人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道的表达

目的探讨人宫颈鳞状上皮细胞癌（简称鳞癌）组织中电导钾离子通道（IKCal）mRNA及其蛋白产物与正常宫颈上皮组织中钙激活性的差异。方法采用免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测30例不同分化程度的宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCalmRNA及其蛋白产物的表达情况。结果（1）IKCalmRNA阳性表达率15例子宫颈鳞癌组织中分别为73．3％，表达水平为（1．2±n5），18例正常宫颈上皮组织中分别为11．1％，表达水平为（0．9±0．2），差异均有统计学意义；（2）30例宫颈鳞癌组织细胞核及细胞膜上IKCal蛋白产物均呈阳性表达；正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达，差异有统计学意义；（3）宫颈鳞癌组织中IKCal蛋白产物的表达与癌细胞分化程度呈正相关。结论IKCal的高表扶与宫颈鳞痛的发牛和发展密切相关．

宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道蛋白产物表达分析

目的探讨正常宫颈和宫颈癌组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)与人类宫颈鳞状上皮细胞癌的相关性。方法取2007年10月至2008年4月泸州医学院附属医院手术治疗的30例不同分化程度的宫颈鳞状上皮细胞癌患者病变部位组织作为实验组,同时期18例正常宫颈上皮组织作为对照组,分别采用免疫组织化学方法检测上述组织中IKCa1蛋白产物表达部位及表达水平。结果 IKCa1在30例宫颈鳞状上皮细胞癌组织细胞核及细胞膜上均呈阳性表达,阳性表达率为100.0%;18例正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达,阳性表达率为5.6%,IKCa1蛋白产物在宫颈鳞状上皮细胞癌组织中的表达程度及表达部位均与正常宫颈组织中存在明显差异(Z=-6.109,P=0.00,P<0.05)。在不同分化程度的宫颈鳞状上皮细胞癌组织中,高分化鳞癌组阳性表达率为40.0%,中分化鳞癌组阳性率为90.0%,低分化鳞癌组阳性率为100.0%;IK-Ca1蛋白产物表达程度与癌细胞分化程度呈负相关(χ2=8.4,P<0.05)。结论宫颈鳞状上皮细胞癌组织中IK-Ca1蛋白产物的表达明显高于正常宫颈组织;且IKCa1蛋白产物表达水平与癌细胞的分化程度呈负相关;过高表达的IKCa1与宫颈鳞状上皮细胞癌的发生和发展可能存在重要联系。

中电导钙激活钾离子通道在心脑血管疾病中的研究进展

在非传染性疾病中,心血管疾病(CVD)是导致死亡的主要原因。根据2023年更新的美国心脏学会报告,2017~2020年全球心血管疾病的患病率高达48.6%[1]。在中国,CVD的患病率和死亡率逐年上升,给社会带来巨大的经济负担。因此,心血管疾病的机制研究及诊治具有重要意义。

中电导钙激活钾离子通道在乳腺癌中的表达及其与临床病理指标的关系

目的探讨中电导钙激活钾离子通道(Intermediate-conductance calcium-activated potassium channel,SK4)在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其临床意义。方法 42例乳腺癌组织标本,20例距肿瘤切缘2 cm的癌旁组织标本。免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)和Western Blot法(WB)检测SK4在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达,并分析其与临床病理指标的关系。结果 SK4在癌组织中的表达高于癌旁组织。SK4在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为88.1%和35.0%(P<0.05);低、中、高分化肿瘤中SK4表达阳性率分别为100.0%、87.5%和75.0%(P<0.05);伴或不伴淋巴结转移的患者SK4的表达阳性率分别为69.2%和99.6%(P<0.05);在乳腺癌雌激素受体阳性和阴性中SK4的阳性率别为86.7%和91.7%(P>0.05)。SK4在乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中明显表达。结论 SK4在乳腺癌组织中表达增加;SK4的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关。

