水稻Ⅲ类过氧化物酶基因IPH1调控水稻株高

过氧化物酶(peroxidase, PRX)是过氧化物酶体的标志酶,能够保护细胞免受氧化损伤和解除H2O_(2)的毒害作用,还可以增强自然杀伤细胞的活性,调节细胞的增殖、分化和凋亡等.其中Ⅲ类过氧化物酶(CⅢPRXs)是植物中特有的过氧化物酶家族,通过清除活性氧(ROS)在植物免疫中发挥重要作用,然而CⅢPRXs在水稻株型建立中的功能尚不清楚.通过基因编辑技术CRISPR/Cas9获得CⅢPRXs基因(LOC_Os12g09460)两种不同形式的敲除突变体iph1-1,iph1-2.iph1突变体的株高显著高于野生型,除倒1节节长(即第5节)外,其他节节长均显著或极显著长于野生型.农艺性状考察表明,穗长及结实率等主要性状差异无统计学意义;通过RT-qPCR技术进行的表达模式分析表明,IPH1在根、茎、叶、鞘、穗中均表达,并在茎和鞘中表达相对较高;亚细胞定位分析表明,IPH1蛋白主要定位于过氧化物酶体中.进一步通过生理分析,发现突变体中过氧化物酶活性显著降低,同时H2O_(2)质量分数显著增加.这些结果初步证实了IPH1能够通过过氧化氢途径调控水稻株高的形成,可为丰富株高调控网络提供有利的基因资源,进一步为株型相关生物育种奠定基础.

单原子铂纳米酶的简便构建及其类过氧化物酶活性

采用浸渍吸附法,以多孔碳纳米笼(CNC)作为载体,简便构建了单原子铂/CNC(SA-Pt/CNC)纳米酶。通过透射电子显微镜(TEM)、高分辨透射电子显微镜(HRTEM)和X射线光电子能谱(XPS)深入解析了SA-Pt/CNC的微观结构。酶活性测试表明,SAPt/CNC表现出优异的类过氧化物酶活性,能高效催化过氧化氢氧化各种底物分子。

多种金属有机框架材料的类过氧化物酶活性研究

采用溶剂热法合成了ZIF-8、UIO-66、MIL-101(Fe)、MIL-101(Cr)、Cu-TCPP(Fe)等5种金属有机框架(MOF)材料,通过观察MOF材料与3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)反应的颜色变化及测定反应液的OD_(450/630)值评价其类过氧化物酶活性。结果表明,ZIF-8、MIL-101(Fe)、MIL-101(Cr)几乎没有类过氧化物酶活性,UIO-66的类过氧化物酶活性微弱,而二维片状的Cu-TCPP(Fe)显示出超高的类过氧化物酶活性;Cu-TCPP(Fe)的类过氧化物酶活性来源于TCPP(Fe),其类血红素结构能加速TMB反应的颜色变化。MOF材料作为人工模拟酶在纳米生物学领域显示出巨大的应用潜力。

基于麦麸碳点的类过氧化物酶用于葡萄糖的检测

本文以炭化麦麸为原料,经回流氧化制得麦麸碳点(Wheat Bran Carbon Dots,WCDs),获得的WCDs除了具有良好的水溶性和光学性能外,还具有内在的类酶催化活性。与辣根过氧化物酶(HRP)类似,WCDs的类酶催化活性同样受到pH、温度和H_(2)O_(2)浓度的影响,但是WCDs性能更稳定、廉价易得。WCDs协同葡萄糖氧化酶(GOx)的催化作用,建立了一种简便的、选择性和灵敏度高的方法,可实现对葡萄糖的比色检测,线性范围为0.025~0.25 mmol·L^(-1),检出限为0.016 mmol·L^(-1)。该方法可用于果汁样品中葡萄糖含量的测定。

