案例教学法结合通关模式在“中药药理与应用”课程的实践

为了提升“中药药理与应用”的教学质量,围绕以学生为中心和以学习为中心的OBE教育理念,结合案例教学法和通关模式,开展中药药理的案例教学。通关模式的案例教学法可以全方位地促进学生学习的积极性、主动性和目标性。教学实验研究结果表明,案例教学法结合通关模式能明显提升学生的学习状态、学习成绩和学习效果,实验班与对照班比较,p<0.05,有显著差异性,能提升“中药药理与应用”课程的整体教学效果。

长江上游水运口岸通关模式成因分析

本文通过对长江上游水运口岸通关模式的调查梳理,对其模式成因进行分析。在传统通关、区域通关改革、区域通关深化改革、区域通关一体化再到全国通关一体化的通关模式改革进程中,长江上游四个主要水运口岸因口岸开放等级不同,改革的路径也不尽相同。

通关藤口服液治疗肺癌合并慢性支气管炎回顾性研究

目的 分析通关藤口服液对肺癌合并慢性支气管炎患者临床疗效的影响。方法 采用回顾性研究方法,收集2018年1月—2020年2月黑龙江中医药大学附属第一医院肿瘤科门诊治疗的38例肺癌合并慢性支气管炎患者的临床资料,根据用药情况分为通关藤组19例和脾氨肽组19例。其中,通关藤组予通关藤口服液治疗,脾氨肽组予脾氨肽口服冻干粉治疗。比较两组患者治疗后的CAT评分、中医证候(咳嗽、咳痰、喘息)评分、C-反应蛋白(CRP)、中性粒细胞计数/淋巴细胞计数比值(NLR)、治疗后1年内慢性支气管炎急性加重次数。结果 治疗后,两组患者CAT评分、中医证候(咳嗽、咳痰、喘息)评分、CRP、NLR均显著降低(P<0.05)。组间相比,通关藤组CAT评分、咳嗽和喘息评分、CRP、NLR均低于脾氨肽组(P<0.05)。通关藤组治疗后1年内慢性支气管炎急性加重次数为(1.21±0.89)次,少于脾氨肽组的(2.84±1.66)次(P<0.05)。结论 通关藤口服液可以显著改善肺癌合并慢性支气管炎患者咳嗽、喘息症状,减少慢性支气管炎急性加重次数,可能与改善机体炎症状态有关。

基于蛋白质组学技术探讨通关藤注射液治疗小鼠肺癌的作用机制

目的:基于蛋白质组学技术研究通关藤注射液对小鼠肺癌组织生长情况及蛋白表达的影响,探究其作用机制。方法:40只BALB/c雄性小鼠,采用腋下接种Lewis肺癌瘤株的方法建立肺癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、顺铂组和通关藤注射液高、低剂量组,每组10只。分别在给药前及给药后记录小鼠肿瘤生长情况,在给药第21天时处死,眼球取血,取肿瘤组织,称量体积及瘤体质量。通过检测各组小鼠肿瘤大小,计算抑瘤率来评价肿瘤生长情况。取血清样本,采用定量蛋白质组学分析血清中蛋白表达差异的影响,并分析差异蛋白参与的信号通路。结果:与模型组相比,通关藤注射液高剂量和低剂量组肿瘤组织显著减小(P<0.01)。共定量得到6272个蛋白质,给药组与模型组之间有176个差异蛋白(上调59个,下调117个),这些差异蛋白的功能主要为基因表达、细胞生物合成、DNA模板转录等;对差异蛋白富集的信号通路进行分析可知,PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、ErbB信号通路、心肌收缩、志贺菌病、系统性红斑狼疮、胰岛素信号通路、不同环境中的微生物代谢、cAMP信号通路、信使核糖核酸监测通路等通路可能与肿瘤细胞的增殖、存活有密切关系。结论:通关藤注射液抑制肺癌小鼠肿瘤生长的作用机制,可能通过调节关键蛋白影响基因表达、细胞生物合成、DNA模板转录等过程,与PI3K/Akt信号通路、HIF-1信号通路、ErbB信号通路等通路密切相关。