中电导钙激活钾离子通道在肿瘤中的作用

恶性肿瘤是一类以分化障碍为特征的异常病理增生性疾病,其中细胞的过分化、增殖、肿瘤细胞的迁徙与新生血管生成等是恶性肿瘤生长、转移的重要原因之一。

N-乙酰半胱氨酸通路对AGT-REN双转基因高血压小鼠心肌成纤维细胞中电导钙激活钾离子通道蛋白表达的影响及其意义

目的:探讨高血压过程中心肌成纤维细胞(CFs)氧化应激水平与中电导钙激活钾离子通道(KCa3.1)蛋白表达的关系,阐明KCa3.1在心肌纤维化中的作用及机制。方法:原代培养雄性AGT-REN双转基因高血压小鼠(dTH)CFs,另培养同品系野生C57B6小鼠CFs作为对照。dTH小鼠CFs随机分为高血压组(dTH)和N-乙酰半胱氨酸组(NAC),dTH小鼠CFs给予不同浓度NAC干预24h。MTT法检测细胞增殖情况,双氯荧光素(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧(ROS)分子表达,Western blotting法检测细胞培养上清collagenⅠ、collagenⅢ和细胞中KCa3.1通道蛋白表达、PI3K信号通道蛋白磷酸化改变。结果:4、8和12月龄dTH小鼠CFs中ROS和KCa3.1通道蛋白表达水平与2月龄dTH小鼠比较均增加(P<0.05或P<0.01);MTT检测,应用1×10^(-6)、1×10^(-5)、1×10^(-4)和1×10^(-3) mol·L^(-1) NAC干预后,dTH小鼠CFs增殖率分别为165.9%、138.72%、110.92%和109.82%,与dTH组比较,1×10^(-4)和1×10^(-3) mol·L^(-1) NAC对CFs增殖抑制作用明显(P<0.01)。与对照组比较,1×10^(-4) mol·L^(-1) NAC组小鼠CFs中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成明显减少(P<0.01);Western blotting检测,与对照组比较,1×10^(-4) mol·L^(-1) NAC组小鼠CFs中KCa3.1通道蛋白表达水平下降(P<0.01);dTH小鼠CFs中p-Akt/T-Akt表达水平较对照组增加(P<0.01),而1×10^(-4) mol·L^(-1) NAC组小鼠CFs中p-Akt/T-Akt表达水平下降(P<0.01)。结论:ROS清除剂NAC抑制dTH高血压小鼠CFs中KCa3.1通道蛋白表达,可能与其上调细胞中PI3K信号通道磷酸化水平有关。

中电导钙激活性钾通道在多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭和IgE分泌中的作用

本研究旨在探讨中电导钙激活性钾通道(IKCa1)在多发性骨髓瘤细胞增殖、迁移、侵袭及单克隆免疫球蛋白分泌中的作用。应用台盼蓝拒染法检测IKCa1阻滞剂克霉唑(clotrimazole,CLO)对MM细胞株U266生存能力的影响;应用Transwell迁移及Matrigel侵袭实验检测CLO对U266细胞迁移及侵袭能力影响;应用双抗夹心法(ELISA法)检测CLO对U266细胞单克隆免疫球蛋白IgE分泌的影响。结果表明,小剂量CLO(≤1.0μmol/L)对U266细胞活力无明显影响。Transwell迁移实验及Matrigel侵袭实验显示,小剂量CLO(≤1.0μmol/L)作用后,U266迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05)。1.00μmol/L CLO作用24 h与48 h后,细胞上清液IgE浓度分别为(4.98±0.39)、(4.38±0.32)ng/ml,24 h与48 h对照组IgE浓度分别为(15.41±1.88)、(21.73±2.01)ng/ml,提示1.00μmol/L组与对照组比较具有显著差异(P<0.05)。结论:CLO通过阻滞IKCa1而抑制MM细胞迁移和侵袭及M蛋白分泌,这为MM靶向治疗提供新思路。

