检测抗人疱疹病毒6型IgG的间接免疫荧光试验的建立及其应用

目的 :建立检测血清中人疱疹病毒 6型 (HHV 6 )IgG的间接免疫荧光试验 (IFA)。方法 :用HHV 6国内分离株感染人脐带血单个核细胞制备抗原片 ,建立检测HHV 6IgG的IFA方法 ,并用于育龄期妇女血清流行病学调查。结果 :建立的IFA具有特异性。对 116份育龄期妇女血清标本检测表明 ,HHV 6IgG的阳性率为 72 .4 % ,几何平均滴度 (GMT)为 1∶6 1;在孕妇和正常未孕妇女之间 ,以及不同孕期的孕妇之间 ,HHV 6IgG的阳性率和GMT均无差异 (P >0 .0 5 )。结论 :建立了具有特异性的IFA法 ,可用于对育龄妇女HHV

间接免疫荧光试验在西尼罗病毒抗体检测中的初步应用

目的了解人群血清西尼罗病毒(WNV)抗体存在的本底,探讨WNV与乙型脑炎病毒(JEV)的免疫交叉反应。方法以新兵入伍健康体检时收集的男性血清347份为检测标本,应用建立的间接免疫荧光试验(IFA)对WNV与JEV的IgG抗体进行检测。结果血清WNV和JEV的抗体阳性率分别为3.2%(11/347)和5.7%(14/244);在同时检测了两种病毒抗体的244份标本中,有3份两者均为阳性,分别占WNV和JEV抗体阳性数的60%(3/5)和21%(3/14)。结论人群对WNV缺乏免疫力,JEV抗体对WNV的交叉免疫作用有一定的局限性。

测鸭出血症病毒间接免疫荧光试验的建立

为寻求一种检测鸭出血症病毒 (duck hemorrhagic disease virus,DHDV)快速、敏感、实用的方法 ,建立了间接免疫荧光试验 ,并测定了一抗 (兔抗鸭出血症病毒阳性血清 )、二抗 (FITC标记的羊抗兔 Ig G)的最佳使用浓度及最佳感作时间分别为 1∶ 2 0、6 0 m in和 1∶ 10 0、6 0 min。以建立的间接免疫荧光试验检测了 DHDV于番鸭胚成纤维细胞中的复制动态 ,结果表明 ,接毒后 36～ 6 0 h为 DHDV大量复制期 ;6 0～ 12 0 h为 DHDV从核膜以出芽方式进入胞浆中成熟的阶段 ;12 0～ 14 4 h为大量 DHDV自胞浆中释放至胞外阶段。该方法快速、特异 ,可用于该病的实验室诊断。

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析

目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18U/mL为阳性,12～18U/mL为可疑,≤12U/mL为阴性。结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%。经卡方检验P<0.01。其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499。结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法。同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性。

间接免疫荧光试验在HIV抗体检测中的应用

[目的 ]评价间接免疫荧光试验 (IFA)作为一种确认实验在 HIV抗体检测中的应用。 [方法 ]用 T嗜性的HIV毒株感染 MT4细胞制备抗原片 ,并与不同稀释度的免疫血清相结合 ,再滴加荧光素标记的羊抗人 Ig G,在荧光显微镜下检测特异性免疫荧光。 [结果 ]用 IFA检测 43份血清样本 (其中包括 17份 WB阳性血清 ,14份阴性血清和 12份EL ISA阳性或 WB出现可疑条带但按标准不能判为阳性的可疑血清 ) ,除 HIV- 2血清呈阴性反应外 ,其余检测结果与WB相符。 IFA对 HIV- 1抗体检测的敏感性和特异性均达到 10 0 %。 HIV- 1阳性血清抗体最高滴度达到 1∶ 10 2 40。 [结论 ]IFA可用于 HIV- 1抗体检测的确认 ,它可作为 Western Blot的一种补充或替代实验。

马疫锥虫间接免疫荧光试验测定抗双链DNA抗体和抗核抗体

用马疫锥虫间接免疫荧光试验测305例血清抗双链DNA(dsDNA)抗体和抗核抗体(ANA),其中包括50例系统性红斑性狼疮(SLE),43例其它结缔组织病(CTD),76例银屑病,82例其它疾病和52例正常人对照。结果表明全部23例活动期SLE患者显示抗dsDNA和ANA阳性反应,27例非活动期SLE患者抗dsDNA仅1例阳性而ANA24例(88.9％)阳性。其它各组除1例播散性盘状狼疮和1例肺癌外,抗dsDNA均为阴性反应。

