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剪切力对骨髓间充质干细胞向角膜上皮细胞方向分化的影响
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作者 赵江涛 李冬妍 +4 位作者 李伶 汲婧 黄艳 王丽珍 樊瑜波 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期432-432,共1页
目的干细胞在角膜修复中起到了重要作用,在体外生化因素或共培养等可以诱导干细胞向角膜上皮细胞方向分化,力学因素可以影响干细胞的生物学功能,本文主要研究流体剪切力对兔骨髓间充质干细胞(rabbit bone marrow-derived mesenchymal st... 目的干细胞在角膜修复中起到了重要作用,在体外生化因素或共培养等可以诱导干细胞向角膜上皮细胞方向分化,力学因素可以影响干细胞的生物学功能,本文主要研究流体剪切力对兔骨髓间充质干细胞(rabbit bone marrow-derived mesenchymal stem cells,RBMSCs)向角膜上皮细胞方向分化的影响。方法使用含有表皮生长因子、胰岛素、兔角膜上皮细胞培养上清液的条件培养基诱导RBMSCs向角膜上皮细胞方向分化;利用平行平板流动腔对诱导或者不诱导的RBMSCs加载5、10、15 dyn/cm^(2)流体剪切力;通过倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察剪切力对细胞形态和骨架的影响,通过RTPCR和免疫组化等检测剪切后细胞表达角膜上皮相关基因和蛋白的情况。结果剪切后的细胞表现出更加突出和伸长的肌动蛋白丝,且平行于剪切力方向排列。剪切力可以上调CK3、CK12和PAX6等角膜上皮细胞标志物的基因和蛋白表达,尤其是5 dyn/cm^(2)剪切力的作用更为显著。结论适当的剪切应力可以促进RBMSCs向角膜上皮细胞方向分化,但其机制还有待进一步的深入探究,以期为干细胞应用于角膜上皮损伤修复的治疗提供参考。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 流体剪切力 骨髓间充质干细胞 表皮生长因子 激光共聚焦显微镜 条件培养基 力学因素 免疫组化
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不同拉伸模式对人角膜上皮细胞形态及增殖、迁移的影响
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作者 谢懿 李冬妍 +4 位作者 杜若田 肖辉 汲婧 王丽珍 樊瑜波 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期434-434,共1页
目的生理状态下,角膜受到眼压及其产生的拉伸力作用。当疾病或外力引起角膜所受拉伸力改变,可能影响角膜上皮细胞间连接,破坏上皮结构完整性及其屏障功能。已有研究表明,角膜细胞对不同拉伸模式的响应存在差异,但具体机制尚不清楚。因此... 目的生理状态下,角膜受到眼压及其产生的拉伸力作用。当疾病或外力引起角膜所受拉伸力改变,可能影响角膜上皮细胞间连接,破坏上皮结构完整性及其屏障功能。已有研究表明,角膜细胞对不同拉伸模式的响应存在差异,但具体机制尚不清楚。因此,本工作拟通过研究不同拉伸模式对角膜上皮细胞相关功能的影响及其机制,为构建体外角膜近生理力学加载模型和探究角膜上皮细胞在力学刺激下的响应机制提供依据。方法以0.1 Hz频率、5%幅度对人角膜上皮细胞分别加载单轴拉伸、等轴拉伸12 h。通过光学显微镜观察细胞形态,利用CCK-8、划痕实验检测细胞增殖与迁移能力,采用免疫荧光染色对细胞骨架、力学相关通路蛋白YAP的表达进行检测。结果与等轴拉伸相比,单轴拉伸作用下人角膜上皮细胞面积更大,骨架荧光强度更高,应力纤维数量增多,细胞的增殖与迁移速度显著降低,YAP荧光强度和核质比显著增高。结论人角膜上皮细胞对不同拉伸模式的响应存在差异,与等轴拉伸相比,单轴拉伸增大了细胞面积、促进应力纤维形成,抑制细胞增殖与迁移;YAP可能参与其中的调控。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 角膜细胞 力学刺激 应力纤维 拉伸力 单轴拉伸 核质比 屏障功能
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渗透压对角膜上皮细胞迁移、增殖及相关分子表达的影响
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作者 李冬妍 杜若田 +3 位作者 谢懿 汲婧 王丽珍 樊瑜波 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期429-429,共1页
