几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞相容性的实验研究

为了观察几丁质及几丁糖对雪旺氏细胞生长的影响，用新生Ｗｉｓｔｅｒ鼠坐骨神经及臂丛神经的雪旺氏细胞接种于几丁质膜片及几丁糖液上，在培养１，３，７天时用光镜及扫描电镜进行观察。发现，几丁质及几丁糖上生长的雪旺氏细胞占９４％，成纤维细胞占６％；对照组雪旺氏细胞占７１％，成纤维细胞占２９％。几丁糖内的细胞数多于几丁质膜片上的细胞数。认为，几丁质及几丁糖与雪旺氏细胞有着良好的组织相容性，几丁糖液优于几丁质膜片，两者均可抑制成纤维细胞的生长。

雪旺氏细胞培养方法的比较

目的 :寻找一个快捷、简便、获取大量雪旺氏 (Schwann)细胞的培养方法 ,旨在为临床 Schwann细胞的自体移植提供实验基础。方法 :比较了 4种 Schwann细胞培养方法 ,即植块反复种植法、单细胞悬液法、阿糖胞苷抑制成纤维细胞生长法和刺激因子增殖法。结果 :植块反复种植法加刺激因子 forskolin和 BTI可使Schwann细胞的产量明显高于其它组 ,Schwann细胞纯度可达 98% ,且成纤维细胞明显减少。结论 :植块反复种植法加刺激因子 forskolin和 BTI为 Schwann细胞培养的最佳方法。此方法简便、快速 ,可在短时间内获得大量

几丁质室内植入雪旺氏细胞对神经再生影响实验研究

采用生物材料几丁质制成的管道作为神经再生室，对大鼠坐骨神经缺损１２ｍｍ进行桥接。在几丁质室内植入粗品雪旺氏细胞（ｒｓｃ）和不植入ｒｓｃ，并与骨能肌桥接进行了比较。术后４、８、１２周进行大体观察、显微解剖、神经电生理测试、辣根过氧化酶（ＨＲＰ）逆行示踪、组织学检查和电镜观察。结果：植入和不植入ｒｓｃ在术后８周近端再生神经纤维均与远端纤维连接，但不植入ｒｓｃ再生神经的形态、方式和大鼠肢体功能的恢复明显优于植入ｒｓｃ和肌桥。

不同方法共移植的嗅鞘细胞和雪旺氏细胞在损伤脊髓内的迁移和对轴突再生的影响

目的:观察经不同方法共移植的嗅鞘细胞和雪旺氏细胞在脊髓内的迁移特点和对轴突再生的影响。方法:将8只75±1d雌性SD大鼠随机分为2组,每组4只,利用NYU打击器制作T10脊髓损伤模型,打击高度25mm,打击杆重量10g。造模后2周,一组采用联合移植,雪旺氏细胞移植于损伤部位中心,嗅鞘细胞移植于距离损伤中心0.5mm处的头侧和尾侧的脊髓中线上;另一组采用混合移植,将嗅鞘细胞和雪旺氏细胞混合后移植于距离损伤中心0.5mm处的头侧和尾侧的脊髓中线上。每个部位注射4个点,深度为1.75mm、1.25mm、1mm、0.5mm,注射速度为0.1μl/min。联合移植组嗅鞘细胞量每点0.5μl含5×104个,雪旺氏细胞量为每点1μl含105个雪旺氏细胞;混合移植组为每点1μl含嗅鞘细胞和雪旺氏细胞各5×104个。细胞移植后1周和8周时各组分别取2只大鼠,以损伤部位为中心取包含细胞移植部位的脊髓,荧光和共聚焦显微镜下观察细胞迁移情况,利用神经丝(neurofilment,NF)和生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)免疫荧光染色观察移植细胞对轴突再生的影响。结果:两组中均可见嗅鞘细胞迁移,主要在灰质和白质内沿脊髓纵轴向损伤部位迁移,还分别有一小部分沿中央管和蛛网膜下腔迁移;但雪旺氏细胞仅在与嗅鞘细胞混合移植于距离损伤中心0.5mm处的头侧和尾侧脊髓时才可见有限距离的迁移。联合移植时,NF阳性(NF+)和GAP-43阳性(GAP-43+)纤维伴随嗅鞘细胞迁移而沿脊髓纵轴延伸,雪旺氏细胞移植处可见NF+纤维从各个方向长入损伤部位(移植部位)并互相缠绕;混合移植时,大量NF+纤维伴随移植细胞迁移而延伸,损伤部位虽然NF+纤维较少,但没有互相缠绕现象。结论:雪旺氏细胞在损伤脊髓内迁移能力差;嗅鞘细胞不仅具有良好的迁移能力,而且可促进雪旺氏细胞迁移。无论是联合移植还是混合移植,移植细胞均能促进轴突再生,但联合移植时雪旺氏细胞移植处再生纤维互相缠绕、无法延伸。