间接免疫荧光试验检测抗核抗体的前带效应分析

目的探讨间接免疫荧光试验(IIFA)检测抗核抗体(ANA)中的前带效应对ANA荧光滴度的影响。方法将880例血清样本以1∶100稀释进行手工检测,筛选ANA荧光滴度≥1∶1 000的样本分别以1∶100、1∶1 000、1∶10 000稀释检测,统计有前带效应(1∶1 000稀释比1∶100稀释荧光亮)的样本数;将前带效应的样本采用欧蒙Sprinter XL全自动荧光加样仪和EUROPattern全自动荧光分析仪检测ANA(1∶100稀释),与手工法检测ANA(1∶100稀释)进行比较,检测前带效应样本的特异性自身抗体,分析其荧光模型、荧光滴度及阳性特异性自身抗体的分布特点。结果有明显前带效应的样本数为34例,占总样本数的3.86%,占高滴度(≥1∶1 000)ANA样本数的29.57%。通过手工法检测或通过Sprinter XL全自动荧光加样仪检测均发现前带效应,其荧光模型及荧光滴度相似,值得注意的是,EUROPattern只能选取图片中间区域判读。在有前带效应的血清样本中,以荧光滴度≥1∶10 000最常见(74.42%)。在荧光模型方面,以斑点型最为多见(46.51%)。在特异性自身抗体的分布方面,以抗核糖核蛋白(RNP)抗体最多见(62.79%),其次为抗双链DNA抗体(51.16%)和抗SSA抗体(51.16%)。结论 IIFA检测高滴度ANA样本在低稀释度时容易产生前带效应,从而导致错误的ANA荧光滴度判断,临床检验实验室应引起重视。

间接免疫荧光试验检测登革IgG的应用

１９９５年广东省番禺等市发生登革热流行，应用间接免疫荧光试验检测５８份待测登革ＩｇＧ的标本，３８份阳性，阳性率６５．５２％（３８／５８）；检测疑似登革热患者早期血标本５１份，用Ｃ６／３６细胞分离出２８株登革Ｉ型病毒，阳性率５４．９０％（２８／５１）．证实本次流行是登革Ｉ型病毒所引起，二者检出率差异无显著性（Ｘ２＝１．２８，Ｐ＞０．０５）。ＩｇＧ最早检出于发病后第三天，一周后达高峰，患者血清中各型登革ＩｇＧ呈高度交叉反应，不能分型，其平均几何滴度在１：１００以上。此外，ＩＥＡ检测确诊登革病人血清９份。ＩｇＧ阳性率为１００％，滴度范围为１：１６０－１：１２８０：检测非登革血清３３６份，滴度１：４０有１５份，１：８０有１份，阳性率为４．７６％。此法检测登革ＩｇＧ，方法简单、敏感、快速、经济。结果表明：病后一周取检，ＩｇＧ抗体滴度达１：８０以上，对诊断为登革热感染有参考意义。

间接免疫荧光法和酶联免疫吸附试验对抗中性粒细胞胞质抗体检测方法的结果比较

目的探讨临床间接免疫荧光法和临床酶联免疫吸附试验对抗中性粒细胞胞质抗体临床检测方法的结果比较。方法选取2018年1月至2019年1月在沈阳金域医学检验所有限公司实验室诊断部的抗中性粒细胞胞质抗体临床检测样本200例,并进行临床间接免疫荧光法(IIF)和临床酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的临床一致性比较。结果两种临床方法的一致性较好且差异具有临床统计学意义(P<0.05)。结论临床间接免疫荧光法和临床酶联免疫吸附试验法单独检测抗中性粒细胞胞质抗体均有漏检,临床联合检测的效果最佳,值得在临床上进一步推广。

间接免疫荧光试验与酶联免疫吸附试验在肺炎支原体检测中的比较分析

目的探讨间接免疫荧光试验与酶联免疫吸附试验在肺炎支原体中的检测效果。方法选取2015年3月—2017年4月我院收治的疑似肺炎支原体感染患者650例,入院后完善相关检查,均采用间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验法检测肺炎支原体,比较不同方法的检测效果。结果650例患者最终均得到确诊,89例患者检测出肺炎支原体IgM抗体阳性,检测率为13.69%。间接免疫荧光试验IgM抗体阳性,检出率为13.54%,酶联免疫吸附试验IgM抗体阳性检出率为13.38%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论间接免疫荧光试验和酶联免疫吸附试验用于肺炎支原体检测中各有优缺点,应根据患者的病情及医院实际情况选择合适的检测方法。