滋肾通关方对糖尿病大鼠肾损伤的改善作用及其机制

目的:研究滋肾通关方对糖尿病大鼠肾损伤的改善作用及其机制。方法:将50只8周龄雄性SD大鼠随机分为5组(每组10只):对照组、模型组和滋肾通关方低剂量(7.0 g生药/kg)、中剂量(14.0 g生药/kg)、高剂量(28.0 g生药/kg)组。除对照组外,其余组大鼠高脂高糖喂养4周联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ,35 mg/kg)构建糖尿病肾损伤大鼠模型。造模成功后,各组分别连续4周灌胃给予相应药物或生理盐水,1次/d。给药前和给药后第1、2、3、4周检测空腹血糖(FBG)、血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)含量,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量;苏木精-伊红(HE)染色法观察肾损伤情况,蛋白质印迹法检测肾组织转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))/Smads通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,模型组的大鼠FBG和血清BUN、Cr、TC、TG、TNF-α、IL-6、IL-1β均显著升高(均P<0.05);肾组织可见病理学损伤改变;TGF-β_(1)、Smad3、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin)的表达明显上调,而Smad7的表达明显下调。滋肾通关方低、中、高剂量组治疗4周后糖尿病肾损伤大鼠FBG和血清BUN、Cr、TC、TG、TNF-α、IL-6、IL-1β含量均明显降低(均P<0.05),肾组织病理学损伤明显改善,TGF-β_(1)、Smad3、α-SMA、Vimentin表达下调且Smad7表达上调,在不同剂量的滋肾通关方观察组中,其作用表现出一定的剂量依赖性。结论:肾通关方可通过抑制TGF-β_(1)/Smads信号通路改善糖尿病大鼠肾纤维化损伤。

通关藤注射液联合SOX方案治疗进展期胃癌临床观察

目的观察通关藤注射液联合SOX方案治疗进展期胃癌的疗效。方法将60例进展期胃癌患者随机分为对照组和观察组,每组30例。对照组患者接受标准SOX方案化学治疗;观察组患者加用通关藤注射液治疗。治疗前后分别检测患者血清癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)、糖类抗原(carbohydrate antigen,CA)125、CA153、CA199水平,以及肝肾功能和血清白蛋白,并检测血小板、淋巴细胞、中性粒细胞、单核细胞计数及中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil-to-lymphocyte ratio,NLR)、血小板与淋巴细胞比值(platelet-to-lymphocyte ratio,PLR),采用卡氏功能状态量表(Karnofsky’s performance status,KPS)评价患者生活质量,比较两组患者总生存期(overall survival,OS)和无进展生存期(progression-free survival,PFS)。结果观察组在降低血清CA125、CA199、PLR水平,提高KPS评分,防止血清白蛋白和淋巴细胞水平降低,延长OS和PFS方面均显著优于对照组(P<0.05)。结论通关藤注射液联合SOX方案治疗进展期胃癌具有增效减毒作用,可降低化学治疗药物不良反应,延长患者生存期。

粤港澳大湾区陆路口岸旅客通关模式优化研究

陆路口岸是粤港澳大湾区要素跨境流动的重要通道,承担着服务港澳融入国家发展大局的重要使命。在粤港澳大湾区建设深入推进的背景下,陆路口岸旅客通关便利化改革重要且迫切。本研究在分析粤港澳陆路口岸旅客通关模式的现状及面临问题的基础上,借鉴国外跨境口岸旅客通关模式的先进经验,结合实际情况,创新性地提出陆路口岸旅客通关模式优化的目标和系统性创新方案,以期为粤港澳大湾区提升口岸通关便利化水平、推动要素自由流动提供借鉴。

