Humanin对鱼藤酮诱导的多巴胺神经元毒性的保护作用研究

目的探讨Humanin(HN)对鱼藤酮(rotenone,Rot)诱导的多巴胺神经元毒性损伤的保护作用和机制。方法构建Rot染毒PC12细胞模型,实验设对照组、Rot染毒组、HN预处理Rot染毒组、单独HN处理组。采用ELISA检测Rot染毒细胞内外HN的含量,CCK-8法检测细胞活性,ATP检测试剂盒检测细胞内ATP含量,DCFH-DA探针检测细胞内ROS水平,Western blot分别检测线粒体自噬调控蛋白Pink1、Parkin、p-Parkin、p62、LC3,线粒体生物发生调控蛋白PGC1α和分裂/融合调控蛋白OPA1、MFN2、DRP1、p-DRP1以及抗氧化应激调控蛋白Keap1、Nrf2的表达。采用HBAD-mcherry-EGFP-LC3腺病毒转染细胞观察自噬体和自噬溶酶体的数量。结果Rot染毒组PC12细胞内HN浓度显著高于对照组(P<0.05);与对照组比较,Rot染毒组PC12细胞活性下降,ATP含量下降,ROS的生成增加,Rot染毒后PC12细胞内Pink1、p-Parkin表达升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高,p62表达下降,细胞线粒体生物发生蛋白PGC1α和线粒体融合蛋白MFN2、OPA1表达下降,而线粒体分裂蛋白p-DRP1表达升高,抗氧化应激蛋白Keap1和Nrf2表达下降(P均<0.05);与对照组比较,Rot染毒组PC12细胞中自噬体和自噬溶酶体数量增多(P<0.05),而20μmol/L HN预处理可以改善Rot染毒引起的上述变化(P<0.05)。结论HN通过抑制线粒体自噬和线粒体分裂、促进线粒体生物发生和融合以及抗氧化应激,改善Rot诱导的多巴胺神经元毒性损伤。

鱼藤酮激活AMPK-ULK1信号通路诱导大鼠胸主动脉内皮细胞自噬

目的探讨鱼藤酮对大鼠胸主动脉内皮细胞(RTAEC)自噬的影响及其初步机制。方法选用60只雄性SD大鼠,随机分为对照(Con)组、二甲基亚砜(DMSO)组和鱼藤酮组[1、2、4 mg·(kg·d)^(-1)],各组分别干预28 d。实验前后分别记录大鼠体质量、血压和心率;HE染色观察胸主动脉和心脏组织病理生理改变,透射电镜观察其超微结构及自噬小体发生。细胞实验分组:Con组、DMSO组和鱼藤酮组(20、100和500 nmol·L^(-1)),分别处理24 h,用活性氧(ROS)和三磷酸腺苷(ATP)水平筛选鱼藤酮干预最佳浓度后,选取500 nmol·L^(-1)进行后续干预。腺苷酸激活的蛋白激酶(AMPK)抑制剂化合物C(CC)在鱼藤酮处理前2 h干预细胞;RT-qPCR和Western blot检测胸主动脉自噬相关因子及腺苷酸激活的蛋白激酶-UNC-51样激酶1(AMPK-ULK1)通路的改变。结果与DMSO组相比,鱼藤酮组体质量增长量减少(P均<0.01);鱼藤酮对大鼠的血压和心率没有影响(P均>0.05);HE结果显示,鱼藤酮组胸主动脉内皮细胞伴有缺损,且心脏组织纤维排列紊乱、断裂;透射电镜结果发现,鱼藤酮组胸主动脉和心脏组织伴有结构异常及自噬小体出现;随着RTAEC鱼藤酮干预浓度增大,ROS产生水平增加(P<0.01),而ATP的生成减少(P<0.01);RT-qPCR结果显示,与DMSO组相比,LC3和P62的mRNA表达水平均上调(P均<0.01);信号通路相关因子AMPK和ULK1的mRNA表达水平均增加(P均<0.01);加入AMPK抑制剂CC,Western blot检测自噬相关蛋白,与500 nmol·L^(-1)组相比,LC3表达降低(P<0.01),P62表达上调(P<0.01);AMPK和p-AMPK表达减少(P均<0.01),AMPK的下游因子ULK1及p-ULK1表达均减少(P均<0.01)。结论鱼藤酮可促进RTAEC发生自噬,而其自噬机制可能是通过AMPK-ULK1信号通路介导。

