马钱子碱抑制豚鼠心室肌细胞钠电流的作用研究

目的本研究旨在分析马钱子碱(brucine)对分离的单个豚鼠心室肌细胞钠电流(INa+)的作用,并探索其抗心律失常的可能机制。方法共选取24只健康的成年豚鼠作为实验对象,雌雄不拘,随机分为4组,每组6只:第1组是未接受任何处理的对照组,之后通过微量加样器使培养皿中brucine药物的终浓度分别达到3μmol/L、10μmol/L、30μmol/L。采用急性酶解法分离获得单个豚鼠心室肌细胞,通过全细胞膜片钳技术测量离子通道电流,以检测不同浓度的brucine对豚鼠心室肌细胞INa+的影响。结果正常的对照组没有明显的INa+电流峰值的变化,而brucine 3μmol/L组给药前后基本不影响INa+电流峰值,当brucine的浓度增加到10μmol/L时,给药前后INa+电流峰值显著下降(P<0.05),在30μmol/L组给药前后INa+电流峰值大幅度减少(P<0.01),并且这种抑制作用呈浓度依赖性。正常对照组及brucine 3μmol/L剂量组中,电流-电压曲线(Ⅰ~Ⅴ曲线)并未受到显著的影响;然而,10μmol/L、30μmol/L剂量组与对照组比较,INa+的Ⅰ~Ⅴ曲线上移,无平行移动,且曲线形状不变。结论Brucine能够通过抑制心室肌细胞钠通道电流发挥抗心律失常作用。

炙马钱子和马钱子碱氮氧化物的毒性研究

目的明确炙马钱子和马钱子碱氮氧化物的毒性。方法选用C57BL/6小鼠210只,雌雄各半,随机分为对照组10只,生马钱子组、炙马钱子组、马钱子碱组、马钱子碱氮氧化物组,各50只。对照组正常饲养饮水,其他组灌胃给药,观察24 h内小鼠中毒死亡情况,然后持续观察记录14 d内小鼠死亡情况,逐日记录各组小鼠死亡数量和中毒症状。灌胃给药,观察小鼠的一般状态、死亡情况、给药后14 d内的体质量变化;采用HE染色观察死亡小鼠心、肝、脾、肾组织的病理损伤情况。结果给药后四种药品的小鼠中毒反应类似,并呈现剂量依赖性加重。14 d内各给药组小鼠的体质量变化较对照组无明显异常。炙马钱子的LD50约为生马钱子的1.6倍;马钱子碱氮氧化物的LD50可达马钱子碱的31倍左右。相较于炙马钱子和马钱子碱氮氧化物,生马钱子和马钱子碱的死亡-剂量曲线,较为陡直,均呈剂量依赖性。与对照组相比,四种药品最高剂量组中毒死亡小鼠心、肝、脾、肾组织HE染色均未见明显异常。结论炙马钱子和马钱子碱氮氧化合物比生马钱子和马钱子碱毒性更小,治疗窗更大,更安全。

马钱子碱与异马钱子碱氮氧化物抗肿瘤细胞生长及抗氧化损伤作用的比较

目的：探讨马钱子经炮制后毒性下降而生物效应增强的机制。方法：采用体外培养肿瘤细胞的方法，观察马钱子碱（ｂｒｕｃｉｎｅ）和异马钱子碱氮氧化物（ｉｓｏｂｒｕｃｉｎｅＮ－ｏｘｉｄｅ）对肿瘤细胞株ＨＥｐ－２生长抑制作用及形态损伤作用；并采用电镜观察心肌细胞。结果：异马钱子碱氮氧化物能明显地抑制肿瘤细胞生长，而马钱子碱则无明显此效应。其细胞的形态损伤作用与生长抑制作用相一致；异马钱子碱氮氧化物还能明显地抵消黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶（ＸＸＯＤ）引起的破坏培养的心肌细胞肌丝和线粒体等超微结构的作用，而马钱子碱无此作用。结论：异马钱子碱氮氧化物具有抗肿瘤细胞生长和抗氧化作用，而马钱子碱却无此明显作用。

