番茄愈伤组织的诱导与遗传转化体系的建立

番茄是植物研究领域常用的模式植物之一,番茄高效稳定的遗传转化体系是研究番茄基因生物学功能的基础,但常规番茄遗传转化耗时过长。以番茄愈伤组织为侵染对象,最终获得转基因番茄愈伤组织,可极大地缩短获得番茄转基因材料的时间。本文以番茄Micro-Tom(Solanum lycopersicum cv. Micro-Tom)为实验材料,探索番茄愈伤诱导条件,建立标准的番茄愈伤组织遗传转化体系。结果表明,胚根为外植体、激素配比2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-Dichlorophenoxyacetic acid, 2,4-D)1 mg/L+6-苄氨基腺嘌呤(6-Benzylaminopurine, 6-BA)1 mg/L、蔗糖浓度30 g/L、光照强度3 000 lx为最佳诱导条件。标准番茄愈伤遗传转化体系包括愈伤组织培养、悬浮细胞建立、农杆菌侵染、共培养、抗性愈伤筛选、核酸鉴定等。该实验结果能够为以番茄为研究对象的分子机理研究及其所涉及的免疫沉淀、高通量测序、亚细胞定位等实验提供科研实验材料和方法参考。

马铃薯高效再生及遗传转化体系的优化

为优化马铃薯高效再生及遗传转化体系,研究鄂马铃薯3号茎段外植体在不同激素浓度配比下愈伤组织及分化情况,获得最佳愈伤组织及分化激素配比,再采用根癌农杆菌的遗传转化进行筛选,获得最佳转化体系,为马铃薯优质品种的基因工程育种提供依据。结果表明,不同激素浓度配比下愈伤组织及分化率差异较大,其中2.0 mg/L ZR+0.1 mg/L IAA激素配比下可高效再生出芽,出芽率高达100%,芽长势粗壮。通过构建植物表达载体pCambia1301,以GV3101为介导菌株,预培养2~3 d,共培养2~3 d,350 mg/L羧苄青霉素,50 mg/L卡那霉素筛选浓度转化效果较好,转化效率可达65%,其中转化苗在0.8 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA激素配比的培养基中可形成再生植株,再生率达80%,苗茎粗壮,根系发达。

植物遗传转化中体细胞再生的分子机制及应用研究进展

植物遗传转化是转基因技术及以此为基础的基因组编辑、功能基因组学研究和分子育种的关键。其中,物种和基因型差异往往是限制遗传转化效率和基因编辑技术广泛应用的主要瓶颈。随着再生芽发生和体胚发生的分子机制被逐渐探明,在愈伤组织形成、增殖和再生过程中涉及生长素和细胞分裂素合成、响应和信号转导的生长及发育调节基因被用于提高遗传转化效率。本研究首先综述了植物遗传转化过程中体细胞再生的不同途径和方式,以及转化细胞以间接的器官发生方式和体胚发生方式再生的分子机制。然后重点讨论了与生长素和细胞分裂素有关的再生促进基因在提高再生效率,缩短转化时间,以及实现执拗型物种和基因型的遗传转化等方面的应用。最后总结了再生促进基因在转基因和基因编辑中的应用潜力和研究方向。

丹参转录因子SmWRKY1基因克隆及遗传转化拟南芥

以丹参为试材,提取总RNA和合成cDNA,采用PCR扩增获得丹参转录因子SmWRKY1基因序列,通过生物信息软件及在线工具检测基因编码蛋白质的理化性质及氨基酸多序列比对,构建过表达载体并使用花序侵染法转入拟南芥,研究了转SmWRKY1基因对拟南芥生长性状和生理指标的影响,以期初步探究丹参SmWRKY1转录调控因子的生物学功能。结果表明:SmWRKY1基因全长1041 bp,编码346个氨基酸,NCBI数据库保守区BLAST分析显示具有典型的“WRKY”DNA结合保守结构域和C2H2型锌指结构。编码蛋白分子量为37310.4 Da,等电点pI为9.77,GRAVY为-0.571,ProtParam分析SmWRKY1属于亲水性蛋白。构建过表达载体pCAMBIA-SmWRKY1,并使用花序侵染法转入拟南芥,经鉴定获得11株转SmWRKY1基因的阳性苗,转基因植株可以使叶片和莲座直径显著变大,叶绿素和可溶性糖含量增加,MDA和脯氨酸含量减少,因此推测丹参SmWRKY1可能是一个与植物基础防御有关的负调控因子,参与植物非生物胁迫反应。

