云南蟾蜍1新属2新种

云南大窑大百草岭和永德大雪山分布的具有溪流繁殖习性的小型蟾蜍是2种新的未描述蟾蜍新种,它们都与哀牢蟾蜍(Parabufo Bufo ailaonica)有相似的形态和习性:(1)体型较小;(2)无鼓膜;(3)蝌蚪口部无吸盘;(4)产卵于山区溪流。因此,我们为其建立了1个新属(Parabufo gen.nov.),并将这2个新种分别命名为Parabufo baicaolingensis sp.nov.和Parabufo xueshanensis sp.nov.,将哀牢蟾蜍(Parabufo Bufo ailaonica)移入该新属。3个种之间有明显的形态差异:(1)体型大小:雄性的百草岭蟾蜍45.0~50.2 mm,雪山蟾蜍53.1~62.0 mm,哀牢蟾蜍41.1 mm,雌性的百草岭蟾蜍66.0~70.5 mm,雪山蟾蜍(缺少样本),哀牢蟾蜍52.0~55.0 mm;(2)皮肤:百草岭蟾蜍皮肤较为粗糙并密布大小不一的疣粒和痣粒(尤其雌蟾),雪山蟾蜍背部皮肤较光滑且疣粒很少,哀牢蟾蜍背部皮肤较为光滑但疣粒明显且大小较一致。

蟾蜍油炮制工艺及质量评价方法研究

目的:优化蟾蜍油干燥工艺,并建立以高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱及氨基酸含量测定为主的质量评价方法。方法:以氨基酸和浸出物为指标,进行蟾蜍油热风干燥、自然阴干、冷冻干燥及真空干燥工艺的优选,分别考察了热风干燥的加热温度、加热时间、物料厚度,冷冻干燥的预冻时间、冷冻干燥时间,真空干燥的温度及时间对蟾蜍油的影响。采用HPLC建立15批蟾蜍油的指纹图谱,确定共有峰并进行相似度评价;同时,采用柱前衍生化法测定氨基酸含量。结果:蟾蜍油最佳工艺为不叠加样本,50℃热风干燥11 h。HPLC指纹图谱中共确定7个共有峰,相似度均大于0.99;异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸质量分数分别为0.40%~0.57%、0.57%~0.78%、0.54%~0.75%、0.26%~0.86%。结论:所确定的工艺及质量评价方法简便、重复性好,可为蟾蜍油的加工炮制及质量评价提供参考。

牛磺酸对蟾蜍甾烯在心脏组织分布情况的影响

目的:考察牛磺酸(Tau)对蟾蜍甾烯在心脏组织分布情况的影响。方法:16只雄性豚鼠随机分为空白组、模型组(8 mg/kg蟾酥)、牛磺酸低剂量组(8 mg/kg蟾酥+150 mg/kg Tau)和牛磺酸高剂量组(8 mg/kg蟾酥+300 mg/kg Tau),给予相应处理后,采用HPLC-ESI-TOF-MS分析不同给药组蟾蜍甾烯类成分在豚鼠心脏中的摄取情况,进一步采用分子对接技术模拟牛磺酸与目前已知心脏疾病相关靶点蛋白SCN5A结合位点。结果:在模型组心脏中检测到Gtl、Arg、Hel、Tel、Btl、Bul、Rbg、Cbg和Cbt共9种蟾蜍甾烯的原型,在肝、肾中检测到部分可能发生羟基化的代谢产物,牛磺酸各剂量组心脏中也测到相关蟾蜍甾烯的原型化合物,但与模型组相比,牛磺酸各剂量组心脏中蟾蜍甾烯的摄入均显著减少;分子对接模拟牛磺酸与SCN5A结合能为-3.7 kcal/mol,牛磺酸可以与受体氨基酸Glu1225、Arg1306、Arg1309之间氢键相连。结论:牛磺酸可延缓蟾蜍甾烯类成分在靶器官心脏中的摄取,从而降低蟾酥的心脏毒性,推测牛磺酸与SCN5A的结合位点可能是Glu1225、Arg1306、Arg1309,这为中药配伍在心脏疾病治疗中的应用提供了实际的实验依据。