目的角膜表面的泪液渗透压构成眼表重要力学微环境,其异常改变会对角膜上皮的损伤修复产生重要影响。本工作拟通过研究渗透压对角膜上皮细胞迁移和增殖的影响,及损伤修复过程中起关键作用的黏附分子表达以及力敏感转录因子YAP相关通路... 目的角膜表面的泪液渗透压构成眼表重要力学微环境,其异常改变会对角膜上皮的损伤修复产生重要影响。本工作拟通过研究渗透压对角膜上皮细胞迁移和增殖的影响,及损伤修复过程中起关键作用的黏附分子表达以及力敏感转录因子YAP相关通路的变化,探究渗透压影响角膜上皮损伤修复的机制。方法通过添加不同浓度葡萄糖溶液建立人角膜上皮细胞系的高渗、等渗、低渗培养体系。使用划痕法观察24 h内细胞迁移能力,CCK-8法检测48h内细胞增殖功能,通过免疫荧光染色观察1 h时细胞皮质骨架变化、钙黏蛋白和YAP分子的表达及分布变化。结果与等渗组的角膜上皮细胞相比,高渗组细胞的划痕愈合速度显著减慢,增殖实验OD值显著降低,皮质骨架的荧光强度在细胞膜侧显著增强,分布更集中,钙黏蛋白和YAP分子的表达及分布无明显差异;而低渗组细胞的划痕愈合速度显著加快,增殖实验OD值无明显差异,皮质骨架的荧光强度无明显变化,分布更分散,钙黏蛋白的荧光强度显著升高,呈现点状分布,YAP的荧光强度显著升高,核质比显著增大。结论渗透压会影响角膜上皮细胞的迁移和增殖、改变细胞骨架排列以及钙黏蛋白和YAP分子的表达及分布,可能是其影响角膜上皮损伤修复的机制之一。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 钙黏蛋白 渗透压 核质比 细胞骨架 免疫荧光染色 荧光强度 损伤修复
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模拟角膜缘干细胞微环境诱导人多潜能干细胞分化为角膜上皮细胞的研究
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作者 武小斐 张怡 +1 位作者 柯洪敏 蔡莉 《国际眼科杂志》 2024年第1期30-35,共6页
目的:探讨模拟角膜缘干细胞(LSCs)微环境诱导人多潜能干细胞(hiPSCs)分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:体外建立hiPSCs细胞系,利用transwell体系将hiPSCs与角膜基质细胞共培养模拟角膜缘干细胞微环境,添加小分子骨形态发生蛋白4(BMP4)... 目的:探讨模拟角膜缘干细胞(LSCs)微环境诱导人多潜能干细胞(hiPSCs)分化为角膜上皮细胞的可行性。方法:体外建立hiPSCs细胞系,利用transwell体系将hiPSCs与角膜基质细胞共培养模拟角膜缘干细胞微环境,添加小分子骨形态发生蛋白4(BMP4)和特异性转化生长因子β抑制剂(SB431542),诱导hiPSCs向角膜上皮细胞分化。采用免疫荧光染色、流式细胞方法检测角膜上皮细胞特异标志物CK3和CK12,角膜上皮细胞前体CK15,角膜缘干细胞标志物ABCG5的表达。结果:hiPSCs体外培养增殖活跃,免疫荧光染色显示干细胞特异性标志物OCT4、SOX2、TRA-1-60、NANOG呈阳性。采用transwell体系将hiPSCs与角膜基质细胞共培养,免疫荧光染色结果显示角膜缘干细胞标志物ABCG5及角膜上皮细胞前体标志物CK15阳性,角膜上皮细胞标志物CK3及CK12阴性;在共培养的基础上添加小分子BMP4和SB431542,免疫荧光染色及流式细胞检测结果显示角膜上皮细胞特异性标志物CK3阳性表达,且随分化时间延长表达比例增高。结论:模拟角膜缘干细胞微环境同时添加小分子SB431542及BMP4,可成功诱导体外培养的hiPSCs向角膜上皮细胞分化。 展开更多
关键词 诱导人多潜能干细胞 角膜上皮细胞 诱导分化
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正常人眼角膜上皮细胞的原子力显微镜观察 被引量:10
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作者 蔡小芳 杨筱曦 +1 位作者 蔡继业 邓华 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期881-885,共5页
应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM... 应用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平上分析了人眼角膜上皮细胞的形貌和机械性质,为进一步探讨人眼角膜上皮细胞结构与功能的关系奠定了基础。将体外培养的人眼角膜上皮细胞用2.5%戊二醛固定,空气中干燥后用原子力显微镜进行观察。从AFM形貌图可知,细胞呈长梭形,膜表面布满颗粒状物质,由AFM附带软件IP2.1的线分析及面分析功能,得到细胞膜表面结构的几何参数,包括高低差Rp-v、均方根粗糙度Rq、平均粗糙度Ra、平均高度Meant Ht。利用AFM高空间分辨的力位移曲线测量系统,可得出细胞膜的粘弹力、硬度和杨氏模量。AFM能对人眼角膜上皮细胞表面的超微结构清晰地成像并提供更多更确切的表面信息,从另一层面增加对眼角膜上皮细胞的认识。 展开更多
关键词 原子力显微镜 人眼角膜上皮细胞 形貌 粘弹力 硬度 杨氏模量
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去势雄性小鼠泪膜功能异常及角膜上皮细胞超微结构改变 被引量:7