间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹试验检测自身免疫性肝炎抗体的效果

目的分析采用间接免疫荧光法与蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测自身免疫性肝炎(AIH)抗体的效果。方法选择2017年2月—2018年6月云南省滇南中心医院(红河哈尼族彝族自治州第一人民医院)收治的231例肝炎患者作为研究对象,包括AIH组(33例)、病毒性肝炎组(136例)、原发性胆汁性肝硬化(PBC)组(59例)和原发性硬化性胆管炎(PSC)组(3例);另选择同期63名健康体检者作为健康对照组。采用间接免疫荧光法检测AIH中抗核抗体(ANA),采用Western blotting检测抗线粒体抗体M2(AMA-M2)、抗肝/肾微粒体抗体Ⅰ型(LKM-1)、抗可溶性肝抗原抗体/肝胰抗原抗体(SLA/LP)、抗平滑肌抗体(ASMA)与抗肝细胞溶质抗原Ⅰ型抗体(LC-1)等。结果ANA在AIH组、PBC组、PSC组的阳性检出率明显高于病毒性肝炎组和健康对照组〔72.73%(24/33)、88.14%(52/59)、66.67%(2/3)比30.15%(41/136)、6.35%(4/63),均P<0.05〕;AIH组中LKM-1、LC-1、SLA/LP、ASMA的阳性率以及PBC组中AMA-M2的阳性率均明显高于病毒性肝炎组和健康对照组〔LKM-1:15.15%(5/33)比0.74%(1/136)、0.00%(0/63),LC-1:9.09%(3/33)比0.00%(0/136)、0.00%(0/63),SLA/LP:3.03%(1/33)比0.00%(0/136)、0.00%(0/63),ASMA:57.58%(19/33)比0.74%(1/136)、0.00%(0/63),AMA-M2:93.22%(55/59)比4.41%(6/136)、0.00%(0/63),均P<0.05〕。结论临床上针对AIH抗体采用间接免疫荧光法联合Western blotting检测,具有较高的诊断效率,值得推广应用。

高致病性猪生殖与呼吸综合征病毒间接免疫荧光鉴别方法的建立

应用2株针对猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的单克隆抗体(McAb-A61,McAb-C65)建立了对PRRSV美洲株、欧洲株和高致病性毒株进行鉴别的间接免疫荧光试验(IFA)方法,并与商品化的PRRSV RT-PCR鉴别试剂盒进行比较。结果显示,McAb-C65与PRRSV美洲株和高致病性PRRSV毒株均呈阳性反应;McAb-A61与PRRSV美洲株呈阳性反应,但不与高致病性PRRSV毒株发生反应;2株单抗都不与欧洲株反应;IFA与RT-PCR的符合率为100%。表明,建立的PRRS间接免疫荧光鉴别诊断方法可为临床高致病性PRRS的确诊提供可靠的验证手段。

间接免疫荧光法与ELISA检测抗核抗体、抗双链DNA抗体的比对分析

目的探讨间接免疫荧光法(IIFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗核抗体(ANA)和抗双链DNA(ds-DNA)抗体的异同。方法抽取确诊或疑为自身免疫性疾病患者血清125例,同时采用IIFA法和ELISA法检测ANA82例,抗ds-DNA抗体检测57例,其中14例同时检测ANA和抗ds-DNA抗体。对两种方法检测结果不符者采用免疫印迹法复查抗可溶性核抗原(ENA)。结果82例ANA阳性率IIFA法与ELISA法分别为87.8%和73.17%,差别有统计学意义(P<0.01);57例血清中抗ds-DNA抗体检测阳性率IIFA法与ELISA法分别为77.19%和71.93%,差别无统计学意义(P>0.05)。采用不同cutoff值时两种方法符合率比较,ANA、抗ds-DNA抗体检测结果差别均有统计学意义(P<0.01)。两法对一些稀有核型ANA检测符合率较低,而抗ds-DNA抗体的符合率在不同核型上没有差异。ANA检测以1:100为cutoff滴度,抗ds-DNA抗体以弱阳性为cutoff值时,两种方法可获得较高的符合率,但在检测滴度1:100ANA、弱阳性抗ds-DNA抗体时两种方法存在明显的不一致。结论IIFA法检测总ANA、抗ds-DNA抗体的敏感性均高于ELISA法,IIFA法作为ANA的筛查方法,阳性标本再进行ELISA法检测,可在获得荧光核型信息同时观察抗体滴度的变化情况,并且更快捷经济。两种或多种不同方法学原理的实验互相佐证,有助于减少实验误差。

弓形虫感染间接免疫荧光检测试剂盒的检测效果评价

目的研制检测弓形虫IgG抗体的间接免疫荧光(IFA)检测试剂盒。方法在成功建立弓形虫感染IFA检测方法的基础上,构建人弓形虫感染IFA检测试剂盒。对弓形虫阳性血清、羊抗人FITC-IgG的最佳稀释浓度进行优化。对试剂盒的敏感性、特异性、稳定性和保存期等进行评价,并与国外同类试剂盒比较。结果弓形虫阳性血清、羊抗人FITC-IgG的最佳稀释浓度分别为1∶40和1∶100。该试剂盒可检测到弓形虫阳性血清的最大稀释倍数为1∶640,与恶性疟、间日疟、血吸虫病、棘球蚴病和囊尾蚴病患者血清均无交叉反应,但与类风湿因子阳性患者血清有交叉反应。该试剂盒的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Youden指数分别为90.9%、100%、100%、96.2%和97.2%和0.91,而国外同类试剂盒分别为100%、98%、95.7%、100%和98.6%和0.98,两种试剂盒的敏感性和特异性间差异无统计学意义(P>0.05)。结论该试剂盒检测弓形虫IgG抗体敏感性和特异性较高。

