基于靶细胞萃取法的增液汤降糖作用的药效物质基础研究

目的采用靶细胞萃取法联合质谱手段,通过靶细胞萃取法遴选增液汤发挥降糖作用的物质基础。方法以增液汤提取物为研究对象,选取与增液汤降糖效应相关的关键靶细胞HepG2细胞、C2C12细胞和MIN6细胞,采用HPLC-Q-TOF-MS/MS对增液汤与相应靶细胞的结合成分进行分析,通过对比空白组、模型组、给药组的总离子流图,提取离子流对比文献与数据库鉴定增液汤降糖作用的潜在药效成分。结果遴选增液汤中能与相关靶细胞结合的活性成分,发现其中能和HepG2肝癌细胞结合的成分有4个,分别为Aucubin、Harpagide、p-coumaric acid、Harpagoside,4个成分均来自于君药玄参。有5个成分能和C2C12骨骼肌细胞结合,其中有4个成分来自于君药玄参,分别为Harpagide、p-coumaric acid、Cinnamic acid、Harpagoside;有1个成分Catalpol来源于生地。有4个成分能和MIN6胰岛细胞结合,分别为Aucubin、Harpagide、p-coumaric acid、Harpagoside,这4个成分均来自于君药玄参。结论Aucubin、Harpagide、p-coumaric acid、Harpagoside、Cinnamic acid、Catalpol可能为增液汤发挥降糖作用的潜在物质基础。

靶细胞提取和高效液相飞行时间质谱联用分析预测丹参中的活性成分

建立靶细胞提取和与高效液相飞行时间质谱联用(HPLC-ESI/TOFMS)分析相结合进行丹参活性成分研究的方法,对丹参中可能的活性成分进行了推测。将靶细胞和丹参样品一起孵育培养,根据活性成分可以与靶细胞膜有特异性的结合或者进入靶细胞内的原理,用HPLC-MS方法对培养后细胞破碎液中的成分进行分析。从加药Raw264.7细胞和Ecv304细胞破碎液中检测到丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸D、紫草酸、迷迭香酸及丹酚酸B7种丹参中成分,在加药的HL7702细胞破碎液中检测出丹参素、原儿茶醛、咖啡酸及丹酚酸B4种丹参中的水溶性成分。结果显示:细胞破碎液中检测的成分为丹参在靶细胞中有吸收的成分,本方法可用于预测中药中的活性成分。

转Wee1基因靶细胞抗CTL介导的细胞毒效应

目的 :研究Wee1转基因细胞抗CTL介导的细胞毒效应及抗穿孔素抗体对抗细胞毒效应的影响。方法 :体外混合NIT及淋巴细胞培养获得CTL ,并测定淋巴细胞增殖指数 (MTT法 ) ;采用脂质体将重组体Wee1Hu GFP导入哺乳动物细胞NIT ;以转染重组体前后的NIT为靶细胞 ,检测CTL介导的胞毒效应 (LDH法 ) ,同时测定抗穿孔素抗体对此效应的影响。结果 :混合细胞培养可诱导CTL的增殖 ;转染Wee1基因及加入抗穿孔素抗体NIT组发生的细胞溶解的数量最少。结论 :转Wee1基因靶细胞在一定程度上可抵抗CTL介导的细胞毒作用 ,穿孔素抗体可协同增强此抗胞毒作用。

基因Ⅳ型戊型肝炎病毒ORF3对靶细胞脂肪因子表达的影响

为了探讨戊型肝炎病毒ORF3影响靶细胞脂肪因子表达的分子机制,应用蛋白芯片技术比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的脂肪因子表达谱,筛选获得显著上调/下调的脂肪因子。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞,Fas和TIMP-2的表达水平升高,而ACE-2表达水平降低。研究结果为HEV ORF3对于靶细胞重要脂肪因子表达影响的分子机制研究提供了重要依据。

猪圆环病毒2型靶细胞及其受体的研究进展

猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)是统称为猪圆环病毒相关疾病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)的几个综合征的主要致病因子。目前,对PCV2配体表位和细胞受体在病毒入侵过程中的致病机理还不清楚,受体识别是病毒黏附到宿主细胞表面的第一步,在病毒入侵和致病机理方面起到重要的作用。作者对近几年来PCV2侵染的靶细胞及其靶细胞受体的研究进展作一综述。