血管紧张素(1-7)通过抑制中电导钙激活钾离子通道蛋白表达参与肾脏纤维化

目的探讨血管紧张素(Ang)(1-7)在肾纤维化过程中的保护作用与中电导钙激活钾离子通道(KCa3. 1)的关系。方法 60只雄性小鼠随机分为5组:对照组(WT);血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组:皮下注射AngⅡ[1. 4 mg/(kg.d)];注射AngⅡ的同时给予以下药物干预:AngⅡ阻断剂洛沙坦(Losartan)组:皮下注射Losartan[40 mg/(kg.d)];Ang (1-7)组:皮下注射Ang(1-7)[0. 14 mg/(kg.d)];血管紧张素转化酶2(ACE2)激动剂重氮氨苯脒乙酰甘氨酸盐(DIZE)组:皮下注射DIZE[10 mg/(kg.d)]。连续给药4周后对相关指标进行检测。Masson染色法检测肾组织胶原沉积变化;Western blotting法检测肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和KCa3. 1通道蛋白表达的变化。结果与对照组相比,AngⅡ组小鼠肾组织内胶原沉积量明显增加(n=12,P<0. 01),表明肾纤维化模型复制成功。AngⅡ使肾组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成显著增多(n=6,P<0. 01),同时促进了肾组织KCa3. 1通道蛋白的表达(P<0. 01),而Ang (1-7)及ACE2激活剂DIZE的应用抑制了肾组织内胶原沉积量、Ⅰ/Ⅲ型胶原合成及KCa3. 1通道蛋白的表达(n=12或6,P<0. 01)。结论 Ang (1-7)在肾纤维化过程中发挥保护作用,这一作用可能与其下调肾组织中KCa3. 1通道蛋白表达有关。

阻断钙激活钾通道对宫颈癌细胞增殖及钾通道电流的影响

目的观察钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)被阻断后对宫颈癌He La细胞增殖及IKCa1膜电位的影响。方法分别用IKCa1阻断剂克霉唑和RNA干扰法阻断He La细胞的IKCa1后,用RT-PCR技术检测He La细胞的IKCal mRNA,MTT法检测细胞OD值,膜片钳技术检测细胞IKCa1电流。结果克霉唑阻断IKCa1后,He La细胞的IKCa1 mRNA表达降低、IKCa1电流减弱、细胞OD值下降,与对照组相比,P均<0.05。RNA干扰法阻断IKCa1后,Hela细胞的IKCa1 mRNA表达下降、IKCa1电流减弱、细胞OD值降低,与空白对照组和阴性转染组相比,P均<0.05。结论阻断IKCa1能有效抑制He La细胞增殖,下调细胞IKCa1 mRNA的表达,降低其IKCa1电流;IKCa1通过调控He La细胞膜电位而影响其信号传递,调控He La细胞的增殖。

体内干扰中电导钙激动钾离子通道抑制乳腺癌增殖及肿瘤血管生成

目的建立乳腺癌原代细胞成瘤模型,探讨体内转染干扰中电导钙激动钾离子通道(KCa3.1)的表达在乳腺癌增殖、肿瘤新生血管中的效应。方法收集随机选取的23例2018年至2019年于安徽医科大学第一附属医院乳腺外科手术切除的乳腺浸润性癌新鲜组织标本,分离并体外培养人乳腺癌原代细胞,建立22例裸鼠乳腺癌原代细胞成瘤模型;合成胆固醇修饰小干扰RNA(siRNA)并鉴定其转染效率,将成瘤裸鼠随机分为实验组(11例,siRNA干扰)及对照组(11例,阴性对照),检测体内转染Chol-siRNA干扰KCa3.1对乳腺癌成瘤组织增殖及血管生成的影响。应用SPSS 18.0统计软件分析,组间采用χ^2检验及t检验。结果预先设计的siRNA1与siRNA2均可对乳腺癌原代细胞中KCa3.1产生有效干扰,蛋白质印迹法(Western blot)检测其干扰效率为(71.03±9.97)%及(65.81±9.18)%(t=21.034、20.883,P<0.05),差异有统计学意义;成功建立22例乳腺癌原代细胞BALB/c裸鼠成瘤模型,成瘤率为70.96%;成瘤组织行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测KCNN4干扰效率,Chol-siRNA组中KCNN4 mRNA表达水平显著低于对照组(t=6.541,P<0.05),差异有统计学意义;免疫组织化学检测成瘤组织肿瘤细胞因子的表达,对照组中VEGF的阳性表达率为(43.42±7.89)%,siRNA组中的阳性表达率为(13.19±4.32)%(t=11.146,P<0.05),差异有统计学意义;对照组中CD31的阳性表达率为(17.49±4.15)%,siRNA组中的阳性表达率为(9.28±5.86)%(P<0.05),差异有统计学意义;对照组中细胞核增殖抗原(Ki-67)的阳性表达率为(88.77±7.61)%,siRNA组中的阳性表达率为(58.17±9.62)%(t=8.274,P<0.05),差异有统计学意义。结论KCa3.1参与调控乳腺癌细胞的增殖及肿瘤血管生成,成功在体内成瘤模型中验证了干预KCa3.1对肿瘤形成的抑制作用。

