重复利用淋巴瘤组织切片行荧光原位杂交的可行性分析

淋巴瘤的分类非常复杂,形态多样,鉴别诊断有时非常困难,需借助免疫组化及分子检测来进行分析。FISH检测在淋巴瘤的鉴别诊断中广泛使用^([1-3])。目前淋巴瘤石蜡组织较多来源于门诊小手术样本、B超引导下的粗针穿刺组织样本、胸腔镜和腹腔镜样本等,共同的缺点是组织较小,标本量少,且病变细胞不明确,组织易受挤压,形态欠佳,前期形态学检测项目多,所剩样本有时不足以进行相关FISH检测。

粗穗披碱草1H^(t)S染色体特异荧光原位杂交标记开发

小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL罗伯逊易位系高抗小麦条锈病和叶锈病,是小麦遗传改良的优异基因源。我们前期利用中国春ph1b基因突变体对该易位系进行诱导,获得了一批诱导后代材料,为了从中准确鉴定小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系,需要建立能够覆盖粗穗披碱草1H^(t)S染色体的荧光原位杂交(FISH)标记。本研究利用21个小麦及其近缘种探针、61个基于中国春基因组序列新开发的小麦1BS染色体探针以及40个根据简单三碱基重复序列新开发的探针对小麦-粗穗披碱草1H^(t)S.1BL易位系进行非变性FISH分析。结果显示,B74、B76和B77等36个探针(33个为新开发的)在1H^(t)S染色体上具有杂交信号,并且杂交信号可分为仅在染色体末端、仅在着丝粒处、同时在着丝粒处和近着丝粒处、覆盖1H^(t)S约3/4染色体臂、覆盖绝大部分1H^(t)S共五种类型。因此,部分探针单独使用或多个探针联合使用,其信号能覆盖1H^(t)S染色体,能够满足小麦-粗穗披碱草1H^(t)S小片段易位系鉴定,这可为小麦背景中粗穗披碱草染色质追踪提供新的检测手段。

观察全自动免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)评价胃癌HER2状态的效果

探讨荧光原位杂交(FISH)和全自动免疫组化(IHC)评价胃癌表皮生长因子受体2(HER2)状态的效果。方法 对我院胃食管交界处腺癌或手术切除原发性胃石蜡组织标本展开FISH和IHC检测,288例标本采集时间为2019.1.1-2023.12.31,对FISH和IHC检测的胃癌HER2蛋白与基因表达情况加以分析。结果 228例标本中,50例(21.93%)表达为IHC2+与3+,178例(78.07%)表达为0+与1+。FISH检测HER2基因扩增病理病例34例,其中31例IHC+1病例FISH检测有27例扩增,未扩增病例共2例,来源于17号染色体多体;FISH检测扩增病例共2例,来源于IHC2+的19例;在检测FISH下可检出HER2扩增34例,其中低度、中度以及高度扩增分别有15例(44.12%)、10例(29.41%)、9例(26.47%);扩增病理中17号染色体非整倍性者17例,其中亚二体性、低多体性、高多体性各有1例(5.88%)、11例(64.71%)、5例(29.41%);HER2蛋白表达与WHO分化程度与Lauren分级密切相关,P<0.05;HER2基因扩增、Lauren分级、肿瘤分化程度三者之间关系密切,P<0.05。结论 HER2基因扩增中17号染色体多倍体发生比例与分化程度相对更高,HER2阳性率偏高,以肠型多见,IHC虽能够用于胃癌HER2的筛查,但若遇到无法明确的病例,可借助FISH检测进一步确诊,能够有效提升临床诊断的准确性。

