冠心病痰浊证与健康人血浆外泌体蛋白质谱研究

目的探索冠心病痰浊证患者血浆外泌体中特异蛋白表达,为冠心病痰浊证的诊断提供生物学参考。方法纳入冠心病痰浊证患者20例和同时期健康体检者20例,运用qEV尺寸排阻法提取所有受试者血浆外泌体,随机抽取10例冠心病痰浊证和10例健康受试者,运用label free非靶向蛋白定量分析,筛选两组间差异表达蛋白,并运用MRM靶向蛋白标记技术在剩余受试者中验证差异表达蛋白。结果与健康对照组相比,冠心病痰浊证患者血浆外泌体差异表达蛋白共计214个(61个上调,153个下调),主要与胆固醇代谢、补体和凝血级联、免疫效应有关。ANXA6、C4BPB、F8、CFB、APOE、C9、CLU蛋白进一步通过了MRM靶向蛋白验证。结论冠心病痰浊证患者血浆外泌体蛋白表达与健康人存在差异,差异蛋白主要与胆固醇代谢、补体和凝血级联有关。

野生牡丹种子蛋白质谱带的比较研究

利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对野生牡丹7个种10个居群的蛋白质谱带进行研究,并采用聚类分析法对其种子蛋白质谱带的不相似程度进行分析。结果表明:野生牡丹的种子蛋白质谱带具有种水平的特异性,同一野生种不同居群间蛋白质谱带差异明显;革质花盘亚组的四川牡丹、稷山牡丹、杨山牡丹亲缘关系较近,而紫斑牡丹3个不同的居群差异明显;肉质花盘亚组狭叶牡丹、黄牡丹、紫牡丹可聚为一大类,但种间蛋白质谱带差异较大,超过了革质花盘亚组的种间蛋白差异程度,应作为种来单独分类。

牡丹野生种间蛋白质谱带的比较研究

利用ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究了中国牡丹６个野生原种的蛋白谱带。结果表明，这些牡丹野生种间在蛋白谱带构成上具有种的特异性。利用排序方法对牡丹野生种间蛋白谱带的相似程度进行定量分析，结果显示：紫斑牡丹、四川牡丹、矮牡丹相互间存在一定亲缘关系；黄牡丹与狭叶牡丹间也有较近的亲缘关系；而大花黄牡丹与其它５个野生种之间的亲缘关系较远。本文进一步讨论了大花黄牡丹的系统分类位置。

捕食线虫真菌酯酶同工酶谱和可溶性蛋白质谱分析

本文对５个属１４个种共３３株捕食线虫真菌采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行了酯酶同工酶谱和可溶性蛋白质谱分析。结果表明，酯酶同工酶谱带少，但各属的特征谱带是明显的，在同属不同种之间，多数种都有自已的特征谱带与其它种相区别，同种不同菌株间没有明显差异；蛋白质谱带较多，在每个属中均有１～２条特征谱带，属间的谱带差异明显。

人成熟卵泡液蛋白质谱图的初步研究

目的:建立人成熟卵泡液的蛋白质谱图,筛选鉴定卵泡发育/卵母细胞成熟的相关蛋白质。方法:选取48例因男性因素行ICSI-ET治疗的女性为研究对象,收集取卵时获得的人成熟卵泡液,采用双向凝胶电泳-质谱技术分离鉴定人成熟卵泡液蛋白质谱图。结果:获得了较高分辨率的人成熟卵泡液蛋白质谱图,共检测到180多个蛋白质点,筛选鉴定了5个蛋白质点,分别是载脂蛋白E、PRO2044、Hypothetical protein、免疫球蛋白G重链以及转铁蛋白,PRO2044和Hypothetical protein根据蛋白数据库的鉴定分析结果可能是血清白蛋白的修饰产物。转铁蛋白和载脂蛋白E在以往卵泡发育机制的研究罕有报道。结论:蛋白质组学是全面分析人卵泡发育过程中卵泡液蛋白质表达变化的有效手段,筛选鉴定得到的卵母细胞成熟相关蛋白为进一步研究卵母细胞成熟机制提供了理论依据。

