自制抗体的颗粒增强透射免疫分析法测定人血清胱抑素C的评价

目的:用自制抗体研制可在自动生化分析仪应用的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETIA)定量测定人血清胱抑素C(Cys C)的试剂盒.方法:构建人CysC的原核表达载体pET32a(+)/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫大白兔,制备Cys C抗血清;以自制的CysC抗血清包被乳胶颗粒,研制PE-TIA法定量检测血清Cys C的试剂盒,并对其分析性能进行方法学评价.结果:本法回收率为97.5%～105.0%,批内及批间CV均<5%,线性范围8.11～0.25mg/L,检测限0.2mg/L;本法与Dako法和BN-Prospect法呈正相关(P<0.0001);胆红素对高浓度Cys C测定有干扰作用,Hb和葡萄糖对本法无干扰.结论:应用自动生化分析仪的自研法性能满意.

颗粒增强免疫透射比浊测定血中Cyst C全自动分析法的建立与评价

目的:建立颗粒增强免疫透射比浊测定血中胱蛋白酶抑制剂C(Cyst C)全自动分析,评价该法常规用于检测血中胱蛋白酶抑制剂C的可行性。方法:将含有Cyst C血样本与乳胶颗粒增强的Cyst C多克隆兔抗体按一定体积比混合,在一定量的兔免疫球蛋白及表面活性剂存在条件下,抗原、抗体结合反应在一定温度、时间内产生一定大小的颗粒,许多颗粒在反应液体中形成一定的浊度,利用Olympus AU2700全自动生化分析仪透射比浊测定,并对方法的不精密度、准确度、干扰试验及与Dade Behring BN ProSpec免疫散射比浊测定方法比较等进行评价。结果:Cyst C浓度为1.03mg/L、5.67mg/L样本的批内不精密度CV分别为4.8%、1.9%。向Cyst C浓度为0.79mg/L、1.18mg/L、1.46mg/L、2.46mg/L样本中加入1.65mg/L的标准液测定回收率分别为100%、95%、85%、87%,平均回收率为92%。样本中的类风湿因子、胆红素、血红蛋白、三酰甘油等干扰物浓度分别达975U/ml、400μmol/L、5g/L、6.7mmol/L时对检测无显著性影响。Cyst C浓度在0.41mg/L^6.60mg/L范围内检测线性良好。血清、肝素抗凝血浆及EDTA抗凝血浆样本测得的Cyst C结果未发现显著性差异(F=0.065,P=0.938)。与Dade Behring BN ProSpec免疫散射比浊测定方法比较有良好的相关性,Y=0.98x-0.054,r=0.997,P<0.01,但两者存在非常显著性差异(P<0.01),本法结果较Dade Behring BN ProSpec免疫散射仪测定结果略低,两种方法的平均偏差为-0.0678mg/L。结论:建立的颗粒增强免疫透射比浊法测定血CystC重复性好、准确度高。血清、肝素抗凝血浆及EDTA抗凝血浆均可用于分析。测定不受类风湿因子(≥975U/ml),胆红素(≥400μmol/L),血红蛋白(≥5g/L)及三酰甘油(≥6.7mmol/L)的干扰。与Dade Behring BNProSpec免疫散射比浊测定方法测定结果比较有良好的相关性,适用于在全自动生化分析仪上作常规检测。