两种国产膀胱癌荧光原位杂交检测试剂盒的临床应用比对

目的:通过比对两种国产膀胱癌荧光原位杂交(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)试剂盒在尿液脱落细胞染色体畸变检测结果差异,探究膀胱癌FISH试剂盒的实际临床应用价值。方法:选取2021年1月至2022年1月,首都医科大学临床检验中心20例血尿患者尿液筛查样本,分别使用不同厂家试剂盒,检测尿液脱落细胞染色体畸变,并与液基薄层细胞特殊染色(CellDetect染色)结果进行对比,分析两种不同试剂盒检测结果的差异。结果:20例样本中,19例样本检测结果一致,仅有1例样本结果不一致。两种试剂盒阳性检出率分别为50%和45%,结果无统计学差异(P>0.05)。结论:两种国产膀胱癌FISH试剂盒检测结果一致性高,均可应用于临床膀胱癌FISH检测。

220例骨髓增生异常综合征患者的荧光原位杂交和染色体核型结果分析

目的探讨荧光原位杂交(FISH)技术和染色体核型分析(CCA)对骨髓异常综合征(MDS)的诊断及预后评估的价值。方法采集2016年1月至2021年1月南昌大学第一附属医院的220例MDS初诊患者骨髓标本,对其进行染色体核型分析和荧光原位杂交技术检测,并整理分析患者临床资料。结果世界卫生组织(WHO)分型的各亚型中,骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多Ⅰ型(MDS-EB-1)和骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多Ⅱ型(MDS-EB-2)组的FISH异常染色体检出率高于CCA法,差异有统计学意义(P<0.05),而两种检测方法对其他亚型的异常染色体检出率无统计学意义(P>0.05);同时,两种方法的联合诊断异常染色体总检出率高于CCA法,差异有统计学意义(P<0.05);进一步采用修订版国际预后积分系统(IPSS-R)进行等级评分,结果提示联合诊断风险等级显著高于单独CCA检测,差异有统计学意义(P<0.05)。结论FISH联合CCA法可显著提高MDS患者的染色体异常检出率,在MDS的诊断、分型甚至预后分层都具有显著指导意义。

无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用

目的探讨无水乙醇替代甲醇在膀胱癌荧光原位杂交技术中的应用价值。方法收集30例疑似膀胱癌患者尿脱落细胞,每例均随机平均分为A、B组,分别使用传统方法甲醇:乙酸=3:1配制固定液和无水乙醇:乙酸=3:1配制固定液,并使用膀胱癌染色体异常检测试剂盒进行荧光原位杂交检测,观察两组方法的染色一致性。结果两组方法均能获得良好制片效果,检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论在膀胱癌尿脱落细胞荧光原位杂交实验中,使用无水乙醇替代传统方法中的甲醇配制固定液能取得良好的制片效果及一致性的检测结果,在不影响结果和报告准确性的前提下,减少了职业危害的发生,为病理技术人员的健康提供更多的保障,是值得推广的试剂替代方法。

荧光原位杂交分离探针非典型信号研究进展

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)分离探针因设计、判读相对简单而广泛应用于肿瘤的病理诊疗。目前针对FISH分离探针中出现的非典型信号类型及意义尚无系统研究。该文根据国内外相关研究,系统总结了FISH分离探针非典型信号的类型、意义、出现的可能原因及机制,为FISH分离探针非典型信号的判读及深入研究提供理论基础。

尿液基细胞荧光原位杂交检测对膀胱尿路上皮癌的诊断价值

目的探讨尿液基细胞学(LBC)靶向的荧光原位杂交(FISH)对膀胱尿路上皮癌(BUC)的诊断价值。方法回顾性收集2020年10月—2022年10月于首都医科大学附属北京天坛医院泌尿外科行膀胱镜检查的128例患者的临床资料。所有患者在行膀胱镜检查前进行尿核基质蛋白22(NMP22)检测、尿LBC检测与尿LBC靶向的FISH检测,以术后病理结果为标准,分析3种检查方法的灵敏度和特异度。结果NMP22、尿LBC与LBC靶向的FISH的灵敏度分别为61.11%、79.17%、82.46%,特异度分别为57.14%、73.21%、86.67%;NMP22、尿LBC的灵敏度在检测高级别BUC时优于低级别,差异有统计学意义(P=0.01,P=0.03);3种方法对肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌检测的灵敏度比较,差异无统计学意义(P≥0.05)。结论尿LBC靶向的FISH对BUC诊断的灵敏度和特异度较高,尤其是对于低级别BUC,可以作为BUC早期筛查、诊断的重要方法。