兔骨折愈合早期蛋白质谱分析

目的:观察骨折愈合早期骨痂中的蛋白质含量、种类与正常骨质的差别,寻找影响骨折愈合过程的差异蛋白分子。方法:随机选取家兔10只,建立右上肢桡骨骨折模型(实验组)以对侧正常骨组织对照(对照组)。4周后取出骨痂并提取骨组织蛋白,测定蛋白质浓度后,行SDS-双向凝胶电泳、Image Master 2DE软件分析,对差异蛋白质点采用基质辅助激光解吸—电离飞行时间质谱测定肽质指纹图谱并查询NCBInr数据库。结果:获得分辨率高且具有可重复性的双向电泳银染图谱。图像分析检测骨痂组织平均蛋白点数实验组为732±21,对照组为698±31。找出差异蛋白点15个,初步鉴定出差异表达蛋白质点8个,包括巨噬细胞移动抑制因子、泛素/核糖体蛋白S27A融合蛋白、原肌球蛋白β-异构体2、磷脂结合蛋白1、谷胱甘肽S-转移酶、磷酸丙酮异构酶1、果糖二磷酸醛缩酶A、肽基脯氨酰顺反异构酶A。其中5个差异点早期表达均上调,2个差异点表达下调,1个差异点仅在实验组中表达。结论:骨痂组织与正常骨组织的蛋白质表达存在明显差异,这些差异蛋白可能在骨折愈合的发生发展中发挥作用。

不同能量激光照射后中华大蟾蜍早期胚胎发育及其蛋白质谱变化的研究(英文)

应用YAG倍频激光器选择不同能量密度激光微束对中华大蟾蜍4细胞期胚胎进行照射,观察胚胎的生长、发育状况,统计出膜率、畸胎率和死亡率。实验结果表明:低能量激光照射明显地提高了胚胎的孵化速度,且使畸变率降低;而高能量激光对胚胎发育有明显抑制作用,而且使畸变率增高。不同能量密度激光微束照射中华大蟾蜍早囊胚,0.5h后制备样品进行双向电泳,凝胶成像后用PDQuest软件进行分析。结果显示激光照射对蛋白质点数及其分布有影响,影响程度与照射激光密度有关。结论:激光照射可以影响胚胎发育和蛋白质的合成。

基于尿液蛋白质谱技术评估系膜增生性肾炎患者小管间质纤维化程度的临床研究

目的:观察经肾活检证实病理表现为弥漫系膜增生性肾炎的原发性肾病综合征患者,分析比较肾小管间质纤维化不同病变程度下尿液蛋白质谱的差异表达,筛选用于评价原发性肾病综合征肾小管间质损伤的早期生物标志物,为早期诊断和治疗肾间质纤维化提供新的思路。方法:将12例经肾活检病理诊断为弥漫系膜增生性肾炎的原发性肾病综合征患者,根据肾小管间质损伤程度依次划分为正常组、轻型组、中型组、重型组各3例,采用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)的方法检测各组尿液蛋白质谱的表达,继而采用免疫印迹法验证差异表达蛋白,分析相关差异性蛋白及蛋白表达的情况。结果:与正常组相比,小管间质纤维化轻、中、重组患者尿液的α1-抗胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、微管蛋白酪氨酸连接酶表达明显升高(P<0.01),且在不同组别之间差异也存在统计学意义(P<0.01);补体C4a蛋白亚型、血清淀粉样蛋白A4、免疫球蛋白ε重链可变区等的尿液蛋白质表达在轻、中、重3组中差异有统计学意义(P<0.01)。结论:病理诊断为弥漫系膜增生性肾炎的原发性肾病综合征患者,尿液蛋白质谱在不同肾小管间质损伤程度间差异存在统计学意义,这些差异蛋白可以作为判断肾间质纤维化程度的新的生物学标记物,以期将来以尿液蛋白质组学分析替代有创的肾活检穿刺术,广泛地应用于临床实践。

