长毛风毛菊提取物治疗肾性水肿的化学成分和作用机制研究

目的阐明藏药长毛风毛菊的药效及化学成分,探讨其有效成分、关键靶点和相关通路,明确其治疗肾性水肿的作用机制。方法将SD大鼠分为空白组、阿霉素诱导肾性水肿模型组,长毛风毛菊给药低剂量组、高剂量组。测定血清生化指标,探讨各组总蛋白(total protein,TP)、尿素氮(blood u-rea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(serum total cholestero,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL-C)、高密度脂蛋白(high density lipopro-tein,HDL-C)指标的情况。采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技术对藏药长毛风毛菊的化学成分进行分析;在SwissTargetPrediction、GeneCards数据库分别获取长毛风毛菊化学成分靶点和肾性水肿靶点,取交集获得治疗肾性水肿作用靶点;通过STRING数据库进行蛋白互作分析;利用Metascape平台进行gene ontology(GO)功能和京都基因和基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路分析;将药物、靶点等导入到Cytoscape3.7.2构建“药物-成分-靶点-疾病-通路”网络图。筛选出排名靠前的6个基因和12个有效成分,通过分子对接技术验证网络药理预测的准确性,揭示长毛风毛菊治疗肾性水肿的作用机制。结果大鼠血清中TP、HDL-C指标上调,BUN、SCr、TC、TG和LDL-C指标均下调。从藏药长毛风毛菊提取物中共鉴定了71个化合物,包括7个苯丙素类、16个绿原酸类和39个黄酮类等成分。通过预测得出75个长毛风毛菊治疗肾性水肿靶点,GO富集共涉及生物过程、细胞组分、分子功能3个方面,KEGG富集结果显示PI3K/AKT、AGE-RAGE、MAPK等是显著通路。分子对接结果显示,有效成分与关键靶点结合能Vina评分均小于0,高效验证了网络药理预测的准确性。结论该研究基于药效学实验,结合UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定、网络药理学分析和分子对接技术,表明长毛风毛菊能够治疗肾性水肿,可能通过调控PI3K/AKT、AGE-RAGE、MAPK信号通路中TP53、PI3K、AKT等相关靶点来发挥作用。

长毛对虾酸性磷酸酶的纯化与性质

分别从健康和患病长毛对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｐｅｎｉｃｉｌａｔｕｓ）肌肉提取一种酸性磷酸酶（ＡＣ－Ｐａｅ，ＥＣ．３．１．３．２．），进一步用硫酸铵分级分离，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱纯化，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，并于ＢｅｃｋｍａｎＤＵ－８Ｂ紫外分光光度计扫描为单一区带酶液。该酶紫外吸峰在２８０ｎｍ处，荧光激发峰在２８４ｎｍ处，发射峰在３４７ｎｍ处。酶的分子量为７３０００道尔顿，等电点为４．７酶水解对硝基苯磷酸二钠（ＰＵＰＰ）最适ｐＨ为４．５，最适温度４０℃。健康虾与病虾酶的活化能分别为４１．０３ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ和４５．７８ｋＪ／ｍｏｌ·Ｌ，米多常数ｋｍ值分别为０．８０×１０－４ｍｏｌ／Ｌ和１．４３×１０－４ｍｏｌ／Ｌ。重金属离子Ｃｕ２＋，Ｈｇ２＋，有机溶剂甲醇，乙醇，乙二醇等对ＡＣＰａｓｅ有明显的抑制作用。

长毛对虾精子发生的研究——Ⅰ.精子的形态结构

利用电子显微镜技术结合细胞化学染色方法,研究长毛对虾精子形态结构,结果显示:长毛对虾精子由圆球状球体部和钉子状棘突部组成;精子全长约7μm;棘突及与之相联的球体表面平滑无突起,而与棘突相对的球体底面有指状突起。透射和冷冻蚀刻电镜显示:长毛对虾精子棘突包括顶体锥和顶体帽两部分;顶体锥向外突出形成精子的棘突,顶体帽覆盖在球体部的胞质及核区上方。成熟精子胞质极度退化,仅靠顶体帽边缘可见1—2个线粒体。球体的中央区域为近球形,呈Feul-gen阳性反应,为精子的核区。其结构松散,电子密度低,属非浓缩型,内布许多絮状物质,外由许多长短不一的膜性结构不规则排列成不连续的核膜结构。研究结果认为:长毛对虾精子属不动无鞭毛精子类型,其棘突部并非鞭毛结构而是顶体的位置。