心肌成纤维细胞成为基因靶细胞的可行性研究

目的探索心肌成纤维细胞成为基因靶细胞的可行性。方法采用改良的差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞并加以鉴定;利用携带新霉素抗性基因(neor)的假型逆转录病毒载体(VSV-G/MuLV)转导培养的乳鼠心肌成纤维细胞,用G418筛选法观察基因转导效果。结果成功建立高纯度心肌成纤维细胞培养模型;转基因后的心肌成纤维细胞经G418筛选后2周左右见大量克隆形成。结论假型病毒载体成功介导neor基因转导入心肌成纤维细胞,表明心肌成纤维细胞有望成为心血管疾病基因治疗的靶细胞。

表达HIV-1 gp160膜蛋白靶细胞的制备及鉴定

目的获得表达INV-1 gp160膜蛋白的靶细胞,用于HIV-1特异性细胞毒性淋巴细胞(CTL)和抗HIV-1重组毒素细胞杀伤活性检测。方法采用PCR方法,从质粒pJen 10中扩增HIV-1 gp160基因,插入pGEM-T载体,测序后克隆入pIRESl neo载体中构建成重组质粒pIRE160,酶切鉴定正确后,转染人肝癌细胞(SMMG-7721),CA18加压筛选至细胞不再死亡为止,并采用Western blot和间接免疫荧光法对制备的靶细胞进行检测。结果HIV-1 gp160在SMMC7721表面表达,并裂解为gp120和gp41蛋白。结论已成功得到稳定表达HIV-1 gp160的靶细胞,且表达的蛋白具有良好的特异性。

乙型肝炎病毒核心抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞作用的靶细胞的建立

目的建立ＨＢｃＡｇ特异性ＣＴＬ作用的靶细胞系统，为进一步研究ＨＢＶ基因变异对ＣＴＬ细胞毒效应的影响奠定基础。方法采用两种质粒ｐＸＴ１和ＥＢＯ－ｐｌｐｐ构建ＨＢＶＣ基因真核细胞表达载体并转染水生化Ｂ细胞，ＤＮＡ分析和流式细胞仪检测ＨＢＶＣ基因在宿主细胞中的复制、表达。结果在转染重组质植ｐＸＴ１－ＨＢＶｃ和ＥＢ０－ｐｌｐｐ－ＨＢＶｃ的Ｂ细胞中，均能检测到目的基因；分另有８９．８１％和８８．５１％的宿主细胞能检测到ＨＢｃＡｇ；连续培养３周后，分别有８８．３０％和７２．１９％的宿主细胞表达ＨＢｃＡｇ。结论重组逆转录病毒表达载体ｐＸＴ１－ＨＢＶｃ和ＥＢ病毒表达载体ＥＢＯ－ｐｌｐｐ－ＨＢＶｃ转染的永生化人外周血Ｂ细胞能有效地表达靶抗原（ＨＢｃＡｇ），可作为较为理想的ＨＢＶ特异性ＣＴＬ作用的靶细胞。

1α,25-双羟维生素D_3作用于靶细胞的机制

1α,2 5-双羟维生素 D3 [1 α,2 5(OH) 2 D3 ]作用于靶细胞后产生 2种不同的信号传导系统 :基因效应和非基因效应。前者是指 1α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D核受体 (n VDR)结合 ,n VDR再与视黄酸 X受体 (RXR)发生异二聚化反应 ,在转录因子 (TF)的作用下 ,促使靶基因转录。后者是指 1 α,2 5(OH) 2 D3 与维生素 D膜受体 (m VDR)结合 ,随之引发一系列信号传导 ,促使细胞膜上的 Ca2 +-通道迅速打开。探讨 1α,2 5(OH) 2 D3 的作用机制有利于开发治疗维生素 D内分泌系统疾病的新药。本文就目前有关 1 α,2 5(OH) 2 D3 作用于靶细胞的机制的研究成果进行综述。

基于戊型肝炎病毒中和表位HEV-p179的靶细胞的构建及应用

目的以HEV-p179编码基因为目的片段,构建并筛选戊型肝炎病毒(HEV)的靶细胞,评估HEV疫苗的细胞免疫活性。方法将p179编码基因克隆入pIRES质粒中,构建pIRES-179质粒;将pIRES-179重组质粒转染Sp2/0细胞,用G418压力筛选靶细胞;用间接免疫荧光法和western blot检测靶细胞中目的蛋白p179的表达;用HEV蛋白和基因疫苗免疫BALB/c小鼠,第6周分离小鼠脾淋巴细胞作为效应细胞,用MTT法对细胞进行细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤实验。结果成功构建重组质粒pIRES-179,转染Sp2/0细胞后,经G418的压力筛选,在800μg/mL筛选到单克隆细胞;间接免疫荧光法和western blot分析表明靶细胞能够有效地表达靶抗原p179;CTL杀伤实验结果表明,pVax-p179-C3d3重组质粒免疫组的杀伤活性为(58.26±4.36)%,p179蛋白免疫组为(37.24±3.71)%,对照组为(6.45±1.74)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论经G418压力筛选pIRES-179转染的Sp2/0细胞可作为HEV的靶细胞,用以评估HEV疫苗的细胞免疫活性。