过氧化物酶抗体在妊娠甲状腺功能紊乱发生中的诊断价值

目的探讨血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)在筛查孕妇发生自身免疫性甲状腺功能紊乱中的诊断价值。方法选取确诊甲状腺功能紊乱的孕妇75例,非甲状腺功能紊乱孕妇145例,采用微粒子酶免疫分析法(MEIA)和化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)分别测定血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平和促甲状腺激素(TSH)水平。结果(1)甲状腺功能紊乱组血清TSH和TPOAb水平与非紊乱组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);(2)甲状腺功能紊乱组中TPOAb呈较高的阳性率(84.0%),非紊乱组孕妇TPOAb阳性率达11.0%;(3)TSH异常组中约半数孕妇(53.3%)呈TPOAb阳性。TSH正常组中有14.5%孕妇TPOAb呈阳性反应;(4)TPOAb阳性组中有65.6%的孕妇出现TSH紊乱;(5)较高TSH水平(>4.67mIU/L)组中,TPOAb阳性率较高(55.7%),低TSH水平组(<0.47mIU/L)中TPOAb阳性率则较低(9.9%);(6)各组高龄孕妇与育龄孕妇组之间血清TSH和TPOAb水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论TPOAb可作为孕妇产前监测指标,有助于临床早期诊断并明确妊娠期甲状腺功能紊乱的病因。从诊断价值上看,TSH并不能完全取代TPOAb检测。TPOAb异常可能预示孕妇发生自身免疫性甲状腺疾病的可能和风险。

左甲状腺素钠对妊娠早期甲状腺过氧化物酶抗体阴性的亚临床甲状腺功能减退患者围产结局的影响

目的探讨左甲状腺素钠(L-T4)对妊娠早期伴甲状腺过氧化物酶抗体(TPoAb)阴性的亚临床甲状腺功能减退(甲减)患者围产结局的影响。方法选择就诊的妊娠早期亚临床甲减伴TPoAb阴性患者1 140例,随机分为L-T4组(n=570)和对照组(n=570),L-T4组给予L-T4治疗并达到目标值[促甲状腺素(TSH)<2.5mU/L],对照组不进行相应治疗。观察两组患者妊娠高血压、贫血、流产、早产及新生儿体质量等相关指标。结果对照组妊娠高血压、贫血、流产率及早产率等指标显著高于L-T4组(P<0.05),顺产率显著低于L-T4组,并且L-T4组患者治疗达目标值所需L-T4剂量与患者的TSH水平呈明显正相关(r=0.763,P<0.05)。结论 L-T4可以明显改善妊娠早期伴TPoAb抗体阴性的亚临床甲状腺功能减退患者的围产结局。

催化光度法研究血红素受体类过氧化物酶活性

介绍含血红素的过氧化物酶作为超分子受体在仿生催化体系中的应用研究 .以动态分光光度分析法研究血红素蛋白质作为过氧化物酶的催化作用和其在胶束中的类酶活性 .通过对催化过程及反应活性中间体的分子吸收光谱研究 ,发现血红蛋白催化活性与氢供体底物邻苯二胺浓度之间遵从米氏方程 ,并获得牛血红蛋白、血红素及其血红素的环糊精衍生物作为生物催化试剂所具有的类酶特征常数 .

亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及谷胱甘肽过氧化物酶的影响

目的:观察亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用并分析其机制。方法:实验于2002-02/2003-04在泰山医学院机能实验室完成。将40只沙土鼠随机分为5组,假手术组,缺血再灌注2,4d组,亚硒酸钠处理-缺血再灌注2,4d组,各8只。假手术组及缺血再灌注2,4d组自由饮用自来水,亚硒酸钠处理-缺血再灌2,4d组自由饮用0.8mmol/L亚硒酸钠水1个月。采用夹闭双侧颈动脉法制备沙土鼠脑缺血再灌注模型,假手术组除不夹闭颈总动脉外,其余操作相同。术后各组饮水情况同术前。原位末端转移酶标记法染色光镜下观察凋亡神经元情况,计算凋亡密度。同时测定脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶的含量。结果:实验纳入沙土鼠40只,死亡2只,模型成功38只,模型成功率95%,后补充2只沙土鼠,40只动物进行结果分析。①光镜下原位末端转移酶标记法染色显示凋亡情况:假手术组凋亡神经元少见;缺血再灌注2,4d组凋亡神经元分布较广泛,4d时更明显;亚硒酸钠处理-缺血再灌注2,4d组凋亡神经元减少,4d时更少。②各组谷胱甘肽过氧化物酶及凋亡密度比较:亚硒酸钠处理-缺血再灌注2,4d组沙土鼠与缺血再灌注2,4d组比较,谷胱甘肽过氧化物酶含量增多[分别为(317.73±50.96),(319.62±63.14),(181.16±32.06),(185.99±31.92)nkat/L],凋亡细胞减少[分别为(44.6±3.2),(51.4±4.7),(60.8±2.5),(67.8±3.7)个],差异有显著性意义(P<0.01)。结论:①亚硒酸钠可增强脑缺血再灌注早期脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶的活性,抑制氧自由基损伤,减轻脂质过氧化反应,从而减轻脑缺血再灌注损伤后神经元的坏死和凋亡,并可能存在对脑缺血耐受的预处理机制。②亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

