Chir99021调控Wnt/β-catenin信号通路抑制大鼠牙髓干细胞成骨诱导分化的机制

目的探讨Chir99021对大鼠牙髓干细胞(DPSCs)成骨诱导分化的影响及机制。方法原代分离大鼠DPSCs,利用荧光免疫法进行验证。设置不同浓度的Chir99021,通过CCK-8检测细胞增殖情况挑选最适浓度。利用茜素红染色验证细胞成骨诱导分化。最后通过Real-time PCR、Western blotting检测成骨诱导分化相关基因与蛋白无翅型MMTV整合位点家族成员1(Wnt1)、无翅型MMTV整合位点家族成员3A(Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)、轴抑制蛋白2抗体(Axin2)、骨钙素(OCN)、牙本质基质蛋白1(DMP1)的mRNA和蛋白表达情况。结果牙本质涎磷蛋白(DSPP)和干细胞标记物波形蛋白(vimentin)阳性表达,说明大鼠DPSCs分离成功。大鼠DPSCs成骨诱导后钙沉积物显著上升,加入糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的小分子抑制剂Chir99021后钙沉积物明显减少。大鼠DPSCs成骨诱导分化后Wnt1、Wnt3a、β-catenin、Axin2、OCN和DMP1表达明显上升,而加入Chir99021后Wnt1、Wnt3a、β-catenin、Axin2、OCN和DMP1蛋白表达均显著下降。结论Chir99021对诱导7 d后的大鼠DPSCs成骨诱导分化有一定的抑制作用。

花鲈前脂肪细胞系的建立及油酸诱导分化

花鲈(Lateolabrax maculatus)前脂肪细胞系为探索鱼类脂肪细胞分化和脂肪沉积的调控作用及相关分子机制提供了一种新的体外模型。研究将花鲈腹腔脂肪组织用胶原酶消化后原代培养,再以胰酶消化后传代,总共经过150次传代培养后,得到花鲈前脂肪细胞系。进而,染色体核型分析表明该细胞系长期培养仍能保持正常表型,进一步使用线粒体cox1和cytb基因鉴定该细胞系来源于花鲈。用pEGFP-C1质粒转染细胞系,观察到明显的绿色荧光,表明可用于研究外源基因的表达。用不同浓度的油酸培养细胞系,3d后细胞有明显脂滴聚集,7d后脂滴达到最大;油红O染色表明,400μmol/L油酸诱导7d后细胞即可正常分化成熟。综上所述,实验建立了花鲈前脂肪细胞系,该细胞系形态典型、可正常分化,为后续研究鱼类脂肪细胞分化及脂肪沉积提供了良好的实验材料。

非人灵长类多能干细胞体外培养和诱导分化的研究进展

干细胞在疾病发生、细胞治疗、药物筛选和临床应用等方面具有巨大价值。自日本科学家Shinya Yamanaka发现诱导多能干细胞以来,相关的研究立即成为研究热点并持续至今。小鼠干细胞的研究为其它动物的相关研究开辟了道路,但在药物筛选和疾病治疗等方面有很大局限性。非人灵长类与人类具有更高的基因同源性,在生理、病理、生殖、药理、神经等多方面与人类高度相似,是研究人类疾病和开发人用药物的理想动物模型。非人灵长类研究也是新药在进入临床实验前必须的一个环节。非人灵长类干细胞的研究在疾病的机理研究和药物开发中越发重要,同时避免了伦理问题。本文从体外培养系统的优化和诱导分化的方法两个方面对非人灵长类多能干细胞的相关研究进行了综述,以期为非人灵长类干细胞进一步深入研究提供参考。