中电导钙激动钾离子通道在多种乳腺癌细胞中的表达差异及作用

目的 观察中电导钙激动钾离子通道（KCa3.1）在乳腺癌细胞中的表达,在体外及体内探讨KCa3.1在乳腺癌增殖和细胞凋亡的作用.方法 Western blot技术检测KCa3.1在多种乳腺癌细胞株中的表达;免疫荧光技术检测KCa3.1在细胞中的表达定位;使用噻唑蓝（MTT）法研究KCa3.1对乳腺癌增殖的影响;流式细胞术研究KCa3.1对乳腺癌凋亡的影响;检测体内干预KCa3.1对乳腺癌细胞体内成瘤增殖及凋亡的影响.结果 KCa3.1在MDA-MB-231及MCF7细胞中存在表达,而在T-47D细胞中无明显表达;KCa3.1在乳腺癌中的表达定位于细胞膜上;体外干预KCa3.1可影响乳腺癌细胞的增殖,促进乳腺癌细胞的凋亡,MDA-MB-231细胞各组凋亡率分别为48 h：四乙铵-34（TRAm34）组（17.29 ±2.14）％,1-EBIO组（35.32±3.74）％,对照组（8.41±1.31）％;72 hTRAm34组（27.47±5.74）％,1-EBIO组（57.62±5.94）％,对照组（9.43±2.12）％;使用1-EBIO体内激活KCa3.1通道,可降低成瘤组织的增殖,促进成瘤组织的凋亡,各组凋亡率：对照组为（11.34±4.75）％,实验组为（23.92±5.96）％.结论 KCa3.1参与调控乳腺癌细胞的增殖及凋亡,成功在体内成瘤模型中验证了干预KCa3.1对肿瘤形成的抑制作用.

原发性高血压大鼠阴茎海绵体组织中电导型钙激活性钾通道的表达

目的 检测内皮依赖性超级化因子（EDHF）通路关键性物质中电导型钙激活性钾通道（IKCa）在原发性高血压大鼠阴茎海绵体组织的表达,探讨高血压对大鼠阴茎海绵体中IKCa表达的影响.方法 健康雄性原发性高血压大鼠（SHR） 20只及同系正常（WKY）大鼠10只,无创血压仪测量大鼠尾部收缩压（SBP）,颈部皮下注射阿扑吗啡（APO）检验大鼠阴茎勃起,将大鼠分为高血压勃起功能障碍组（HBP-ED）、高血压组（HBP）和对照组（Control）.运用Western blot和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检验大鼠阴茎海绵体中IKCa蛋白和mRNA的表达.结果 SHR组收缩压为（202.43±9.89）mmHg（1 mmHg =0.133 kPa）,与WKY组[（127.21±3.48） mmHg]比较差异有统计学意义（P＜0.01）,Western blot和RT-PCR显示IKCa蛋白及mRNA在WKY、HBP及HBP-ED组中的表达均呈递减变化,其中HBP-ED组显著低于WKY组（P＜0.01）及HBP组（P＜0.01）,WKY组与HBP组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 高血压性勃起功能障碍可能与IKCa在原发性高血压大鼠阴茎海绵体中的表达低下密切相关.