基于网络药理学和细胞实验探讨蟾蜍灵治疗胃癌的作用机制

本研究基于网络药理学、分子对接和细胞实验探究蟾蜍灵治疗胃癌的作用机制。利用PubChem和PharmMapper数据库检索蟾蜍灵的药物靶点;GeneCards数据库收集胃癌的相关靶点,运用Venny软件和STRING数据库构建药物与疾病共同靶点的PPI网络图,通过DAVID数据库进行GO富集和KEGG通路分析。利用Cytoscape3.9.0软件进行可视化并筛选核心靶点,通过GIEPA数据库、Kaplan-Meier方法、AutoDock和PyMOL软件分析核心靶点分别与胃癌和蟾蜍灵之间的关系。最后通过细胞实验对网络药理学预测的靶点和信号通路进行实验验证。网络药理学筛选到蟾蜍灵的药物靶点285个,胃癌相关的疾病靶点909个,蟾蜍灵与胃癌的交集靶点91个,结合PPI网络度值排名、胃癌患者中表达水平以及患者生存预后相关性筛选2个核心靶点为HSP90AA1和SRC。KEGG富集分析蟾蜍灵治疗胃癌可能与PI3K-Akt、FoxO、Ras和MAPK信号通路有关。生存分析结果显示,HSP90AA1和SRC mRNA在胃癌组织中表达显著上调,且其高表达的患者总生存期显著低于低表达组。分子对接结果显示,蟾蜍灵与核心靶点具有较好的结合力。细胞实验结果表明,与对照组相比,蟾蜍灵处理胃癌细胞MGC-803后,细胞的增殖、迁移能力均下降,而细胞凋亡数增加。MGC-803细胞中HSP90AA1、SRC、Bcl-2、p-AKT和FoxO1蛋白表达水平显著下调,Bax蛋白的表达显著上调。综上所述,蟾蜍灵可能通过调控HSP90AA1和SRC核心蛋白及Akt/FoxO1信号通路发挥治疗胃癌的作用。

蟾蜍出血性疾病病原鉴定及其对抗生素的药物敏感分析

蟾蜍科动物在世界范围内有13属、约300种,我国主要存在12种;蟾蜍属动物有200多种,世界各地均有分布。我国分布的种类主要为大蟾蜍华西亚种、大蟾蜍中华亚种及黑眶蟾蜍。本研究拟以中华大蟾蜍(俗称“蟾蜍”)为研究对象,其在我国的分布比较广,在我国东北、华东、华中和西南均有栖息地,国外则在朝鲜、俄罗斯等国家有分布。蟾蜍养殖同其他水产养殖动物类似,诱发病害的原因大多数为高密度养殖模式,这同样也是阻碍蟾蜍养殖业发展的主要原因。

蟾蜍灵抗肿瘤作用的研究进展

蟾蜍灵是从蟾蜍中提取的一种具有抗肿瘤功能的活性成分,可有效抑制多种肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞自噬和凋亡,并能够与其它药物联合使用降低肿瘤抗药性,产生协同治疗效果。利用纳米颗粒作为载体,能够提高蟾蜍灵的生物相容性和抗肿瘤能力。本文作者就蟾蜍灵治疗多种不同类型肿瘤的研究现状及其作用机制进行综述,以期为蟾蜍灵抗肿瘤深入研究与临床应用提供理论依据和参考。