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作者 黎黎 王双梅 +1 位作者 郑璇 康前雁 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期103-107,共5页
背景体内雄性激素水平的下降对睑板腺与泪腺上皮细胞的分泌功能产生不利影响,导致泪膜质与量的异常,但与泪膜稳定性密切相关的黏蛋白层是否受雄激素水平下降的影响尚不清楚。目的探讨去势手术对雄性小鼠泪膜功能及角膜上皮细胞超微结... 背景体内雄性激素水平的下降对睑板腺与泪腺上皮细胞的分泌功能产生不利影响,导致泪膜质与量的异常,但与泪膜稳定性密切相关的黏蛋白层是否受雄激素水平下降的影响尚不清楚。目的探讨去势手术对雄性小鼠泪膜功能及角膜上皮细胞超微结构的影响。方法采用随机数字表法将56只SPF成年BALB/c雄性小鼠分为正常对照组、伪手术组、和去势术后1、2、4、6、8周组,各手术组小鼠均实施双侧睾丸摘除术,伪手术组小鼠仅切开局部组织而不摘出睾丸。分别于术前和术后1、2、4、6、8周采集各组小鼠外周血样本,采用竞争放射免疫法检测血清睾酮的质量浓度。各组小鼠干眼功能相关检查包括采用酚红棉线法检测泪液分泌功能,检测泪膜破裂时间(BUT)及角膜荧光素染色评分。根据分组于相应时间点颈椎脱臼法处死各组小鼠后收集其角膜组织,透射电子显微镜下观察小鼠角膜上皮组织超微结构的变化。结果正常对照组、伪手术组血清睾酮质量浓度分别为(573.87±6.74)ng/μl和(579.74±8.24)ng/μl,组间差异无统计学意义(t=1.432,P=0.251),但各手术组小鼠血清睾酮质量浓度均为0ng/μl。正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8周组小鼠泪液分泌量分别为(5.26±0.99)、(4.89±0.56)、(4.62±0.83)、(4.28±0.63)、(3.36±0.56)、(2.60±0.27)和(2.08±0.35)mm/5min,其中术后2、4、6、8周组小鼠泪液分泌量均明显低于正常对照组,差异均有统计学意义(均P〈0.05);正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8周组小鼠BUT分别为(68.33±12.86)、(62.47±3.75)、(58.67±10.03)、(47.17±7.64)、(39.51±3.39)、(32.67±3.88)和(31.00±2.36)s,其中术后2、4、6、8周组小鼠泪液BUT较正常对照组均明显缩短,差异均有统计学意义(均P〈0.05);小鼠角膜荧光素染色评分随术后时间的延长逐渐增加。透射电子显微镜下可见手术组小鼠角膜上皮细胞微绒毛数量减少、变短和肿胀,细胞间桥粒连接分离。结论去势小鼠血清雄激素水平骤降,小鼠泪液量分泌减少,泪膜稳定性下降,角膜上皮细胞结构损坏,与人类干眼的临床表现吻合。 展开更多
关键词 雄激素 角膜上皮细胞 干眼 泪膜 超微结构 睾丸切除术 动物模型 BALB/c小鼠
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角膜上皮细胞IL-1β含量与干眼症关系的实验研究 被引量:5
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作者 张晓融 宋秀君 +1 位作者 卞小芸 吕伟 《山东医药》 CAS 北大核心 2004年第26期7-8,共2页
目的 研究高渗透压对人角膜上皮细胞 IL - 1β含量的影响。方法 在液渗透压分别为 4 0 0 m Osm、4 5 0 m Osm、5 0 0 m Osm的细胞培养液中分别加入等量的人角膜上皮细胞 ,采用酶标法 (EL ISA法 )测定 2 4小时后培养液中 IL- 1β含量... 目的 研究高渗透压对人角膜上皮细胞 IL - 1β含量的影响。方法 在液渗透压分别为 4 0 0 m Osm、4 5 0 m Osm、5 0 0 m Osm的细胞培养液中分别加入等量的人角膜上皮细胞 ,采用酶标法 (EL ISA法 )测定 2 4小时后培养液中 IL- 1β含量。结果 不同渗透压组 IL- 1β含量有显著差异 (P<0 .0 5 ) ;培养液渗透压越高 ,IL- 1β含量越高。结论  IL- 展开更多
关键词 IL-1Β 角膜上皮细胞 含量 干眼症 高渗透压 实验研究 酶标法 细胞培养液
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雄激素调节小鼠泪膜功能与角膜上皮细胞Mucins表达的体内研究 被引量:5
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作者 黎黎 郑璇 +2 位作者 王双梅 高鸽 康前雁 《国际眼科杂志》 CAS 2016年第7期1228-1231,共4页
