核桃花中绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸的提取工艺优化及其抗氧化活性研究

目的探讨干燥核桃花中绿原酸、隐绿原酸和新绿原酸的最佳提取工艺及其抗氧化活性。方法采用超声波辅助乙醇法提取核桃花中的绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸,以提取温度、乙醇体积分数、提取时间和料液比为自变量,以得率的总评归一值(overall desirability,OD)为因变量,应用响应面对提取工艺进行优化,并通过体外实验评价了其抗氧化活性。结果最佳提取工艺为:温度77℃、乙醇体积分数67%、提取时间28 min,料液比1:23(g/mL)。此时,绿原酸、新绿原酸和隐绿原酸的总提取率最佳,OD值可达0.91,对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐[2,2’-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)ammonium salt,ABTS]阳离子自由基和羟自由基的半数抑制浓度(half-maximal Inhibitory concentrations,IC50)值分别为41.63、41.68和34.43μg/mL。结论优选出的工艺稳定可行,且提取液具有较好的体外抗氧化活性,为核桃花中绿原酸类成分的进一步开发利用提供了理论基础。

UPLC法测定金宁口服液中绿原酸、隐绿原酸、橙皮苷、蒙花苷的含量

目的建立超高效液相色谱法(UPLC)测定金宁口服液中绿原酸、隐绿原酸、橙皮苷、蒙花苷含量的方法。方法采用Acquity BEH C18(2.1mm×100mm,1.7μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水为流动相,梯度洗脱;流速0.3mL/min;检测波长300nm;柱温40℃。结果金宁口服液中绿原酸、隐绿原酸、橙皮苷、蒙花苷在10min内达到基线分离并进行了含量测定。结论该方法快速、简便,线性关系、精密度和准确度良好,可作为金宁口服液多成分的质量控制方法。

UPLC法测定银翘解毒口服液中牛蒡苷、蒙花苷、绿原酸、隐绿原酸

目的采用UPLC测定银翘解毒口服液中牛蒡苷、蒙花苷、绿原酸、隐绿原酸。方法色谱柱:C18(2.1mm×100mm,1.7μm),流动相:乙腈-0.1%甲酸水进行梯度洗脱,检测波长300nm,流速0.3mL/min,柱温40℃。结果所检测的各色谱峰分离度良好,方法学实验结果符合UPLC法测定要求。结论该方法可用于银翘解毒口服液的质量控制。

隐绿原酸对H9N2-AIV致小鼠肺损伤的免疫调节和抗氧化效果

为探讨隐绿原酸(4-CQA)对感染H9N2亚型禽流感(H9N2-AIV)病毒的小鼠造成肺损伤的修复作用,将90只6~8周龄健康昆明系小鼠随机分为病毒(H9N2)感染组、H9N2+4-CQA组、空白对照组、4-CQA对照组,用H9N2-AIV滴鼻复制小鼠肺损伤模型并灌胃4-CQA干预。观察各组小鼠肺组织病理学变化;测定肺指数及肺内丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、髓过氧化物酶(MPO)含量;测定脾内T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD8^(+)百分比及比率(CD4^(+)/CD8^(+))。结果显示,H9N2组小鼠表现出精神沉郁、呼吸急促;肺指数上升、脾指数下降;肺组织病理学表现为肺泡萎缩、肺泡隔增厚、局部肺实变;T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比率显著下降(P<0.05);肺内T-SOD活性显著下降、MDA含量显著增加、MPO活性显著升高(P<0.05)。4-CQA干预后,小鼠肺指数下降、脾指数上升;肺组织病理学损伤减轻;T淋巴细胞亚群CD4^(+)/CD8^(+)比率显著上升(P<0.05);肺内T-SOD活性显著升高,MDA含量显著降低,MPO活性显著下降(P<0.05)。得出4-CQA可通过维持机体免疫平衡、降低机体氧化损伤来缓解由H9N2亚型AIV诱导的小鼠肺损伤。

UHPLC-MS/MS法同时测定大鼠血浆中汉黄芩素、隐绿原酸和白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量

建立了UHPLC-MS/MS同时测定大鼠血浆中的汉黄芩素、隐绿原酸和白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量的方法。以芹菜苷为内标,采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相,流速为0.2 mL·min-1。结果表明,汉黄芩素、隐绿原酸和白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷线性范围为1~1 000 ng·mL^(-1)(R2>0.99),最低定量浓度为1 ng·mL^(-1),提取回收率、基质效应均符合生物样品分析要求。建立的方法灵敏、准确,可用于大鼠血浆中汉黄芩素、隐绿原酸和白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷的测定及其药代动力学研究。

