过氧亚硝基阴离子的细胞代谢及病理损伤作用

过氧亚硝基阴离子（ＯＮＯＯ－）是ＮＯ和Ｏ２－·结合或进一步反应生成的。新近研究发现ＯＮＯＯ－是ＮＯ产生病理损伤作用的主要环节。ＯＮＯＯ－可使酶氧化失活，可导致脂质过氧化，与核酸作用引起ＤＮＡ裂解，作用于线粒体使能量生成障碍。ＯＮＯＯ－是某些疾病情况下导致细胞损伤、能量耗竭和细胞死亡的重要因素。有关ＯＮＯＯ－生成和代谢及其病理损伤作用的研究，已引起广泛关注。

丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子致大鼠成骨细胞凋亡的作用

目的探讨丹皮酚拮抗过氧亚硝基阴离子(ONOO-)对体外培养大鼠成骨细胞凋亡的作用。方法用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,采用淬灭流动反应方法体外制备ONOO-,以1 mm o l/L终浓度加入成骨细胞培养体系,作用30 m in后弃去,继续常规培养12 h,用Hoechst33258染色法及TUNEL法检测成骨细胞的凋亡,并以0.1 mm o l/L丹皮酚消除ONOO-(1 mm o l/L)对大鼠成骨细胞凋亡的影响。结果1 mm o l/L的ONOO-可导致大鼠成骨细胞凋亡;0.1 mm o l/L丹皮酚能拮抗ONOO-(1 mm o l/L)所引起的大鼠成骨细胞凋亡。结论丹皮酚0.1 mm o l/L在体外具有拮抗ONOO-(1 mm o l/L)致大鼠成骨细胞凋亡的作用。

过氧亚硝基阴离子对气道上皮细胞的损伤作用

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)对气道上皮细胞的损伤作用。方法 :在培养的大鼠气道上皮(RTE)细胞观察外源性给予ONOO-对RTE细胞线粒体呼吸、8-羟基脱氧鸟苷 (8-OHdG)水平、乳酸脱氢酶 (LDH)释放及凋亡细胞百分率的影响。结果 :ONOO-(0 2 5 - 1mmol/L)呈剂量依赖方式抑制RTE细胞线粒体呼吸功能、增高LDH释放率。并呈剂量依赖性引起 8-OHdG水平升高。不同浓度 (0 2 5mmol/L、0 5mmol/L及 1mmol/L)ONOO-均以时间依赖方式引起RTE细胞凋亡。结论 :ONOO-可引起培养的RTE细胞发生凋亡和坏死。低浓度的ONOO-损伤RTE细胞以凋亡为主 ;高浓度的ONOO-可能主要引起RTE细胞发生坏死。

丹皮酚对过氧亚硝基阴离子致成骨细胞增殖抑制的影响

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO )对体外成骨细胞增殖的影响及丹皮酚 (Pae)对抗ONOO 的作用。方法 :采用改良的淬灭流动反应方法 ,体外制备ONOO 。以不同终浓度加入成骨细胞培养体系中 ,用MTT法观察在不同时相对成骨细胞增殖的影响 ,并用不同终浓度的Pae消除ONOO (10 0 0 μmol/L)对成骨细胞增殖的影响。结果 :低浓度ONOO (5 0～ 2 0 0 μmol/L)对培养的成骨细胞有促增殖作用 ;高浓度ONOO (10 0 0 μmol/L)则明显抑制成骨细胞增殖。Pae(10 - 4～ 10 - 7mol/L)可消除ONOO (10 0 0 μmol/L)对成骨细胞增殖抑制的作用。结论 :低浓度ONOO 促成骨细胞增殖 ,高浓度ONOO 抑制成骨细胞增殖。Pae可消除高浓度ONOO 对成骨细胞增殖的抑制作用。