目的:探讨去势小鼠干眼模型中雄激素浓度对小鼠泪膜稳定性以及角膜上皮细胞Mucins表达的影响。方法:通过双侧睾丸切除去势手术,改变体内雄激素水平,观察泪膜破裂时间的变化,同时在不同时间点采用RT-PCR法与Western-Blot法分别检测小鼠... 目的:探讨去势小鼠干眼模型中雄激素浓度对小鼠泪膜稳定性以及角膜上皮细胞Mucins表达的影响。方法:通过双侧睾丸切除去势手术,改变体内雄激素水平,观察泪膜破裂时间的变化,同时在不同时间点采用RT-PCR法与Western-Blot法分别检测小鼠角膜上皮细胞中Muc1和Muc4的mRNA和蛋白水平的表达变化。结果:去势1wk后小鼠睾酮质量浓度下降至0ng/μL;正常对照组、伪手术组及去势术后1、2、4、6、8wk组小鼠BUT分别为68.33±12.86、62.47±3.75、58.67±10.03、47.17±7.64、39.51±3.39、32.67±3.88、31.00±2.36s,其中术后2、4、6、8wk组小鼠泪液BUT值较正常对照与伪手术组均明显缩短,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Muc1与Muc4的mRNA与蛋白水平表达,随雄激素浓度下降,表达下调(P<0.05),Muc1在去势后第2wk表达最低,而Muc4在去势后第1wk表达降至最低。结论:在体内,雄激素可调控小鼠角膜上皮Mucins表达,并缩短泪膜破裂时间,参与泪膜稳定性的维持。 展开更多
关键词 雄激素 泪膜破裂时间 黏蛋白 角膜上皮细胞
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聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响 被引量:7
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作者 郑永征 刘光辉 潘铭东 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2020年第10期1684-1687,共4页
目的:观察聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响。方法:观察不同浓度聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响,取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为:对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组。观察不同消毒时间聚维酮碘对... 目的:观察聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响。方法:观察不同浓度聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响,取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为:对照组、低浓度组、中浓度组和高浓度组。观察不同消毒时间聚维酮碘对角膜上皮细胞氧化损伤的影响,取体外培养的生长良好的角膜上皮细胞按随机数字法分为:对照组、短时间组、中等时间组和长时间组。采用ELISA检测各组丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量,采用倒置显微镜、CCK-8法检测各组细胞活性,采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。结果:聚维酮碘浓度越高,角膜上皮细胞的MDA含量越高,SOD含量越低,细胞活性越低,凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈浓度依赖性,组间有差异(均P<0.01)。聚维酮碘消毒时间越长,角膜上皮细胞的MDA含量越高,SOD含量越低,细胞活性越低,凋亡率越高。聚维酮碘对角膜上皮细胞的氧化损伤呈时间依赖性,组间有差异(均P<0.01)。结论:聚维酮碘对角膜上皮细胞有氧化损伤作用,损伤呈浓度和时间依赖性。 展开更多
关键词 聚维酮碘 角膜上皮细胞 氧化损伤 手术 消毒
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渗透压对角膜上皮细胞的影响及牛磺酸对高渗环境细胞的保护作用 被引量:5
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作者 潘士印 肖湘华 +5 位作者 赵娜 安娜 刘先宁 朱秀萍 银勇 王养正 《西北药学杂志》 CAS 2019年第4期509-513,共5页