HPLC法同时测定野马追药材中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定野马追药材中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸的含量。方法 Phenomenex C18(250×4.6mm,5μm);流动相:乙腈:0.2%醋酸水溶液(11:89);流速为1.0m L/min,检测波长:327nm,柱温:30℃。结果绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸的回收率分别为100.03%、100.09%、99.97%;线性范围分别为0.34~6.8μg、0.41~8.2μg、0.29~5.8μg。三种成分的线性关系良好,精密度、稳定性、重复性的RSD均低于3%。结论该方法简便,准确,灵敏,为野马追的质量控制提供了参考。

UPLC法测定不同产地白术中新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的含量

目的建立同时测定不同产地白术中新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的UPLC质量分数的方法。方法采用UPLC-DAD法,色谱柱为Waters BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm);流动相为乙腈-0.1%(质量分数)H3PO4,梯度洗脱;流速为0.25 mL/min;检测波长为325 nm;柱温为25℃。结果新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的平均加样回收率分别为90%(RSD=2.0%)、93%(RSD=1.2%)、89%(RSD=1.5%),n=6。结论本方法简便、准确,适用于白术中新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸的质量分数测定。

HPLC同时测定小儿金宁口服液中绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、柚皮苷、橙皮苷和蒙花苷

目的:建立HPLC同时测定小儿金宁口服液中绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、柚皮苷、橙皮苷、蒙花苷6个成分的方法。方法:Lichrospher C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈(A)-0.4%磷酸水溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(10∶90～18∶82～27∶73),流速(0.8～1.1～0.8)mL.min-1,柱温30℃,检测波长300 nm。结果:6种成分均能达到基线分离,各成分都有较宽的线性范围和良好的线性关系,加样回收率在95%～105%。结论:本法快速、准确、可靠、重复性好,可为小儿金宁口服液的质量控制提供参考依据。

绿原酸、隐绿原酸和新绿原酸在中性和碱性pH条件下的降解动力学

本文研究了绿原酸(5-CQA)及其同分异构体隐绿原酸(4-CQA)和新绿原酸(3-CQA)在中性和碱性p H条件下的降解规律。结果表明,3-、4-、5-CQA在酸性p H条件下较为稳定,在中性和碱性p H条件下不稳定,且随碱性的增强,降解越强烈,转化成的CQA总量越低,但并不生成咖啡酸。同时,3-CQA和5-CQA在水解时更趋向于转化为4-CQA,而4-CQA水解时更趋向于转化为3-CQA,而非5-CQA。通过比较中性和碱性p H条件下3-、4-、5-CQA的降解动力学参数发现,反应速率常数k值的大小顺序为4-CQA>3-CQA>5-CQA,降解半衰期t_(1/2)值的大小顺序为4-CQA<3-CQA<5-CQA,说明在中性和碱性p H条件下三者的稳定性顺序为4-CQA<3-CQA<5-CQA。

UHPLC-Q-TOF/MS鉴定大鼠体内隐绿原酸的代谢产物

目的定性分析隐绿原酸在大鼠血浆、尿液和粪便中的代谢产物。方法大鼠给予隐绿原酸后,采集血液、尿液和粪便并进行样品处理,采用UHPLC-Q-TOF/MS法检测各生物样品中的代谢产物。结果通过相应的色谱保留行为、精确相对分子质量、特征碎片离子、质谱裂解规律、文献报道以及对照品比对,最终分析鉴定了47个代谢产物。其主要体内代谢途径为水解反应、异构化反应、甲基化、氢化、葡萄糖醛酸化以及它们的复合反应。结论UHPLC-Q-TOF/MS法能较全面地鉴定隐绿原酸在大鼠体内的代谢产物,有助于进一步阐明隐绿原酸的药效学物质基础。

一测多评法测定藏茴香中异绿原酸A、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C

目的建立一测多评法(QAMS)测定藏茴香中6种咖啡酰奎宁酸类成分含量,并验证该方法在藏茴香质量评价中应用的可行性与适用性。方法取藏茴香粉末(过三号筛)0.5 g,精密加入70%甲醇20 mL,超声处理(250 W、频率53 kHz)30 min,制备供试品溶液;采用Phenomenex GeminiR C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,检测波长为330 nm,体积流量1.0 mL·min^(−1),柱温30℃,进行专属性、供试品提取条件、检测波长选择、色谱条件、线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率方法学考察,建立异绿原酸A、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C成分含量检测的HPLC法;以异绿原酸A为内参成分,分别计算新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C 5种成分的相对校正因子,分别采用3种不同色谱仪和3种色谱柱进行相对校正因子、相对保留时间耐用性考察,对藏茴香样品同时采用外标法与QAMS测定6种成分的质量分数,比较2种测定方法结果的差异。结果建立的6种成分的HPLC检测方法的专属性、供试品提取条件、检测波长选择、色谱条件、线性关系、精密度、重复性、稳定性、加样回收率均符合要求;新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C的相对校正因子平均值分别是1.362、1.257、1.335、1.470、1.134,3种不同色谱仪和3种色谱柱对相对校正因子、相对保留时间均无明显影响;QAMS与外标法2种方法测定3批藏茴香样品中6种成分得到的结果之间无显著差异。结论建立的QAMS简便、准确、可靠,可用于藏茴香中6种咖啡酰奎宁酸类成分——异绿原酸A、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C的定量分析。