过氧亚硝基阴离子对离体兔肺动脉反应性变化的影响

探讨过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO^-)对离体兔肺动脉反应性变化的影响。用离体血管环技术观察ONOO^-孵育后肺动脉对钙离子载体A23187、ADP、ACh、硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)和苯肾上腺素(phenylephrine,PE)的反应性张力变化。结果显示:(1)ONOO^-孵育后肺动脉对A23187、ADP和ACh引起的舒张反应明显降低,ONOO^-抑制内皮依赖受体依赖或受体非依赖性舒张反应有量效关系;(2)ONOO^-孵育可剂量依赖性抑制肺动脉对SNP的舒张反应;(3)0.5 mmol/L ONOO^-孵育后肺动脉对PE的收缩反应明显增强,而1.0和2.0mmol/L ONOO^-导致肺动脉的收缩反应明显降低;(4)溶剂对肺动脉的反应性无明显影响,dec ONOO^-对PE和ADP的反应性影响不大,但可增强A23187、ACh和SNP的舒张反应。结果表明,ONOO^-可改变离体肺动脉的反应性。

过氧亚硝基阴离子致大鼠肺微血管壁通透性增高的研究

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)对肺微血管内皮屏障功能的影响和在急性肺损伤发生中的意义。方法 :向SD大鼠气管内推注不同浓度的ONOO-、分解ONOO-或溶剂 2h后 ,检测肺微血管壁通透性变化和肺组织病理学变化 ,并检测ONOO-引起正常肺匀浆MDA含量变化。结果 :ONOO-推入气管后 ,肺系数、肺湿干重比以及肺含水量和伊文思兰含量明显增高呈现剂量效应关系 ;并可导致肺泡明显萎陷、肺泡壁毛细血管明显扩张充血及局灶性出血 ,内皮细胞肿胀、核深染及脱落。ONOO-造成正常肺匀浆MDA含量增加。结论 :外源性ONOO-气管推注后可导致明显的肺微血管内皮屏障功能障碍 ,提示肺内源性ONOO-生成增多时可能参与介导急性肺损伤的发生。

镁硅玉人工髋关节假体周围骨溶解与诱导型一氧化氮合酶、过氧亚硝基阴离子的关系

[目的]观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在假体周围各区的表达和分布变化,各区iNOS和ONOO-表达与骨溶解程度之间的关系。[方法]临床选取6例镁硅玉人工全髋关节翻修术,手术中按Delee-Charnley髋臼分区法和Gruen股骨分区法,取出松动假体周围各区的假体-骨间界膜,免疫组化法检测iNOS和ONOO-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的表达,同时以术前X线片,区分假体周围非骨溶解区和骨溶解区。分析并比较iNOS和NT在各个分区中的阳性表达,与骨溶解程度的关系。[结果]髋臼侧Ⅲ区的iNOS阳性细胞率高于Ⅰ、Ⅱ区,股骨侧1、2、6、7区染色阳性细胞率高于3、4、5区(P<0·05);髋臼侧Ⅲ区的NT阳性细胞率明显高于Ⅰ、Ⅱ区,股骨侧阳性细胞率由高到低依次为1、7区,2区,6、4、3、5区(P<0·05);骨溶解区界膜组的iNOS和NT阳性细胞率均明显高于非溶骨区界膜组和OA滑膜组(P<0·01)。[结论]假体周围iNOS和ONOO-的表达具有一定规律性,并与骨溶解程度密切相关。iNOS和ONOO-的异常表达可能是磨损颗粒造成界面骨重建受阻和骨溶解的关键环节之一。