目的观察渗透压对体外培养的兔角膜上皮细胞的影响及牛磺酸对高渗环境细胞的保护作用,为人工泪液的处方制定提供理论依据。方法采用分离培养的兔角膜上皮细胞,分为低渗组(143,229和257 mOsm·L^-1)、等渗对照组(286 mOsm·L^-1... 目的观察渗透压对体外培养的兔角膜上皮细胞的影响及牛磺酸对高渗环境细胞的保护作用,为人工泪液的处方制定提供理论依据。方法采用分离培养的兔角膜上皮细胞,分为低渗组(143,229和257 mOsm·L^-1)、等渗对照组(286 mOsm·L^-1)和高渗组(315,343和429 mOsm·L^-1),用不同渗透压的培养液作用3 h后,换回正常培养液培养3 d,记录作用3 h及恢复培养3 d时的细胞形态,并用MTT法检测作用3 h、恢复培养1 d和恢复培养3 d后的细胞活性。在正常培养液286 mOsm·L^-1中加入牛磺酸培养细胞24 h后,换为429 mOsm·L^-1的高渗培养液培养3 h后,换回含牛磺酸的等渗培养液恢复培养1 d,倒置显微镜下记录作用3 h及恢复培养1 d时的细胞形态,并用MTT法检测细胞活性。结果高渗环境会导致细胞活性降低,甚至死亡;低渗环境会改变细胞形态及活性。257 mOsm·L^-1渗透压组与等渗对照组相比,在作用3 h及恢复培养1和3 d后细胞形态及细胞活性差异无统计学意义。含有不同浓度牛磺酸培养基的各组细胞也有轻度肿胀,高渗培养基作用3 h后以及恢复正常培养基培养1 d后,细胞活性差异具有显著统计学意义(P<0.05)。结论泪液高渗透压会造成眼表损伤。应用渗透压为257 mOsm·L^-1的人工泪液,在对正常细胞无影响的条件下,可降低干眼患者泪液的高渗透压,有助于干眼病的治疗。牛磺酸作为细胞保护剂,可降低高渗透压对细胞的损害,在干眼病治疗方面,具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 牛磺酸 渗透压 角膜上皮细胞 干眼
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缺氧诱导因子-1α在早期糖尿病大鼠角膜上皮细胞中的表达 被引量:5
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作者 宋虎平 惠延年 +2 位作者 王丽丽 韩晓霞 王海燕 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第2期352-356,共5页
目的:观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在早期糖尿病大鼠角膜上皮细胞中的表达以探讨其在糖尿病性角膜上皮细胞病变发生及发展中的作用。方法:用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,在制模成功后1,2,4,6,8,10及12wk取眼球组织,以年龄匹配... 目的:观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在早期糖尿病大鼠角膜上皮细胞中的表达以探讨其在糖尿病性角膜上皮细胞病变发生及发展中的作用。方法:用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,在制模成功后1,2,4,6,8,10及12wk取眼球组织,以年龄匹配正常大鼠作为对照组,分别以免疫组织化学染色及Westernblotting方法检测角膜上皮细胞中HIF-1α表达的位置及表达量。结果:糖尿病模型诱导成功后1wk,角膜上皮细胞中即有HIF-1α表达,主要位于基底细胞的细胞核内,4wk时阳性细胞数大于1wk(21.80±1.93vs15.30±2.05),6~10wk达到高峰(6,8和10wk分别为49.00±2.82,90.80±4.23,51.40±5.21),12wk下降(14.40±2.06)。Westernblotting分析显示HIF-1α蛋白表达模式与免疫组织化学相似,1wk时即有表达,6~10wk达到高峰,12wk下降。结论:HIF-1α在早期糖尿病角膜上皮细胞中的瞬时高表达而不是持续表达,可能是早期糖尿病角膜上皮细胞病变的原因。 展开更多
关键词 糖尿病并发症 角膜上皮细胞病变 缺氧诱导因子-1Α
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冰片对兔角膜上皮细胞膜促渗透作用的实验研究 被引量:48
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作者 樊岚岚 唐由之 +2 位作者 卢景 陆丽珠 王丽霞 《中国中医眼科杂志》 1998年第2期67-69,共3页
目的:探讨冰片对兔角膜上皮细胞促渗透作用的机理。方法:将培养的兔角膜上皮细胞分为实验组和两个对照组。应用电子自旋共振方法对实验组和对照组的细胞膜磷脂分子排列的有序性参数进行测量。结果:两个对照组和实验组的有序参数分别... 目的:探讨冰片对兔角膜上皮细胞促渗透作用的机理。方法:将培养的兔角膜上皮细胞分为实验组和两个对照组。应用电子自旋共振方法对实验组和对照组的细胞膜磷脂分子排列的有序性参数进行测量。结果:两个对照组和实验组的有序参数分别为0.711±0.024,0.717±0.018,0.743±0.039。实验组与其他两组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:冰片的促渗透作用与其改善角膜上皮细胞的细胞膜磷脂分子排列有关。 展开更多
关键词 冰片 角膜上皮细胞 细胞 中药
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低浓度地塞米松对兔角膜上皮细胞的影响(英文) 被引量:3
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作者 刘兵 李丹 +4 位作者 王恩普 茹海霞 林军军 张梅 孙永华 《国际眼科杂志》 CAS 2006年第1期1-4,共4页