牙周病变组织谷胱甘肽过氧化物酶的测定

目的：探讨谷胱甘肽过氧化物酶与牙周组织病的关系。方法：选择了１２例慢性龈炎，１３例单纯性牙周炎，９例健康对照，采用ＤＴＮＢ显色法测定酶的活性，对其病变龈组织做ＧＳＨ－ＰＸ测定，并分析了临床指标与实验室指标的相关关系。结果：１．龈炎组，ＧＳＨ－ＰＸ含量为２９３．７４±１２１．７０，牙周炎组为２４２．９７±１１０．５９，对照组７８１．２５±１１３．３９，龈炎组、牙周炎组的ＧＳＨ－ＰＸ活性显著低于对照组（Ｐ＜０．０１），龈炎组与牙周炎组ＧＳＨ－ＰＸ活性无显著差异（Ｐ＞０．０５）。２．龈炎组牙龈指数与ＧＳＨ－ＰＸ活性成负相关（ｒ＝－０．７２２５，Ｐ＜０．００５），牙周炎组牙周袋深度，附着丧失量与ＧＳＨ－ＰＸ活性成负相关（ｒ＝－０．７６５３，ｒ＝－０．８５７８，Ｐ＜０．００２５）。结论：牙周病变组织ＧＳＨ－ＰＸ活性降低可能有两方面的原因，其一是牙周病是细菌引起的非特异性炎症，由于细菌的存在，局部自由基生成增多对ＧＳＨ－ＰＸ消耗增大；其二是由于全身因素的影响局部ＧＨＳ－ＰＸ合成减少。

湖北汉族冠状动脉粥样硬化性心脏病患者203例与健康对照者过氧化物酶体增殖物激活受体γC161→T基因的多态性(英文)