北京黑猪脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化研究

旨在建立北京黑猪脂肪前体细胞的分离培养及成脂诱导分化培养体系,为研究猪脂肪沉积的分子机制提供试验材料,为生物培育肉的制备提供技术指导。本研究采集1头7日龄健康的北京黑猪公猪的颈部皮下脂肪组织,使用机械法联合I型胶原酶消化法分离脂肪前体细胞。对获得的脂肪前体细胞进行形态观察、生长曲线绘制、免疫荧光鉴定、成脂诱导分化、油红O染色、BODIPY染色、甘油三酯含量测定及使用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测成脂分化相关基因的表达。结果表明,分离的北京黑猪脂肪前体细胞贴壁后呈长梭形,细胞生长曲线呈S型。免疫荧光结果表明,PREF1表达为阳性,表明分离的细胞的确为脂肪前体细胞。在相同的诱导试剂组合条件下,使用10%FBS比2%FBS成脂诱导分化效果更好。在相同血清浓度的情况下,鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用的细胞分化效果较好。分化8 d的细胞中出现大量的脂滴,脂滴经油红O染色呈红色,经BODIPY染色呈绿色。且分化8 d的细胞中甘油三酯的含量显著升高(P<0.001)。qPCR结果显示,PPARγ、CEBPα、ACCα、LPL、SCD和FABP4在分化2 d时表达量均显著升高(P<0.05),4~6 d达到高峰,8 d时表达量降低。Western blot结果表明,PPARγ、CEBPα、FABP4、APN在细胞分化过程中表达逐渐上调。PREF1在细胞分化过程中表达逐渐下调。在三维培养情况下,使用10%FBS,鸡尾酒法与油酸钠、罗格列酮共同联用也能使脂肪前体细胞分化为成熟的脂肪细胞,分化8 d的细胞中脂滴经BODIPY和油红O染色后分别呈绿色和红色,且PPARγ、CEBPα、ACCα、LPL、SCD和FABP4在分化8 d的细胞中的表达量显著上调(P<0.001)。综上所述,本研究成功建立了北京黑猪脂肪前体细胞的分离与培养体系,并筛选出适合二维和三维培养的成脂诱导分化方法,为进一步研究猪脂肪沉积的分子机制和改善肉品质奠定基础,也为细胞培育肉的制备提供技术指导。

人尿源性干细胞的分离培养及诱导分化为平滑肌细胞

背景:传统尿路修复重建手段受限于供体短缺、并发症多以及生理功能恢复不理想等问题,组织工程策略为此领域提供了新方向。鉴于尿路主要由肌性组织构成,其中关键在于发掘适合的种子细胞并高效诱导分化为平滑肌细胞,但关于不同平滑肌细胞诱导方案效能的对比研究仍较为匮乏。目的:旨在分离、培养及鉴定人尿源性干细胞,并比较两种不同成平滑肌诱导方案的效果。方法:采用多次离心法从11份健康成人志愿者尿液中分离提取尿源性干细胞,使用流式细胞仪进行表面标志物的鉴定,通过成骨、成脂诱导分化来验证尿源性干细胞的多向分化潜能。尿源性干细胞分别在含转化生长因子β1以及转化生长因子β1联合血小板衍生生长因子的成平滑肌细胞诱导分化培养基中诱导分化14 d,采用免疫荧光染色和Western blot检测平滑肌特异性蛋白(α-SMA、SM22)的表达差异。结果与结论:①成功从8份健康人尿液中分离出尿源性干细胞,细胞呈“米粒”样,具有很好的分裂增殖能力;②尿源性干细胞高表达间充质干细胞表面标志物CD73、CD90和CD44,极低表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45,不表达CD19、CD105和HLA-DR;③经成骨和成脂诱导分化后,可见明显的钙结节和脂滴形成,茜素红染色和油红O染色结果呈阳性;④成平滑肌诱导培养14 d,免疫荧光染色显示转化生长因子β1/血小板衍生生长因子组尿源性干细胞成平滑肌诱导分化率显著高于转化生长因子β1组(P<0.005);⑤成平滑肌诱导培养14 d,Western blot检测显示转化生长因子β1/血小板衍生生长因子组α-SMA和SM22蛋白表达量显著高于转化生长因子β1组(P<0.005)。结果表明:尿源性干细胞可以通过多次离心法无创分离获取;相较于单纯转化生长因子β1,转化生长因子β1/血小板衍生生长因子联合应用能显著提高尿源性干细胞诱导分化为平滑肌细胞的效率。