马钱子碱及生物转化氮氧化物对斑马鱼胚胎毒性的研究

目的通过观察斑马鱼胚胎发育的情况,评价马钱子碱及生物转化产物马钱子碱氮氧化物对斑马鱼胚胎毒性的差别。方法马钱子碱、马钱子碱氮氧化物培养斑马鱼6 h受精卵,观察24、96 h死亡情况并计算LC50、孵化率、相对成活率、幼鱼形态变化;细胞凋亡分别采用吖啶橙法及流式细胞仪检测。结果给药后24、96 h的马钱子碱氮氧化物的LC50分别是马钱子碱的15倍及10倍,同时孵化率及成活率明显高于马钱子碱组;200μmol/L质量浓度时,马钱子碱组鱼胚胎出现脊柱侧弯,心包水肿等现象,相同质量浓度的马钱子碱氮氧化物组则未观察到该类现象;马钱子碱组斑马鱼细胞凋亡明显,而其氮氧化物组则无明显凋亡。结论马钱子碱氮氧化物较马钱子碱对斑马鱼胚胎的毒性有明显降低。

马钱子碱及其脂质体对移植性荷瘤小鼠抗肿瘤作用的对比研究

目的评价和比较马钱子碱及其脂质体对移植性肿瘤模型荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用和生存时间的影响。方法用ICR小鼠接种S180、EAC腹水瘤、肝癌Heps瘤株造成相应的移植性荷瘤小鼠模型,考察马钱子碱及其脂质体对实体瘤模型(S180和Heps)小鼠的抑瘤率和对腹水瘤模型(EAC和Heps)小鼠生命延长率的作用以研究两者的抗肿瘤活性。结果马钱子碱及其脂质体能有效抑制实体瘤模型荷瘤小鼠体内肿瘤生长,1.61、3.23、6.46mg/(kg·d)马钱子碱对Heps小鼠的抑瘤率分别为35.05%、43.70%和46.09%,而1.61、3.23mg/(kg·d)马钱子碱脂质体的抑瘤率分别为45.41%和58.19%;1.61、3.23、6.46mg/(kg·d)马钱子碱对S180小鼠的抑瘤率分别为37.59%、36.13%和38.87%,而1.61和3.23mg/(kg·d)马钱子碱脂质体的抑瘤率分别为53.00%和48.37%,明显高于马钱子碱;但两者对腹水瘤模型(EAC和Heps)荷瘤小鼠的生存时间均无延长作用。结论马钱子碱及其脂质体有显著的抑制荷瘤小鼠肿瘤生长作用,马钱子碱脂质体抗肿瘤作用明显强于马钱子碱。

马钱子碱对小鼠淋巴细胞功能的影响

目的 观察镇痛剂量的马钱子碱（ Ｂｒｕ） 对小鼠淋巴细胞功能的影响。方法 测定绵羊红细胞（ Ｓ Ｒ Ｂ Ｃ） 致敏小鼠血清溶血素及脾抗体分泌细胞（ Ａ Ｆ Ｃ） 水平， 二硝基氯苯（ Ｄ Ｎ Ｃ Ｂ） 所致小鼠迟发性超敏反应（ Ｄ Ｔ Ｈ） ，以及丝裂原诱导小鼠脾淋巴细胞增殖和产生 Ｉ Ｌ２ 能力。结果 Ｂｒｕ（１０ 及２０ ｍｇ·ｋｇ － １ ，ｉｐ 显著增强小鼠对 Ｄ Ｎ Ｃ Ｂ 的特异性细胞免疫反应，但５ ，１０ 及２０ ｍｇ·ｋｇ － １ 不影响对 Ｓ Ｒ Ｂ Ｃ 的特异性体液免疫反应。对环磷酰胺（ Ｃｙｃ） 降低的上述反应，３ 个剂量的 Ｂｒｕ均有显著恢复作用（ Ｐ＜ ００５ ～００１） 。 Ｂｒｕ １０ ｍｇ·ｋｇ－ １ ｉｐ增强 Ｃｏｎ Ａ 及 Ｌ Ｐ Ｓ 诱导的脾淋巴细胞增殖（ Ｐ＜ ００５） ，对 Ｃｙｃ 所降低的脾淋巴细胞尤其 Ｔ 细胞增殖反应， Ｂｒｕ ５ ～２０ｍｇ·ｋｇ － １ 范围内均使其恢复（ Ｐ＜ ００５ ～００１） 。 Ｂｒｕ ０１ ～１００ ｍｇ· Ｌ－ １ 在体外对丝裂原诱导小鼠脾淋巴细胞产生 Ｉ Ｌ２能力无明显影响。结论 镇痛有效剂量的 Ｂｒｕ

中药马钱子商品中士的宁和马钱子碱的含量测定

目的：对我国１５个省区产的中药马钱子商品及炮制品中的士的宁和马钱子碱进行含量测定。方法：应用反相高效液相色语法。结果：发现部分省市的生马钱子商品的士的宁含量偏高，个别炮制品的士的宁含量也超过了国家药典规定的标准。结论：因士的宁为剧毒成分，应引起足够的重视。