细胞毒T细胞对靶细胞的杀伤机制研究进展

细胞毒Ｔ细胞对靶细胞的杀伤机制研究进展＊潘景轩１综述马涧泉２李树浓１审校ＣＴＬ怎样杀伤靶细胞？早期研究发现某些受ＣＴＬ攻击的靶细胞质膜上可见类似于受补体攻击所致的“空洞”，所以，长期以来，人们一直认为ＣＴＬ杀伤靶细胞的机制与补体类似。新近资料表明二者...

两种靶细胞在ADCC检测中的比较

选用绵羊红细胞 (SRBC)和鸡红细胞 (CRBC)作为靶细胞 ,用微量比色法检测人外周血单个核细胞 (PBMC)的抗体依赖细胞介导的细胞毒 (ADCC)活性。结果测得靶细胞对绵羊红细胞细胞毒指数为 9 0 3± 6 74 % ,对鸡红细胞的指数为 31 77± 16 2 7%。经t检验 ,有显著性差异 (t =4 75,P <0 0 1)。在 10例配对比较中 ,经相关性检验 ,对两靶细胞的指数具有显著相关性 (r =0 7152 ,P <0 0 5) ;经t检验 ,对两靶细胞的指数具有极显著差异 (t=4 33,P <0 0 1)。相同条件下 ,对CRBC的指数比SRBC的指数高。故认为 ,用CRBC作为靶细胞检测人PBMC的ADCC活性较好。

HIV-1包膜糖蛋白侵入靶细胞作用机制研究进展

在HIV 1感染宿主细胞过程中 ,其包膜糖蛋白在病毒的侵入中起关键的作用。首先外膜糖蛋白gp1 2 0识别宿主细胞表面的CD4分子和一种趋化因子受体 ,并与之结合进而导致病毒包膜糖蛋白的构象改变 ,暴露出跨膜糖蛋白gp4 1 ,其在诱导膜融合的过程中发生一系列构象变化 ,进而引起HIV 1包膜与宿主细胞质膜相融合 ,使得HIV

以SMMC-7721为靶细胞MTT法检测LAK细胞活性方法的建立

目的建立以贴壁生长的癌细胞为靶细胞、MTT法检测LAK细胞活性的方法。方法用MTT比色法测定LAK细胞对体外培养的K562、Raji、SMMC－7721细胞的杀伤活性。结果LAK细胞对已知的NK敏感细胞K562及NK耐受细胞Raji均有明显杀伤作用，贴壁生长的SMMC-7721肝癌细胞对NK细胞不敏感，而对LAK细胞敏感，在效靶比为40：1时，LAK细胞对肝癌细胞的杀伤率达90％以上，其杀伤效应随效靶比增高而增高。结论SMMC-7721细胞可作为检测LAK细胞活性的靶细胞。以贴壁细胞作为靶细胞的MTT法检测LAK细胞活性较传统的悬浮细胞如Raji作为靶细胞具有灵敏、准确、简单、可靠的优点，更适用于国内一般实验室开展。

细胞毒T细胞对靶细胞的杀伤机制研究进展

细胞毒T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)怎样杀伤靶细胞?早期研究发现某些受CTL攻击的靶细胞质膜上可见类似于受补体攻击所致的'空洞'。所以,长期以来,人们一直认为CTL杀伤靶细胞的机制与补体类似。新近资料表明二者存在较大差异,例如CTL击杀的靶细胞核DNA迅速裂解,补体溶解的靶细胞则否,可以说穿孔机制只是CTL效应机制的一部分。近十多年来,CTL的杀伤机制方面有不少令人鼓舞的进展。一、CTL杀伤时相(phases of killing)可分为四个阶段:

HIV-1进攻靶细胞的机制及相应环节抑制剂的研究进展

HIV -1是导致获得性免疫缺陷综合症 (AIDS)的流行最广、破坏力最强的病毒。HIV -1分两个步骤特异性地进攻CD4+细胞 :一是利用表面糖蛋白 gp120和靶细胞膜上的受体结合 ;二是通过跨膜糖蛋白 gp41使病毒的包膜和靶细胞的质膜发生融合。经过上述步骤 ,病毒的核心蛋白和遗传物质得以进入人体细胞 ,在其中进行复制 ,同时 ,细胞膜的稳定性被破坏 ,细胞的内外环境失去平衡 ,最终导致细胞死亡。HIV