粤澳联合一站式车辆通关模式在口岸的应用

目前国内车辆通关模式存在各检查单位信息不关联、查验流程复杂、卡口布置分散等问题,造成通关车辆重复申报、重复录入的情况,导致查验环节累赘、效率低等问题。因此,口岸车辆通关模式的优化、实施两地联合一站式车辆通关模式、简化车辆查验流程成为主流选择。论文以横琴口岸为依托,从智能卡口、公共平台业务功能、出入境联合验放流程及整体数据架构4个方面系统介绍粤澳联合一站式车辆通关模式的运行原理。

UPLC-MS/MS法同时测定通关藤药材中3种皂苷的含量

目的:建立同时测定通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法,色谱柱为Phenomenex Kinetex XB-C18,流动相为0.1%甲酸溶液-乙腈(梯度洗脱),流速为0.2 m L/min,柱温为40℃,进样量为5μL,离子源为电喷雾离子源,多反应离子监测模式,正离子扫描,离子源喷射电压为5 500 V,雾化气压力为60 psi,加热气压力为60 psi,帘气压力为20 psi,去溶剂温度为600℃。结果:通关藤苷A、H、I检测质量浓度线性范围分别为0.1~10 ng/m L(r=0.999 7)、0.025~10 ng/m L(r=0.999 5)、0.025~10 ng/m L(r=0.998 9);定量限分别为0.1、0.025、0.025 ng/m L,检测险分别为0.05、0.012 5、0.012 5ng/m L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于4.0%;加样回收率分别为97.67%~99.00%(RSD=0.47%,n=6)、95.00%~101.67%(RSD=2.59%,n=6)、96.67%~103.33%(RSD=2.83%,n=6)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于通关藤药材中通关藤苷A、H、I含量的同时测定。

HPLC-DAD-ELSD法同时测定22个产地通关藤中3种皂苷

目的建立HPLC-DAD-ELSD法同时测定22个产地通关藤Marsdenia tenacissima(Roxb.)Wight et Arn.中3种皂苷的含有量。方法通关藤70%乙醇提取物的分析采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-水(45∶55);检测波长235 nm;体积流量1.0 mL/min;漂移管温度80℃;载气压力3.5 bar(1 bar=100 kPa)。结果通关藤苷G、H、I分别在1.768～5.305μg(r=0.999 2)、3.842～11.526μg(r=0.999 0)、3.026～9.078μg(r=0.999 1)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.60%(RSD=1.86%)、99.88%(RSD=2.49%)、99.08%(RSD=1.14%),不同产地样品中三者含有量有明显差异。结论该方法稳定可靠,可用于通关藤的质量控制。

基于JAK1/STAT3信号通路的通关藤对人骨肉瘤细胞增殖的影响

目的探讨通关藤注射液和通关藤提取液对人骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及潜在机制。方法体外培养人骨肉瘤细胞MNNG/HOS、Saos-2和人骨髓间充质干细胞(BMSC),分别予通关藤注射液或通关藤提取液(40、60、80 mg/mL)处理,CCK-8实验和平板克隆实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,Hoechst33342染色和Annexin-V/PI双染实验检测细胞凋亡情况,RT-qPCR检测细胞Bax、Bcl-2、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)mRNA表达,Western blot检测细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Janus激酶1(JAK1)、p-JAK1、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3、基质金属蛋白酶(MMP)9蛋白表达。结果与对照组比较,不同浓度通关藤注射液和提取液均能显著降低MNNG/HOS和Saos-2细胞存活率,抑制细胞克隆形成、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),促进细胞BaxmRNA和蛋白表达,抑制Bcl-2mRNA和蛋白表达,上调Caspase-3mRNA和CleavedCaspase-3蛋白表达。通关藤注射液可显著下调Saos-2细胞p-JAK1、p-STAT3、MMP9蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论通关藤注射液和提取液均可显著抑制人骨肉瘤细胞MNNG/HOS和Saos-2增殖、迁移和侵袭,诱导其凋亡,二者抗肿瘤作用无明显差异,其机制可能与抑制JAK1/STAT3信号通路激活有关。