马钱子碱和士的宁镇痛作用的初步探讨

本文研究了中药马钱子的主要成份马钱子碱、士的宁的镇痛作用,并与哌替啶作了比较。小白鼠醋酸扭体法:①量效关系:马钱子碱、哌替啶抑制ip HAC引起的扭体半数有效量(ED_(50))分别为12.68(8.12～14.15)mg/kg;2.69(2.21～3.29)mg/kg(Litchfield-Wilcoxon-method)。士的宁与对照组无显著差异。②时效关系:马钱子碱抑制扭体作用持续时间较哌替啶为长约4倍。小白鼠热板法:马钱子碱、哌替啶在一定剂量和时限内均有明显镇痛作用,士的宁无显著镇痛作用。马钱子碱39.81(38.95～51.29)mg/kg、哌替啶41.69(38.19～45.5)mg/kg时,两药100min时限内平均镇痛阈提高百分率相等。

马钱子碱对小鼠肿瘤的抑制作用

目的:评价马钱子碱对移植性肿瘤模型荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用和生存时间的影响.方法:用ICR小鼠接种S180、 EAC、 Heps瘤株造成相应的移植性荷瘤小鼠模型,考察马钱子碱对实体瘤模型(S180、 Heps)小鼠的抑瘤率和对腹水瘤模型(EAC、 Heps)小鼠生命延长率以研究其抗肿瘤活性.结果:马钱子碱在1.61～6.46 mg·kg-1对实体瘤Heps模型小鼠和S180模型小鼠的抑瘤率均不低于30%.马钱子碱能还能提高小鼠的免疫器官的重量及其指数,但其对腹水瘤模型(EAC、Heps)荷瘤小鼠的生存时间无明显延长作用.结论:马钱子碱能一定程度地抑制实体瘤模型小鼠体内肿瘤生长,值得进一步研究.

马钱子碱与牛血清白蛋白相互作用的研究

应用荧光光谱和紫外光谱法研究了马钱子碱与牛血清白蛋白(BSA)的结合反应,求得它们之间的结合常数KA和结合位点数n分别为KA=6.3×103,n=0.94(27℃);KA=7.7×103,n=0.97(37℃)。根据Frster非辐射能量转移理论求出了马钱子碱与BSA之间的结合距离为3.99nm(27℃)和4.21nm(37℃)。探讨了马钱子碱的荧光猝灭机理,结果表明马钱子碱能够插入BSA内部形成基态复合物导致内源荧光猝灭,猝灭机理主要是静态猝灭和非辐射能量转移。根据热力学参数确定马钱子碱与BSA之间的作用力类型主要为疏水性相互作用。

马钱子碱及其脂质体对移植性肝癌Heps小鼠的抗肿瘤作用和毒性的比较

目的:比较马钱子碱(brucine,B)和马钱子碱脂质体(brucine liposome,BL)对移植性肝癌Heps小鼠的抗肿瘤作用和毒性。方法:ICR雄性小鼠接种肝癌Heps瘤株造成移植性肝癌Heps小鼠模型(简称Heps小鼠),测定B(1·61,3·23,6·46 mg·kg^(-1)·d^(-1),ip,8 d)和BL(以B计,1．61和3．23 mg·kg^(-1)·d^(-1),ip,8 d)对实体瘤小鼠的抑瘤率和腹水瘤小鼠的生命延长率;并比较各组实体瘤小鼠的体重、免疫器官(脾和胸腺)指数、血细胞指数(白细胞、红细胞、血小板和血红蛋白)和肝、肾功能指数(AST,ALT和BUN)。结果:低、中、高剂量的B(1．61,3．23,6．46 mg·kg^(-1)·d^(-1))对Heps实体瘤小鼠的抑瘤率分别为35．05%,43．70%,46．09%;同剂量的BL(1．61,3．23 mg·kg^(-1)·d^(-1))的抑瘤率分别为45．41%和58．19%。BL对Heps实体瘤小鼠的肿瘤抑制作用显著强于B,但B和BL对Heps腹水瘤小鼠生存时间均无延长作用。B和BL在1．61,3．23 mg·kg^(-1)·d^(-1)时对Heps实体瘤小鼠的造血、免疫系统以及肝、肾功能不仅无明显的毒性,相反还能提高其免疫器官的重量和指数,显著提高Heps小鼠的白细胞和血小板计数,并能显著降低Heps小鼠的AST,ALT和BUN的异常升高。结论:BL对移植性肝癌Heps小鼠的抗肿瘤活性明显强于B,并且对Heps小鼠造血、免疫系统以及肝肾的毒性低,通过深入研究BL可望成为一种新型的抗癌药物。