绿原酸及其同分异构体对人血浆阿司匹林酯酶活性的影响

目的探究绿原酸及其同分异构体对人血浆阿司匹林酯酶活性的影响。方法以高效液相色谱法测定阿司匹林酯酶体外培养体系中水杨酸(SA)和阿司匹林(ASA)的浓度,以CSA/(CASA+CSA)反映阿司匹林酯酶的活性。通过空白对照组和添加单体成分的实验组间阿司匹林酯酶活性的变化来分析各成分对阿司匹林酯酶活性的影响。结果实验组与空白对照组之间差异没有显著性。结论在本实验浓度下,绿原酸及其同分异构体对酯酶影响不明显,为临床同时使用阿司匹林与含有该类化合物的中药或中药制剂提供理论依据。

高效液相色谱法测定青梅花、枝、叶中绿原酸类化合物

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定青梅非果部位(花、枝、叶)中新绿原酸(NCA)、绿原酸(CA)及隐绿原酸(CCA)3种绿原酸异构体的含量。方法:采用高效液相色谱法梯度洗脱,使用LunaC18色谱柱,以体积分数2%乙酸溶液和乙腈为流动相,二极管阵列检测器在波长328nm处进行检测。结果:该方法线性范围宽,3种绿原酸异构体的线性范围均为5～200μg/mL,NCA、CA、CCA的检出限分别为0.21、0.16、0.29μg/mL,定量限分别为0.76、0.50、0.98μg/mL,测得青梅花、枝、叶的30%乙醇提取物中3种绿原酸异构体的总含量分别为(48.26±0.11)、(10.82±0.04)、(21.33±0.08)μg/g。结论:该方法简便、快速、准确,青梅花、枝、叶是优良的绿原酸类化合物天然资源。

一测多评法同时测定枇杷叶标准汤剂中3种绿原酸

目的建立一测多评法同时测定枇杷叶标准汤剂(枇杷叶)中3种绿原酸的含量。方法该药物50%甲醇提取液的分析采用Agilent 5 HC C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm);流动相乙腈-0.4%磷酸,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长327 nm。以绿原酸为内标,建立新绿原酸、隐绿原酸的相对校正因子,测定其含量。结果绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸在各自范围内线性关系良好(r>0.999 6),平均加样回收率97.22%~97.66%,RSD 1.16%~1.85%。一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法简便可靠,耐用性好,可用于枇杷叶标准汤剂的质量控制。

野地瓜茎中3种绿原酸提取工艺的优化及抗氧化活性研究

以野地瓜茎中新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸得率的总评归一值为评价指标,采用响应面设计对野地瓜茎回流提取工艺进行优化。利用DPPH自由基和ABTS^(+)自由基清除率评价不同提取工艺下野地瓜茎提取物的抗氧化活性。结果表明,野地瓜茎提取物中3种绿原酸得率最佳的提取工艺为乙醇浓度63%、提取温度72℃、料液比1∶26(g/mL),经验证试验总评归一值为0.9201±0.0230。与预测值(0.9280)的偏差为0.85%,二项式拟合效果好;最佳工艺下野地瓜茎提取物对DPPH自由基、ABTS^(+)自由基清除活性的半数抑制浓度(IC_(50))分别为(24.32±0.52)、(67.52±0.89)μg/mL;相关性分析显示3种绿原酸对DPPH自由基和ABTS^(+)自由基清除能力贡献显著。

超高效液相色谱法测定清咽糖中6种绿原酸类化合物的含量

目的建立超高效液相色谱法同时测定清咽糖中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸6种绿原酸类化合物的含量。方法采用Agilent Eclipse Plus C18 RRHD色谱柱(2.1 mm×150 mm, 1.8μm),以乙腈、0.4%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长327 nm,柱温35℃。结果 6种成分在相应的线性范围内呈良好的线性关系。精密度、重复性、稳定性实验中6种成分峰面积的相对标准偏差均小于3.0%,平均加样回收率为93.77%~104.37%,相对标准偏差为0.28%~1.86%。结论该方法具有良好的专属性和重现性,加样回收率实验符合要求,结果准确、稳定,适用于同时测定清咽糖中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、3,4-O-二咖啡酰基奎宁酸、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸和4,5-O-二咖啡酰基奎宁酸的含量。