背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ是核受体超家族的成员,与动脉粥样硬化的形成密切相关。目的:通过分子生物学方法,分析过氧化物酶体增殖物激活受体γC161→T基因多态性与冠状动脉粥样硬化性心脏病的相关关系。设计:随机对照实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院心内科,武汉大学中南医院心内科,华中科技大学人类基因研究中心,湖北中医学院附属医院内科,北京中医药大学东直门医院老年病研究所。对象:所选对象均来自武汉大学中南医院与华中科技大学同济医院2002-06/2005-12住院患者及至门诊体检者,冠状动脉粥样硬化性心脏病组共203例,汉族,男129例,女74例,平均年龄(65±11)岁,有156例经冠状动脉造影诊断,冠状动脉无病变和冠状动脉狭窄<50%的患者43例,冠状动脉狭窄>50%的患者113例,对照组:共89例,男56例,女33例,汉族,平均年龄(59±9)岁,为本院例行体检的健康人群。确认各组人群之间无血缘关系。方法:本实验于2002-06/2005-12在华中科技大学同济医院完成,运用聚合酶链式反应及限制酶片段长度多态性技术分析无血缘关系汉族人群(包括89例正常健康人,203例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者)的过氧化物酶体增殖物激活受体γC161→T基因多态性;结合放射免疫技术、冠状动脉造影,以及临床常规生化检测指标,综合分析基因型频率、等位基因频率分布及不同基因型与临床资料、生化指标的关系,并对不同基因型患者冠状动脉粥样硬化性心脏病的危险性进行评价。主要观察指标:参与者基因型频率、等位基因频率分布及不同基因型与临床资料、生化指标的关系及血脂、血糖、空腹胰岛素、体质量指数等。结果:203例冠状动脉粥样硬化性心脏病患者和89例对照组均参与基因多态性分析,得出了不同的基因分布频率。①正常组T等位基因频率为0.213,C等位基因频率为0.787;冠状动脉粥样硬化性心脏病组T等位基因频率为0.192,C等位基因频率为0.808;两组间基因型频率及C、T等位基因频率分布差异无显著性意义(P>0.05)。②存在冠状动脉病变的冠状动脉粥样硬化性心脏病组以CC基因型为主,与T等位基因携带者(CT+TT)相比较差异有显著性意义(P<0.05),且T等位基因携带者(OR:0.56,95%CI:0.24～0.63)冠状动脉粥样硬化性心脏病危险性低于CC基因型(OR=1.92,95%CI:1.09～2.54)。③冠状动脉粥样硬化性心脏病患者中CC基因型载脂蛋白B明显高于T等位基因携带者(CT+TT)(P<0.05),胰岛素抵抗指数差异无显著性意义(P>0.05)。结论:过氧化物酶体增殖物激活受体γC161→T的置换与冠状动脉粥样硬化性心脏病之间有重要的相关性,T等位基因携带者发生冠状动脉粥样硬化性心脏病的危险性较少。

桥本病伴甲减产妇的婴儿血甲状腺激素和过氧化物酶抗体检测的临床意义

慢性淋巴性甲状腺炎,即桥本病（HD）属于自身免疫性甲状腺疾病,由遗传和非遗传因素相互作用而产生[1]。有文献报道甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）属于IgG,极易通过胎盘[2],影响胎儿甲状腺功能,导致不少新生儿患先天性甲状腺功能减退症（甲减）[3]。

糖尿病大鼠脑缺血再灌注后肿瘤坏死因子α表达和髓过氧化物酶活性的变化

目的:观察糖尿病大鼠脑缺血再灌注后炎症因子肿瘤坏死因子α表达和髓过氧化物酶活性的变化,并与急性高血糖组相比较。方法:实验于2001-03/2002-03在河南医科大学耳鼻喉研究所进行。选用成年健康Wistar大鼠144只,随机分为4组,每组36只:①糖尿病组:经尾静脉注射60mg/kg链脲佐菌素溶液(200g/L)制备糖尿病大鼠模型,1个月后制作左侧大脑中动脉栓塞,缺血2h再灌注模型。②急性高血糖组:术前5min腹腔注射500g/L葡萄糖注射液20mL/kg,然后同前制备脑缺血再灌注模型。③正常血糖组:术前不干预,同前制备脑缺血再灌注模型。④假手术组:不栓塞大脑中动脉,其余处理同正常血糖组。各组均又分为再灌注0,3,6h组,再相应时间点麻醉状态下处死大鼠取脑,用免疫组织化学方法检测缺血脑组织细胞间黏附分子1表达,用比色法测定缺血脑组织髓过氧化物酶活性。结果:经补充后144只大鼠进入结果分析。①肿瘤坏死因子α表达:假手术组有微量表达,急性高血糖组和糖尿病组在缺血2h后表达即显著高于正常血糖组(1628.33±152.57,1663.17±314.55,1353.67±194.36,P<0.01),且在再灌注3h达高峰,并维持至再灌注6h,但在各个时间段中,急性高血糖组仅于再灌注3h低于糖尿病(2332.17±162.02,2779.50±131.96,P<0.01)。②髓过氧化物酶活性:假手术组在0.068～0.072。再灌注3h急性高血糖组和糖尿病组增加至0.41,高于正常血糖组的0.17(P<0.01)。再灌注6h急性高血糖组高于糖尿病组(0.74,0.44,P<0.05),但两组均高于正常血糖组(0.35,P<0.01)。结论:急性高血糖可加重大鼠脑缺血再灌注后的炎症损伤,糖尿病不仅通过高血糖机制,还通过其它机制加重再灌注炎症损伤。