KCa3．1表达改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,KCa3.1)表达水平和活性改变对子宫内膜癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:将携有KCa3.1RNA干扰(RNA interference,RNAi)片段的质粒转染子宫内膜癌HEC-1-A和Ishikawa细胞,应用实时荧光定量PCR(real time fluorogentic quantitative PCR,RFQ-PCR)及Western印迹法检测KCa3.1的表达变化;应用MTT法、BrdU掺入法、FCM及Western印迹法检测KCa3.1特异性阻断剂TRAM-34和KCa3.1RNAi表达质粒干扰后,子宫内膜癌细胞株增殖、细胞周期、凋亡及cyclin D1、cyclin E及survivin蛋白表达的改变。结果:KCa3.1RNAi表达质粒可以明显抑制KCa3.1mRNA及蛋白的表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);TRAM-34及KCa3.1RNAi可以明显抑制HEC-1-A和Ishikawa细胞的增殖,2株细胞的G0/G1期细胞百分比上升,S期细胞百分比下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),但细胞凋亡率与对照组相比无明显差异(P>0.05);cyclin D1、cyclin E及survivin的蛋白表达水平降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:抑制KCa3.1的表达及活性可以抑制子宫内膜癌细胞增殖,阻碍细胞周期进展,但对细胞凋亡无明显影响。

人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中IKCa1 mRNA的表达及意义

目的观察人宫颈鳞状上皮细胞癌组织(简称宫颈癌)及正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)mRNA表达变化,探讨其机制。方法采用RT-PCR方法分别检测15例宫颈癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCalm RNA的表达变化。结果宫颈癌组织中IKCal mRNA阳性表达率为73.33%,表达水平为1.14±0.45;正常宫颈上皮组织中分别为11.11%和0.86±0.23(P均<0.05)。宫颈癌组织中存在更高表达的IKCalmRNA。结论宫颈癌组织中细胞核内IKCal mRNA表达明显高于正常宫颈组织,过度表达的IKCal可能是宫颈癌发生的机制之一。

IKCal蛋白产物在人宫颈鳞状上皮细胞癌组织及正常宫颈组织中表达差异分析

目的研究人宫颈鳞状上皮细胞癌组织及正常宫颈上皮组织中钙激活性中电导钾离子通道(IKCal)蛋白产物的分布差异,探讨IKCal与人类宫颈鳞状上皮细胞癌的关联。方法采用免疫组织化学方法检测18例正常宫颈上皮组织和30例不同分化程度的宫颈鳞状上皮细胞癌组织中IKCal蛋白产物表达部位及表达水平。结果①IKCal在30例宫颈鳞状上皮细胞癌组织细胞核及细胞膜上均呈阳性表达;18例正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达,IKCal蛋白产物在宫颈鳞癌组织中的表达与正常宫颈组织中存在明显差异(Z=-6.109,P=0.00,P<0.05);②在不同分化程度的宫颈鳞癌组织中,IKCal蛋白产物表达程度与癌细胞分化程度呈负相关(2χ=16.468,P=0.00,P<0.017)。结论宫颈鳞癌组织中IKCal蛋白产物的表达明显高于正常宫颈组织;且IKCal蛋白产物表达水平与癌细胞的分化程度呈负相关;过高表达的IKCal与宫颈鳞状上皮细胞癌的发生和发展可能存在重要联系。

IKCa1基因shRNA真核表达载体的构建及其在HeLa细胞中的表达

目的:构建针对钙激活性中电导钾离子通道(intermediate-conductance Ca2+-activated K+channels,IKCa1)的小发夹RNA(small hair RNA,shRNA)真核表达载体,观察其在宫颈癌细胞HeLa中的表达。方法:设计、合成IKCa1基因特异性shRNA序列,插入空载体pGenesil-1.1中,构建重组体,脂质体法转染宫颈癌HeLa细胞,半定量RT-PCR和Western blotting技术检测转染前后HeLa细胞中IKCa1的表达。结果:成功构建IKCa1 shRNA真核表达载体,转染后HeLa细胞中IKCa1的表达受到显著抑制。结论:成功构建IKCa1特异性shRNA表达载体,为进一步研究IKCa1参与宫颈癌发生发展的机制奠定实验基础。