颗粒增强免疫透射比浊法测定甲胎蛋白方法学评价

目的对定量测定甲胎蛋白(AFP)的颗粒增强免疫透射比浊法(PETIA)进行方法学评价。方法应用OLYMPUS AU5400全自动生化分析仪定量测定AFP,探讨该检测方法的精密度、试剂开瓶稳定性、检测下限、敏感性、线性范围、干扰和准确性;并与SIEMENS CENTAUR电化学发光法(ECLIA)定量测定临床新鲜血清AFP的结果进行相关性分析,同时对其参考区间进行验证。结果 29.95和132.25 ng/mL的新鲜血清测定的批内变异系数(CV)分别为1.67%和1.52%;天间CV分别为7.17%和7.84%;测定下限和敏感性分别为0.52和0.53 ng/mL;5.4～256 ng/mL范围内其测定的线性相关系数(r2)达0.999 4,回归方程为Y=1.014X+1.063 3;高、低水平浓度的定值质控血清测定的相对偏差分别为5.96%和8.40%,远小于卫生部临床检验中心AFP室间质评能力比对试验(PT)评价标准的"靶值±20%";107例临床病例测定结果与SIEMENS化学发光分析仪测定的结果相关性良好,YECLIA=1.138 7XPETIA+2.835 3(r2=0.992 1);一定程度的溶血、黄疸及脂血对该测定无明显干扰;20名健康体检者AFP测定结果均处于厂家推荐的参考区间内。结论 PETIA测定AFP可作为一种简便易行、快捷价廉、准确可靠的临床常规检测方法,特别适合于健康体检时大规模筛查。

胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测CEA和AFP的结果对比

目的比较胶乳增强透射免疫比浊法与电化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物的结果。方法选取的210名受试者为2015年7月至2020年4月收治的结直肠癌患者(n=124)和同期体检的健康人群(n=86)。受试者均清晨采集全血标本,分别应用胶乳增强透射免疫比浊法、电化学发光免疫分析法检测血清中癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)水平,比较两种检测方法的检测结果,并对结果进行Pearson相关性分析和肿瘤诊断的ROC曲线下面积分析。结果两种方法的检测值比较差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson直线相关性分析显示两种方法的检测值呈正相关(r CEA=0.733、r AFP=0.669,P<0.01)。ROC曲线分析显示,胶乳增强透射免疫比浊法检测CEA、AFP的结果在诊断肿瘤中的AUC分别为0.674、0.655,电化学发光免疫分析法检测CEA、AFP的结果在诊断肿瘤中的AUC分别为0.606、0.639,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论胶乳增强透射免疫比浊法、电化学发光免疫分析法检测血清肿瘤标志物的结果基本一致,相关性良好,均有助于提升临床肿瘤疾病的诊断准确性。

颗粒增强免疫透射比浊法检测血清高半胱氨酸

目的建立测定血清中高半胱氨酸(Hcy)的颗粒增强免疫透射比浊法。方法血清Hcy经S-腺苷高半胱氨酸水解酶(SAHase)与腺苷转化为S-腺苷高半胱氨酸(SAH),用抗SAH抗体与转化后SAH以及胶乳颗粒结合的SAH先后反应,根据生成免疫复合物的变化值计算出SAH浓度;依据美国CLSI标准和指南性文件,对方法进行评价。结果建立的方法检测范围为3.0～53.0μmol/L,最低检测限0.6μmol/L;批内不精密度1.00%～2.09%;日间不精密度4.69%～5.44%;方法回收率为97.3%～105.6%;Vit-C≤1 000 mg/L、胆红素≤400μmol/L、乳糜≤0.8%、Hb≤6.0 g/L对测定结果无显著性干扰;参考值为<15.5μmol/L;与高效液相色谱(HPLC)法相关性良好(r=0.994,P<0.01),测定结果无显著性差异。结论建立的方法可用于临床实验室检测血清Hcy浓度。

颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的性能评价

目的对颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白进行性能评价。方法根据美国临床和实验室标准协会(CLSI)文件对颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的精密度、准确度、参考范围进行验证。结果该方法的批内变异系数是0.70%~0.78%,批间变异系数是0.50%~0.43%,小于厂商提供的1.2%的变异系数。准确度评价显示的偏倚均小于要求范围,评价通过。参考区间符合厂商说明。结论颗粒增强型免疫透射比浊法检测肌红蛋白的基本性能均符合厂商声明。