具有类过氧化物酶活性的纳米材料在比色分析中的研究进展

纳米酶的出现是人工模拟酶研究领域的重大进展,突破了以往人工模拟酶催化效率不高的局限性,目前已被广泛应用到疾病诊断和治疗、环境监测及污水处理等多个领域。近年来,人们发现了多种纳米材料具有天然酶活性,并将具有类过氧化物酶活性的纳米材料应用于制备比色生物传感器。借助纳米材料自身所具有的催化能力,模拟类过氧化物酶活性,发挥其成本低、稳定性高和易于储存等优势,直接实现对生化反应的催化,进而通过裸眼观察或以分光光度计检测溶液吸光度变化对目标物进行快速、灵敏的定性定量分析。具有类过氧化物酶活性的纳米材料在比色传感器中的应用为新型纳米比色传感器的发展提供了更广阔的空间。但是随着研究的不断深入,该类纳米材料也暴露出一些需要改进的问题,如对pH值要求较多、亲和力不够强、催化活性不够高等。针对上述问题,大多的研究都集中于材料的改进和优化。现有的研究表明,可以通过改变材料的结构、增加表面修饰、多种纳米材料复合等方法来进行性能的改进和提升。本文首先明确了比色传感器的显色机制,接着从六种纳米材料(贵金属纳米材料、金属氧化物纳米材料、金属硫化物纳米材料、碳基纳米材料、金属有机骨架、MXene纳米材料)出发详细综述其类过氧化物纳米酶的研究及应用进展,最后概述和讨论了类过氧化物纳米酶当前面临的挑战,明确了纳米材料在比色分析中的地位和未来的发展前景。

人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

目的 克隆人过氧化物酶体增殖体激活受体γ2 (hPPARγ2 )基因及构建其真核表达重组体 ,为进一步研究该基因打下基础。方法 采用RT PCR方法从中国人网膜脂肪垫总RNA中扩增出hPPARγ2cDNA全长基因 ,将全长hPPARγ2cDRA定向插入真核表达载体pcDNA3 1(+)中 ,筛选出阳性克隆。通过限制性内切酶酶切和核苷酸序列测定进行鉴定。结果 克隆出全长hPPARγ2cDNA序列与GeneBanK序列相同 ,真核表达质粒经限制性内切酶酶切后获得的片段大小与理论值一致。结论 成功地克隆了hPPARγ2cDNA ,并构建了真核表达重组体。

适配体增强金纳米粒子类过氧化物酶活性快速检测鸡蛋中的恩诺沙星

目的 利用核酸适配体增强金纳米粒子类过氧化物酶(peroxidase,POD)活性,建立了一种快速检测鸡蛋中恩诺沙星的方法。方法 金纳米粒子具有类POD活性,能催化H_(2)O_(2)氧化3,3’-5,5’四甲基联苯胺(3,3’-5,5’tetramethylbenzidine, TMB)反应,加入核酸适配体后,适配体通过Au-N键吸附于金纳米粒子表面,使催化活性增强;进一步加入靶标物恩诺沙星后,核酸适配体与靶标物特异性结合而脱离金纳米粒子表面,使催化活性减弱。基于此建立了恩诺沙星比色检测方法,优化了反应条件,并将其用于鸡蛋样品检测中。结果 在核酸适配体浓度为10 nmol/L, TMB浓度为0.3 mmol/L,显色反应时间为20 min时,反应体系的吸光度变化随恩诺沙星浓度在5~150μmol/L范围内具有良好的线性关系,检出限为1.98μmol/L。该方法具有良好的选择性和抗干扰能力,将此法用于鸡蛋中的恩诺沙星的检测,加标回收率为92.67%~109.04%。结论 该方法简便快速,为鸡蛋中恩诺沙星检测提供了一种新的尝试方法。