根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化体系的优化

为进一步提高根癌农杆菌介导的紫花苜蓿遗传转化效率,本试验以紫花苜蓿(Medicago sativa L.)品种‘中苜1号’为试验材料,通过筛选高效再生的植株,以筛选出的植株叶片为外植体,并通过调节培养基激素配比,在农杆菌侵染过程中添加谷氨酰胺、进行冷处理等措施优化苜蓿由农杆菌介导的遗传转化体系。试验结果表明:转化过程中以嫩叶作为外植体,菌液和重悬液中添加150μmol·L^(-1)乙酰丁香酮,侵染过程中使用300μmol·L^(-1)的谷氨酰胺将瞬时转化效率从32%提高至92%,转化效率提高到31%。研究紫花苜蓿的遗传转化体系可为紫花苜蓿高效遗传改良及基因功能研究提供了技术支持。

农杆菌介导的厚皮甜瓜遗传转化体系的建立

【目的】遗传转化是进行基因功能验证的重要手段,构建较为完善、高效的厚皮甜瓜遗传转化体系,为基因功能验证和厚皮甜瓜种质改良提供技术支撑。【方法】以厚皮甜瓜B8为材料,用携带植物双元表达载体pQY002005的根癌农杆菌介导转化B8子叶诱导再生,通过探究影响甜瓜遗传转化过程中的重要因子的作用,建立以B8为基础的甜瓜遗传转化体系。【结果】以正常光周期培养3 d的无菌苗子叶节为外植体,对其进行微刷+10 s超声处理可提高农杆菌侵染效率,荧光芽获得率达29.6%;压力85 kPa的2次5 min的抽真空侵染方式(间隔1 min)侵染效果较佳;4 mg·L^(-1)的Basta较适宜筛选抗性植株。利用以上方法,单次转化120个子叶节外植体,可获得31个再生荧光芽,17株生根苗,通过PCR检测确定8株阳性苗,阳性率达58.8%,阳性植株获得率为6.7%。【结论】成功建立了以B8为材料的甜瓜高效遗传转化体系,为甜瓜关键基因功能验证和种质精准改良提供技术支持。

滇杨组织培养再生及遗传转化体系建立

【目的】建立高效的滇杨Populus yunnanensis离体叶片再生及遗传转化体系,有助于滇杨基因工程育种研究。【方法】以滇杨叶片为外植体,研究不同植物生长调节剂组合对叶片愈伤组织和不定芽诱导及生根的影响,从而获得滇杨再生组培苗;进一步以农杆菌Agrobacterium tumefaciens介导法探讨菌液吸光度、侵染时间和共培养时间等对滇杨遗传转化效率的影响。【结果】滇杨愈伤组织诱导的最适培养基为1/2 MS+0.005 mg·L^(−1)噻苯隆(TDZ)+0.010 mg·L^(−1)萘乙酸(NAA),诱导率达91.7%;不定芽诱导的最佳培养基为1/2 MS+0.002 mg·L^(−1) TDZ+0.010 mg·L^(−1) NAA,诱导率为75.0%;生根最适培养基为1/2 MS+0.010 mg·L^(−1) NAA+0.100 mg·L^(−1)吲哚乙酸(IBA),生根率高达96.7%,平均生根数为2.57条。利用pBI121-GUS载体转化滇杨,最适转化菌液吸光度D(600)为0.2,侵染时间为5 min,共培养时间为2 d;在分化过程中,抑制农杆菌生长的头孢霉素(Cef)最佳质量浓度为200 mg·L^(−1),抗性筛选中最佳培养基的卡那霉素(Kan)质量浓度为20 mg·L^(−1)。对再生植株进行β-D-葡萄糖苷酸酶(GUS)组织化学染色和PCR鉴定,获得20株阳性植株,转化阳性率为45.45%。【结论】本研究成功建立了滇杨离体叶片再生和遗传转化体系。