白菜组织细胞微管间接免疫荧光检测体系的优化

利用正交试验设计,从酶浓度、酶解时间、一抗稀释度、二抗稀释度4种因素3个水平对白菜组织细胞微管的间接免疫荧光检测体系进行了优化,确立了适合白菜组织细胞的微管免疫荧光检测体系———果胶酶和纤维素酶浓度均为1.0%,酶解时间1h;一抗稀释浓度1∶100,孵育时间1h;二抗稀释浓度1∶500,孵育时间1h。使用优化后的微管免疫荧光检测体系在荧光显微镜上能够快速观察到白菜组织细胞内的微管。

酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体方法的比较

目的比较酶联免疫吸附法（ELISA）和间接免疫荧光法（IIF）检测抗dsDNA抗体的检出情况及符合率。方法用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法同时检测286份临床疑为系统性红斑狼疮（SLE）的病人血清。结果286份样本中ELISA法捡出31例抗dsDNA抗体阳性，255例抗dsDNA抗体阴性，而在ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性中IIF法检测仅有13例阳性，阳性符合率仅为41．94％。ELISA法检出的255例抗dsDNA抗体阴性标本中IIF法检测有255例阴性，职性符合率100％。ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率有显著性差异。结论ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率差异有统计学显著性意义（P〈0．05），ELISA法检测抗dsDNA抗体简便、快速、设备要求不高，可以用于大批量的抗dsDNA筛壹，但因为特异性不高，假阳性较多，因此有条件的实验室最好采用IIF法对阳性结果进行复检确认。

H9亚型禽流感病毒间接免疫荧光检测方法的建立与比较

将禽流感病毒(AIV)接种犬肾上皮细胞(MDCK),24h后以鸡抗禽流感抗体和兔抗鸡荧光抗体进行间接免疫荧光试验(IFA),结果于细胞核、细胞质内观察到特异性的荧光。利用96孔细胞板培养MDCK细胞,以间接免疫荧光作为判定指标对禽流感病毒进行毒力测定,并与禽流感病毒通用荧光反转录-聚合酶链反应(荧光RT-PCR)检测方法进行比较。结果表明间接IFA、荧光RT-PCR对同一样品检测的最高稀释度分别为10-5.25TCID50和10-6,Ct<30,两种方法对禽流感病毒的检测敏感性均很高。但由于荧光RT-PCR仅对抽提的RNA进行检测,而间接IFA是对禽流感活病毒进行检测,因此在临床样品检测和动物产品检疫中间接IFA更具准确性和实用性。

间接免疫荧光法测定新城疫病毒滴度的研究

为快速确定新城疫病毒含量,以鸡抗新城疫病毒多克隆抗体为一抗、FITC标记的兔抗鸡IgG为二抗,通过对反应条件优化,建立了检测新城疫病毒含量的间接免疫荧光法(IFA)。结果显示:IFA最佳时间是病毒感染后4 d,一抗最佳稀释度为1∶100,二抗最佳稀释度为1∶200。利用该方法对新城疫病毒不同毒力毒株进行滴度测定,并与常规的致细胞病变(CPE)观察法相比,表明IFA方法在测定弱毒株含量时优势明显,其敏感性高于CPE方法,且结果可靠,易判定,有望应用于新城疫活疫苗的生产。

应用HEV ORF2蛋白McAb间接免疫荧光法检测HEV的研究

应用抗猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2蛋白单克隆抗体和猪戊型肝炎病毒多克隆抗血清对感染猪戊型肝炎病毒的A549细胞培养物进行了间接免疫荧光检测病原的比较研究。单克隆抗体(McAb)进行的间接免疫荧光染色后,HEV感染细胞培养物中多数细胞在其胞浆和细胞膜上出现黄绿色荧光,未接种病毒的细胞培养物被伊文思蓝染成红色,未见有黄绿色荧光染色的细胞存在;多克隆抗血清对接种病毒的细胞培养物染色后,荧光强度高,呈现亮绿色,但未接种HEV的细胞培养物亦有一定的非特异性荧光反应。结果表明,利用所研制的抗HEVORF2蛋白McAb进行间接免疫荧光法对病原检测具有很高的特异性。