雷蒙德棉第Ⅲ类过氧化物酶全基因组鉴定和表达分析

第Ⅲ类过氧化物酶(Class Ⅲ Peroxidases,Prxs)是植物特有的过氧化物酶家族,存在于植物细胞外空间或液泡中,参与了植物抗逆和生长发育等多个过程。为了分析过氧化物酶基因在棉花纤维发育过程中的功能,利用蛋白保守结构域分析方法,对雷蒙德棉(D组)第Ⅲ类过氧化物酶家族基因进行了全基因组鉴定,确定了90个第Ⅲ类过氧化物酶基因。进一步根据聚类分析、基因结构分析和蛋白亚细胞定位分析结果将雷蒙德棉第Ⅲ类过氧化物酶划分成8个亚类。最后,结合转录组数据和qRT-PCR对基因的表达模式进行了分析,获得了在棉花纤维不同发育阶段高水平表达的候选基因GrPrx 11和GrPrx3、GrPrx21和GrPrx 77。这些特异性高表达基因的鉴定为深入研究过氧化物酶基因在纤维发育中的功能奠定了一定的基础。

糖尿病大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达和髓过氧化物酶活性的变化

目的:观察糖尿病大鼠脑缺血再灌注后缺血损伤区炎症因子细胞间黏附分子1表达,以及代表局部中性粒细胞数目的髓过氧化物酶活性变化,并与急性高血糖组相比较。方法:实验于2001-03/2002-03在河南医科大学耳鼻喉研究所进行。选用成年健康Wistar大鼠144只,随机分为4组,每组36只:①糖尿病组:经尾静脉注射60mg/kg链尿佐菌素溶液(200g/L)制备糖尿病大鼠模型,1个月后制作左侧大脑中动脉栓塞,缺血2h再灌注模型。②急性高血糖组:术前5min腹腔注射500g/L葡萄糖注射液20mL/kg,然后同前制备脑缺血再灌注模型。③正常血糖组:术前不干预,同前制备脑缺血再灌注模型。④假手术组:不栓塞大脑中动脉,其余处理同正常血糖组。各组均又分为再灌注0,3,6h组,再相应时间点麻醉状态下处死大鼠取脑,用免疫组织化学方法检测缺血脑组织细胞间黏附分子1表达,用比色法测定缺血脑组织髓过氧化物酶活性。结果:经补充后144只大鼠进入结果分析。①细胞间黏附分子1表达:假手术组有微量表达,急性高血糖组和糖尿病组在再灌注3h即显著高于正常血糖组(1607.00±106.48,1812.00±112.58,1115.67±83.86,P<0.01),再灌注6h仍高于正常血糖组(2005.33±173.86,2181.67±122.85,1269.17±106.53,P<0.01),且糖尿病组明显高于急性高血糖组(P<0.05)。②髓过氧化物酶活性:假手术组在0.068～0.072。再灌注3h急性高血糖组和糖尿病组增加至0.41,高于正常血糖组的0.17(P<0.01)。再灌注6h急性高血糖组高于糖尿病组(0.74,0.44,P<0.05),但两组均高于正常血糖组(0.35,P<0.01)。结论:急性高血糖可加重大鼠脑缺血再灌注后的炎症损伤,糖尿病不仅通过高血糖机制,还通过其他机制加重再灌注炎症损伤。

氧化亚甲蓝-碘化钾法髓过氧化物酶快速染色及应用

目的:介绍一种安全稳定、快速可靠的髓过氧化物酶(MPO)染色新方法(氧化MB-KI法)。方法:采用亚甲蓝(Methylene blue)为显色剂取代Pereira原法中的Leishman's染料,并采用人工预先氧化亚甲蓝溶液的新方法,使其一步到位达到最佳氧化成熟程度,以后每次配制MPO染色工作液时不必加H2O2。结果:本法(氧化MB-KI法)MPO阳性产物呈棕黑色颗粒状,细胞核为蓝绿色。与Washburn联苯胺法比较,两者阳性率十分相近,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:氧化MB-KI法所显示的MPO阳性反应对比鲜明、易于判断,避免了假阴性结果的发生。试剂安全、稳定可靠、易于配制、操作简单、染色时间短,是理想的MPO染色方法。