光动力学疗法过程中小鼠皮肤蛋白质谱变化的研究

目的寻找皮肤对血卟啉单甲醚光动力学疗法（hematoporphyrin monomethyl ether mediated photodynamic therapy,HMME-PDT）应答的蛋白质分子标志物。方法雌性BALB/c小鼠尾静脉注射血卟啉单甲醚（hematoporphyrin monomethyl ether,HMME）10mg/kg后即刻以532nm的激光对其皮肤进行照射,功率密度50mW/cm^2,光斑直径1cm,照光时间20min;同时设立单纯照光组、单纯光敏剂组以及空白对照组。术后24h从照射局部皮肤取材,以裂解液提取皮肤蛋白,然后用蛋白质芯片（WCX2）和SELDI蛋白质芯片阅读机检测小鼠皮肤差异蛋白质的表达。结果HMME-PDT能够明显改变照射局部皮肤蛋白质谱的表达,在质荷比为相对分子质量（Mr）4949-18828之间,共有7个蛋白质峰的强度发生了显著改变,其中2个蛋白质表达上调,另外5个蛋白质表达下调。单独照光组在Mr14927处有1个蛋白质的表达下调,与PDT处理组在该点的变化一致,且与正常对照相比有显著差异。结论PDT照射能显著改变小鼠皮肤蛋白质谱的表达,单纯照光也能引起个别蛋白的表达发生改变,并且与PDT在该点的表达趋势一致,提示这些差异蛋白质的表达与皮肤对PDT所产生的氧化应激或照光引起的光热效应的应答机制有关。

RCCS模拟微重力对铜绿假单胞菌毒力编码基因和蛋白质谱的影响

目的探讨三维细胞培养系统（RCCS）模拟微重力环境对铜绿假单胞菌（PA）毒力编码基因表达及菌体蛋白质谱的影响。方法应用RCCS建立PA ATCC 27853模拟微重力培养体系,实验组旋转瓶轴心与地面平行模拟微重力环境,对照组即重力组旋转瓶轴心与地面垂直;采用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测c DNA样本中毒力编码基因外毒素（tox A）、弹性蛋白酶（las B）、鼠李脂糖（rhl A）、绿脓菌素（phza2）mRNA的相对含量;利用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术及CM10芯片检测PA菌体蛋白质谱。结果 RCCS模拟微重力处理14 d后,Real-time PCR检测实验组c DNA样本中tox A、las B、rhl A、phza2毒力编码基因相对含量均低于对照组（P〈0.05）;表面增强激光解吸电离飞行时间质谱检测发现有82种小分子菌体蛋白质[荷比在（2-20）×103Da范围内],两组42种菌体蛋白相对含量表达差异有统计学意义,实验组20种蛋白质相对含量表达高于对照组,22种蛋白质相对含量表达低于对照组（P〈0.05）。结论 RCCS模拟微重力培养条件下PA毒力编码基因表达和菌体蛋白质谱发生显著变化。

小鼠成熟卵丘-卵母细胞复合体蛋白质谱图的建立

目的通过聚丙烯酰胺二维凝胶电泳技术,全面展示小鼠成熟卵丘卵母细胞复合体(COC)的蛋白质表达谱。方法采用13cmpH3～10的非线性胶条进行双向凝胶电泳,分离成熟雌鼠COC总蛋白,并作质谱鉴定。结果获得了较高分辨率的小鼠成熟COC蛋白质表达谱图,并对胶上的3个蛋白点进行了质谱鉴定。结论蛋白质组学是全面分析COC蛋白表达的有效手段。成熟COC蛋白质表达谱的建立为研究卵泡发育机理提供了依据。