揭秘基因密码—荧光原位杂交分子病理报告解读

生命是一部由基因编写的复杂交响曲,而荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)是揭示这部交响曲内在奥秘的重要工具之一。FISH是一种生物分子分析技术,用于研究细胞和组织中的染色体结构、基因定位和基因表达。该技术通过使用荧光标记的DNA或RNA探针与目标DNA或RNA序列杂交,然后通过荧光显微镜观察杂交信号的位置和数量。FISH技术让人们能够在细胞和组织层面上观察基因、染色体的情况,了解患者病变部位的分子生物学特征,从而为个体化医疗提供支持。但对于许多患者而言,他们并不了解FISH,甚至对为何进行FISH检测存在疑惑。本文将从科普角度解读FISH分子病理报告,以及FISH走入临床工作的意义。

单分子荧光原位杂交(smFISH)技术及应用

单分子荧光原位杂交(single-molecule fluorescence in situ hybridization,smFISH)技术是一种通过用偶联荧光基团的寡核苷酸探针,对固定细胞或组织中单个mRNA分子进行成像的方法。smFISH可对RNA进行定位、定量,以此对目标转录本进行实时研究。sm FISH适用于细胞、组织切片等多种类型生物样本。近年来,多种基于基础smFISH的改进技术被发明,进一步促进了该技术的实际应用。smFISH良好的RNA单分子可视化能力,使得其在发育生物学、神经生物学及肿瘤生物学等基础生物学科中得到了广泛的应用。本文综述了smFISH技术基本原理、smFISH技术的局限性、smFISH衍生技术方法、smFISH在不同生物学科中的应用进展,并对smFISH技术的发展前景做出展望。

免疫组化及荧光原位杂交检测人类表皮生长因子受体2的临床意义

目的:探讨结直肠癌中不同免疫组化评分标准下人类表皮生长因子受体2(HER2)蛋白表达情况及荧光原位杂交方法检测HER2基因扩增与临床病理特征之间的关系。方法:选择2019年1月-2021年12月结直肠癌根治术的石蜡组织标本100例,同时收集患者的临床和病理信息。采用三种不同评分标准对所有病例行全自动免疫组化(IHC)检测HER2蛋白和荧光原位杂交(FISH)检测HER2基因表达,分析其与临床病理特征的关系。结果:100例结直肠癌组织中,三种不同评分标准下HER2的蛋白阳性表达率分别为34%,27%和20%,差异无统计学意义(P>0.05)。IHC评分标准1下HER2蛋白表达3+,2+,1+,0+与基因扩增的一致性分别为50.0%,12.5%,2.9%和0。IHC评分标准2下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性分别为71.4%,15.0%,2.9%和0,IHC评分标准3下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性分别为100.0%,20.0%,2.9%和0,IHC评分标准3下HER2蛋白与基因扩增一致性最高。FISH检测HER2基因扩增9例(9.0%)。HER2基因扩增与年龄、性别、病理分期、浸润深度无相关性(P>0.05),与分化程度、淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结论:三种评分标准检测HER2蛋白表达阳性率比较,差异无统计学意义,但评分标准3下HER2蛋白表达与基因扩增的一致性最高。HER2基因扩增与分化程度和淋巴结转移有关。临床上应优先选用评分标准3进行HER2蛋白表达检测。