KCa3.1在碱性环境促进高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化中的作用

目的：探究中电导钙激活性钾离子通道（intermediate-conductance Ca^2＋-activated K＋channels ，KCa3.1）在碱性环境促进高磷诱导大鼠胸主动脉平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells ，VSMCs）钙化中的作用及机制。方法体外培养原代大鼠主动脉平滑肌细胞和大鼠胸主动脉血管环，利用10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠制备血管平滑肌细胞钙化、血管环钙化模型。同时使用HCl和NaHCO3调节培养基pH值，细胞、血管环被随机分为6组：正常pH7.4组、正常pH8.0组、高磷组（在高磷培养基的基础上调整pH值为7.4、7.7、8.0三个亚组）、TRAM-34（KCa3.1抑制剂）干预组（在高磷pH8.0培养基的基础上添加20 nmol/L TRAM-34）。茜素红染色法和钙含量测定法判断细胞钙化程度；von Kossa染色法和钙含量测定法判断血管环钙化程度。RT-PCR、Western印迹法检测各组细胞中调节成骨和软骨分化的关键转录因子Runx2的表达，酶联免疫吸附法测定碱性磷酸酶（ALP）活性，荧光探针法测定细胞内钙离子浓度。免疫组织化学法检测各组血管环中KCa3.1、Runx2的表达。结果体外培养VSMCs 12 d后，与正常pH7.4组相比，高磷组钙盐沉积明显增高（P＜0.05），且随着pH升高逐渐增加（P＜0.05）；与高磷pH8.0组相比，TRAM-34干预组钙盐沉积明显降低（P＜0.05）。体外培养VSMCs 4 d后，碱性环境显著促进钙离子内流（P＜0.05），增加KCa3.1、Runx2表达（P＜0.05），增加ALP活性（P＜0.05），而TRAM-34干预可显著抑制钙离子内流（P＜0.05），减少Runx2表达（P＜0.05），降低ALP活性（P＜0.05）。体外血管环培养12 d后，与正常pH7.4组相比，高磷组钙盐沉积明显增高（P＜0.05），且随着pH升高逐渐增加（P＜0.05）；与高磷pH8.0组相比，TRAM-34干预组钙盐沉积明显降低（P＜0.05）。体外血管环培养4 d后，免疫组化结果显示，碱性环境促进KCa3.1和Runx2表达（P＜0.05），TRAM-34可显著抑制Runx2表达（P＜0.05）。结论碱性环境可促进高磷诱导下大鼠胸主动脉平滑肌细胞钙化，其机制可能是通过促进平滑肌细胞钙离子内流，增加KCa3.1表达，促进平滑肌细胞表型转化来实现的。

miR-497-5p对人宫颈癌细胞增殖的抑制作用及机制

目的探讨miR-497-5p对人宫颈癌细胞(He La)增殖的抑制作用及机制。方法将对数生长期人宫颈癌He La细胞随机分为两部分,第一部分细胞随机分为四组:miR-497-5p mimics NC+IKCa1 3'端非翻译区(3'-URT)野生型双荧光素酶重组质粒载体(IKCa1-wt)转染组、miR-497-5p mimics+IKCa1-wt转染组、miR-497-5p mimics NC+3'-URT突变型双荧光素酶重组质粒载体(IKCa1-mut)转染组、miR-497-5p mimics+IKCa1-mut转染组,分别转染相应质粒48 h,用双荧光素酶报告基因检测系统检测He La细胞荧光素酶活性。第二部分细胞随机分为三组:miR-497-5p mimics转染组、miR-497-5p mimics NC转染组和空白对照组,分别转染相应质粒,用qRT-PCR技术检测细胞IKCa1 mRNA表达,Western boltting法检测细胞IKCa1蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力。结果第一部分细胞中的miR-497-5p mimics+IKCa1-wt转染组荧光素酶活性较其他三组降低(P均<0.05),其他三组间比较差异无统计学意义(P均>0.05),证实miR-497-5p与IKCa1 3'-URT存在特异性结合位点。第二部分细胞中的miR-497-5p mimics转染组IKCa1 mRNA、蛋白的相对表达量较其他两组降低(P均<0.05),其他两组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。第二部分细胞培养24、48、72、96 h,miR-497-5p mimics转染组增殖能力均较其他两组降低(P均<0.05),其他两组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 miR-497-5p可以通过负向调控IKCa1基因表达以抑制宫颈癌细胞增殖。