长毛对虾精子的发生过程

于1989－1994年每年4－5月，在福建省漳浦县海区采集长毛对虾，以雄虾精巢为材料，应用光镜和电镜技术研究长毛对虾的精子发生情况。结果表明，长毛对虾精子的发生可划分为精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞及精子5个阶段。精原细胞染色质呈团块状分布在核内膜，胞质电子密度低，呈嗜酸性，细胞紧密排列在一起；初级精母细胞核糖体密度高，胞质呈现嗜碱性；次级精母细胞经历减数分裂变化；精子细胞变态过程主要表现在顶体的形成，顶体由粗糙型内质网演变形成；成熟精子由圆球状的主体部和钉子状的棘突部组成，核染色质属非浓缩型，呈絮状弥散分布于核内，精子全长约为7μm。

加州新小绥螨对朱砂叶螨不同螨态的捕食选择性及与拟长毛钝绥螨功能反应比较

加州新小绥螨是世界商品化品种,近年在国内首次发现。本文在25℃,RH(80±5)%,光周期16L:8D的条件下研究了加州新小绥螨雌成螨对朱砂叶螨3种螨态(卵、幼螨及若螨)的捕食喜好性,并与拟长毛钝绥螨对朱砂叶螨的功能反应进行了比较。结果表明,相对于朱砂叶螨卵(Ci为-0.09)与幼螨(Ci为-0.07),加州新小绥螨更喜食若螨(Ci为0.06)。当朱砂叶螨卵密度高于20粒时或若螨密度高于15头时,加州新小绥螨的捕食量显著高于拟长毛钝绥螨。两种捕食螨对朱砂叶螨3种螨态的功能反应均为HollingⅡ型,加州新小绥螨对朱砂叶螨3种螨态控制能力(a'/Th值)均强于拟长毛钝绥螨。加州新小绥螨对朱砂叶螨卵、若螨的理论最大捕食量分别比拟长毛钝绥螨的高出35.0%、37.1%;对幼螨的理论最大捕食量仅比拟长毛钝绥螨低8.0%。

金属离子对长毛对虾酸性磷酸酶的影响

本文研究几种金属离子分别对健康虾和病虾酸性磷酸酶ACPase（EC3．1．3．2）活力的影响。结果表明，Ni2＋、Mg2＋、Cd2＋对酶无明显抑制作用，Zn2＋、Cu2＋、Hg2＋对酶活力抑制明显。当Hg2＋离子浓度达0．5mmol／dm3时，酶活力被抑制96％（健康虾）和95％（病虾）；各金属离子对酶的抑制强度依次为Hg2＋＞Cu2＋＞Zn2＋＞Pb2＋＞Cd2＋、Mg2＋＞Ni2＋；健康虾酶对Hg2＋、Cuv、Zn2＋、Pb2＋敏感性大于病虾酶。随着Cu2＋、Hg2＋浓度加大，抑制作用增强，表现为竞争性抑制类型，抑制常数Ki值分别为1．6×10－4mol／dm3和和1．0×10－4mol／dm3。不同浓度Hg2＋离子分别与酶作用后，测定酶的紫外吸收光谱和荧光发射光谱，从光谱的变化表明，Hg2＋离子影响酶活力同时也影响酶的构象。

长毛风毛菊中苯丙素类化学成分研究

目的:对长毛风毛菊中的苯丙素类化学成分进行分离鉴定。方法:运用硅胶柱色谱、高效液相制备色谱分离纯化,根据波谱数据确定化合物结构。结果:从长毛风毛菊中分离得到7个苯丙素类化合物,分别鉴定为:伞形花内酯(1)、东莨菪内酯(2)、咖啡酸(3)、七叶内酯(4)、茵芋苷(5)、东莨菪苷(6)、绿原酸(7)。结论:其中,化合物3、4、7为首次从该植物中分离得到。

长毛对虾、短沟对虾和日本对虾的染色体研究

目前,利用高新技术,如实行生殖和遗传操作进行对虾品种改良的设想正在中国、美国、澳大利亚和日本等国加紧实施,但对虾遗传和生殖学研究尚欠深入,限制了这项研究的进展。其中对虾染色体知识的贫乏和研究技术的短缺就是突出的一例。

长毛对虾卵子皮层反应的研究

Morphology of the cortical reaction in the eggs of Penaeus penicillatus was studied with the light microscopy,scanning electron microscopy and transmission electron microscopy. The cortical reaction is divided into four stages. These stages are unreacted stages, early stages, corona stages and dissipation stage. The cortical rods were released and formed a jelly coating around the surface of the egg. The jelly coating remained until the first cleavage had finished. In the end, the hatching membrane appeared around the egg. It is believed that these cortical reaction are responsible for the prevention of polyspermy by both a chemical and physical block and that also may establish a microenvironment inside a touch chorionic membrane for the developing embryo.