高效液相色谱法测定马钱属植物中士的宁和马钱子碱的含量

高效液相色谱法测定马钱属植物中士的宁和马钱子碱的含量顾志平张曙明王春兰连文琰肖培根陈建民（中国医学科学院、中国协和医科大学药用植物研究所，北京１０００９４）马钱属植物我国产１０种，主要分布于广东、广西、海南、云南等省区。士的宁和马钱子碱是该属植物的主...

高效液相色谱法同时测定马钱子总生物碱脂质体中士的宁和马钱子碱的含量

目的：采用高效液相色谱法测定马钱子总生物碱脂质体中马钱子碱和士的宁的含量。方法：马钱子总生物碱脂质体与甲醇按1：9混合后离心取上清液用甲醇稀释进样。色谱条件：采用Lichrospher C18柱（4．6mm×250mm，5μm），乙腈-0．01mol·L^-1庚烷磺酸钠与0．02mol·L^-1磷酸二氢钾等量混合（用10％磷酸调pH值2．8）（24：76）为流动相，流速1．0mL·min^-1，检测波长254nm，柱温30℃，结果：马钱子碱、士的宁的线性范围均为1～20mg·L^-1，r=0．9999。低、中、高浓度士的宁平均加样回收率分别为（101．2±1．8）％，（99．2±1．3）％，（99．1±1．2）％（n=3）；低、中、高浓度马钱子碱的加样回收率分别为（103．9±2．8）％，（100．4±0．4）％，（102．7±1．2）％（n=3）。结论：本方法操作简便，是在药典方法基础上的改进，可用于控制马钱子总生物碱脂质体的质量。

纳米马钱子碱脂质体制备工艺研究

目的:采用薄膜超声分散法制备马钱子碱脂质体,考察了表面活性剂浓度,脂材比例,外水相条件,制备温度及药物浓度对马钱子碱脂质体粒径及包封率的影响。方法:薄膜超声分散法制备纳米级马钱子碱脂质体,凝胶色谱可见光比色方法测定包封率。结果:采用薄膜超声法制备的脂质体多为大单室脂质体,粒径主要分布在50～300nm。脂材比例为3∶10,表面活性剂Tween80与总脂材比为3∶10,制备温度为40°C,水相pH值为7.4时得到了粒径均匀、分散性好,包封率达61.24的马钱子碱脂质体。结论:薄膜超声法是制备纳米马钱子碱脂质体的一种简单可行的方法。

马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用

本研究旨在观察马钱子碱对人白血病细胞株K562细胞的诱导凋亡作用。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测马钱子碱对K562细胞生长抑制作用;应用AO/EB荧光染色、Annexin-V/PI细胞凋亡检测法、DNA-ladder片段凝胶电泳法检测马钱子碱对K562细胞凋亡的影响。结果显示:马钱子碱能有效抑制K562细胞的生长,在一定范围内,抑制率随马钱子碱浓度的增高而增高,马钱子碱浓度为400μg/ml作用72小时后对K562细胞抑制作用最为明显,抑制率达94.0%;K562细胞经浓度为400μg/ml马钱子碱作用72小时后大部分细胞核染色质被EB染成桔红色并呈固缩状或圆珠状显示为晚期凋亡的细胞形态;马钱子碱作用72小时可诱导K562细胞凋亡,在马钱子碱浓度为50-400μg/ml范围内随药物浓度的增加,细胞凋亡率也逐渐上升;马钱子碱400μg/ml作用72小时后的K562细胞出现细胞凋亡的典型梯形条带。结论 :马钱子碱能有效抑制K562细胞生长,诱导其凋亡,并且在50-400μg/ml范围内呈剂量效应关系。

马钱子碱长循环脂质体的制备和质量评价

目的通过优化手段筛选最佳处方及工艺,制备马钱子碱长循环脂质体,并评价其质量。方法采用乙醇注入式硫酸铵梯度法制备马钱子碱长循环脂质体,用聚乙二醇修饰脂质体膜。考察马钱子碱长循环脂质体的形态、粒径分布、pH值、包封率、初步稳定性和体外释放行为。结果优化后的脂质体颗粒圆整、平均粒径为120 nm,平均pH值为6.655,包封率达到93.72%,在4℃条件下稳定性良好,体外释放效果优于马钱子碱磷酸缓冲液。结论脂质体制备工艺可行,药剂学性质稳定。