颗粒增强透射比浊法测定胱抑素C方法学评价

目的用颗粒增强透射比浊法(PETIA)测定血清中胱抑素C(CysC)水平,评价该法用于检测血清中CysC水平的可行性。方法用PETIA检测试剂盒在Cobas 8000全自动生化分析仪上测定血清CysC水平,对方法的不精密度、灵敏度、线性范围等进行评价,并与CysC颗粒增强散射比浊法检测结果进行相关性分析,同时对其参考区间进行验证。结果低值样本和高值样本的批内不精密度CV分别为3.67%,1.15%,批间不精密度CV分别为4.08%,1.53%;准确度的测定偏差仅为-1.25%;此试剂盒检测CysC灵敏度为0.07mg/L;CysC浓度在0.2~8.0mg/L范围内检测线性良好;与西门子德灵颗粒增强散射比浊法(PENIA)比较有良好的相关性Y=0.945 8 X+0.048 6,r2=0.991 3,r=0.995 6,40例健康体检者样本的检测值仅有2例在厂家提供的参考区间之外,90%以上的观测值在待验证区间之内。结论颗粒增强透射比浊法用于定量检测人血清CysC水平,具有简便易行、快捷价廉、准确可靠的优点,适用于在日常临床检测中推广应用。

两种方法检测血清C-反应蛋白含量的实验对比

目的 评价免疫透射比浊法(ITD)和胶乳增强免疫透射比浊法(LEITD)检测C 反应蛋白(CRP)的可 靠性及临床应用。方法 分别对2种方法进行线性评价、精密度评价、干扰评价,并对二者相关性进行分析。结 果 2种方法线性范围均符合要求;LEITD精密度和抗干扰性较ITD好;2种方法有较好的相关性。结论 使用 LEITD检测CRP优于ITD。

两种方法检测超敏C反应蛋白诊断2型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度的价值

目的探讨两种方法检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)对2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉内中膜厚度(IMT)增加的诊断价值。方法选择2013年4月至2015年4月我院收治的84例T2DM患者,以彩色多普勒超声诊断仪检查患者颈动脉的结果为标准,按IMT<0.9 mm和IMT≥0.9 mm分成颈动脉正常组40例和颈动脉增厚组44例。同期另选42例健康查体者为正常对照组,分别采用乳胶增强免疫散射比浊法和颗粒增强免疫透射比浊法检测所有受检者的全血hs-CRP和血清hs-CRP的水平,用受试者工作特征(ROC)曲线评价两种方法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能。另用总胆固醇(TC)联合全血hs-CRP检测评价对T2DM患者IMT增加的诊断效能。结果两种方法显示IMT增厚组的全血[(4.78±1.04)mg/L]和血清hs-CRP水平[(4.43±0.95)mg/L]均高于IMT正常组[(1.85±0.78)mg/L和(1.70±0.89)mg/L]和正常对照组[(0.98±0.67)mg/L和(0.87±0.59)mg/L],差异均有统计学意义(P<0.05)。用ROC曲线分析得全血hs-CRP的诊断灵敏度(76.2%)较高,而特异性(47.1%)较低,曲线下面积为0.612,而颗粒增强免疫透射比浊法检测血清hs-CRP的诊断灵敏度(69.0%)较低,特异性(52.9%)较高,曲线下面积为0.596;全血hs-CRP联合总胆固醇(TC)诊断的灵敏度(83.3%)和特异性(64.7%),曲线下面积为0.732,均高于hs-CRP单项指标诊断效能。结论 T2DM患者IMT增加时,血液中hs-CRP水平升高;乳胶增强免疫散射比浊法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能优于颗粒增强免疫透射比浊法;全血hs-CRP联合TC检测能提高对T2DM患者IMT增加的诊断灵敏度和特异性。

PETIA与PENIA测定IgE的分析灵敏度比较

血清免疫球蛋白E（immunoglobulinE，IgE）主要是用于过敏性疾病的诊断。目前临床常用的检测方法主要有颗粒增强免疫透射比浊法（parti—cleenhancedimmunoturbidimetricassay，PETIA）和免疫散射比浊法（particleenhancedimmunonephe—lometryassay，PENIA）。这2种方法是目前公认的最为理想的方法。过去人们大多认为用散射比浊法检测特定蛋白的分析灵敏度较高，而传统免疫透射比浊法的分析灵敏度较低。因此，我们分析了这2种方法检测IgE的灵敏度。