荧光原位杂交技术检测乳腺癌HER2基因的影响因素

探究荧光原位杂交技术(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)在乳腺癌人类表皮生长因子受体2(Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER2)基因状态检测中的影响因素。方法 选择40例2021年1月至2023年12月我院外科手术切除乳腺癌组织标本,使用FISH检测HER2基因状态,观察不同的酶消化时间、煮片的温度与时间、组织前期处理固定效果对FISH检测HER2基因扩增的影响。结果 酶消化11分钟癌细胞杂交成功率>75%,实验较为稳定;酶消化9分钟时提示消化时间不足;酶消化13分钟提示消化过度。煮片水温在92℃,时间在15~25分钟左右会出现荧光杂交信号弱量较少情况;温度在97℃,时间15分钟会出现荧光杂交信号弱量较少情况,时间在20~25分钟会出现荧光杂交信号强度不均匀情况;煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右最佳。在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定最佳,乳腺组织离体到固定时间间隔不超过1h,不宜用微波快速固定。结论 使用荧光原位杂交技术检测人类表皮生长因子受体2基因扩增时,在乳腺组织离体30min内使用10%中性缓冲福尔马林固定、酶消化11分钟、煮片水温在95℃,时间保证在20分钟左右具有较高的杂交成功率,同时可以保持实验的稳定性。

4种荧光原位杂交探针检测隐匿易位急性早幼粒细胞白血病的比较

目的:比较4种临床常用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)探针对罕见隐匿PML-RARα插入易位急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia, APL)的检测能力。方法:联合FISH、RT-PCR及常规染色体核型分析技术检测3例罕见APL病例相关融合基因及染色体异常,其中FISH技术采用4家不同公司PML-RARα探针进行检测。结果:FISH方法检测罕见插入易位PML-RARα融合时,由于片段短小极易出现假阴性的情况。4家不同探针FISH检测结果显示,美国Abbott公司探针3例PML-RARα融合基因检测均为阴性;英国Cytocell公司探针检测到2例阳性,1例阴性;武汉康录和广州安必平公司探针在3例中均成功检测到融合信号。结论:康录和安必平公司探针PML-RARα检出率高,是FISH检测此类罕见PML-RARα融合基因时的更优选择。

荧光原位杂交技术在性染色体异常产前诊断中的应用

目的:探讨荧光原位杂交(FISH)技术在性染色体异常产前诊断中的应用。方法:回顾性分析100例因无创产前检测提示性染色体异常高风险的孕妇资料,在郑州大学第三附属医院产前诊断中心接受羊膜腔穿刺行FISH检测,同时进行染色体核型分析、全基因组低深度测序(CNV-seq)或染色体微阵列分析(CMA)检测,收集检测结果和孕妇妊娠结局,比较FISH和其他技术(染色体核型分析、CNV-seq或CMA)结果的一致性。结果:羊水FISH检出38例性染色体异常,其中22例为性染色体数目异常,与其他检测方法结果一致;16例为性染色体嵌合体,有6例FISH结果与其他检测方法结果不一致。其他检测方法检出FISH未检出的性染色体异常病例5例。FISH与其他检测方法结果一致性较好(Kappa=0.788,P<0.001)。FISH联合其他检测方法共检出性染色体异常病例43例,终止妊娠21例,分娩活产胎儿15例,分娩死胎1例,6例失访。结论:FISH技术在产前诊断中对性染色体异常的诊断有着重要的应用价值,但因技术的局限性,适合和其他的遗传学诊断技术联合应用,共同提高产前诊断检出率。

探讨提高石蜡样本荧光原位杂交重复检测成功率的方法

目的探讨石蜡包埋样本荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)检测失败的原因,并分析FISH检测失败与样本来源、探针种类、实验条件的相关性,以提高石蜡样本FISH重复检测的成功率。方法收集12709例石蜡检测样本,对其中首次检测失败的512例样本,采取更换蜡块或改变实验条件的方法进行重复实验,统计重复实验前后FISH检测结果。结果总体检测重复率为4.03%(512/12709),包括信号微弱无法判读58.59%(300/512),完全无信号41.41%(212/512)。其中本院样本195例(2.89%,195/6753),会诊样本317例(5.32%,317/5956)。按照样本来源分类,检测重复率较高的组织分别为软组织(4.41%)、肺(4.20%)、乳腺(4.18%)、淋巴(4.16%)、头颈部(4.03%)、胃(3.69%)、神经(2.88%)。样本来源及探针种类间的检测重复率差异无统计学意义(P>0.05)。重复检测后,186例(36.33%)样本检测成功,其中更换蜡块和改变实验条件的成功率分别为60.75%和29.88%(P<0.05)。结论石蜡样本FISH检测重复率与样本的前处理和实验操作相关,与组织学类型和探针类型无关,采取更换蜡块的方式重复实验可有效提高FISH二次检测的成功率。