肺腺癌伴恶性胸腔积液患者胸水细胞蜡块KCa3.1的表达及其意义

目的探讨肺腺癌(LUAD)伴恶性胸腔积液患者胸水细胞蜡块中电导钙激活钾离子通道蛋白(KCa3.1)的表达及其意义。方法利用GEPIA、Kaplan-Meier plotter数据库分析KCa3.1在肺腺癌组织中的表达情况及其与肿瘤分期、总生存期(OS)的关系。选取2019年6月1日至2021年6月30日绍兴市人民医院收治的LUAD伴恶性胸腔积液患者72例,应用免疫组化法检测胸水细胞蜡块KCa3.1表达,分析其与临床特征及预后的关系。结果生物信息学分析和临床资料分析提示,LUAD患者KCa3.1表达水平明显高于正常肺组织(P<0.05),KCa3.1高表达和低表达患者性别、年龄、吸烟情况、T分期、N分期、肺外转移情况、表皮生长因子受体基因突变情况比较差异均无统计学意义(均P>0.05),KCa3.1高表达患者OS低于低表达患者(P<0.05)。结论KCa3.1在LUAD患者中高表达,且与不良预后有关,提示KCa3.1可作为LUAD患者诊断和预后判断的潜在靶点。

REST在宫颈鳞状细胞癌组织中表达及其对KCa3.1的影响

目的探讨抑制元件l沉默转录因子(REST)在宫颈鳞状细胞癌组织中表达及其对电导钙激活钾离子通道(KCa3. 1)的影响。方法收集宫颈鳞状细胞癌组织、癌旁组织和正常宫颈组织,采用免疫组化、qRT-PCR分别检测不同组织中REST的蛋白和mRNA表达量。Ch IP-qPCR检测REST在KCa3. 1启动子区抑制元件1(RE1)位点处富集程度。结果宫颈鳞状细胞癌、癌旁、正常宫颈组织中REST基因相对表达量分别为0. 46±0. 06、0. 89±0. 13、1. 00±0. 12;宫颈鳞状细胞癌中REST基因相对表达量较癌旁组织和正常宫颈组织分别下降48%、54%;宫颈鳞状细胞癌、癌旁、正常宫颈组织中KCa3. 1基因表达量分别为2. 14±0. 35、1. 18±0. 21、1. 00±0. 13,宫颈鳞状细胞癌中KCa3. 1基因表达量较癌旁组织和正常宫颈组织分别上升81%、114%。在宫颈鳞状细胞癌组织中REST的蛋白表达和mRNA转录水平较正常宫颈组织和癌旁组织下调(P均<0. 05)。KCa3. 1的表达量在宫颈鳞状细胞癌中较癌旁组织及正常宫颈组织增加(P均<0. 05)。REST能与KCa3. 1启动子区RE1位点结合,且宫颈鳞状细胞癌组织中REST在KCa3. 1启动子RE1位点处的富集程度低于正常宫颈组织和癌旁组织(P均<0. 05)。结论 REST通过与KCa3. 1启动子RE1位点处结合负调控KCa3. 1表达。REST表达下调降低了对KCa3. 1基因表达的抑制,导致KCa3. 1基因表达量上升,增强KCa3. 1的活性,促进宫颈鳞状细胞癌的发生发展。