慢性肾脏病患者肾小球滤过率与血清Cystatin C相关性分析

探讨慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)与血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(cystatin C)的相关性。采用颗粒增强免疫浊度分析法测定340例CKD组患者和60名对照组血清cystatinC,全自动生化分析仪检测血清SCr,采用校正eMDRD方程计算GFR,比较各指标与GFR间的相关性。结果表明:GFR与cystatin C、SCr间呈明显负相关(P<0.01),且与cystatin C相关最为密切。cystatin C与SCr有显著性差异(P<0.05)。血清cystatin C能准确反映CKD患者GFR,对早期诊断CKD患者肾小球滤过功能有价值。

两种胃蛋白酶原检测方法比较及偏倚评估

目的探讨在胃蛋白酶原(PG)定量检测方法中,化学发光微粒子免疫分析法(CMIA)试剂和乳胶颗粒增强免疫比浊法(PETIA)试剂对标本检测结果的一致性,为证实采用PETIA试剂检测PG的可靠性提供实验依据。方法参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A2文件的要求,以PETIA为待评方法,CMIA为参比方法,挑选出已经通过胃镜确诊的不同胃萎缩状态下的患者标本96份,分别用CMIA和PETIA试剂盒双向检测,并记录胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、PGⅠ与胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)比值(PGⅠ/PGⅡ)的检测结果,对两组结果进行方法比对和偏倚估计。结果 CMIA和PETIA试剂检测PGⅠ与PGⅠ/PGⅡ的预期相对偏倚在方法的线性范围内可以被接受。结论应用PETIA试剂检测标本PGⅠ、PGⅡ的结果可以被接受。

生化分析仪在尿胱抑素C检测中的应用

目的：近年来，尿胱抑素c的临床应用研究不断增多，尽管全自动生化分析仪已用于尿胱抑素c的检测，但尚缺乏对生化分析仪的性能评价。所以本研究拟探讨全自动生化分析仪在尿胱抑素c检测中的分析性能。方法：基于全自动生化分析仪，采用颗粒增强透射免疫比浊（PETIA）法检测尿胱抑素C，通过精密度、线性范围、灵敏度,参考区间、回收率等，评估全自动生化分析仪在检测尿胱抑素c中的分析性能。并分析温度、二甲苯、保存时间等干扰因素对尿胱抑素C检测的影响。结果：该法精密度要优于ELISA法；线I}生范围（0-0．86mg／L）；检测限（0．01mg／L）；参考区间（〈0．15mg／L）；回收率（96％-104％）。另外，二甲苯与尿标本室温保存（三天）不会对标本检测造成影响。结论：在临床研究与科研工作中，基于全自动生化分析仪，采用PETIA法可满足对尿胱抑素C检测需要，且该法省时省力、价格低廉，有应用价值。

兰州市健康人血清胱抑素C浓度参考范围的调查

目的调查兰州市健康人血清胱抑素C(CysC)浓度的参考范围。方法应用颗粒增强免疫透射比浊法测定115例健康受检者血清胱抑素C浓度;用SPSS11.0软件对检测结果进行统计学处理。结果115例健康受检者的血清胱抑素C浓度与性别无关。受检者的血清胱抑素C浓度1～50岁年龄段血清胱抑素C的浓度水平一致,95%的可信区间为0.790～1.250mg/L;大于50岁年龄段95%的可信区间为0.660～1.760mg/L。结论兰州市1～50岁血清胱抑素C的参考范围是0.790～1.250mg/L,大于50岁年龄段的参考范围是0.660～1.760mg/L,与文献报道基本一致。