脊神经节来源的人胎儿雪旺氏细胞的体外培养研究

实验介绍一种简便快速的从人胎儿脊神经节中获得雪旺氏细胞的方法.取孕15～20周人胎儿腰部脊神经节,将其切成0.5mm^3大小,接种于涂有鼠尾胶的圆盖玻片上,为了消除成纤维细胞,每隔2～3天将组织块移种到新的盖玻片上,共2～3次,最后一次移种后,培养液中加入牛脑垂体浸出液(200μg/ml)培养7～10天以刺激细胞增殖,每个脊神经节可获细胞5×10~6,细胞传代培养生长良好.根据形态学以及抗S—100蛋白免疫细胞化学染色阳性标准计数,雪旺氏细胞的纯度超过96%.扫描电镜和透射电镜显示典型的雪旺氏细胞的形态学特征.

LPS对大鼠雪旺氏细胞iNOS表达的影响

目的:探讨内毒素脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对大鼠雪旺氏细胞(Schwann cells,Scs)诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric-oxide synthase,iNOS)基因表达及一氧化氮(Nitric oxide,NO)生成的影响。方法:用不同浓度(1、10、100μg/ml)和同一浓度不同时间(1、2、4、6小时)的LPS刺激雪旺氏细胞,分别用RT-PCR和亚硝酸盐含量测定观察细胞iNOS mRNA的表达量和细胞培养液中亚硝酸盐的水平,同时用免疫荧光细胞化学染色检测iNOS的细胞定位。结果:用LPS10μg/ml刺激2小时后,iNOS mRNA的表达增加,4小时表达活性最高。细胞上清中的亚硝酸盐含量高峰在6小时。免疫细胞化学证明LPS诱导雪旺氏细胞iNOS的表达定位在胞浆。结论:LPS可在转录水平上诱导雪旺氏细胞iNOS mRNA表达,促进NO的合成,提示雪旺氏细胞在周围神经系统炎症过程中可能发挥免疫调节作用。

植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植修复周围神经缺损的实验与临床研究

目的 :研究修复周围神经缺损新的手术方法和验证胎儿神经、雪旺氏细胞对神经再生的作用。方法 :用80只大白鼠 ,随机分成三组 :A组自体神经移植组 ;B组单纯液氮冷冻胎儿神经组 ;C组液氮冷冻胎儿神经加自体雪旺氏细胞组。术后分别于 4,12和 2 4周取材 ,进行大体观察、组织学观察及电生理检测。临床应用胎儿神经加自体雪旺氏细胞修复周围神经缺损 32例 (4 5条 ) ,术后 1年进行神经功能评定 ,随访 1～ 3年。结果 :A ,C两组术后 4周开始再生纤维逐步增多 ,术后 2 4周再生纤维增粗并形成神经束 ,而B组再生纤维数目很少 ;复合动作电位峰值恢复率及传导速度恢复率A ,C两组恢复明显高于B组。临床应用 32例 (4 5条 )周围神经 ,按Seddon的周围神经损伤术后恢复评定标准进行评定 ,优良率为 6 5 .8%。结论 :植入自体雪旺氏细胞的胎儿神经移植是一种修复周围神经缺损的新方法 。

体外培养人胎儿雪旺氏细胞的增殖及其细胞动力学研究

新鲜和液氮保存3个月的人胎儿雪旺氏细胞体外培养8天,细胞数量增加一倍,培养液中加入二丁基环磷酸腺苷和牛脑垂体浸出液,细胞增倍时间缩短近一倍.流式细胞计测定结果显示,培养早期,S期、G2+M期细胞所占比例<5%,随着培养时间的延长,其比例逐渐增加,第6天达高峰,环磷酸腺苷和垂体浸出液作用3天,S期、G2期+M期比例达15%.实验结果表明:人胎儿雪旺氏细胞在体外增殖缓慢,环磷酸腺苷和垂体浸出液能刺激雪旺氏细胞分裂;冷冻复苏后的雪旺氏细胞其生长特征以及对环磷酸腺苷和垂体浸出液的反应与新鲜细胞相同.