过氧亚硝基阴离子诱导离体兔肺动脉舒张反应的特性

实验用离体血管环张力测定技术 ,观察过氧亚硝基阴离子 (ONOO )对离体预收缩的兔肺动脉的舒张反应、肺动脉内皮细胞对舒张反应的影响 ,并初步探讨其病理意义。结果显示 ,ONOO 可剂量依赖性引起离体预收缩兔肺动脉舒张。分解的ONOO 也有舒张作用 ,但其舒张效应明显低于ONOO 的作用。比较观察表明 ,ONOO 的舒张效应显著低于硝普钠 (SNP)和乙酰胆碱 (ACh)。与内皮完整的肺动脉比较 ,ONOO 对去内皮肺动脉的舒张作用明显增强 ,剂量依赖性舒张反应曲线明显左移。肺动脉对ONOO 重复作用时的舒张反应有递减趋势。在本实验条件下 ,ONOO 舒张前后的肺动脉 ,对ACh的舒张反应无明差异。结果表明 ,ONOO 对肺动脉的舒张作用较弱 ,此作用受到内皮细胞的抑制性调节并有快速去敏性。

内毒素诱导肺动脉内皮细胞生成过氧亚硝基阴离子的意义

目的 :探讨牛肺动脉内皮细胞 (BPAEC)产生过氧亚硝基阴离子 (ONOO )的能力及其作用。方法 :用流式细胞免疫荧光技术 ,定量检测内毒素主要成分脂多糖 (LPS)诱导培养的BPAEC中ONOO-生成标志物硝基酪氨酸 (NT)的含量 ,观察ONOO-对BPAEC形态变化的影响。结果 :LPS可剂量依赖性诱导BPAEC产生ONOO-明显增多 ,并为氨基胍部分翻转 ;ONOO-可导致BPAEC明显回缩 ,胞体变小 ,细胞间隙增宽。结论

过氧亚硝基阴离子的研究进展

过氧亚硝基阴离子 (peroxynitriteanion ,ONOO- )是一氧化氮 (NO)和氧自由基 (O- ·2 )结合生成的。它可能是NO产生病理损伤作用的重要环节。它在休克、缺血 再灌注损伤、败血症、胰岛素依赖性糖尿病、动脉硬化及感染炎症等疾病中的作用已愈来愈受到重视。加强对ONOO- 生成途径和NO、O- ·2 与ONOO- 的相互作用的基础研究 ,以及ONOO- 的病理生理作用的研究 ,特别是开展针对抗ONOO- 损伤作用和有效清除体内ONOO- 的新药研制 ,不仅有助于揭示NO的细胞毒作用的分子机制 ,还有助于为治疗某些临床危征提供启示性思路。

抗过氧亚硝基阴离子损伤的三种途径

生物系统中产生的过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)具有强氧化性 ,能够损伤许多生物大分子 ,具有细胞毒性。

多聚(ADP-核糖)聚合酶和半胱天冬蛋白酶-3在过氧亚硝基阴离子致气道上皮细胞损伤中的作用

目的 :探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO-)介导气道上皮细胞损伤的作用机制。方法 :在培养的大鼠气道上皮细胞 (RTE) ,观察应用多聚 (ADP -核糖 )聚合酶 (PARP)抑制剂 3 -氨基苯甲酰胺 (3 -AB)和半胱天冬氨酸蛋白酶 - 3 (caspase - 3 )抑制剂Ac -DEVD -CHO后 ,外源性给予ONOO-对RTE细胞乳酸脱氢酶 (LDH)释放、凋亡百分率的影响 ,用Westernblot分析PARP裂解片段。结果 :3 -AB不能完全抑制ONOO-引起的RTE细胞LDH释放率的增高。 3 -AB对ONOO-引起的RTE细胞凋亡无明显影响。Ac -DEVD -CHO呈剂量依赖性抑制ONOO-诱导的RTE细胞凋亡。ONOO-致RTE细胞凋亡过程中有PARP的裂解。结论 :PARP活化是ONOO-介导RTE细胞损伤的途径之一 ,过度的PARP活化参与了ONOO-所致的RTE细胞坏死 ;caspase -