尼古丁对鱼藤酮诱导帕金森病小鼠模型的神经保护作用机制

背景:研究发现尼古丁可以激活脑部的多巴胺系统,减缓帕金森病的发展,但具体机制尚不明确,目前缺乏对帕金森病动物模型神经保护作用的机制研究。目的:探讨尼古丁对鱼藤酮诱导帕金森病小鼠的神经保护作用机制。方法:将28只C57BL/6小鼠随机分为溶剂组、鱼藤酮组、自噬激动剂+鱼藤酮组和尼古丁+鱼藤酮组,每组7只,利用鱼藤酮诱导C57BL/6小鼠多巴胺能神经损害,在造模前给予自噬激动剂(雷帕霉素)或尼古丁,干预结束后进行旷场实验观察小鼠空间探索功能;采用Western blot和Q-PCR检测黑质中α-突触核蛋白的表达,自噬相关因子Beclin-1、P62的表达以及凋亡相关因子Bax、Bcl-2和Cleaved-caspase-3的表达;透射电镜观察黑质中线粒体、自噬小体和脂褐素沉积情况;尼氏染色观察神经元的存活情况;免疫荧光和免疫组化染色观察黑质中酪氨酸羟化酶的表达。结果与结论:(1)旷场实验显示,与溶剂组相比,鱼藤酮组小鼠表现出运动距离、平均速度和运动时间均减少;与鱼藤酮组相比,尼古丁+鱼藤酮组和自噬激动剂+鱼藤酮组小鼠运动距离、平均速度和运动时间均增加(P<0.05)。(2)免疫荧光和免疫组化结果显示,与溶剂组相比,鱼藤酮组酪氨酸羟化酶平均荧光强度和平均吸光度值减小;与鱼藤酮组相比,尼古丁+鱼藤酮组和自噬激动剂+鱼藤酮组酪氨酸羟化酶平均荧光强度和平均吸光度值增加。(3)Western blot和Q-PCR结果显示,与溶剂组相比,鱼藤酮组α-突触核蛋白、P62表达升高,Beclin-1表达减少(P<0.05);与鱼藤酮组相比,尼古丁+鱼藤酮组和自噬激动剂+鱼藤酮组α-突触核蛋白、P62表达减少,Beclin-1表达增多(P<0.05)。与溶剂组相比,鱼藤酮组Bax、Cleaved-caspase-3表达增多,Bcl-2表达减少(P<0.05);与鱼藤酮组相比,尼古丁+鱼藤酮组和自噬激动剂+鱼藤酮组Bax、Cleaved-caspase-3表达减少,Bcl-2表达增多(P<0.05)。结果提示,尼古丁可能是通过改善自噬功能障碍和减少细胞凋亡,对鱼藤酮诱导的帕金森病小鼠模型产生多巴胺能神经保护作用。

鱼藤酮帕金森病大鼠模型的建立与评价研究

运用长期低剂量在颈背部皮下注射鱼藤酮试剂的给药方式建立帕金森病大鼠模型。方法 将18只SPF级雄性SD大鼠通过丢色子随机分组法分成三组,即溶剂组、模型组、正常组。正常组任其正常生活,模型组的大鼠在其颈背部皮下注射鱼藤酮葵花油乳化液试剂,建立PD模型,溶剂组皮下注射等量的葵花油液(不含鱼藤酮试剂)。观察各组大鼠的一般行为学的变化,进行悬挂试验并进行评分,HE染色法观察中脑黑质部位神经元细胞的变化,免疫组化法观察黑质内的酪氨酸羟化酶(TH)的表达,蛋白免疫印迹(Westernblot)技术观察大鼠纹状体内α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)表达。结果 (1)模型组大鼠出现变黄、变脏、行走困难、向一侧偏瘫等改变。模型组内大鼠行为异常评分明显降低(P<0.01),悬挂测试结果显示模型组大鼠在金属丝上悬挂时间明显减少(P<0.01)。(2)HE染色结果显示模型组大鼠中脑黑质致密部神经元细胞数量减少,稀疏,轮廓不清,可见路易小体的形成,正常组与溶剂组之间无明显变化。(3)免疫组化法观察,与正常组和溶剂组比,模型组黑质内(TH)阳性细胞明显减少(P<0.01)。(4)蛋白免疫印迹(Westernblot)技术检测结果显示模型组大鼠纹状体内α-syn表达比正常组和溶剂组显著增高(P<0.01)。结论 通过皮下注射鱼藤酮试剂的方式可建立与人类帕金森病临床病理状态、慢性病理过程相似的疾病模型,为PD实验的研究探讨提供理论支持。