生物组织中10种蟾蜍毒素的UPLC-MS/MS检测

本文以肝脏为样本,建立了同时检测生物组织中10种蟾蜍毒素(沙蟾毒精、日蟾蜍它灵、酯蟾毒精、去乙酰华蟾蜍精、酯蟾毒配基、华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾酥毒基、蟾毒灵、华蟾毒精醇)的超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/Exactive MS)的检测方法。取肝脏0.2 g,首先加入0.8 mL乙腈沉淀蛋白,然后用Hybird固相柱进行净化,选用ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm×1.8μm)色谱柱,流动相A相为0.1%甲酸水,B相为乙腈,采用梯度洗脱分离;质谱采用电喷雾离子源,正离子模式进行分析。10种蟾蜍毒素的检出限均在10 ng/mL以内,最低可以达到0.1 ng/mL。10种蟾蜍毒素添加在20~400 ng/mL范围内的线性良好(R^(2)>0.996)。10种蟾蜍毒素的提取回收率在62.9%~93.2%之间,基质效应在90.9%~109.0%之间,日内精密度在9.2%之内,日间精密度在14.6%之内,在基质中的反复冻融稳定性、常温稳定性和提取后稳定性良好,浓度变化均在15%以内。灌胃解剖后在雄鼠体内的分布为:肝>肺>心>肾>生殖器>肌肉,在雌鼠体内的分布为:肺>生殖器>肝>心>肾>肌肉。本研究建立了生物组织中蟾蜍毒素的检测方法,并初步得出毒素在动物体内的分布规律,为蟾蜍毒素的检验和相关检材的选择提供了参考依据。

蟾蜍毒素研究进展

蟾蜍毒素种类繁多,兼具强烈的毒性和较高的药用价值,应用潜力巨大。蟾蜍毒素中毒性组分依其化学组成不同,可分为蟾蜍二烯内酯类和吲哚生物碱类两大类,它们分别主要表现为心脏毒性和致幻性。此外,蟾蜍毒素是中药蟾酥的主要成分,对于多种肿瘤细胞都有明显的抑制作用。蟾蜍毒素在不同的药物基质中,提取和检测方式也有所差异。本文综述了目前常见的提取方法和检测方法,希冀为标准方法开发、法庭科学毒物检验以及相关标准的制定提供参考。

生物体液中10种蟾蜍毒素的UPLC-MS/MS检测

本文建立了人的血液、尿液中10种蟾蜍毒素(沙蟾毒精、日蟾蜍它灵、酯蟾毒精、去乙酰华蟾蜍精、酯蟾毒配基、华蟾毒它灵、蟾毒它灵、华蟾酥毒基、蟾毒灵、华蟾毒精醇)的超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q/ExactiveMS)的检测方法。取血液或尿液0.2mL,先加入0.8mL乙腈沉淀蛋白,后用Hybird固相柱进行净化。选用ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm×1.8µm)色谱柱,流动相A相为0.1%甲酸水,B相为乙腈,采用梯度洗脱分离。质谱采用电喷雾离子源,正离子模式进行分析。该方法在血液、尿液中对于10种蟾蜍毒素的检出限均可在10 ng/mL以内,最低可以达到0.1 ng/mL。10种蟾蜍毒素的血、尿基质添加在20~400 ng/mL范围内线性良好(R^(2)>0.995)。血、尿中10种蟾蜍毒素的提取回收率在65.0%~97.7%之间,基质效应在90.8%~109.0%之间,日内精密度在9.6%之内,日间精密度在14.7%之内,在基质中的反复冻融稳定性、常温稳定性和提取后稳定性良好,浓度的RSD变化均在15%以内。用本文建立的方法对动物实验中收集到的血液进行分析,结果表明10种蟾蜍毒素均可检出。该方法灵敏度高,适用性广,可以用于蟾蜍毒素中毒类案件的检验鉴定。

蟾蜍制剂治疗猪病验方

蟾酥是中华大蟾蜍(又称懒蛤蟆、虫苏)的头部耳后腺和皮肤腺分泌的白色乳浆,是我国传统的名贵药材,别名蟾眉脂、蟾蜍眉酥、蛤蟆浆等,蟾酥主要含有华蟾蜍毒素、华蟾蜍素华蟾蜍次素及去乙酰基华蟾蜍素、儿茶酚胺类化合物,以及含有辛二酸蟾蜍碱等物质。蟾蜍味甘心性温,有强心、利尿解毒消肿、通窍止痛、升高血压和白血球、兴奋呼吸、止咳、抗菌、抗病毒.抗炎等药理作用。笔者在临床中采用蟾蜍丸埋入卡耳、开风、尾根等穴配合蟾蜍注射液治疗猪病,收到理想疗效。