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活性研究

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获得ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４３～６７Ｋｄ之间。经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５～５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓前角神经元表现出明显的体外成活作用。Ｄ蛋白带可能是一种有别于已知的ＳＣ源神经营养物质，其活性浓度达到了神经营养因子分子检测水平。

人胎儿雪旺氏细胞的体外培养及其纯化研究

本实验用酶消化法从孕１４～１９周人胎儿周围神经中分离培养雪旺氏细胞，结合差速贴壁和阿糖胞苷处理进行纯化，根据Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色和形态学特征，分析不同时期雪旺氏细胞的纯化程度。实验结果显示：培养４ｄ，倒置相差显微镜下观察，雪旺氏细胞呈典型的双极或三极形，端对端或旋涡状排列，Ｓ－１００蛋白免疫细胞化学染色呈阳性反应，其比例约占９８％；在２～３周内，雪旺氏细胞的纯度维持在８５％～９０％；培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占８０％；单纯采用阿糖胞苷或差速贴壁处理，培养３５ｄ，雪旺氏细胞约占７０％；原代培养９２ｄ，传代１１代细胞生长良好。实验结果表明，多种方法联合使用较单一方法所得的纯度高。本方法快速、简便，能为雪旺氏细胞作为移植材料提供足够的来源。

雪旺氏细胞基底膜成份-Laminin在神经再生中的作用探讨Laminin抗血清的活体应用及观察

实验用74只近交克隆系Wistar大鼠.切取供体神经,经冷冻和加热处理后,半数神经用正常兔血清处理,另半数用抗Laminin抗血清处理,然后分别植入对照组和实验组鼠体内.术后不同时间的电镜观察和统计数据表明:对照组再生轴突几乎都走在基底膜管内侧(92％),而实验组走在基底膜管内侧的轴突数(48％)与走在基底膜管外侧的轴突数(52％)几乎相等;轴突总数15天时实验组约为照对组的50％,30天时38％.实验组内轴突的长出时间较对照组晚约3天左右;实验组内巨噬细胞的数量和滞留时间均多于和长于对照组.这些结果表明Laminin在神经再生过程中不仅促进轴突生长成熟,引导神经方向性生长,亦对维持正常的再生微环境起了重要作用.

乳鼠雪旺氏细胞的纯化培养研究

目的：获得高纯度的乳鼠雪旺氏细胞。方法：采用出生后３～５天乳鼠的坐骨、臂丛神经，植块法培养乳鼠雪旺氏细胞；并通过精细剥除神经外膜、组织块反复再植、低浓度胰酶快速消化、差速贴壁法的有机结合对雪旺氏细胞进行纯化；继用抗Ｓ－１００蛋白单抗通过间接免疫荧光法及ＡＢＣ法进行细胞鉴定。结果：首次植块获得的细胞经纯化后雪旺氏细胞可高达８５％以上，反复植块者可达９５％，甚至高达９８％。结论：本方法简单、稳定，所获得的雪旺氏细胞纯度高、数量大。

雪旺氏细胞从冷冻人胎周围神经的分离技术及其特性

本研究取１５～２０周人胎周围神经，放在冷冻的含ＤＭＥＭ（４０％）、ＤＭＳＯ（１０％）及小牛血清（５０％）中。细胞活性为９１％。雪旺氏细胞经过分离、培养、保持了活性。经３～６月液氮保存后，细胞活性为９４％，雪旺氏细胞在４℃下经２４小时，活性仍有９２％。从新鲜周围神经取得的和经冷冻保存的以及单个培养的雪旺氏细胞，在培养时生长缓慢，但在培养液中加牛脑垂体提取液后，细胞增殖加快。取自新鲜或冷冻的周围神经的雪旺氏细胞用Ｓ－１００蛋白抗体染色的特性相似。本文还报告了分离出的雪旺氏细胞在扫描及透射电镜下的形态特征。