刮痧对鱼藤酮诱导的帕金森病大鼠行为学及黑质区TH水平和炎症因子的影响

目的观察刮痧对鱼藤酮诱导的帕金森病(PD)模型大鼠行为学及黑质酪氨酸羟化酶(TH)、核因子κB(NF-κB)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-1β(IL-1β)的影响,探究刮痧干预PD可能的作用机制。方法32只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、药物组和刮痧组,每组8只。模型组、药物组和刮痧组大鼠采用颈背部皮下注射鱼藤酮(1 mg·kg^(-1))建立PD大鼠模型。药物组每天给予美多芭灌胃(50 mg·kg^(-1)),刮痧组隔日刮痧1次,刮12次,共计23 d。造模前、造模后、干预结束观察大鼠行为学改变;干预结束,采用Western blot和免疫荧光检测黑质区TH表达,免疫组化法检测黑质TH、NF-κB表达,ELISA法检测中脑黑质NF-κB、IFN-γ、IL-1β含量,HE染色观察纹状体区细胞形态。结果与假手术组相比,模型组大鼠行为学评分(3.42±1.248),5 min内运动总距离缩短(P<0.0001),起点停留时间延长(P<0.05),悬尾5 min内静止时间明显延长(P<0.001),中脑黑质TH表达减少(P<0.001),黑质NF-κB、IFN-γ、IL-1β含量均增加(P<0.0001),纹状体区细胞肿胀明显(P<0.05)。与模型组相比,刮痧组大鼠5 min内运动总距离增加(P<0.05)、起点停留时间缩短(P<0.05)、悬尾5 min内静止时间缩短(P<0.05),黑质区TH表达增加(P<0.05),黑质NF-κB、IFN-γ、IL-1β含量均下降(P<0.05),纹状体区细胞肿胀情况改善(P<0.0001)。刮痧组与药物组相比,各项指标差异均无统计学意义。结论刮痧可改善鱼藤酮诱导的PD大鼠的运动功能障碍,其机制可能与下调炎性因子表达,抑制神经炎性反应,减少多巴胺能神经元丢失,发挥神经保护作用有关。

导入酵母NDI1基因减少鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型的损伤

目的探讨导入酵母NDI1基因能否替代人功能缺陷的线粒体复合体Ⅰ,为复合体Ⅰ功能障碍所致散发型帕金森病(PD)的基因治疗提供研究基础。方法将表达酵母NDI1的重组腺相关病毒(rAAV-NDI1)感染鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型。设DMSO+空载、鱼藤酮+空载、鱼藤酮+NDI1共3组。用Western blot、免疫荧光染色、氧耗测定、ATP含量测定、ROS测定等方法检测细胞病理学、线粒体功能方面指标。结果鱼藤酮+NDI1组较鱼藤酮+空载组,细胞形态明显改善,细胞存活率显著上升(P<0.05),pS129α-突触核蛋白、全细胞自噬显著下降(P<0.05,P<0.001);复合体Ⅰ依赖性氧耗显著升高(P<0.01),细胞总ATP合成、线粒体氧化磷酸化偶联的ATP合成显著上升(P<0.01),线粒体ROS、线粒体自噬显著降低(P<0.01,P<0.001)。结论导入酵母NDI1基因可以在鱼藤酮诱导的分化型帕金森病细胞模型中,替代性弥补复合体Ⅰ的功能缺陷,对细胞病理学、线粒体功能的损伤具有改善作用。