植物遗传转化新技术和新方法

目前通过遗传转化技术获得了许多植物的转基因植株,一些重要农作物转基因新品种已进入产业化阶段,展现出极好的应用前景。但随着研究的不断深入,在如何提高遗传转化效率和转基因安全性等方面,一些新的技术和方法不断出现并得到应用,如胚状体再生系统、叶绿体转化系统、超声波辅助农杆菌介导法、位点特异重组MATvector系统、正选择系统以及新的转基因分子检测方法,使遗传转化技术向高效、安全方向发展,新一代的转基因植物也将会更适应人们和生态环境的需求。

高粱遗传转化研究进展

高粱是世界第五大粮食作物,可作为食用、饲用、酿造用和生物能源用。高粱遗传转化技术是高粱功能基因组学研究中必不可少的重要工具,同时,也可作为传统育种方法的重要补充。本文对近年来高粱遗传转化的研究进展进行总结,分析高粱遗传转化中存在的难题,并提出进一步的解决策略,以期为高粱遗传转化技术的进一步改良提供参考。通过对近年来50余篇高粱组织培养和遗传转化文献进行归纳总结。介绍用于遗传转化的高粱基因型、外植体来源、再生体系构建等方面的研究现状,对比电穿孔法、花粉管通道法、基因枪法和农杆菌介导法4种高粱遗传转化常用方法的优劣,总结遗传转化载体主要组成部分启动子、目的基因、选择标记基因和报告基因对转化效率的影响,阐述高粱遗传转化的应用现状,分析高粱遗传转化技术存在的主要瓶颈问题,研究对策措施。高粱基因型对组织培养有很大影响,以P898012和Tx430最为常用。基因枪法和农杆菌介导法是最常用的高粱遗传转化方法,且农杆菌介导法的优势逐渐显现。在载体构建中,CaMV35S启动子和ubi1启动子最为常用,抗生素抗性基因(nptII、hpt)、除草剂抗性基因(bar)和养分同化基因为常用的三大类选择标记基因。随着高粱遗传转化技术及CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术的不断发展,一些重要农艺性状基因被成功转入高粱。但基因型依赖性强、组织培养周期长、遗传转化稳定性差是限制高粱遗传转化的主要瓶颈,通过引入形态发生调节因子,直接进行体细胞发生,缩短了组织培养周期,提高了转化效率,扩大了外植体来源,高粱遗传转化技术取得重大突破。通过引入形态发生调节因子,采用切-浸-芽(CDB)递送系统等方式可进一步改良高粱遗传转化技术,结合CRISPR/Cas9基因编辑技术的应用,必将为高粱分子育种及相关基因功能鉴定提供重要的技术支撑。

西瓜遗传转化体系的优化

以8种基因型西瓜为试验材料,通过统计不同基因型材料的发芽率、不定芽诱导率,筛选出再生能力较强的基因型,并以其为材料对种子播种后培养时间、外植体造伤方式、菌液浓度、共培养时间及侵染方式等进行优化筛选,旨在建立高效的西瓜遗传转化体系。结果表明,在播种2 d时,YL、CYY298、CYY171及CYY137之间的种子发芽率差异不显著且均显著高于其他材料,但在不同浓度GA_(3)诱导下,YL外植体的不定芽诱导率均最高;以YL材料为基础进行体系优化,发现播种2 d后的种子状态最适于侵染;刀片划伤后的外植体荧光亮度最强,荧光率最高达74.9%;菌液浓度OD600=0.8,共培养时间为3 d时,外植体分化状态最佳且荧光率最高为70.3%;真空负压方式可以显著提高侵染效率,外植体荧光率可达71.8%,愈伤组织诱导率高达60.2%;分化培养基中添加0.5 mg·L^(-1)的GA_(3)后不定芽的诱导率最高为74%;生根培养基中添加0.5 mg·L^(-1)的IBA时生根率最高,平均生根数最多。