产ESBLs肺炎克雷伯菌蛋白质谱决策树模型的建立

目的建立肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum beta-lacta-mases,ESBLs)菌株蛋白质指纹图谱决策树诊断模型,为产ESBLs KPN感染的快速鉴定奠定基础。方法采用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱技术及金芯片分析产ESBLs KPN差异表达蛋白,结合决策树分析建立KPN产ESBLs菌株蛋白质谱模型,并作诊断效能评价。结果用3个蛋白质(质荷比为5993.25,8363.60,9215.26)建立的KPN产ESBLs菌株决策树诊断模型,对产ESBLs KPN诊断的灵敏度、特异度分别为96.43%、93.33%。结论该研究建立蛋白质谱决策树模型对产ESBLs KPN的检测时间短、诊断准确率高,值得进一步研究和探讨。

不明原因流产与正常早孕妇女血清蛋白质谱

目的研究不明原因流产患者血清蛋白质谱特征,探讨不明原因自发性流产的可能病因。方法采用表面增强激光解离飞行时间质谱技术(SELDI-TOFMS),运用WCX2蛋白质芯片检测39例不明原因流产患者和30例正常早孕血清蛋白质谱,获得的蛋白质谱用Biomarker Wizard软件分析,初步筛选蛋白质峰,结合生物信息学的支持向量机方法建立并测试不明原因流产患者血清蛋白质指纹图谱模型。结果在芯片上捕获到251种蛋白质,经蛋白质质谱仪分析发现不明原因流产患者与正常对照组有29种差异蛋白,从中筛出差异显著的5种蛋白质组成原发不孕患者血清的蛋白质谱最佳优化模型,其中质荷比(m／z)分别为8 350,6 954,8 634,8 826的4种蛋白质表达下降,质荷比为(m／z)6 628的蛋白质表达上调。模型经三倍交叉验证实验测定,其敏感性为83．9％,特异性为83.7％。阳性预测值为81．1％。结论不明原因流产患者与正常早孕者血清蛋白质谱存在明显差异,深入研究可能为不明原因流产的病因学提供基础,同时有助于自发性流产血清生物标记物的筛查和发现。

卵巢癌的蛋白质谱及超声造影诊断研究

目的探讨蛋白质谱与超声造影对于卵巢癌临床诊断的准确性。方法对宝安区妇幼保健院103例被怀疑为卵巢癌的患者进行蛋白质谱与超声造影检测，分别做出诊断结果，与最终病理、术后或化疗确诊结果进行对比分析。结果蛋白质谱对恶性肿瘤的诊断准确率为87．88％，超声造影对恶性肿瘤的诊断准确率为93．94％；蛋白质谱与确诊结果间呈正相关性（r=0．9936，P〈0．01）；超声造影与确诊结果间呈正相关性（r=0．9981，P〈0．01），差异具有统计学意义。结论蛋白质谱及超声造影可有效提高卵巢癌的临名床诊断准确率，对于卵巢癌的早期诊断具有十分重要的参考价值。．

蛋白质谱技术在急性冠脉综合征早期诊断中的应用价值

目的探讨蛋白质谱技术在急性冠脉综合征（ACS）早期诊断中的应用价值。方法选择ACS患者血清标本68例,同时选择对照组50例,采用飞行时间质谱仪对收集血清中蛋白质荷比为0~5000的数据进行对比分析,筛选出差异蛋白。结果经过质谱扫描分析后,共发现12个差异蛋白,其中4个差异蛋白高表达,质荷比分别为1565.69、2414.21、4183.15、9634.06。ACS组中进一步分组比较发现,质荷比为2414.21的蛋白在急性ST段提高性心肌梗死（STEMI组）高于NSTEMI组（P〈0.01）,而质荷比为4183.15的蛋白在不稳定心绞痛（UA组）和急性ST段提高性心肌梗死（STEMI组）与非急性ST段提高性心肌梗死（NSTEMI组）之间的差异均有统计学意义（P〈0.01）;四种差异蛋白预测ACS发生的ROC曲线下面积分别为0.745、0.797、0.814、0.719,对应的灵敏度和特异度分别为（0.76,0.68）、（0.80,0.73）、（0.84,0.80）以及（0.71,0.54）。结论四种差异蛋白对预测早期ACS的诊断价值较大,可进一步深入研究。