马钱子碱对豚鼠心脏乳头肌动作电位的影响

研究马钱子碱对心肌电生理方面的影响。采用常规微电极技术同步记录收缩力的方法，观察了马钱子碱对豚鼠心脏乳头肌动作电位（Ａｐ）及收缩力（Ｆｃ）的影响。实验结果表明：马钱子碱在浓度大于等于１×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１时，浓度依赖地延长快反应动作电位（ＦＡＰ）及高钾除极组织胺和氯化钡诱发的慢反应动作电位ＳＡＰ的ＡＰＤ５０、ＡＰＤ９０，在浓度大于等于３×１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１时，抑制ＦＡＰ及ＳＡＰ的Ｆｃ，在浓度大于等于１×１０－５ｍｏｌ·Ｌ－１时，还可抑制ＦＡＰ及ＳＡＰ的ＡＰＡ、Ｖｍａｘ。提示马钱子碱具有阻断心肌Ｋ＋、Ｎａ＋、Ｃａ２＋通道的作用。

不同粒径马钱子粉中马钱子碱、士的宁的含量分析与比较

为考察粒径对马钱子粉中活性(毒性)成分含量的影响,制备了20～200目下的马钱子粉样品;采用扫描电子显微镜(SEM)观察各样品的微观形貌,利用薄层色谱法(TLC)对各样品进行定性鉴别并用高效液相色谱法(HPLC)测定各样品中马钱子碱、士的宁含量。结果表明:不同粒径下马钱子粉样品微观形态组成比例存在差异,而且马钱子碱、士的宁含量不同,马钱子碱(或士的宁)在部分样品中的含量存在显著性差异。因此在马钱子药粉入药时,应严格控制其粒径,结果显示宜将马钱子粉的粒径控制在100～200目之间。

马钱子碱对一氧化氮诱导软骨细胞凋亡的影响

目的:观察中药马钱子碱对一氧化氮(nitricoxide,NO)在体外诱导的兔软骨细胞凋亡的影响。方法:取体外培养的新西兰兔软骨细胞,分别加入硝普钠(SNP)培养12,24,48h,用透射电镜和流式细胞仪观察软骨细胞凋亡的变化,并以不同剂量马钱子碱加入NO诱导的软骨细胞凋亡体系培养24h,采用annexinV/PI方法检测凋亡情况。结果:在体外培养兔软骨细胞加入硝普钠24h,流式细胞仪检测早期凋亡率为(38.7±6.5)%。空白对照组为(2.4±1.4)%(t=10.90,P<0.01),透射电镜可见典型软骨细胞早期凋亡形态改变,并有一定时间依赖性,加入不同剂量马钱子碱,其凋亡率明显下降,并以高剂量最为显著为(2.9±1.1)%。马钱子碱高剂量组加入硝普钠后与正常软骨细胞组比较,二者凋亡率无显著差异性(t=0.51,P>0.05)。结论:硝普钠在体外能诱导软骨细胞凋亡,马钱子碱能明显降低NO诱导的软骨细胞早期凋亡,提示马钱子碱能有效治疗骨关节炎,可能与抑制软骨细胞早期凋亡有关。

马钱子碱新型壳聚糖纳米粒体外肝癌细胞摄取特性的研究

以新型高分子材料N-glycyrrhetinic acid(GA)-polyethylene glycol(PEG)-chitosan(NGPC)为载体材料,采用离子交联法制备载马钱子碱(Brucine)的壳聚糖纳米粒(Brucine/NGPC-NPs)。以Hep G2细胞为模型细胞,考察药物作用时间、药物作用浓度、加入外源甘草次酸和细胞内吞抑制剂对细胞摄取的影响,并结合激光共聚焦显微镜成像技术观察纳米粒在细胞内的转运。结果显示,Brucine/NGPC-NPs平均粒径为(197.6±11.2)nm,包封率和载药量分别为(63.48±4.67)%和(5.49±0.38)%。Hep G2细胞对马钱子碱溶液剂和Brucine/NGPC-NPs的摄取均具有时间和浓度依赖性,其中对NGPC-NPs的摄取明显强于溶液剂,具有显著的主动转运特征,且摄取量随外源甘草次酸的加入而减少,其摄取途径主要依赖网格蛋白介导的内吞,之后被细胞内化。结果表明,NGPC-NPs可以作为肝细胞靶向的载体,显著提高药物进入肝癌细胞的量,达到减毒增效的目的。