小果甜柿遗传转化体系建立及其抗冻性遗传改良的初步研究

【目的】建立小果甜柿(Diospyros kaki Thunb.‘Xiaoguo Tianshi’)叶片再生和优化其遗传转化体系,以期通过分子育种技术获得抗冻性强的砧木新种质。【方法】以小果甜柿叶盘为外植体,首先通过不同生长素(IAA)质量浓度和细胞分裂素(ZT,TDZ)配比探讨对其愈伤诱导和不定芽再生的影响;进而探讨其叶片对不同抗生素质量浓度组合的敏感性;此外,利用根癌农杆菌介导的叶盘稳定遗传转化体系,进一步探讨超表达君迁子(D.lotus L.)抗寒基因DlCBF1对小果甜柿叶盘再生植株抗冻性的影响。【结果】叶圆片在MS(1/2N)+ZT 2.0 mg·L^(-1)+TDZ 2.0 mg·L^(-1)培养基中愈伤形成率最高(64.71%);将愈伤组织接种到MS(1/2N)+ZT 2.0 mg·L^(-1)+IAA 0.1mg·L^(-1)生芽培养基中,不定芽再生率和不定芽数分别为31.11%和2.37个。头孢霉素质量浓度为400 mg·L^(-1)时可抑制农杆菌生长,且叶片愈伤形成率低(9.84%);卡那霉素对叶片再生影响大,在质量浓度为20 mg·L^(-1)时其愈伤诱导率为11.57%。小果甜柿叶片稳定超表达君迁子DlCBF1基因,获得再生植株73株,其中阳性植株5株,荧光定量结果分析,阳性植株#1和#47中DlCBF1基因表达量分别为野生型的13倍和11倍。经过-4℃低温处理8 h后,超表达株系与野生型株系相比,叶片受伤害程度更小,光合作用效率变化不明显,电导率低,H_(2)O_(2)和O_(2)^(-)在组织中的积累少,阳性株系表现出比野生型株系更强的抗冻性。【结论】在优化小果甜柿叶片外植体再生和稳定遗传转化体系的基础上,通过在小果甜柿叶片中超表达君迁子DlCBF1基因,获得6.85%转基因阳性再生植株,稳定超表达DlCBF1基因可显著增强小果甜柿再生植株的抗冻性。研究结果为培育抗冻性强的柿砧木新种质提供了科学依据。

根癌农杆菌介导彩色马蹄莲遗传转化体系的建立及优化

【目的】建立及优化根癌农杆菌介导的彩色马蹄莲(Zantedeschia hybrida)遗传转化体系,为提高彩色马蹄莲遗传转化效率及培育彩色马蹄莲抗性品种提供理论参考依据。【方法】将不同外植体(茎基、叶、不定芽)和不同浓度噻苯隆(TDZ)(0.001、0.002和0.005 g/L)进行正交试验筛选外植体和丛生芽增殖培养基;液氮冻融法将pCAM BIA2301和pBI121质粒转入农杆菌LBA4404感受态细胞。以β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因作为农杆菌介导转化测定的报告基因,对彩色马蹄莲的丛生芽进行遗传转化,阳性苗经PCR扩增验证转化结果。通过不同硫酸卡那霉素(Kan)浓度(50、100和150 mg/L)、侵染时间(25、30和40 min)及共培养时间(2和3 d)3因素正交试验筛选最佳转化条件。【结果】外植体为不定芽的丛生芽诱导率极显著高于茎基和叶(P<0.01),当不定芽为外植体、TDZ浓度为0.002 mg/L时,丛生芽增殖倍数(5.12倍)显著高于0.001和0.005 mg/L TDZ处理(P<0.05),筛选出M6培养基+0.002 mg/L TDZ+30 g/L蔗糖+6.25 g/L琼脂为丛生芽增殖培养基;影响阳性频率因素排序为:侵染时间>Kan浓度>共培养时间。当Kan浓度为50 mg/L、侵染时间25 min及共培养时间为3 d为最优侵染条件,此时,GUS+丛生芽出芽频率和PCR阳性频率最高,分别为54.0%和15.27%。【结论】成功优化彩色马蹄莲遗传转化体系,最佳外植体为不定芽,转化体系最佳组合为Kan浓度为50 mg/L、侵染时间为25 min及共培养时间为3 d。