HPLC法同时测定青钱柳叶中绿原酸等4种多酚酸的含量

目的:建立青钱柳叶代用茶中绿原酸等4种多酚酸含量HPLC分析方法。方法:样品经过70%甲醇水溶液80℃水浴提取2小时,采用反相高效液相色谱外标法,色谱柱C18(250×4.6mm,5μm),流动相乙腈-0.1%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速1.0ml/min,柱温30℃,进样量20ul,4种多酚酸检测波长326 nm。结果:新绿原酸(0～84ug/ml范围呈良好的线性关系,相关系数1,加标回收率98.86%,精密度RSD为0.79%);绿原酸(0～102ug/ml范围呈良好的线性关系,相关系数1,加标回收率104.5%,精密度RSD为0.76%);隐绿原酸(0～110ug/ml范围呈良好的线性关系,相关系数0.999,加标回收率98.73%,精密度RSD为0.72%);咖啡酸(0～64ug/ml范围呈良好的线性关系,相关系数1,加标回收率99.97%,精密度RSD为0.73%)。用此法检测青钱柳叶代用茶,其中绿原酸含量较高约2.0～19mg/kg;隐绿原酸和新绿原酸含量较低约0.2～1.5mg/kg;不含咖啡酸。结论:该方法可以同时完成4种多酚酸的有效分离、定性和定量,标准曲线线性关系良好、检测结果可靠、样品前处理简单、检测操作过程便捷,可以作为青钱柳叶代用茶质量控制的检测方法。

反相高效液相色谱法同时测定脉络宁注射液中6种酚酸类成分的含量

目的建立用反相高效液相色谱法同时测定脉络宁注射液中6种酚酸含量的方法。方法采用Kromasil-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;流速:1.0mL/min;紫外检测波长:327nm;柱温:25℃;进样量:20μL。结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸的线性范围分别为0.01090～0.5448μg(r=0.9999)、0.02406～1.2032μg(r=1)、0.01106～0.5528μg(r=1)、0.01594～0.7968μg(r=1)、0.009104～0.4552μg(r=1)、0.01037～0.5184μg(r=1),回收率分别为101.06%、100.22%、101.54%、99.42%、100.21%、101.65%。结论本法灵敏简便,准确可靠,可作为脉络宁注射液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸含量同时测定的方法。

一测多评法测定降脂宁颗粒中的3种有机酸类成分含量

目的:建立以绿原酸为内参物,测定降脂宁颗粒中君药山楂所含的3个有机酸类成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸)含量的一测多评(QAMS)方法。方法:采用Thermo Ultimate 3000液相色谱仪,以Waters X-bridge C_(18)色谱柱,流动相乙腈-1%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长326 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温30℃进行测定。以绿原酸作为内参物,建立制剂中其他2种指标性成分的相对校正因子,从而计算各待测成分的量,并与外标法的测定结果进行比较,对该方法进行可行性验证。结果:在各待测成分的线性范围内,降脂宁颗粒中的绿原酸与新绿原酸、隐绿原酸2种有效成分的校正因子重现性良好,分别为1.07、0.99;采用一测多评法测定有机酸类成分含量与外标法的含量测定结果无显著性差异。结论:以绿原酸为内参物,建立的一测多评结果准确可靠,可用于降脂宁颗粒多指标成分的质量控制。

一测多评法同时测定艾叶配方颗粒中6个酚酸类成分

目的建立一测多评(QAMS)法测定艾叶配方颗粒中6个酚酸类成分的含量,并验证其准确性及可行性。方法采用UPLC法,色谱柱为Waters ACQUITY UPLC HSS T3(150 mm×2.1 mm,1.8μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速为0.3 mL·min^(-1);检测波长为325 nm。以绿原酸为内参物,计算新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的相对校正因子(?)。同时采用外标法和QAMS法测定艾叶配方颗粒中6个酚酸类成分的含量,比较2种方法的测定结果是否存在差异。结果新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C在各自质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.999);?分别为1.00、0.94、1.20、1.25、1.16。QAMS法与外标法测得13批样品中6个酚酸类成分的含量结果无显著差异,相对误差均小于1.2%。结论建立的QAMS法测定结果准确,可用于艾叶配方颗粒的定量分析及质量控制。