新型寡聚核苷酸荧光原位杂交:发展与应用

荧光原位杂交技术(FISH,fluorescence in situ hybridization)是分子细胞遗传学中最为重要的手段之一,可以实现DNA或RNA序列在染色体上精确的可视化的直观定位。随着基因组测序技术的发展和测序成本的降低,大量物种的基因组信息被不断公布,基于高通量测序和参考基因组衍生的寡聚核苷酸序列(Oligo,oligonucleotide)探针在FISH中表现出独特的优势。和传统FISH探针相比,Oligo-FISH能更加精确、深入地揭示植物在进化过程中染色体的进化、遗传与变异。本研究对荧光标记的靶标DNA与荧光探针的种类与应用,寡聚核苷酸探针的种类及制备技术进行了综述,重点聚焦于Oligo-FISH的起源发展及其在鉴定植物染色体、识别植物同源染色体方面所发挥的重要作用。Oligo-FISH技术可用于构建物种属内的染色体核型,利用Oligo-FISH结果可为该属没有全基因组的作物的基因组组装提供指导,Oligo涂染还可以很好地解决异源多倍体物种中非同源染色体间的融合与交换问题,能够准确地检测染色体间是否存在易位等行为及异源重组。因此,Oligo-FISH技术的发展为基因组染色体水平的组装提供了强有力的支撑。未来Oligo-FISH技术与信号放大技术结合能够克服重复序列高度富集区域Oligo探针密度低的困难,可对非常短的基因区域进行可视化,如对启动子、增强子的检测,在转基因中对基因片段定位等,这些研究将有助于更加深入地了解物种遗传和进化,进一步推动作物遗传育种的改良与发展。

荧光原位杂交检测MDM2和DDIT3基因信号改变在诊断脂肪肉瘤中的价值

目的:探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)法检测MDM2和DDIT3基因在各亚型脂肪肉瘤的临床诊断价值。方法:回顾性分析北京大学第一医院病理科2015年1月至2019年12月诊断的62例脂肪肉瘤的临床病理学特征,所有病例进行了MDM2基因扩增FISH检测,其中48例进行了DDIT3基因断裂FISH检测,观察MDM2和DDIT3基因信号改变模式,并综合临床病理学特征确诊不同亚型脂肪肉瘤。结果:62例患者以男性多见(男∶女=1.75∶1),中位年龄59(31~89)岁。脂肪肉瘤组织学亚型包括20例非典型脂肪瘤性肿瘤/高分化脂肪肉瘤(atypical lipomatous tumour/well differentiated liposarcoma,ALT/WDLPS)、26例去分化脂肪肉瘤(dedifferentiated liposarcoma,DDLPS)、13例黏液样脂肪肉瘤(myxoid liposarcoma,MLPS)和3例多形性脂肪肉瘤(pleomorphic liposarcoma,PLPS),其中23例(23/26)DDLPS和8例(8/20)WDLPS位于腹膜后,而MLPS和PLPS则均不位于腹膜后。肿瘤发生部位在不同亚型脂肪肉瘤间的差异具有统计学意义(P<0.05)。组织形态学上,各亚型脂肪肉瘤均可见多少不等的黏液样间质,且差别具有统计学意义(P<0.05)。MDM2基因扩增见于所有ALT/WDLPS和DDLPS(均为100%,20/20及26/26);DDIT3分离探针典型信号表现为基因断裂/易位,仅见于MLPS(100%,13/13),但值得注意的是,该探针还可出现非典型信号(端粒侧信号簇状扩增),比较常见,包括绝大多数DDLPS(96.2%,25/26)和ALT/WDLPS(83.3%,5/6,探针只随机检测6例)。对照分析探针说明书上的设计图,DDIT3分离探针之红绿色探针并未覆盖DDIT3基因本身,而是跨越了DDIT3基因,且探针端粒侧红色探针覆盖了CDK4基因,而DDIT3基因与CDK4基因距离很近,因此,当DDIT3分离探针端粒侧出现簇状扩增信号,提示CDK4基因扩增而非DDIT3基因断裂。随机挑选10例出现这种非典型信号的病例,以FISH法进一步应用CDK4和DDIT3计数探针进行验证,证实为CDK4基因扩增(100%,10/10),其中2例同时检测到DDIT3基因扩增(20%,2/10);DDIT3分离探针还存在另一种少见的非典型信号,即基因拷贝数增加(黄色融合信号数目≥3个),对应形态学表现为多形性和预后差,见于1例DDLPS和2例PLPS。结论:利用FISH技术观察MDM2和DDIT3基因信号改变模式时,需要注意对非典型信号做出正确判读,并结合患者的临床病理学特征,才能对不同亚型脂肪肉瘤做出正确诊断,进一步指导临床治疗。