通关藤多糖结构表征及生物活性研究

以通关藤为原料,采用超声辅助水提法提取通关藤多糖,研究其结构表征及体外抗氧化、抗肿瘤细胞增殖作用。采用紫外可见分光光度计、离子色谱仪和红外光谱仪对通关藤多糖的结构进行表征,通过自由基清除能力评价通关藤多糖体外抗氧化活性。利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度通关藤多糖分别作用于人肝癌细胞HepG224 h、48 h的细胞抑制率。结果显示通关藤多糖的多糖含量为72.83%,由Glc、Gal、Ara、Rha、Xyl、Man、ManA、GalA和GlcA组成,其摩尔比为58.5∶17.8∶17.1∶2.4∶1.2∶0.9∶0.9∶0.6∶0.5;通关藤多糖对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基都具有一定的清除作用,且呈现浓度依赖性。通关藤多糖可抑制人肝癌细胞HepG2增殖,且呈浓度与时间依赖性。因此,通关藤多糖具有良好的体外抗氧化和抗肿瘤细胞增殖作用,具有潜在的开发应用价值。

长三角地区“大通关”建设的动因与建议——采用博弈模型分析

随着长三角地区经济的快速发展,尤其是外向型经济的驱动,"大通关"建设成为该地区打破发展瓶颈、改善贸易环境的必然选择。目前长三角地区"大通关"建设存在着政府理念创新和协调作用发挥不够等问题。长三角地区要加快"大通关"建设,就必须努力打造服务型政府,提高整体规划水平,使"大通关"建设与总体规划相匹配;同时推进海关和地方政府绩效考核等相关体制的改革,加强长三角地区"大通关"制度一体化建设,加快电子口岸的信息平台建设。

长三角“大通关”建设的经济学分析

"大通关"建设已成为长三角改善贸易环境,发展外向型经济的必然选择。从经济学角度,讨论长三角"大通关"建设的理论基础及实践意义,根据国外"大通关"建设的经验和启示,长三角共同加快"大通关"建设需要努力打造服务型政府;发挥中央总揽全局与地方主导协调的作用,坚持科技创新与制度创新的结合。因此,要明确长三角各类口岸的功能定位,提高整体规划水平,推进相关体制改革,强化相应的金融监管,加快电子口岸信息平台建设。

中外口岸通关模式的比较研究

随着我国改革开放逐步深入和外向型经济的快速发展,口岸通关的提速和便捷已成为一个十分重要的投资条件。而我国传统的通关模式已不能适应快速发展的经济和对外贸易的需要。因此,在对我国传统通关模式分析的基础上,通过中外对比,提出了实行“大通关”作业的新型通关模式。

关于第三轮“大通关”若干问题的思考

通过对“大通关”概念的深入理解,阐述了开展第三轮“大通关”建设的重要性,在总结前两轮“大通关”建设经验的基础上,提出改善通关环境,降低通关费用,提高通关效率,缩短通关时间的具体做法和途径,供与大通关建设有关的政府部门、生产和服务企业参考。