目的: 探讨地塞米松(dexam ethasone,D EX)对培养的兔角膜上皮细胞和角膜上皮伤口愈合的影响。方法: 体外实验原代培养兔角膜上皮细胞, 用四唑盐(M TT)实验和流式细胞仪检测不同浓度 D EX 对兔角膜上皮细胞的作用, 同时通过 H E 、免疫... 目的: 探讨地塞米松(dexam ethasone,D EX)对培养的兔角膜上皮细胞和角膜上皮伤口愈合的影响。方法: 体外实验原代培养兔角膜上皮细胞, 用四唑盐(M TT)实验和流式细胞仪检测不同浓度 D EX 对兔角膜上皮细胞的作用, 同时通过 H E 、免疫组织化学染色和扫描电镜及临床观察兔角膜上皮细胞刮除后 0.1g/L D EX 用药组和对照组伤口愈合的情况。结果: M TT 检测显示小于 0.1g/L 浓度的 D EX 对兔角膜上皮细胞的生长无明显影响。流式细胞仪检测到 0.1g/L 浓度的 D EX 对兔角膜细胞生长周期无抑制作用。动物实验: 0.1g/L 地塞米松作用后上皮愈合时间显著性缩短, 两组中新生成的上皮细胞均有较强的 PC N A 蛋白的表达。0.1g/L 地塞米松组与对照组相比, 电子显微镜检查角膜基质排列更规则, 炎症反应较轻。结论: 低于 0.1g/L 浓度的地塞米松对培养的兔角膜上皮细胞的生长无抑制作用。0.1g/L 浓度的地塞米松眼液能有效的促进角膜上皮生长并降低炎症反应, 将有利于准分子激光角膜屈光手术后早期角膜伤口愈合。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 地塞米松 免疫组化 电镜
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各类滴眼剂对角膜上皮细胞的毒性—组织培养法研究 被引量:12
14
作者 张泺 邱良秀 沈远平 《眼科新进展》 CAS 1999年第3期158-161,共4页
目的观察各类滴眼剂对人角膜上皮细胞的毒性,以便提供临床上对药物的评估。方法应用组织培养的方法,观察30种滴眼剂的毒性。结果氯霉素(pH6.7)、庆大霉素(pH5.1)、磺胺类、喹诺酮类、咪唑类药物、地卡因、氧氰化汞等... 目的观察各类滴眼剂对人角膜上皮细胞的毒性,以便提供临床上对药物的评估。方法应用组织培养的方法,观察30种滴眼剂的毒性。结果氯霉素(pH6.7)、庆大霉素(pH5.1)、磺胺类、喹诺酮类、咪唑类药物、地卡因、氧氰化汞等毒性较大。皮质类固醇的晚期毒性明显。结论我们认为滴眼剂的毒性与主药、防腐剂和溶剂的毒性有关,特别是pH值。为此我们要注意配方的科学性,妥善的存放和合理的用药。 展开更多
关键词 滴眼剂 毒性 角膜上皮细胞
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HIF-1α的RNA干涉可引起缺氧条件下人角膜上皮细胞VEGF表达下调和PEDF表达上调 被引量:4
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作者 张晓玲 陈剑 +2 位作者 姚敏 刘小勇 周清 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期880-884,共5页
目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-... 目的探讨shRNA干扰HIF-1α表达对缺氧条件下人角膜上皮细胞(h CEC)血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响。方法针对HIF-1αmRNA序列靶点设计及合成3个小发夹RNA(shRNA),分别在体外转染自发永生化人角膜上皮细胞(S-ihCEC),转染后的S-ihCEC在1 mmol/L Co Cl2中缺氧诱导培养6 h,实时定量PCR检测HIF-1α、VEGF、PEDF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,ELISA检测PEDF的水平。结果与缺氧组比较,转染HIF-1αshRNA的S-ihCEC中HIF-1αmRNA表达下调、HIF-1α蛋白表达下调,VEGF mRNA表达下调、VEGF蛋白表达下调,PEDF mRNA表达上调(1. 22±0. 18)倍,PEDF水平升高。结论针对HIF-1α的shRNA能有效干扰S-ihCEC中HIF-1α的表达,并下调VEGF表达、上调PEDF的表达。 展开更多
关键词 缺氧 小发夹RNA 自发永生化人角膜上皮细胞 缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子 色素上皮生长因子
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表皮生长因子对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用 被引量:4
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作者 杨瑞彪 王德文 +5 位作者 高亚兵 张建 张振声 刘玉福 彭瑞云 邵立功 《眼科研究》 CSCD 1998年第2期87-89,共3页