血清蛋白质谱在单纯性室间隔缺损诊断中的应用

目的通过构建血清诊断模型,探讨血清蛋白质谱在诊断单纯性室间隔缺损中的意义。方法采用病例对照研究设计,用CM10蛋白质芯片检测56例单纯性室间隔缺损患儿、85例儿科常见病患儿及23例其他先天性心脏病患儿血清,筛选血清差异蛋白,并构建诊断模型。结果完整模型ROC曲线下面积、预测准确率、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为0.988、95.00%、100.00%、92.42%、87.18%和100.00%,简化模型ROC曲线下面积、预测准确率、灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值分别为0.948、94.00%、88.24%、96.97%、93.75%和94.12%。简化模型与完整模型之间预测准确率、灵敏度及特异度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论利用血清蛋白质谱建立的诊断模型能够较好地区分病例与对照,对诊断室间隔缺损具有一定的发展和应用前景。

玉米种子萌发期几种酶活性及其蛋白质谱带的变化

以玉米为材料,研究了玉米在萌发过程中,胚中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、酯酶(EST)、淀粉酶(AMY)、蛋白质谱带的变化,以及SOD和POD活性的变化.结果表明:SOD同工酶相对活性随萌发时间延长而降低,72 h以后下降趋势更明显;POD和AMY同工酶的相对活性都呈现升高的趋势;EST同工酶的相对活性变化不大.蛋白质谱带颜色的深浅也有变化,除少数谱带着色随萌发时间延长逐渐加深外,大多数谱带的着色都变浅.

一种二次投影识别蛋白质谱数据的新方法

作为一种蛋白组学工具,质谱法的使用对疾病的早期诊断和治疗带来了革命性的变化。然而,由于面临"维数灾难"问题,大部分机器学习方法不能直接用于识别蛋白质谱数据,同时这些方法也面临着识别性能较低的问题。借鉴主分量分析(PCA)与局部线性判别嵌入(LLDE)在人脸识别方面取得的较好效果,提出了用于蛋白质谱数据识别的二次投影法(DTP)及改进的二次投影法(MDTP)。该方法先对数据去噪并用T检验降维,再提取均方误最小的第一次投影特征向量与可分性最好的第二次投影特征向量,最后将预处理过的数据先后在二次特征向量空间投影并分类。在卵巢癌蛋白质谱数据上的实验表明,二次投影及其改进方法识别性能较好,优于现有各方法。

基于纳升级二维液相色谱技术的过敏性哮喘大鼠血清差异蛋白质谱表达

目的研究过敏性哮喘大鼠血清差异蛋白质谱表达。方法将24只Wistar大鼠随机分为空白对照组、捆绑组和哮喘模型组,应用纳升级二维液查色谱技术研究哮喘大鼠血清差异蛋白质谱表达。结果哮喘模型组血清多肽谱峰与捆绑组比较,新出现特异性峰1个,为13号峰(94.731 min);特异性消失的峰3个,为1号峰(77.489 min)、2号峰(78.418 min)和5号峰(80.533 min),可能与哮喘发病有关;捆绑组血清多肽谱峰与空白对照组比较,新出现特异性峰4个,为2号峰(78.418 min)、4号峰(79.398 min)、5号峰(80.533 min)和7号峰(81.824 min),特异性峰消失1个,可能与捆绑应激刺激有关。结论过敏性哮喘的发病机制与蛋白异常表达密切相关,但动物实验需要注意区分应激因素导致的相关蛋白表达干扰。

蛋白质谱分析在肝胆胰肿瘤诊治中的应用

表面增强激光解析离子化-飞行时间-质谱(SELDI-TOF-MS)是近年用来研究蛋白质组学的一项新的技术,具有高通量、高效率、高灵敏度等特点,可以快速分析各种生物样品中蛋白质组的组成,在基础医学研究及临床疾病诊断方面应用日益增多。现就其原理、特点和在肝胆胰肿瘤中的应用及发展前景作一综述。