非法猎捕出售野生蟾蜍 两被告获刑

山东省莱西市人民法院不久前巡回审理一起刑事附带民事公益诉讼案,两被告人因非法猎捕、出售815只野生蟾蜍获刑。【基本案情】被告人于某、王某在2019年至2022年期间,先后多次进行非法猎捕野生蛙和蝌蚪的活动。于某将非法猎捕的野生蛙和蝌蚪养大后送至展某英和于某义家中,并将其宰杀、出售供他人食用。

蟾蜍TNFRSF11b、TNFRSF9基因克隆及生物信息学分析

目的:克隆中华蟾蜍肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9基因的全长序列,并分析其序列特征。方法:根据转录组测序所得的TNFRSF11b、TNFRSF9基因片段设计特异性引物,以中华蟾蜍蟾皮为材料,利用逆转录聚合酶链式反应(PCR)技术获得BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9基因全长互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列,并采用生物信息学手段分析其序列特征,通过实时荧光定量PCR方法检测BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9基因在中华蟾蜍7种组织/器官中的表达情况。结果:克隆获得蟾蜍BbgTNFRSF11b基因的全长cDNA序列为1233bp,编码410个氨基酸,理论相对分子质量为46.97kDa,等电点为8.64,不存在跨膜区及信号肽,为亲水性蛋白,具有多个磷酸化位点。BbgTNFRSF9基因的全长cDNA序列为829bp,编码247个氨基酸,理论相对分子质量为67.874kDa,理论等电点为5.12,存在信号肽,为疏水性蛋白,具有多个磷酸化位点,进化树分析发现BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9基因与其他动物TNFRSF11b、TNFRSF9基因相似度不高,表明该基因虽有特殊结构域但不同物种间差异较大。组织表达分析显示,BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9基因在耳后腺中表达显著高于其他部位。结论:成功获得蟾蜍BbgTNFRSF11b、BbgTNFRSF9基因序列,掌握其序列特征,为后续深入研究该蛋白的功能提供参考。

犬蟾蜍毒素中毒治疗

蟾蜍俗称癞蛤蟆，属脊椎动物两栖纲，无尾目，蟾蜍科，有中华大蟾蜍、黑眶蟾蜍及花背蟾蜍等。蟾蜍头部耳后腺及皮肤上的瘤状突起能分泌毒液，称为蟾蜍毒素，该毒素有很强的毒性。

高效液相色谱法测定不同种蟾皮中蟾蜍噻咛的含量

目的对不同种的蟾皮中蟾蜍噻咛的含量进行研究。方法采用高效液相色谱法测定不同种蟾皮中蟾蜍噻咛的含量,色谱柱WondsilTMC18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-水(6∶94),检测波长226 nm,流速1.0 mL/min,柱温35℃。结果回归方程为Y=6 945.3X+82.327,r2=0.999 4,平均回收率为98.57%,蟾皮中蟾蜍噻咛的质量分数在0.041 2～0.824μg。结论蟾蜍噻咛在不同种蟾皮药材中的含量有一定差异。

江西官山国家级自然保护区红外相机记录到食蟹獴捕食蟾蜍一例

2022年5月22日,江西官山国家级自然保护区布设的红外相机记录到1只食蟹獴捕食中华蟾蜍一例,该獴进食后出现倒地、侧卧和仰卧等痉挛动作,经过查看红外相机记录的267次行为并进行比对,认为该獴出现痉挛动作与取食中华蟾蜍的相关显著,符合一些哺乳动物的蟾蜍中毒症状。经查阅相关文献,有獴属动物捕食其他种类蟾蜍的记录。经分析认为,食蟹獴能够捕食中华蟾蜍的主要原因在于:一是食蟹獴把蟾蜍按在地面上翻滚摩擦,擦除了一些体表受刺激时分泌的毒性浆液;二是避开了含毒量高的头部和背部的皮肤,仅吃肌肉和内脏。

