雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母中的高效表达及其酶学性质研究

采用同源克隆法获得了雪白根霉的脂肪酶基因(rnl),将其连接到pPICZαA载体上,得到重组表达载体pPICZαA-rnl。将表达载体pPICZαA-rnl用限制性内切酶SacI线性化后,电击转入毕赤酵母X-33中。雪白根霉脂肪酶基因在毕赤酵母X-33中成功表达,重组菌株摇瓶培养144 h后,酶活可达48 U/mL。重组酶最适pH值为8.5,最适反应温度为35℃。1 mmol/L的Mn2+,Ca2+和K+以及1%的表面活性剂吐温20,吐温80,曲通100对重组脂肪酶具有激活作用。重组酶的最适底物为三月桂酸甘油酯(C12)。

雪白睡莲花酚类成分研究

采用大孔树脂、硅胶、ODS RP-18和Sephadex LH-20柱从雪白睡莲的干燥花蕾中分离得到7个酚类成分,通过理化性质和波谱学方法鉴定化合物的结构,分别为:isostrictiniin(1)、老鹤草素(2)、鞣花酸(3)、短叶苏木酚(4)、Annulatin 3'-O-β-D-xyloside(5)、短叶苏木酚酸甲酯(6),1,2,3,4,6-五没食子酰基葡萄糖(7)。这些化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物1,2,5和6首次从该属植物中分得。

优化密码子及诱导温度提高雪白根霉脂肪酶在毕赤酵母中的表达

根据毕赤酵母密码子的偏好性,通过在线软件对雪白根霉脂肪酶基因(rnl)进行密码子优化。优化后的脂肪酶基因(rnl-opt)GC含量由原来的46%提高到49%,碱基A,T,C,G均匀分布,减少了AT和GC富集区,适应指数由0.82提升到0.85。将rnl-opt连接到表达载体p PICZαA并转入毕赤酵母X33中。将含有rnl和rnlopt的重组工程菌在摇瓶和50 L发酵罐中进行诱导表达。摇瓶培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活分别为458、956 U/m L。50 L发酵罐培养条件下,含有rnl和rnl-opt重组工程菌的最大酶活和总蛋白浓度分别为14 856、30 500 U/m L和3.61、7.8 g/L。为了进一步提高含rnl-opt重组工程菌的表达酶活,对其在50L发酵罐培养的诱导温度进行优化,当诱导温度为22℃时,含rnl-opt重组工程菌的酶活和细胞湿重均达到最大值分别为39 520 U/m L和461 g/L。相对于30℃,酶活和细胞湿重分别提高了30%和16%。

“很雪白”类结构形成的动因与基础

作为一种新出现的语言现象,“很雪白”类结构的形成有三方面的动因:人类思维的日益精密、语言形式的类推作用和韵律的调节作用。而这三种动因又必须依赖于以下三个条件:“很”的非程度义用法,“雪白”类词处在谓语位置以及构成单位的高频使用。本文从一个侧面说明,一种新语法形式的产生都是从个别现象的临时使用开始的,即“用法先于语法”。

雪白睡莲花中烟花苷的提取工艺研究

对烟花苷的提取工艺进行了研究。以烟花苷含量为评价指标,考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数对烟花苷提取率的影响。在单因素试验基础之上,设计四因素三水平正交试验,确定提取睡莲花烟花苷的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%,料液比1∶30(g/m L),提取时间0.5 h,提取次数3次。在此工艺条件下,睡莲花中烟花苷的平均含量为(3.213±0.029)mg/g。

雪白睡莲花活性成分对奶牛乳腺炎主要致病菌抑菌和抗炎作用研究

为了研究雪白睡莲花多糖、黄酮对奶牛乳腺炎主要致病菌的抑菌和抗炎作用,采用超声提取法提取雪白睡莲花活性成分(多糖、黄酮),然后采用牛津杯法结合倍比稀释法测定其抑菌圈、最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC),研究其对奶牛乳腺炎主要致病菌(大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、链球菌)的抑制效果;同时,通过二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验,观察其抗炎作用。结果显示,超声波提取雪白睡莲花多糖、黄酮的提取率分别为51.78%和12.00%;体外抑菌试验可知,金黄色葡萄球菌对多糖高敏,抑菌圈直径为23.01 mm±0.43 mm;雪白睡莲花黄酮对3种致病菌均有抑制作用,且可达高敏或中敏,抑菌圈直径为(13.30±0.27)mm~(24.07±0.72)mm;抗炎试验表明,与空白对照组相比,雪白睡莲花多糖、黄酮均能极显著降低二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀(P<0.01),肿胀抑制率分别为83.11%和65.15%。结果表明,雪白睡莲花多糖和黄酮均具有较好的抑菌抗炎作用,研究结果可为雪白睡莲花活性成分的开发利用奠定一定的理论基础。

