一定程度上弥补了载体系统转染率低的缺点,从而提?..

六味地黄丸增强黑色素瘤自杀基因系统旁观者效应的体外研究

【目的】探讨六味地黄丸含药血清对单纯疱疹病毒核苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-tk/GCV)系统杀伤小鼠黑色素细胞瘤B16细胞株的增效作用,为提高临床基因治疗肿瘤疗效提供新思路。【方法】构建并鉴定恶性黑色素瘤B16细胞HSV-tk/GCV治疗系统,制备六味地黄丸含药血清及对照血清,将B16、B16/tk细胞按20%(1:4)的比例混合制成细胞悬浮液接种于96孔培养板上,分为对照血清组、含药血清组、对照血清联合GCV组、含药血清联合GCV组,其中含药血清组及含药血清联合GCV组按血清体积分数计又分高(10%)、中(5%)、低(2.5%)3组,GCV的终浓度为25μmol/L,按分组添加相应的含药血清,每孔培养液总体积200μL,37℃、体积分数5%的CO2培养箱培养。48h后采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测杀伤效应。采用金正钧Q值法分析六味地黄丸含药血清与自杀基因治疗系统联合作用对旁观者效应是否具有协同性。【结果】MTT实验表明联合用药组对B16细胞的抑制率明显高于其他组,六味地黄丸含药血清对B16细胞株HSV-tk/GCV系统的增效作用存在量效关系:2.5%、5%、10%含药血清联合20%tk/GCV组的实际抑制率(48.75%、59.39%、69.28%)显著高于理论抑制率(38.13%、38.67%、39.92%),金正钧Q值分别为1.28、1.54、1.74,均大于1.15,具有协同增效作用。【结论】六味地黄丸含药血清对B16细胞株HSV-tk/GCV系统旁观者效应有明显的增效作用,且具有一定的量效关系。

Ad-VEGF-GFP-CD/TK双自杀基因系统对大肠癌的生长抑制作用及微环境中细胞因子活性的影响

目的评价重组腺病毒介导的Ad-VEGF-GFP-CD/TK双自杀基因系统对大肠癌Balb/c小鼠移植瘤的治疗作用及其引起的相关细胞因子的变化。方法Balb/c小鼠皮下接种CT26细胞,成瘤后给予双自杀基因系统治疗,计算肿瘤体积抑瘤率的动态变化,治疗结束后检测IL-2、IL-10、TNFα、IFNγ这4种细胞因子的表达水平。结果CD/TK双自杀基因系统对大肠癌的生长抑制作用明显;治疗后小鼠4种细胞因子水平均有升高,与对照组有显著差异(P<0.05)。结论重组腺病毒介导的CD/TK双自杀基因系统对荷大肠癌Balb/c小鼠的移植瘤有明显的抑瘤作用,其所导致的细胞因子的变化可能有助于加强其抗肿瘤效应。

hTERT启动的双自杀基因CDTK载体的构建

目的:构建hTERT启动子启动的双自杀基因载体CDTK(pc-ChCDTK)。方法:利用PCR扩增CMV增强子、hTERT启动子、yCD及TKgly4种元件,并构建过渡载体T-CMV,T-hTERT,T-yCD,T-TKgly,连至pc-DNA3.1(-)质粒载体上构建成双自杀基因载体pc-DNA3.1-CMV-hTERT-CDTK(pc-ChCDTK);对各个元件、过渡载体及最终载体进行琼脂糖凝胶电泳、酶切和测序鉴定。结果:实验所构建的最终载体的酶切产物琼脂糖凝胶电泳所得片段大小分别为6773bp和288bp,与预期片段一致;测序证实最终载体与pc-ChCDTK序列一致。结论:成功构建了含有hTERT启动子的肿瘤特异性双自杀基因载体pc-ChCDTK。

自杀基因系统HSV1-TK/GCV对MEC-1细胞的体外杀伤及诱导凋亡作用

目的 :探讨HSV TK/GCV系统对MEC 1细胞的体外作用。方法 :用脂质体介导将含有HSV 1 TK全长cDNA的真核表达质粒G1NATK转染人黏液表皮样癌细胞系MEC 1,经G418筛选 ,挑选阳性克隆 ,用PCR及RT PCR检测目的基因的整合及mRNA转录 ;分别用MTT及细胞记数法检测TK阳性细胞对GCV的体外敏感性及旁观者效应 ;用倒置显微镜、HE染色、活细胞荧光染色及TUNNEL染色观察GCV作用下MEC 1/TK的形态学变化。结果 :PCR及RT PCR分别从G418阳性克隆中成功扩增出 40 4bp的特异性基因片段 ,将此G418抗性克隆命名为MEC 1/TK ;IC50 MEC 1/TK为 0 .7μg/ml,而MEC 1为 10 0 0 μg/ml以上 ;当将TK阳性细胞和TK阴性细胞以不同比例混合 ,TK阳性细胞只占 10 %时 ,即有 90 %的细胞被杀死 ;形态学观察表明 ,经GCV作用 ,MEC 1/TK细胞变圆、脱壁、漂浮 ,部分细胞呈现核浓缩、核碎裂等特征 ,TUNNEL染色核阳性着色细胞明显增多。结论 :HSV TK/GCV系统在体外能明显杀伤MEC 1细胞 ,对GCV的敏感性比未转染的亲本细胞提高 10 0 0倍以上 ,并显示较强的旁观者效应 ;GCV可诱导部分MEC

癌胚抗原相关细胞黏附分子6-shRNA及双自杀基因yCDglyTK的联合基因载体构建

目的构建新型靶向联合双自杀基因载体pCDNA3.1-yCDglyTK-CEACAM6-shRNA。方法根据已知的癌胚抗原相关细胞黏附分子6(Carcinoembryonic antigen associated cell adhesion molecule 6,CEACAM6)序列构建含有hU6启动子和CEACAM6-shRNA表达框的重组质粒,并将CEACAM6-shRNA表达框(含hU6启动子)通过双酶切方式亚克隆至双自杀基因载体pCDNA3.1-yCDglyTK,构建新型靶向联合双自杀基因载体pCDNA3.1-yCDglyTK-CEACAM6-shRNA。通过酶切、测序等鉴定重组质粒。结果实验所构建的最终载体酶切产物所得的片段大小为7.5 kb,与预期片段一致。测序证实最终载体与pCDNA3.1-yCDg-lyTK-CEACAM6-shRNA序列一致。结论成功构建新型靶向联合双自杀基因载体pCDNA3.1-yCDg-lyTK-CEACAM6-shRNA。

自杀基因治疗乳腺癌的研究进展

自杀基因疗法是近年乳腺癌基因治疗研究的热点之一。这类基因所编码的酶能将无细胞毒性或低细胞毒性的前体药转化成细胞毒性代谢产物 ,经靶向性转导或靶向性转录 ,选择性地杀伤肿瘤细胞。简要介绍该疗法的机理以及基因治疗载体。

恶性肿瘤自杀基因放射导向治疗的研究进展

恶性肿瘤自杀基因放射导向治疗是近年来的研究热点。HSV-TK及EC-CD自杀基因系统是目前研究最多的两种自杀基因系统。自杀基因放射导向治疗的方法,是利用自杀基因及放疗的双重作用治疗肿瘤,通过提高放疗的敏感性,减少放疗剂量,提高治愈率,降低并发症和后遗症,提高病人的生活质量,延长病人的生存时间。用Egr-1启动子的放射诱导性进行肿瘤放射基因治疗实验研究初步获得满意效果。恶性肿瘤基因放疗具有广阔的临床应用前景。