过氧亚硝基阴离子在肝纤维化形成中的作用

目的:探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在肝纤维化形成过程中所起的作用。方法:采用复合因素 建立肝纤维化(HF)动物模型的同时,用一氧化氮合酶抑制剂L-NNA(20mg·kg-1·d-1)给大鼠灌胃(HF+NNA),于实 验4周末测定血浆脂多糖(LPS)、NO2-／NO3-含量;采用免疫组化的方法检测肝组织硝基酪氨酸(NT)的表达;用VG 染色观察肝组织纤维化程度。结果:在HF+NNA组血浆NO水平明显低于HF组(P<0．01),HF组NT表达最强,纤 维化程度最严重。结论:ONOO-能促进肝纤维化的发展。

糖尿病大鼠骨质疏松与过氧亚硝基阴离子关系的免疫组化研究

目的:探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)与糖尿病(DM)骨质疏松(OP)的关系。方法:用链脲佐菌素 (STZ)诱导糖尿病大鼠模型12周后,进行骨密度(BMD)检查、观察股骨胫骨形态学改变,应用免疫组化法检测骨中 和高糖溶液培养成骨细胞(OB)中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、ONOO-水平的变化。结果:高糖溶液培养OB中的 iNOS和ONOO-升高;DM大鼠骨中的iNOS和ONOO-升高、BMD降低、骨形态学呈退行性改变。结论:骨中iNOS、 ONOO-增加可能是糖尿病OP的发病机制之一。

内源性过氧亚硝基阴离子介导脂多糖导致肺动脉内皮细胞损伤

在培养的牛肺动脉内皮细胞(bovine pulmonary artery endothelial cells,BPAECs)水平上,观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对BPAECs诱生过氧亚硝基阴离子(peroxynitrite,ONOO^-)能力及内皮源性ONOO^-在LPS致BPAECs损伤中的作用。结果显示:(1)LPS剂量依赖性地引起BPAECs诱生ONOO^-生成标志物硝基酪氨酸(nitrotyrosine,NT)的荧光强度(即ONOO^-)明显增多,NT阳性细胞数和百分率也明显增多或增高(P<0.05);iNOS选择性抑制剂氨基胍(AG)明显抑制LPS诱生ONOO^-增多(P<0.05),而NT阳性细胞数和百分率分别减少或降低,但无明显差异。(2)在LPS作用下BPAECs培养上清中的MDA含量和LDH活性明显增多和增高,呈现剂量依赖性效应。加AG后MDA含量明显降低(P<0.001),LDH活性呈降低趋势。(3)LPS可诱导BPAECs凋亡明显增多,用EB荧光染色后可见细胞染色质浓集、核变小等凋亡征象。AG可导致LPS引起的BPAECs凋亡明显减少,但仍明显高于溶剂组。LPS可导致BPAECs线粒体呼吸抑制及膜电位下降。上述结果表明,LPS可引起BPAECs生成ONOO^-增多,ONOO^-参与介导LPS所致BPAECs过氧化损伤与细胞凋亡。

过氧亚硝基阴离子介导内毒素致肺血管损伤及胆囊收缩素的保护作用

本文探讨过氧亚硝基阴离子 (ONOO- )在内毒素致肺血管损伤中的介导作用和八肽胆囊收缩素 (CCK)的保护作用及其机制。结果发现 ,内毒素主要成分脂多糖 (LPS)可诱导大鼠肺组织生成ONOO- ,ONOO- 能导致肺微血管壁通透性明显增加和肺脏严重病理变化 ;ONOO- 可引起离体肺动脉反应性异常改变 ,LPS也可产生类似变化 ;ONOO- 有较弱的舒血管作用并受到内皮细胞的抑制性调节 ;LPS诱导培养的牛肺动脉内皮细胞 (BPAEC)产生增多的ONOO- 参与介导内皮细胞本身的损伤 ;CCK能拮抗LPS对BPAEC的损伤效应 ,此作用由CCK受体介导 ,并与抑制ONOO-生成有关。结果提示 ,清除ONOO- 或减少ONOO- 生成可为防治内毒素引起的急性肺损伤等病理过程提供新对策 ;CCK是一种有应用前景的细胞保护因子。