长毛风毛菊化学成分的研究

从长毛风毛菊地上部分分离得到9种化合物,经化学和光谱方法鉴定它们为:东茛菪素(E_1)、伞形花内酯(E_2)、柯伊利素(E_3)、木犀草素(E_4)、牛蒡子甙(B_1)、茵芋甙(B_2)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖甙(B_4)、紫丁香甙(B_5)和一种新的倍半木脂素(Sesquilignan)(E_5),暂定名为Saussol.

长毛三脉紫菀化学成分的研究

目的研究长毛三脉紫菀的化学成分。方法采用柱层析(CC)对植物中的提取物进行分离提纯,并利用现代波谱方法分析鉴定,确定化合物的结构。结果从该植物的乙酸乙酯部分分离出5个化合物,它们的结构分别鉴定为:(-)-Angelicoidenol-2-O-β-D-glucopyranoside(1),(-)-Angelicoidenol-2-O-β-D-Apiofuranosyl-(1→6)-β-D-glucopyrano-side(2),正十六烷酸(3),亚油酸(4),亚油酸甲酯(5)。结论5个化合物均为首次从该植物中分离获得。

乙二醇对长毛对虾酸性磷酸酶活力与构象的影响

应用荧光光谱、紫外差示光谱及园二色性光谱等生物物理技术研究长毛对虾酸性磷酸酶经乙二醇微扰后的分子构象变化情况，结果表明乙二醇对酶分子构象有显著的影响。酶的内源荧光强度随乙二醇浓度增大而增强，Ｔｙｒ、 Ｔｒｐ残基的微环境发生明显的变化；紫外差示光谱在 ２２０和 ２７５ｕｍ出现２个负峰，而 ２３６ｕｍ出现正峰， ２２０和２３６ ｕｍ的差吸收与酶分子主链去折叠有关，而 ２７５ ｕｍ主要与 Ｔｒｐ残基微环境变化有关；乙二醇变性后，酶的园二色性光谱变化说明酶分子二级结构也发生了明显的变化。比较酶在乙二醇溶液中失活与去折叠的关系，结果表明：酶在乙二醇溶液中的失活作用明显快于构象的变化，说明酶活性中心处于对变性剂乙二醇较为敏感的区域。

长毛对虾杆状病毒病研究

近年我国沿海各省市养殖对虾发生了特大的暴发性流行病，造成了极大的损失。本文报道１９９３年长毛对虾（ＰｅｎａｅｕｓｐｅｎｉｃｉｌｌａｔｕｓＡｌｃｏｃｋ）暴发性流行病的症状与危害，在病虾中肠、肝胰腺上皮细胞的细胞核和细胞质中以及腹肌纤维间质细胞质等组织中发现了大量的无包涵体的具有囊膜的Ｃ亚群杆状病毒，描述了该病毒的分布和形态特征及其引起宿主细胞的主要病理变化等，而正常虾组织无这些情况，为一类新的病毒病。

长毛对虾酸性磷酸酶功能基团的研究(Ⅱ)

用化学修饰剂pCMB、NBS、K试剂修饰长毛对虾Penaeuspenicilla－tusAlcock酸性磷酸酶（ACPase，EC3．1．3．2），在修饰剂作用下，酶活力明显下降，健康虾酶对修饰剂的敏感性（NBS除外）大都稍大于病虾酶。修饰酶的紫外280um吸收光谱以及荧光340um发射光谱的变化，表明酶活力下降的同时酶构象也产生相应的变化。结果表明，酶分子的半胱氨酸残基、色氨酸残基以及门冬氨酸、谷氨酸β或γ验基与酶活力有关，是酶的催化功能基团。

长毛对虾精子形成的超微结构

于1993－1994年在厦门海区采集长毛对虾雄性成虾，取其精巢、输精管和精荚，采用JEM－100CXll透射电镜观察长毛对虾精子形成过程的超微结构，并根据项体形成过程中超微结构的变化进行分期。结果表明：长毛对虾精于形成过程可分为早期精子细胞、中期精子细胞、晚期精子细胞及成熟精子四个时期。在早期精子细胞阶段，细胞质中含有丰富的粗面内质网，其周围分布着许多大小不一的囊泡，囊泡融合成前顶体囊，囊内合成前项体颗粒物质。中期棘突原基形成。后期棘突原基进一步浓缩，并向前突出。成熟精子期整个前顶体囊分化为棘突和内、外顶体层．在精子形成过程中，细胞质先囊泡化后移至细胞的一极，同时不断减少，最后只剩下一些残余的扁平小泡样膜相结构，成一薄层包绕于细胞核外。细胞核也经历了三次形态变化，染色质从去浓缩变成弥散状态到重又浓缩为凝絮状；随着发生过程中精子染色质的变化，核膜也崩解，至成熟精子已无完整核膜存在。这些结果说明，长毛对虾与大多数十足目动物类似，精子的顶体物质系由粗面内质网合成。细胞核内染色质的演化，推测与其核骨架与核蛋白的演化是相对应的，是DNA与蛋白质相互作用的结果。