牦牛前体脂肪细胞的分离培养及成脂诱导分化

本文旨在建立牦牛前体脂肪细胞的体外分离及原代培养体系,为牦牛脂肪细胞的相关研究提供试验材料和原代细胞培养模型。以高原型牦牛皮下脂肪组织为材料,通过酶消化法和组织块培养法分离前体脂肪细胞,再使用分化培养基诱导其分化为成熟的脂肪细胞,并采用CCK-8检测细胞增殖期间的生长曲线,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测DLK-1和PPAR-γ的表达量。结果表明:酶消化法获得的牦牛前体脂肪细胞在24 h后开始贴壁,贴壁细胞形态多样;组织块培养法在第4天才呈现出游离的前体脂肪细胞,且其生长速度较缓慢。前体脂肪细胞的生长曲线整体呈现“S”形。前体脂肪细胞诱导分化后,细胞内部积累大量脂滴,并逐渐分化为成熟的脂肪细胞;相较于原代脂肪细胞,传代后的脂肪细胞生长速度较快。qRT-PCR检测发现,脂肪细胞分化后,DLK-1的表达量显著降低,PPAR-γ的表达量显著升高。综上,无论采用酶消化法还是组织块培养法,均能成功获得牦牛前体脂肪细胞,并可通过诱导使其分化为成熟的脂肪细胞。

牙龈成纤维细胞诱导分化神经细胞的可行性

目的 探讨牙龈成纤维细胞诱导分化神经细胞的可行性。方法 选取阻生齿拔除患者10例,取其周围正常牙龈组织作为研究样本,分析牙龈成纤维细胞诱导分化神经细胞的可行性。结果 人牙龈成纤维细胞有突起,胞体呈纺锤形或梭形,存在明显细胞轮廓,核呈卵圆形,细胞体及细胞核均较大,有明显核仁,着色浅;人牙龈成纤维细胞经染色显示为vimentin表达阳性,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、人微管相关蛋白(MAP)-2表达阴性;神经样细胞呈三角形或星形,存在3个及以上突起,细胞核变圆,突起细长,出现轴突样和树突样结构,且互相连接,呈现网状结构;经染色显示神经样细胞为vimentin表达、GFAP表达、MAP-2表达均为阳性;诱导组乙酰胆碱及多巴胺含量均明显高于对照组(均P<0.05),诱导组乙酰胆碱及多巴胺浓度均明显高于对照组(均P<0.05)。结论 对牙龈成纤维细胞进行诱导处理可获得神经样细胞,诱导后细胞不仅具有神经细胞结构、形态,同样具有神经细胞的分泌功能,分泌大量的乙酰胆碱及多巴胺等神经递质。

人肝癌细胞株的诱导分化研究进展

1 诱导分化的近况 肿瘤化疗的着眼点是杀伤瘤细胞,但难以避免选择性差、毒副作用等缺点,因而,人们一直在寻找一种新的治疗方法。1971年Friend发现经二甲基亚砜(DMSO)诱导后的小鼠红白血病细胞合成了血红蛋白,继而,有人将小鼠睾丸畸胎瘤细胞注入小鼠胚囊培养后再植入假孕的雌鼠子宫内。

淫羊藿甙对HL-60细胞诱导分化作用的研究

淫羊藿又名仙灵脾，为历代常用的补益中药。为小蘖科多年生草本植物。采用的淫羊藿甙是从朝鲜淫羊藿中提取的单体成份，为寻找新的肿瘤细胞诱导分化剂，研究了淫羊藿甙对人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)的诱导分化作用。结果如下：

人脐带血间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的可行性

目的探讨人脐带血来源间充质干细胞(MSCs)在体外诱导分化为神经元样细胞的可行性及条件。方法采用Fi- coll-Paque(1.077 g/mL)分离液密度梯度分离人脐带血中MSCs,体外扩增纯化后,二甲基亚砜、巯基乙醇及丁羟茴醚等试剂诱导其向神经细胞分化,显微镜下观察,细胞免疫化学法鉴定。结果诱导后脐血MSCs具有典型神经元形态细胞,免疫细胞化学显示神经丝蛋白(NF-M)染色呈强阳性,占(81．86±4．06)％;Nestin染色呈阳性细胞占(39．99±4．60)％;GFAP染色阴性。结论人脐带血MSCs在体外培养及诱导条件下可定向分化为神经元样细胞。