农杆菌介导的黄瓜遗传转化体系优化研究

【目的】筛选适用于农杆菌介导的黄瓜遗传转化体系,为通过生物技术进行黄瓜新品种培育奠定基础。【方法】以华北型黄瓜品种‘9930’子叶为试材,探讨卡那霉素浓度(kanamycin, Kan)、预培养时间、预培养基添加乙酰丁香酮(acetosyringone, AS)、分化培养基pH及生根培养基中添加不同外源物质对黄瓜遗传转化的影响。【结果】不定芽分化、生根阶段的Kan临界浓度为150 mg/L;不进行预培养的黄瓜不定芽诱导率最高,为77.17%;当分化培养基pH为5.6时不定芽诱导率最高,为75.26%;外植体在添加0.5 mg/L的IBA生根培养基上生根率达100%,根长也显著增加。【结论】在以黄瓜品种‘9930’子叶节为外植体的遗传转化体系中,150 mg/L Kan可作为不定芽分化和生根阶段的筛选选择压;不进行预培养更有利于其抗性芽诱导;适合不定芽诱导的分化培养基pH为5.6;0.5 mg/L的IBA为诱导外植体生根最佳激素浓度。

利用单壁碳纳米管介导植物瞬时遗传转化的研究

为验证单壁碳纳米管(SWNT)介导的新型的植物遗传转化方法的有效性,利用羧基化的单壁碳纳米管(COOH-SWNT)为原材料,构建了聚乙烯亚胺(PEI)修饰的羧基化单壁碳纳米管复合物(PEI-SWNT),探索验证PEI-SWNT复合物对外源基因的结合比例以及保护作用,使用PEI-SWNT复合物将RED以及UBQ10-EGFP等荧光质粒转化到油菜的原生质体和烟草叶片中。结果表明,PEI-SWNT纳米材料成功与外源目的基因结合,并对外源目的基因进行保护,使其免于核酸酶的降解,PEI-SWNT携带目的基因进入受体细胞后,可以成功地在受体细胞内进行基因表达。

玉米无基因型限制遗传转化体系建立和应用

农杆菌介导的玉米自交系遗传转化具有基因型依赖性。形态发生基因Baby boom(Bbm)和Wuschel2(Wus2)显著提高了转化效率,拓宽了可转化自交系的范围。然而,多数玉米自交系仍然难以得到转基因苗,且潜在机制尚不清楚。本研究发现,目标载体与Bbm和Wus2的辅助载体按10∶1比例混合能使大部分自交系产生体细胞胚。瞬时侵染效率和筛选是影响体细胞胚形成和成苗的关键因素。通过利用Bbm和Wus2混转以及优化侵染和延迟筛选的方式,建立了一个快速、不受基因型限制的玉米遗传转化体系。利用该技术体系对131个自交系进行遗传转化,其中104个自交系获得阳性转基因植株。

香蕉遗传转化体系优化

香蕉(Musa spp.)高度不育和多倍体特性严重阻碍常规育种方法的应用,而香蕉遗传转化技术存在基因型依赖性强、转化效率偏低等问题。以贡蕉(Musa acuminata cv.Mas)多芽体为起始转化材料,利用根癌农杆菌介导β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)介导转化,通过研究外植体转化状态、不同转化载体及乙酰丁香酮(acetosyringone,AS)孵育时间、农杆菌菌液浓度、预培养时间、不同农杆菌菌株和共培养方式对香蕉遗传转化过程的影响,优化遗传转化条件,以期获得高效的香蕉遗传转化体系。结果表明,以贡蕉多芽体薄切片为外植体,黑暗条件下预培养1 d,使用以p CAMBIA1304构建的植物表达载体EHA105农杆菌制备侵染液时,AS孵育0~4 h,侵染液农杆菌OD600为0.4~0.6,侵染后将多芽体切片放置在固体MS培养基(添加200μmol/L AS)上进行共培养,再生植株转化效率较好。通过优化遗传转化体系的条件,提高香蕉遗传转化率,为解决产业发展关键技术难题及精准定向分子育种提供技术支撑,为香蕉产业的健康可持续发展提供重要保障。

陆地棉重组自交系再生能力和遗传转化效率筛选

转基因工程育种是棉花种质创新的有效手段,为了拓展陆地棉可再生基因型,丰富棉花转基因受体,本研究以湖北省高产阔叶棉品种‘鄂棉22’(E22)为母本、高再生能力的鸡脚叶品种‘豫早1号’(YZ1)为父本,通过单籽传法构建了F9重组自交系群体(YE);利用棉花中比较成熟的IBA+KT(IK)和2,4-D+KT(DK)2种不同激素组合的培养体系,分别对重组自交系群体的164个家系的愈伤组织诱导率(CIF)、愈伤组织继代繁殖力(CSC)、愈伤组织的出胚率(CRE)以及愈伤组织出胚时间(CET)进行比较,共获得12个可再生的阔叶棉家系;利用目前成熟的棉花遗传转化体系对可再生阔叶棉家系进行遗传转化效率分析,同时对其进行田间农艺性状考察,最终获得了一个遗传转化效率为82.9%并且农艺性状更优良的家系YE3。本研究为棉花的遗传转化及基因功能研究拓展了陆地棉基因型种质资源。