人胱抑素C单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用

目的:制备人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)的单克隆抗体(McAb),并建立检测人血清Cys C的颗粒增强透射免疫浊度分析法(PETIA)。方法:构建人Cys C的原核表达载体pET32a(+)/Cys C,纯化Cys C重组蛋白并免疫BALB/c小鼠,杂交瘤技术制备Cys C的McAb;以自制的McAb包被乳胶颗粒,建立PETIA法测定血清Cys C,并对其分析性能进行初步方法学评价。结果:建立分泌抗Cys C单克隆抗体的杂交瘤细胞株3株,其分泌的McAb为IgG1,Western blot检测证实该抗体能与目的蛋白发生特异性结合;将杂交瘤细胞注射于小鼠腹腔,腹水中Cys C McAb效价为1∶4×106;用自制的McAb建立定量测定Cys C的PETIA,方法学评价试验结果证实我们建立的PETIA法,与进口试剂有很好的可比性,具有较满意的方法学性能。结论:成功制备了抗Cys C单克隆抗体,该抗体可用于建立定量检测Cys C的PETIA法。

巯基蛋白酶抑制肽C检测肾小球滤过功能的临床研究

目的用血清巯基蛋白酶抑制肽(CcystatinC)检查肾小球滤过功能,同时与血清肌酐作比较。方法总测试人数155例,其中儿童组89例,年龄从出生到13岁,均为住院恢复期病人,无肝、肾疾患;成人组66例,其中健康志愿者20例(男12例,年龄36.3±9.5岁,女8例,年龄34.3±10.6岁),患者46例(男26例,女20例),均为肾内科住院病例。用全自动生化分析仪,颗粒增强透射免疫比浊法测定血清cystatinC,肌氨酸氧化酶-PAP法测定血清肌酐。结果儿童组1～13岁,血清cystatinC的浓度稳定于1.26±0.33mg/L,而血清肌酐随年龄增长而增高,与血清cystatinC无相关性;成人组血清cystatinC的浓度稳定、与血清肌酐正相关。两组血清cystatinC均与年龄、身高、体重、性别无关。结论血清cystatinC浓度稳定,范围较窄,不受年龄、身高、体重、性别的影响,用以监测肾小球滤过功能优于血清肌酐。用cystatinC监测肾小球滤过功能有明显的优点,具有广泛的应用前景。

超敏C反应蛋白与冠心病相关性研究

目的 探讨血清超教C反应蛋白(hsCRP)在冠心病中的表达特性.方法 随机选我院50例冠心病患者.在OLYMPUS-2700全自动生化分析仪上应用乳胶增强免疫透射比浊法测定血清中hsCRP的浓度,并分析治疗前后hsCRP水平的差异.结果 冠心病患者中hsCRP浓度与对照组相比明显增高,差异具有统计学意义(P【0.01).冠心病各组的hsCRP水平在治疗前后比较有统计学意义(P【0.01).结论 冠心病患者血清hsCRP水平的增高与冠心病的发生、发展显著相关,检测hsCRP对冠心病的辅助诊断、疗效观察及预后判断具有重要价值.

昆明地区健康人群血清胱抑素C参考区间调查

目的调查昆明地区健康人群血清胱抑素C（CystatinC，Cys-C）水平，建立实验室诊断参考区间。方法应用颗粒增强免疫透射比浊法测定130例健康受检者血清胱抑素C浓度；用SPSS16．0软件对检测结果进行统计学处理。结果130例健康受检者的血清胱抑素C浓度与性别、体重指数无关。受检者的血清胱抑素c浓度1-60岁年龄段血清胱抑素C的浓度水平一致，95％的可信区间为0．500-1．120mg／L；大于60岁年龄段95％的可信区间0．670-1．290mg／L。结论胱抑素C的参考范围在不同年龄人群中是不一致的，昆明市健康人群1-60岁血清胱抑素C的参考范围是0．500-1．120rag／L；大于60岁年龄段95％的可信区间为0．670-1．290mg／L，因此在临床上评价肾小球滤过率应建立适宜的参考范围。