通关藤总皂苷通过IL-6/STAT3/NF-κB信号通路改善肝癌H22小鼠肿瘤炎症的研究

目的探讨通关藤总皂苷对H22荷瘤小鼠抗肿瘤炎症作用及机制。方法建立H22荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,阳性组(阿霉素),联合给药组(阿霉素+通关藤总皂苷中剂量),通关藤总皂苷低(62.5 mg/kg)、中(125 mg/kg)、高(250 mg/kg)剂量组,另设空白对照组。给药14 d。观察各组小鼠的行为学变化;剥离肿瘤组织进行称重,计算抑瘤率。采用HE染色、流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)、反转录实时定量聚合酶链式反应(RTPCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)对H22荷瘤小鼠的肝脏组织和肿瘤组织病理形态、外周血淋巴细胞比例、血清炎症因子、STAT3和核转录因子-κB(NF-κB)通路相关基因和蛋白等指标进行检测。结果通关藤总皂苷能够明显改善H22荷瘤小鼠的精神、行为等状态;各给药组抑瘤率明显,联合给药的抑瘤率高于通关藤总皂苷和阿霉素单独给药,差异具有统计学意义(P<0.01);模型组小鼠肝脏组织肝窦可见肿瘤细胞,且有炎症细胞浸润现象,各给药组情况得到不同程度改善。模型组小鼠肿瘤组织内肿瘤细胞生长密集,可见异型性和病理性核分裂现象,炎细胞浸润,各给药组肿瘤细胞出现大片坏死现象;相较于模型组,各给药组CD3^(+)、CD4^(+)T淋巴细胞百分率升高,CD8^(+)T淋巴细胞百分率降低,CD19^(+)、CD20^(+)B淋巴细胞和CD3^(-)CD16^(+)NK细胞百分率升高,差异具有统计学意义(P<0.01);通关藤总皂苷中、高剂量组血清中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度较模型组降低(P<0.01);各给药组中STAT3、MCL-1、XIAP、BCL-2、NF-κB mRNA的表达和STAT3、p-STAT3、MCL-1、XIAP、BCL-2、NF-κB蛋白的表达均较模型组降低(P<0.01)。结论通关藤总皂苷对H22荷瘤小鼠的肿瘤炎症有抑制作用,其机制可能与通关藤总皂苷下调STAT3和NF-κB信号通路中相关基因和蛋白的表达量及提高机体免疫功能有关。

通关藤水煎液中抗骨肉瘤细胞活性成分研究

目的:研究通关藤水煎液中抗骨肉瘤细胞活性成分。方法:采用大孔树脂柱层析、硅胶柱层析、制备型高效液相色谱(HPLC)、结合磁共振成像波谱(NMR)、高分辨率质谱(HR-MS)等方法,对通关藤水煎液的化学成分进行系统分离与结构鉴定;采用细胞计数检测(CCK-8)方法进行抗骨肉瘤细胞活性评价。结果:分离鉴定了33个化合物。其中,化合物1~8、化合物24~28均为首次从通关藤中分得;化合物6、化合物9、化合物21、化合物22、化合物25、化合物26、化合物29~31均能显著抑制骨肉瘤细胞MG63、143B的增殖。结论:通关藤水煎液中多个成分具有抑制骨肉瘤细胞活性。研究结果为通关藤的应用及进一步开发提供了科学依据。

通关藤总皂苷对LPS诱导的HepG2细胞炎症改善作用研究

目的探讨通关藤总皂苷(MaT)对脂多糖(LPS)诱导的HepG2细胞炎症模型的抑制作用。方法采用四氮唑盐(MTT)法、酶联免疫吸附法(ELISA)筛选出最适LPS造模浓度和诱导时间,建立LPS诱导的HepG2细胞炎症模型;MTT法、ELISA法筛选出MaT干预炎症HepG2细胞浓度范围。采用反转录实时定量聚合酶链式反应RT-PCR技术,检测不同浓度MaT干预后炎症信号通路STAT3和NF-κB通路相关基因的表达。结果以2μg/mL LPS与HepG2细胞在37℃,5%CO_(2)的条件下共培养24 h,建立LPS诱导的HepG2细胞炎症模型。相较于正常组,模型组白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平显著提高(P<0.01);MaT干预后,IL-6、IL-8、TNF-α浓度呈剂量依赖性下降,并且下调了炎症信号通路中STAT3、MCL-1、XIAP、BCL-2、NF-κB mRNA的表达。结论通关藤总皂苷对LPS诱导的HepG2细胞炎症模型具有抑制作用,其机制可能为通关藤总皂苷通过抑制STAT3/NF-κB信号通路相关基因表达,减少炎症因子的释放有关。

提高宁波港“大通关”速度的探索

本文通过对“大通关”概念的深入理解 ,阐述了开展第三轮“大通关”建设的重要性 ,在总结前两轮“大通关”建设经验的基础上 ,提出改善通关环境、降低通关费用、提高通关效率、缩短通关时间的具体做法和途径 ,供与“大通关”建设有关的政府部门。