雪白睡莲花粗提物对奶牛乳房炎主要致病菌体外抑菌和抗炎作用

为探索雪白睡莲花粗提物的体外抑菌和抗炎效果,用雪白睡莲花水提物、醇提物进行了体外抑菌试验,通过牛津杯法和倍比稀释法进行抑菌圈、最低抑菌浓度(MIC)及最低杀菌浓度(MBC)的测定,确定雪白睡莲花粗提物对奶牛乳房炎主要致病菌大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌及链球菌的抑菌活性,并采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法观察其抗炎作用。结果显示,雪白睡莲花水提物和醇提物对金黄色葡萄球菌抑菌效果最好,且水提物抑菌效果优于醇提物;醇提物对金黄色葡萄球菌抑菌效果优于对链球菌的,对链球菌抑菌效果优于对大肠埃希氏菌的。与空白对照组相比,雪白睡莲花水提物、醇提物能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀(P<0.01),雪白睡莲花醇提物抑制率优于水提物抑制率。研究结果为雪白睡莲花用于治疗感染相关疾病提供理论依据。

高速逆流色谱分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分

[目的]采用高速逆流色谱法(HSCCC)分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分。[方法]HSCCC分离过程分为两步,分别采用乙酸乙酯∶甲醇∶水(4∶1∶5)和乙酸乙酯∶正丁醇∶水(4∶1∶5)两个体系,固定相均采用上相,流动相均采用下相,流速为2.0 m L/min,主机转速设定为850 r/min,紫外检测波长为254 nm。高效液相色谱(HPLC)检测纯度。[结果]第一步从200 mg的睡莲花提取物中分离得到异槲皮苷(I,41.4 mg)、紫云英苷(II,40 mg)和一混合物85 mg;第二步从混合物中分离纯化得到isostrictiniin(III,50.1 mg)和烟花苷(IV,26.3 mg),上述4种物质的纯度分别为73.53%、92.42%、82.36%和85.65%。[结论]HSCCC可快速的分离纯化雪白睡莲花中的酚类成分。

PCR法快速检测耐热霉菌雪白丝衣霉

以耐热性霉菌——雪白丝衣霉为研究对象,根据Gen-bank公布的beta-tubulin基因序列,设计两对引物,经过PCR筛选,确定引物Bn-1用于建立雪白丝衣霉的PCR检测方法。对PCR法的扩增条件退火温度和引物浓度进行优化,59℃的退火温度和0.2μM/PCR反应体系的引物浓度为最佳条件;考察该PCR方法的灵敏度和特异性,基因组DNA的灵敏度为1ng/PCR反应体系,检测特异性好。该方法为雪白丝衣霉的快速检测提供了一种重要的技术手段。

雪白委陵菜化学成分的研究

目的研究雪白委陵菜Potentilla nivea L.的化学成分。方法雪白委陵菜80%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、半制备HPLC等进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为白桦酸(1)、熊果酸(2)、齐墩果酸(3)、古柯二醇(4)、barbinervic acid (5)、槲皮素(6)、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷(7)、山柰酚(8)、异鼠李素(9)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(10)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(11)、杨梅素(12)。结论所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

组织中环氧化酶-2蛋白在进展期结直肠腺瘤雪白征中的表达

目的分析组织中环氧化酶-2(COX-2)蛋白在进展期结直肠腺瘤(ACA)雪白征中的表达情况,探讨雪白征相关临床意义。方法采用Western blot方法分别检测雪白征阳性组和阴性组(每组40例)ACA患者腺瘤组织和瘤旁正常组织(距瘤组织远端>5 cm)COX-2蛋白的表达情况。结果雪白征阳性ACA患者在不同年龄差异有统计学意义(P=0.001),而在不同性别、吸烟与否、饮酒与否、不同民族、有无结直肠癌家族史、有无腹痛、有无腹泻、有无便秘、有无便潜血、肿瘤标志物是否正常方面差异均无统计学意义(P均>0.05)。雪白征阳性ACA多见于多发腺瘤(P=0.004)、较大腺瘤(P=0.006)、远端结肠(P=0.015)、突出型息肉(P=0.044)及晚期病理(P=0.010),雪白征阳性ACA在日本窄带成像技术专家小组分型差异无统计学意义(P=0.502)。雪白征阳性和阴性组腺瘤组织COX-2蛋白表达显著高于瘤旁正常组织(P<0.001,P=0.004),雪白征阳性组腺瘤组织COX-2蛋白表达显著高于雪白征阴性组(P=0.001),两组瘤旁正常组织COX-2蛋白表达差异无统计学意义(P=0.603)。结论雪白征阳性ACA多见于年龄较小、多发及较大腺瘤、远端结肠、突出型息肉及晚期病理。雪白征阳性ACA中COX-2蛋白表达显著高于雪白征阴性ACA,成人伴有雪白征的腺瘤比无雪白征的腺瘤容易癌变,具有更高的致癌风险。