长毛对虾磷酸酯酶的研究

从长毛对虾 (Penaeuspenicillatus)头胸部、肌肉分别提取纯化碱性磷酸酶ALPase(EC 3 1 3 1)和酸性磷酸酶ACPase (EC 3 1 3 2 ) ,经快速蛋白液相色谱 (FPLC)检测AL Pase ,聚丙烯酰胺凝胶电泳以及等电聚焦电泳检测ACPase ,得到单一纯酶 .ALPase紫外特征吸收峰在 2 78nm处 ,荧光激发峰在 2 82nm处 ,发射光谱特征峰在 340nm处 .ACPase在 2 80nm处有紫外吸收特征峰 ,荧光激发峰在 2 84nm处 ,发射峰在 347nm处 .分别测定了酶的相对分子质量、亚基数、氨基酸组成、等电点、酶水解对硝基苯磷酸二钠 (pNPP)的最适温度 ,最适pH ,米氏常数Km 值 ,金属离子Mg2 +、Cu2 +、Hg2 +,有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇 ,化学修饰剂BrAe、NBS、pCMB等以及蛋白质变性剂胍、脲等对酶活力的影响 .比较研究健康虾和病虾ACPase酶活力及酶动力学特征常数的变化 (健康虾酶Km=0 0 8mmol/L ,病虾酶Km=0 143mmol/L) .病虾酶Km 值明显增大 ,表现对底物亲和力下降 .活化能明显增大 (健康虾酶 4 1 0 3kJ·mol- 1 ·L- 1 ,病虾酶 4 5 7kJ·mol- 1 ·L- 1 )表明酶的催化能力下降 .

长毛对虾必需氨基酸的研究

分析了不同体长组的长毛对虾生化组成和必需氨基酸(EAA)的可能种类。结果表明:(1)长毛对虾的最主要生化物质蛋白质的含量似有随体长增长(40 mm至 104 mm)而升高。但糖类含量较稳定;(2)注射~3H-葡萄糖后测得 Glu,Asp,Ser,Pro,Gly,(Cys)_2和 Ala等带有较强的放射性,长毛对虾可能从葡萄糖合成这些氨基酸。而极少或甚至没有~3H 参入到Met,Thr,He,Leu,Val,Arg,His,Lys,Phe,Tyr和Trp中。这些可能是长毛对虾的EAA。

铜、汞和铬对长毛对虾幼体的急性毒性

在水温为28±0.5℃,盐度为32‰的条件下,采用静态更新法研究了铜、汞、铬对长毛对虾(Pe-naeus penicillatus Alcock)各期幼体的急性毒性效应.结果表明,长毛对虾幼体对铜、汞、铬的耐受性都随着幼体从无节期变态到仔虾期而逐渐增强,且三种重金属的毒性顺序为汞>铜>铬.根据仔虾的96h LC_(50)值计算的铜、汞、铬的安全浓度分别为0.0408、0.00067、0.370mg/L,而根据仔虾对铜的96h LC_(50)所估算的铜对无节幼体较为稳妥的安全浓度为0.0002mg/L.

长毛红山茶和长尾红山茶的核型分析

长毛红山茶(Camelliav uillosa Chang et S.Y.Liang)和长尾红山茶(C.longicaudata Chang et S.Y.Liang)均为张宏达教授定的新种,分别隶属于山茶属(Camellia)红山茶组(Sect.Camellia)的滇山茶亚组(Subsect.Reficulala)和光果红山茶亚组(Subsect.Lucidissima),前者分布在我国的湖南、广西和贵州,后者分布在广东和广西。 红山茶组共有33个种、1个亚种,7个变种。根据文献资料统计,该组作过染色体计数的有10个种,1个亚种和6个变种,作过核型分析的有4个种、1个亚种和2个变种。本文对该组的长毛红山茶和长尾红山茶的核型作首次报道,并与该组的10个种,1个亚种和6个变种的染色体数目或核型作了比较。