苯乙酸钠对脑胶质瘤细胞诱导分化的实验研究

目的 用苯乙酸钠 (NaPA)在体外处理P 16 8人胶质瘤细胞 ,观察其诱导分化治疗效果 ,并对其作用机制进行初步探讨。方法 对不同浓度NaPA处理后的P 16 8细胞进行四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT)分析及流式细胞仪检测 ,并观察肿瘤细胞的超微结构变化。结果 NaPA能明显抑制人胶质瘤细胞生长 ,呈现时间、浓度依赖性抑制作用 ,经流式细胞仪测定发现 ,NaPA处理的细胞S期为 11.99%或 13.17% ,而未经处理的细胞S期为 2 0 .17%。电镜下显示NaPA处理后的胶质瘤细胞中线粒体、内质网、弹力丝丰富 ,而未经NaPA处理过的肿瘤细胞中有大量游离核糖体。结论 NaPA在体外不仅能够抑制人胶质瘤细胞的生长 。

预见性护理干预对急性早幼粒细胞白血病诱导分化患者的影响观察

探讨在对急性早幼粒细胞白血病诱导分化患者护理时,采用预见性护理干预的效果。方法 将2021年10月-2022年10月期间。进行化疗的80例急性早幼粒细胞白血病患者,将住院号奇数作为对照组和偶数作为观察组各40例,对照组采用传统护理模式,观察组采用预见性护理干预;观察两个组的副作用发生情况及护理前后的心理状况,采用焦虑自评量表(SAS)、抑郁自评量表(SDS),以及生活质量核心问卷。结果 观察组不良反应发生率低于对照组(P<0.01);护理后,观察组SAS、SDS评分均低于对照组(P<0.01,P<0.05);观察组生活质量评分高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论 早期早期 ALL病人可以早期观察到风险因子,采取相应的护理措施,可以有效地缓解其临床表现,进而提高其生存品质。

肝癌诱导分化治疗基础和临床研究

恶性肿瘤的诱导分化治疗是近年来肿瘤生物学和肿瘤治疗学的研究热点和前沿阵地。由于这种治疗方法不损害正常细胞,已成为肿瘤治疗上新的里程碑。笔者曾用形态学、生物学及生物化学等方法在体外细胞培养水平证明了全反式维甲酸(RA)对人肝癌细胞7721确有诱导分化作用,使其诸多表型向正常逆转。最近还将研究深入到分化机制和体内实验。

诱导分化剂联合化疗药治疗可移植性人脑胶质瘤的实验研究

背景与目的:丙戊酸钠(valproate,VPA)不仅是经典的临床抗癫痫药物,近年来还发现其对多种肿瘤细胞都有一定的诱导分化作用,但单独应用或与化疗药联合应用对脑胶质瘤体内疗效如何尚不确定。本研究旨在探讨两者抗胶质瘤的联合效应。方法:将低分化人脑胶质瘤体外细胞系SHG-44移植于裸小鼠制作成可移植性实体瘤模型后,单用VPA以及联合应用盐酸尼莫司汀(nimustine,ACNU)进行治疗,观察移植瘤体积、病理学形态、细胞增殖周期、分化抗原表达等指标的变化。结果:VPA和ACNU联合用药组的疗效明显优于任何一种单独给药组,表现为肿瘤生长抑制,细胞异型性降低,G0/G1期细胞比例增加,胶原纤维酸性蛋白表达上调。结论: VPA联合应用化疗药能够明显增强VPA抑制人脑胶质瘤生长和诱导其向良性分化的作用。

苯丁酸钠联合其他诱导分化剂治疗难治性白血病2例疗效观察

目的探讨苯丁酸钠在血液肿瘤诱导分化治疗中的应用方法。方法以苯丁酸钠为基础,同时加用ATRA、G-CSF、地塞米松。结果2例患者在治疗15 d后均取得了血液学改善,并取得了骨髓缓解。结论苯丁酸钠和其它诱导分化剂联合应用可能是部分血液肿瘤有效的诱导分化治疗方法。