蟾蜍毒素对S180小鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用的实验研究

目的探讨醇溶性蟾蜍毒素在小鼠体内对S180肿瘤细胞的抑制作用及其毒副作用。方法本研究用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆，采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化，获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物（ethanol extract of toad venom，EET），将其作用于S180荷瘤小鼠模型，计算肿瘤抑制率和生命延长率，同时通过血生化和病理等检测观察其对各脏器的毒副作用。结果5mg／kg和0．5mg／kg的EET对S180荷瘤小鼠实体瘤组织的抑瘤率分别是47．096和34．196（P〈0．05）；对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是46．2％和36．5％（P〈0．05）；同时，0．5mg／kg的EET可明显升高白细胞达（11±4）×100／L（P〈0．05）。但EET在5mg／kg时可引起总胆红素升高达（30±5）μmol／L（P〈0．05）。结论0．5～5mg／kg的EET可以明显抑制荷瘤小鼠体内S180肿瘤细胞的生长，但EET的剂量达到5mg／kg时可以损伤肝脏。

花背蟾蜍♀×中华大蟾蜍♂受精过程的细胞学研究

对以花背蟾蜍作母本、中华大蟾蜍作父本的受精卵从受精后１０分钟到１８０分钟期间进行了细胞学研究。结果表明，杂交受精卵与花背蟾蜍本种受精卵发育过程基本一致。在１８～２０℃室温下人工受精后２０～３０分钟精子入卵；６０～７０分钟雌雄原核形成，８０～１００分钟雌雄原核相互移近相结；１１０～１４０分钟，雌雄原核结合，形成合子核；１５０～１８０分钟首次卵裂中期图形建成。整个受精过程中，实验组比对照组落后２０分钟，此外，阶段内受精卵发育的一致性不如对照组。

基于指纹图谱结合多元统计分析不同干燥方式蟾蜍肉氨基酸类成分

目的:建立不同干燥方式所得蟾蜍肉氨基酸类成分的指纹图谱及4个氨基酸的含量测定方法,比较不同干燥方式对蟾蜍肉品质及其氨基酸含量的影响。方法:采用异硫氰酸苯酯柱前衍生化-高效液相色谱法,建立热风干燥、冷冻干燥、真空干燥和阴干干燥4种方式所得蟾蜍肉干燥样品的指纹图谱,同时测定4个氨基酸含量,并进行相似度评价;运用SPSS 22.0软件进行聚类分析,运用SIMCA 14.1软件进行主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)。结果:不同干燥方式得到的16批蟾蜍肉样品指纹图谱相似度结果均大于0.970,共匹配出10个共有峰,指认出缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸4个氨基酸;PCA提取出2个主成分,累积方差贡献率为87.95%;PLS-DA得出异亮氨酸、缬氨酸、亮氨酸、蛋氨酸的变量重要性投影(VIP)值均大于0.7,提示4个氨基酸可作为评价不同干燥方式所得蟾蜍肉品质的关键指标;阴干干燥、热风干燥、冷冻干燥和真空干燥4种方式所得蟾蜍肉氨基酸总质量分数测定值分别为7.92%、4.62%~5.37%、7.89%~9.02%和4.60%~9.24%。结论:所建立的指纹图谱及含量测定方法稳定可行,结合多元统计分析发现不同干燥方式对蟾蜍肉氨基酸含量产生较大影响,可为蟾蜍肉干燥方式和质量控制研究提供参考。

药用动物中华大蟾蜍蜕皮的观察

报道了中华大蟾蜍自然蜕皮 (蟾蜍衣 )的过程 ,并讨论了蟾蜍衣商品化的经济意义和环保意义。