氧化铝陶瓷和高分子聚乙烯磨损颗粒刺激诱导型一氧化氮合酶和过氧亚硝基阴离子生成的实验研究

目的研究和比较氧化铝陶瓷和高分子聚乙烯磨损颗粒在动物体内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和过氧亚硝基阴离子(ONOO-)表达的变化,探讨其在人工假体无菌性松动病理过程的意义。方法昆明小鼠72只,随机均分为3组,构建小鼠air-pouch动物模型。实验组分别注射氧化铝陶瓷颗粒悬液3 m l(A组)和高分子聚乙烯颗粒悬液3m l(B组),对照组注射磷酸盐缓冲盐水3 m。l分别于注射后第3、7、14 d后各处死8只,取出air-pouch囊壁组织。光镜下观察囊壁组织病理变化,细胞计数反映炎性细胞浸润和增殖程度,免疫组化染色法观察iNOS及ONOO-体内生成标志物硝基酪氨酸(NT)的表达与分布。结果光镜下实验组(A组和B组)可见大量巨噬细胞浸润和增殖,均存在iNOS、NT染色阳性细胞,而对照组未见明显组织细胞反应,仅见极少数染色呈阳性的细胞;与对照组相比,实验组细胞计数和iNOS、NT阳性细胞率差异均有显著性(P<0.01);各时间点细胞计数B组均高于A组(P<0.05);第14天时,B组iNOS、NT阳性细胞率明显高于A组(P<0.01);各时间点iNOS的表达与NT的表达呈正相关(r=0.623,P<0.05)。结论两种磨损颗粒均能诱导iNOS、ONOO-的表达,并且高分子聚乙烯颗粒高于氧化铝陶瓷磨损颗粒;过量的内源性NO和ONOO-可能与假体周围无菌性松动有关。

过氧亚硝基阴离子自由基超微传感器的研制及其在心肌细胞研究中的应用研究

本文研究了离体培养的心肌细胞在缺血损伤再灌注过程中释放的过氧亚硝基阴离子(PON)的浓度变化,并研究了 Melatonin 对此损伤的修复作用。通过电化学聚合无机大分子膜—四氨基酞菁锰[Mn(TAPc)]和聚乙烯吡啶(PVP)制作的电流型 PON 超微传感器,对 PON 具有较高的选择性和灵敏度,此传感器抗干扰、抗污染能力确保了其能用于活体检测。我们将该传感器应用于直接检测心肌细胞缺血过程和再灌注过程分别释放的 PON,此方法可获得有关心肌细胞损伤机理的重要信息,对药物修复有重要价值。

离体灌流肾技术检测过氧亚硝基阴离子在大鼠缺血再灌注肾血管反应性损伤中的作用

目的探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在大鼠缺血再灌注肾血管反应性损伤中的作用。方法应用离体灌流肾(isolated perfused k idney,IPK)技术观察肾缺血再灌注(ischem ia reperfusion,I-R)后肾血管对去甲肾上腺素(nor-ep inephrine,NE)和乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)反应性的改变;观察应用氨基胍(am inoguan id ine,AG)阻断内源性NO生成对肾I-R大鼠IPK肾血管反应性的影响,以及给予外源性ONOO-后大鼠IPK肾血管反应性的改变。结果I-R后IPK肾血管对NE的缩血管反应性和对Ach的舒血管反应性都有明显降低,I-R5h较I-R1h进一步降低(均P<0.01)。ONOO-(40μmol.L-1)与veh ic le相比则显著降低IPK肾血管对NE和Ach的反应性(均P<0.01)。AG+I-R1h组大鼠IPK肾血管对NE和Ach的反应性与NS(生理盐水)+I-R1h组大鼠相比无显著差异(均P>0.05),AG+I-R5h组大鼠肾血管对NE和Ach的反应性较NS+I-R5h组明显增强(均P<0.05)。结论ONOO-在肾I-R所致的肾血管反应性损伤中具有重要的作用。