间充质干细胞诱导分化为血管内皮细胞的研究进展

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一种起源于中胚层的成体干细胞,可以向所有中胚层来源的细胞及部分外胚层来源的细胞分化,且MSCs具有来源广泛、易于体外分离培养、免疫原性低,移植后无免疫排斥反应和易于基因转染等特点。血管内皮细胞属于中胚层细胞,MSCs可定向诱导分化为血管内皮细胞,在体外构建成理想的血管移植物,用于心脏组织工程瓣、血管组织工程以及再生医学领域。本文就间充质干细胞的生物学特性及诱导分化为内皮细胞的相关研究以及研究中存在的问题作一综述。

维甲酸诱导分化治疗口腔癌的研究进展

诱导分化治疗是肿瘤化学治疗的一个新领域,它是应用化学药物诱导肿瘤细胞分化并逆转其增殖、浸润、转移等恶性表型,使其成为正常或接近正常的细胞,从而达到治疗肿瘤的目的。常见的诱导分化剂有β—萝卜素、维甲类化合物等,到目前为止,维甲类化合物是被研究和临床应用最广泛的诱导分化剂,维甲类化合物是VitA的衍生物,其合成种类已超过1500种,其中以全反式维甲酸(All—trans retinoic acid,ATRA)和顺式维甲酸(Cis—retinoicacid,cRA)最为常用。维甲酸口服后直接吸收,通过肝脏后与特异性维甲酸结合蛋白结合,被转运到全身靶器官,从而发挥诱导分化的作用。维甲酸具有重要的生理功能,它对某些组织细胞生长发育及功能维持起重要作用,,70年代开始应用于疾病的治疗。近年来。

人参多糖对K562细胞增殖抑制及诱导分化的实验研究

目的 研究人参多糖(GPS)对人白血病细胞株(K562)增殖抑制及诱导分化的影响。方法 采用细胞体外培 养技术,MTT法检测细胞增殖抑制,光镜和电镜观察细胞形态变化;联苯胺(Benzidine)、糖原染色(PAS)、过氧化物酶 (POX)、非特异性脂酶(α- NAE)细胞化学染色分别检测K562细胞向红系、粒系、巨核系分化的特征;免疫细胞化学检测细胞 表面分化抗原及因子表达(CD14、CD15、HIR2、EPO、GM CSF);FAS及FAS L等检测细胞凋亡情况。结果 GPS对K562细胞 的增殖有明显抑制作用并能诱导K562细胞向红系或粒系细胞分化,表现为:①K562细胞的增殖受到抑制;②K562细胞形 态学上可见细胞体积缩小,核直径减小,核仁减少或消失,核染色质浓缩,胞浆丰富,核浆比例降低,可见中晚期粒、红系细 胞;③K562细胞血红蛋白(Hb)、糖原、α- NAE的表达明显增加,而过氧化物酶(POX)的表达与对照无显著性差异;④细胞表 面分化抗原CD15、HIR2、EPO、GM CSF的表达明显增强,CD14的表达与对照无显著性差异;⑤细胞凋亡明显增加。结论 人 参多糖(GPS)能明显抑制K562细胞增殖并能诱导其凋亡并使K562细胞向成熟方向分化。

丹参酮体外诱导分化作用及其机制的研究

本实验在体外细胞培养的基础上，通过细胞形态学、细胞增殖动力学、癌基因表达及裸鼠成瘤性的研究，观察丹参酮对人宫颈癌细胞株（ＭＥ１８０）的体外诱导分化作用（并以全反式维甲酸作对照）。结果表明：经无毒剂量的丹参酮和维甲酸处理后，细胞形态趋向良性分化，生长减慢，集落形成率和３Ｈ－ＴｄＲ掺入率明显降低；细胞ＲＮＡ斑点杂交发现，其ｃ－ｍｙｃ、Ｈａ－ｒａｓ癌基因表达明显降低；细胞在裸鼠身上的成瘤时间延缓；经统计学处理，丹参酮和维甲酸对ＭＥ１８０细胞均具有较好的诱导分化作用，其作用机制可能是对细胞基因表达的抑制。