目的探讨不同浓度的表皮生长因子(EGF)对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用。方法利用培养的兔晶状体和角膜上皮细胞,通过MTT方法,检测细胞增殖密度。培养晶状体上皮细胞的EGF浓度(1~250ng/ml)分为8组;而... 目的探讨不同浓度的表皮生长因子(EGF)对晶状体和角膜上皮细胞增生的刺激作用。方法利用培养的兔晶状体和角膜上皮细胞,通过MTT方法,检测细胞增殖密度。培养晶状体上皮细胞的EGF浓度(1~250ng/ml)分为8组;而培养角膜上皮细胞的EGF浓度(4~1000ng/ml)分为10组。结果EGF浓度在32ng/ml时,促晶状体上皮细胞的增生作用最强,与无血清组比较差异非常显著(P<0.01)。促角膜上皮细胞增生的最佳浓度为16ng/ml,与无血清组比较差异显著(P<0.05)。结论上述结果为今后在细胞和分子水平上研究白内障和角膜伤口愈合的发生规律及其机制提供实验资料。 展开更多
关键词 晶状体上皮细胞 角膜上皮细胞 表皮生长因子 细胞增生 白内障 角膜伤口愈合
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层粘连蛋白对体外角膜上皮细胞凋亡的保护 被引量:13
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作者 吴静 徐锦堂 《眼科研究》 CAS CSCD 2000年第2期112-113,共2页
目的 观察层粘连蛋白 (LN)对离体角膜上皮细胞存亡的影响 ,以寻找预防角膜上皮细胞凋亡的途径。方法 应用流式细胞仪 (FACStarplus)检测凋亡细胞的亚 2倍体DNA的方法 ,对基础培养的、与LN共育的以及阻断LN受体后的兔角膜上皮细胞的凋... 目的 观察层粘连蛋白 (LN)对离体角膜上皮细胞存亡的影响 ,以寻找预防角膜上皮细胞凋亡的途径。方法 应用流式细胞仪 (FACStarplus)检测凋亡细胞的亚 2倍体DNA的方法 ,对基础培养的、与LN共育的以及阻断LN受体后的兔角膜上皮细胞的凋亡情况进行了对比观察及分析。结果 基础培养的第 6代角膜上皮细胞出现明显的细胞凋亡 ;与LN共育的角膜上皮细胞凋亡不明显 ;阻断LN受体后 ,角膜上皮细胞出现显著的凋亡现象。结论 LN对离体培养的角膜上皮细胞的凋亡有保护作用。 展开更多
关键词 层粘连蛋白 角膜上皮细胞 细胞凋亡
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改良兔角膜上皮细胞原代培养及纯化的方法 被引量:3
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作者 石妍 杨帆 +1 位作者 葛红岩 刘平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第7期612-615,共4页
目的改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法,提高角膜上皮细胞原代培养的成功率。方法采用全角膜组织培养法培养兔角膜上皮细胞,利用机械刮除和差速贴壁法进行纯化并传代,通过倒置显微镜对细胞进行形态学观察并应用免疫组织化学的方... 目的改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法,提高角膜上皮细胞原代培养的成功率。方法采用全角膜组织培养法培养兔角膜上皮细胞,利用机械刮除和差速贴壁法进行纯化并传代,通过倒置显微镜对细胞进行形态学观察并应用免疫组织化学的方法对细胞进行鉴定。结果兔全角膜24h贴壁,48h后即可见有细胞自角膜缘爬出,5d后细胞大量爬出可见成纤维细胞和角膜上皮细胞共存,界限明显;角膜上皮细胞复层生长。在界限融合前刮除成纤维细胞,角膜上皮细胞继续旺盛生长,10d后达到融合。兔角膜上皮细胞传至第4代后细胞体积明显变大,传至第5代,细胞衰老、凋亡。兔角膜上皮细胞免疫组织化学显示PCK单克隆抗体阳性。结论改良原代培养及纯化兔角膜上皮细胞的方法简单、经济、有效,并可获得具有良好生物学特性的角膜上皮细胞,为角膜及角膜疾病的研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 角膜上皮细胞 角膜 原代细胞培养 纯化
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体外诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞的可行性 被引量:4
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作者 杨海军 易敬林 刘德伍 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2008年第38期7491-7494,共4页