基于荧光原位杂交技术的全自动病理染色系统结构设计

荧光原位杂交(FISH)技术是检测恶性肿瘤细胞核酸序列的常用方法,在癌症的诊疗领域有广泛应用。为实现FISH实验的全自动化,设计了一种全自动病理染色系统。该系统设置有多轴操纵臂、试剂加样器、载玻片、盖玻片夹具、辅助模块等。多轴操纵臂定位误差不大于±0.1 mm,提取及丢弃移液枪头准确率大于99.5%,抽取盖玻片成功率大于99%,微量试剂加样误差不大于0.6μL,大量试剂加样误差不大于0.5 mL,载玻片夹具控温误差不大于±1℃且无试剂泄漏。生物实验结果表明,该系统荧光染色效果良好,信号点清晰可见,荧光图像可判读率超过90%,具有较好的人工替代性。

荧光原位杂交法分析肥披碱草的染色体核型

以肥披碱草为材料,用45S rDNA和5S rDNA做探针,通过荧光原位杂交(FISH)法,借助肥披碱草染色体内45S rDNA、5S rDNA的分布特性,分析其染色体核型。结果表明,检测到45S rDNA中第2号、第20号染色体短臂的末端及第17号染色体短臂次缢痕上有杂交信号,并检测到5S rDNA中第2号、第7号和第14号染色体短臂上及第17号染色体短臂次缢痕上有杂交信号。肥披碱草的核型公式为2n=6x=42=30 m+12 sm(4 sat);染色体平均长度为12.68μm,染色体长度范围为9.19~17.39μm,染色体组总长度为266.29μm,根据Stebbins核型分类原则,肥披碱草核型属于2A型。

荧光原位杂交和NanoString nCounter技术检测乳腺癌HER2的表达及其与化疗疗效的相关性

目的探讨荧光原位杂交和NanoString nCounter技术检测HER2蛋白在乳腺癌FFPE组织样本中的表达及对化疗疗效的影响。方法分别采用荧光原位杂交和NanoString nCounter技术检测53例乳腺癌及癌旁组织中HER2蛋白的表达,对两种方法的检测结果进行对比,检测结果分别和蒽环类化疗药物的疗效进行对比。结果FISH检测53例乳腺癌FFPE组织标本中HER2阳性率为56.60%(30/53);NanoString nCounter技术检测HER2阳性率为69.81%(37/53);将FISH结果作为金标准,NanoString nCounter检测敏感度为93.32%,特异性为60.87%。FISH检测HER2阳性的30例患者中,19例化疗有效(63.33%)(CR+PR),11例化疗无效(36.67%)(SD+PD);23例阴性结果中,10例化疗有效(43.48%),13例化疗无效(56.52%)(P=0.412)。NanoString nCounter技术检测HER2阳性的37例患者中,19例化疗有效(51.35%),18例化疗无效(48.65%);16例阴性患者中,3例化疗有效(18.75%),13例化疗无效(81.25%)(P=0.039)。结论与FISH方法相比,NanoString nCounter技术结果有较高的敏感度和特异性,且HER2的NanoString nCounter技术的检测结果和化疗疗效更相关。