雪旺氏细胞对中枢神经轴突生长的支持和促进作用

胚胎大鼠脊髓植块接种于纯度>95%的单层人胎儿雪旺氏细胞表面进行培养,观察雪旺氏细胞对神经突起生长的支持作用.脊髓神经突起在雪旺氏细胞表面活跃生长,突起生长速度>450μm/天,与对照组相比有显著性差异(P<0.05).将长于鼠尾胶上的雪旺氏细胞移植于成年大鼠脊髓(T10～12)损伤腔内,移植后21天后,透射电镜观察,有髓或无髓纤维长入移植物中,移植后30天,长入移植物中的轴突更丰富,而无细胞的胶原移植物中未见轴突长入.结果表明,雪旺氏细胞在体内、外能支持和促进中枢神经轴突生长.

兔坐骨神经电损伤后区域雪旺氏细胞增殖变化及分析

目的比较成年兔坐骨神经分别受到75V电压损伤和横断伤后雪旺氏细胞增殖变化情况。方法建立兔坐骨神经电损伤和横断伤实验模型,选择损伤后第3、7、10天作为观察点,应用双酶消化法分离神经受损区域神经雪旺氏细胞并计数。结果75V电损伤后雪旺氏细胞数量明显要多于横断伤后的雪旺氏细胞数量。结论75V电损伤不能损伤雪旺氏细胞正常功能,电损伤后坐骨神经Wallerian变性比较快而全面是雪旺氏细胞数量增多的原因。

雪旺氏细胞植入Dacron人造管修复周围神经缺损的实验研究

用自体或异体雪旺氏细胞植入Ｄａｃｒｏｎ管，移植修复大鼠坐骨神经缺损。术后７、１５、３０天取材进行光镜观察，见植入自体雪旺氏细胞组，再生轴突数与再生轴实恢复享均优于不植入雪旺氏细胞组和异体雪旺氏细胞组，与自体神经倒转回植组结果相近。实验表明：自体雪旺氏细胞植入到渗透作用好、无排斥反应的人造Ｄａｃｒｏｎ管中，同时加入自体血浆作营养支持物，对周围神经再生有较好的促进作用，可望有临床应用前景。

腺样囊性癌中雪旺氏细胞标记物S100蛋白表达的超微结构观察

目的:从超微结构水平了解雪旺氏细胞标记物 S100蛋白在腺样囊性癌中的表达,进而分析腺样囊性癌中哪种细胞成份发生了雪旺氏细胞分化。方法:采用免疫电镜方法研究 S100蛋白,肌动蛋白(muscle actin,MA)在腺样囊性癌中的表达。结果:S100阳性细胞与 MA 阳性细胞具有相同的分布和超微结构。这种超微结构符合肌上皮细胞的超微结构特点。结论:腺样囊性癌中突变的肌上皮细胞可能发生了雪旺氏细胞分化。

体外培养雪旺氏细胞纯化方法的探讨

本文比较了雪旺氏细胞体外培养的主要纯化方法,单纯酶消化法、阿糖胞苷抑制法、差速贴壁分离法、低浓度酶传代法、综合纯化法,以寻找有效的纯化方法。结果显示,综合纯化法获得的SCs纯度最高。

培养中的雪旺氏细胞对脊髓前角神经元的营养作用

通过隔玻片ＳＤ大鼠瓦勒氏变性远段坐骨神经获得的雪旺氏细胞（ＳＣ）与胎龄１４天的ＳＤ大鼠胚胎脊髓前角神经元（ＳＡＨＮ）联合培养，用倒置显微镜、Ｎｉｓｓｌ染色、ＳＡＨＮ免疫学观察，证实培养中的ＳＣ具有维持神经元成活和促进突起生长的作用。在这二种神经营养因子作用下，脊髓前角神经元胞体增大，穷起生长可达数倍胞体长度。为认识和研究运用神经营养学说促进周围神经再生提供了新资料。