雪白弯颈霉产环孢菌素发酵条件的优化

[目的]探讨雪白弯颈霉(Tolypocladium inflatum)产环孢菌素的最适发酵条件。[方法]采用正交试验,研究不同培养时间、培养基种类、装瓶量、菌种接种量(以菌片计)对雪白弯颈霉产环孢菌素的影响。[结果]在培养时间为4 d,发酵培养基为马铃薯200.00 g、甘露醇40.00 g、蛋白胨6.00 g,装瓶量为100 m L,菌片投放为9片时雪白弯颈霉产环孢菌素的发酵条件为最优。[结论]试验结果为提高雪白弯颈霉产环孢菌的产量提供了理论依据。

桦甸雪白南瓜栽培技术(下)

5.加强田间管理南瓜田间管理技术极为重要,要获得南瓜丰产丰收,必须科学地按南瓜生长发育规律进行管理。①药剂除草。公顷用50%乙草胺1—1.5公斤,对水300—400公斤,在播后芽前进行土壤封闭。②适时间苗定苗。当南瓜苗长出1—2片真叶时要进行间苗,每埯留两株。

桦甸雪白南瓜栽培技术(上)

桦甸市是吉林省最大的白瓜籽生产基地,年产白瓜籽约6250吨,生产的白瓜籽以个大、籽粒饱满、含油量高而享有盛誉,白瓜籽系列产品远销美国、俄罗斯及东南亚各国。

雪白睡莲盆栽技术要点

从介绍雪白睡莲盆栽栽培条件出发,总结了其栽培管理和休眠期管理措施,以及繁殖方式和病虫害防治方法。

“花儿”演唱技巧——以《雪白的鸽子》为例

"花儿",青海地区称为"少年",是流行于青海、甘肃、宁夏、新疆等省区的民歌,深受汉、回、藏、蒙古等民族的群众的喜欢,众口传唱,经久不绝;以其高扬的曲调、质朴风趣的唱词格律、直抒胸臆的情感表达和浓郁的民族韵味独树一帜。文章以《雪白的鸽子》为例,从作品的创作背景和作品形式特点入手,重点探讨"花儿"的演唱技巧。

雪白白僵菌产环孢菌素A分批补料发酵动力学

对在30 L发酵罐中雪白白僵菌发酵环孢菌素A的分批补料发酵过程进行了动力学研究。通过对环孢菌素A分批发酵数据进行分析,基于Logistic模型和Luedeking-Piret方程,建立了环孢菌素A发酵动力学模型,包括细胞生长、底物消耗和产物合成回归方程。应用Origin7.5软件对模型进行非线性拟合计算,建立的动力学模型与实验值拟合良好,能较准确反映环孢菌素A分批补料发酵动力学过程。

广汉雪白二号长棒苦瓜

广汉雪白二号长棒苦瓜系四川省广汉市蔬菜良种技术推广站1986年从广汉地方品种中选育的一个长棒形苦瓜品种,尤其以雪白、特早熟著称。

浅析青海“花儿”演唱实践中的风格把握——以声乐作品《雪白的鸽子》为例

我国幅员辽阔、人口众多,不同地域的地理人文风貌对地方音乐产生了不同的影响,不同地方的音乐的演唱形式、演唱风格、演唱技巧各不相同。我国青海甘肃一带流传着一种以“花儿”为名的歌唱形式,本文简要介绍“花儿”这一歌唱形式,并以花儿的代表曲目——《雪白的鸽子》为例,从演唱形式、演唱风格、演唱技巧等方面对其进行分析,希望为读者提供一些启示。

白鸽飞来引天籁之声——观第十二届金钟奖《雪白的鸽子》有感

"放歌十月·盛世金钟",2019年10月第十二届中国音乐金钟奖在成都举办,在本次民族声乐的赛区比赛中,由演唱《雪白的鸽子》的马小明夺得本次金钟奖民族声乐比赛的桂冠。通过马小明这一首《雪白的鸽子》,嘹亮高亢的歌声使我沉浸在大西北地区的民歌魅力之中。我们知道《雪白的鸽子》是一首著名的青海花儿,而通过此次比赛,使"花儿"这种民歌体裁更为广泛地受到我们的关注和认识。本文尝试从"花儿"入手,谈谈对此次金钟奖获奖作品——马小明《雪白的鸽子》的观感。