不同甜瓜品种遗传转化再生体系的建立与基因编辑植株的快速获取

【目的】研究不同甜瓜品种遗传转化再生体系的建立与基因编辑植株的快速获取。【方法】选用巴吾顿、老汉瓜、其里甘、新密杂11号(86-1)4个甜瓜品种的子叶为外植体,通过农杆菌介导法侵染甜瓜子叶,采用组织培养法建立老汉瓜的遗传转化再生体系,运用PCR法检测获取基因编辑植株。【结果】从4个甜瓜品种中筛选出老汉瓜为优势品种作为外植体,在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L培养基预培养2 d和共培养3 d,在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+潮霉素5 mg/L+头孢霉素250 mg/L筛选培养基上继续培养7 d,在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+潮霉素5 mg/L+头孢霉素250 mg/L的不定芽诱导培养基上培养1~2周可见长出的小芽,将诱导芽分别放置于不加潮霉素和加潮霉素的芽伸长培养基上培养,诱导芽在不加潮霉素的芽伸长培养基上的生长速度比加潮霉素的培养基生长快,可使芽生长至2叶苗期缩短3周,在无菌环境下剪去一个芽提取DNA,并采用RT-PCR方法检测获得21株转化植株。【结论】筛选出基因编辑植株嫩芽,不加潮霉素的芽伸长培养基可将获得基因编辑植株周期缩短3周。

‘京枣39’愈伤组织遗传转化体系构建

【目的】以‘京枣39’愈伤组织为外植体进行遗传转化,建立枣树愈伤组织遗传转化体系,优化阳性植株鉴定方法。【方法】本研究以‘京枣39’愈伤组织为转化材料,利用含有报告基因eYGFPuv的改造载体,并通过根癌农杆菌介导方法转化,探究预培养时间、农杆菌菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮浓度、共培养时间对转化率的影响,建立愈伤组织遗传转化体系并优化阳性植株鉴定方法。【结果】(1)卡那霉素对愈伤组织的最小致死质量浓度为30 mg/L。(2)遗传转化最佳处理条件为预培养时间为4 d,菌液OD600为0.6,侵染时间20 min,乙酰丁香酮浓度100μmol/L,共培养时间为4 d;(3)阳性愈伤组织在365 nm紫外光下呈现明亮的荧光绿色,平均转化率达21.2%。【结论】经对比试验,成功建立了‘京枣39’愈伤组织遗传转化体系,为加速枣遗传转化提供了新的方法。

农杆菌介导的“野大1号”高效遗传转化体系建立

栽培大豆在驯化过程中丢失了大量的优异基因,我国野生大豆种质资源丰富,蕴含着许多高蛋白、抗逆方面的基因。大豆新品种“野大1号”作为一份重要的种质资源,保存着宝贵的遗传基因和许多优良的性状,具有较高的营养价值,其中异黄酮的含量高达千分之二,在农业育种上具有重要的价值。本研究以“野大1号”为材料,通过设计不同的消毒方式和时间以及不同的芽诱导6-BA浓度配比,通过GUS染色方法比较摇床和针管真空渗漏两种侵染方式在不同侵染时间下对基因转化效率的影响,分析侵染后外植体最佳抗生素筛选浓度,建立“野大1号”大豆品种的高效遗传转化体系。结果表明:“野大1号”种子消毒最佳方法为75%酒精消毒45 s后再使用15%过氧化氢消毒30 min;最佳侵染方法为针管真空渗漏浸染30 min;最佳不定芽诱导培养基为MS+2 mg·L^(-1)6-BA;抗性筛选标记潮霉素的最适浓度为60 mg·L^(-1)。通过该遗传转化体系成功移栽了14株植株,其中8株为转基因阳性植株。该高效再生及遗传转化体系的建立为大豆的新品种培育奠定坚实基础。