背景:目前同种异体角膜移植是角膜病的主要治疗手段,但该法存在免疫排斥反应、供体来源短缺、角膜内皮细胞慢性丧失功能等难以克服的缺点。目的:探讨人骨髓间充质干细胞在体外向角膜上皮细胞横向分化的可能性。设计、时间及地点:细... 背景:目前同种异体角膜移植是角膜病的主要治疗手段,但该法存在免疫排斥反应、供体来源短缺、角膜内皮细胞慢性丧失功能等难以克服的缺点。目的:探讨人骨髓间充质干细胞在体外向角膜上皮细胞横向分化的可能性。设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2004-06/2005-06在江西省人民医院中心实验室江西省干细胞重点实验室完成。材料:成人角膜缘上皮组织由江西省眼库提供,南志愿者捐献。经肝素抗凝的成人骨髓7份,来自汀西省人民医院骨髓穿刺室同期收治的需要行骨髓细胞学榆查的患者,均排除血液系统恶性疾病。方法:无菌条件下将人角膜缘上皮组织剪碎,胰蛋白酶消化,过滤离心,加入含20%FBS的DMEM/F12培养液,制作条件培养基,置于-20℃备刷。采用淋巴细胞分离液密度梯度法从人骨髓液中分离出单个核细胞层,贴蹙法培养扩增,取传至第5代的骨髓间充质干细胞,按2×10^4个/孔密度接种,待细胞完全贴壁后吸除培养液,设立5组:第1组为空白对照,仅加入含10%FBS的DMEM/F12培养基继续培养;其余4组在空白对照的基础上分别加入5,10,15μg/L表皮生长因子、10μg/L表皮生长因子+50%条件培养基,每3d换液1次,培养30d。主要观察指标:通过细胞角蛋白抗体AE1、AE5免疫组织化学染色结果检测细胞横向诱导转化率。结果:AE1免疫组化染色后与空白对照组比较,5,10,15μg/L表皮生长因子组、10μg/L表皮生长因子+50%条件培养基组的细胞显色率均明显升高(F=415.39,P〈0.01);各诱导组间两两比较差异均有显著性意义(F=373.96,q=38.65,18.16,20.49,P〈0,01):10μg/L表皮生长因子组与10μg/L表皮生长因子+50%条件培养基组细胞显色率基本相似(t=-0.12,P〉0.05)。AE5免疫组化染色后,各组细胞的胞浆都能被DAB均匀淡染。结论:5~15μg/L表皮生长因子能诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞,且此浓度范围内的表皮生长因子诱导作用逐渐增强。用成人角膜缘干细胞培养液制成的50%条件培养基对诱导人骨髓间充质干细胞横向分化为角膜上皮细胞无明显促进作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 角膜上皮细胞 表皮生长因子 诱导分化
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Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及意义 被引量:2
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作者 陈梨萍 李科 +3 位作者 郑振优 宋绪华 李雷 赵楠楠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第11期1731-1734,共4页
目的:探讨Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及其相关分子机制。方法:人角膜上皮细胞经复苏、培养,连续传代2次后共培养12个T25细胞培养瓶,4个培养瓶一组,共3组,分别加入25 ng/m L的重组人Wnt1蛋白和50 ng/m L的重组人W... 目的:探讨Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及其相关分子机制。方法:人角膜上皮细胞经复苏、培养,连续传代2次后共培养12个T25细胞培养瓶,4个培养瓶一组,共3组,分别加入25 ng/m L的重组人Wnt1蛋白和50 ng/m L的重组人Wnt1蛋白,一组不加入重组人Wnt1蛋白作为对照,于不同时间点(6、24、48和72 h)各取一个T25培养瓶的细胞,计算各组角膜上皮细胞总数并采用Western blot方法检测角膜上皮细胞中Cyclin D1蛋白的表达情况。结果:对照组Cyclin D1蛋白的表达在0~48 h内随着时间的延长呈现逐步降低的趋势,在48 h达到最低状态,在72 h有所提高。加入Wnt1后6 h,25 ng/m L组未检测到Cyclin D1蛋白表达,50 ng/m L组Cyclin D1蛋白表达有所提高。在24,48和72 h时间点,25 ng/m L组和50 ng/m L组Cyclin D1蛋白表达均提高,48 h达到最高峰,72 h有所回落。添加Wnt1后与对照组比较,25 ng/m L组及50 ng/m L组角膜上皮细胞生长速度均加快,但在6、24及48 h时间点差异无显著性,在72 h差异有显著性。结论:Wnt1蛋白的刺激可在一定时间范围内增强人角膜上皮细胞Cy-clin D1的表达,且与Wnt1蛋白量呈正相关。Cyclin D1的表达强弱,在角膜上皮损伤修复及其细胞增殖分化过程中可能起重要作用。 展开更多
关键词 CYCLIN D1 角膜上皮细胞 角膜 Wntl
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