人参皂苷Rg3对鱼藤酮纳米脂质载体诱导的帕金森病模型大鼠黑质神经元的保护作用

目的:探讨人参皂苷Rg3对鱼藤酮纳米脂质载体诱导的帕金森病模型大鼠黑质神经元的保护作用。方法:采用雄性成年大鼠(SD)36只,随机分为对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性药物组,每组6只,分别编号1~6号。各组大鼠均于造模前3 d开始给药,每天1次,连续31 d,低剂量组给予3 mg/kg Rg3灌胃,中剂量组给予6 mg/kg Rg3灌胃,高剂量组给予12 mg/kg Rg3灌胃,阳性药物组给予11 mg/kg司来吉兰灌胃,对照组及模型组给予同等剂量羧甲基纤维素钠(CMC-Na)灌胃。灌胃3 d后,除对照组外其余5组大鼠均皮下注射鱼藤酮纳米脂质载体(R-NLC),首剂量给予0.5 mg/kg,第2次给予0.8 mg/kg,此后每次1 mg/kg,2 d一次,连续28 d,对照组皮下注射同等剂量空白纳米脂质载体。采用肌僵直实验和外观行为表现评分考察外观行为学表现;黑质HE染色和透射电镜观察神经元形态和细胞超微结构情况。结果:给药28 d后,模型组外观行为表现评分高于对照组(P<0.05),Rg3低、中、高剂量干预后,外观行为表现评分低于模型组(P<0.05)。肌僵直实验中,模型组大鼠比对照组大鼠移动潜伏期时间延长(P<0.05),而Rg3低、中、高剂量组移动潜伏期时间低于模型组(P<0.05)。HE染色可见,与对照组相比,模型组大鼠黑质正常神经元数目减少,神经元有早期细胞凋亡的特征,Rg3干预能避免模型大鼠黑质神经元形态的变化,减少细胞凋亡的产生,使存活的神经元数目增多。透射电镜结果显示,与对照组相比,模型组大鼠黑质神经元出现细胞凋亡特征,经过低、中、高剂量Rg3干预,大鼠黑质神经元的超微结构基本正常,未见细胞凋亡特征。结论:Rg3对R-NLC诱导的黑质能神经元损伤有保护作用,可减少神经元的凋亡。

SNP-9对鱼藤酮所致帕金森病细胞模型的作用及机制研究

本文研究SNP-9对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞模型的作用和机制。使用鱼藤酮损伤SH-SY5Y细胞建立PD细胞模型;通过MTT法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞活力的影响;Hoechst/PI双染法检测鱼藤酮和SNP-9对细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针检测鱼藤酮和SNP-9对细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的影响;Western blot检测鱼藤酮和SNP-9对酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)、Bcl-2、Bax蛋白水平的影响。研究结果显示,SNP-9能够缓解鱼藤酮诱导的SH-SY5Y细胞活力、TH和α-syn水平、细胞凋亡、ROS水平,以及细胞凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的异常。研究结果提示SNP-9可能通过调控凋亡相关通路,进而缓解鱼藤酮导致的神经细胞损伤。

毛鱼藤酮与鱼藤酮杀虫活性的比较

毛鱼藤酮是从杀虫植物毛鱼藤根中分离的杀虫活性物质。以菜粉蝶、甘蓝蚜、柑桔全爪螨、小菜蛾和黄曲条跳甲为试虫比较测定了毛鱼藤酮与鱼藤酮的毒杀、拒食、生长发育干扰和忌避产卵活性。结果表明 :毛鱼藤酮的杀虫活性依昆虫种类而异 ,对柑桔全爪螨、小菜蛾、黄曲条跳甲的活性与鱼藤酮相当 ,其LC50 没有显著差异 ,而对甘蓝蚜和菜粉蝶的活性显著低于鱼藤酮。毛鱼藤酮和鱼藤酮对昆虫均具拒食活性 ,但前者比后者弱。毛鱼藤酮还与鱼藤酮一样对昆虫有一定的生长发育干扰和忌避产卵作用。NADH 泛醌氧化还原酶抑制活性测定结果显示 ,毛鱼藤酮的抑制活性低于鱼藤酮 ,二者抑制中浓度 (IC50 )分别为 5 2 7nmol·mL- 1 和 2 5 8nmol·mL- 1 。根据拒食、受药途径和酶抑制的试验结果分析认为 ,毛鱼藤酮在浸叶处理时对某些昆虫有较高杀虫活性是由于其比鱼藤酮有较低的拒食活性 。

鱼藤酮通过调控JAK/STAT3通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探究鱼藤酮通过调控酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响。方法:将口腔鳞状细胞癌SCC25细胞分为对照组、低浓度鱼藤酮组(5μmol/L)、中浓度鱼藤酮组(10μmol/L)、高浓度鱼藤酮组(20μmol/L)、JAK2抑制剂AG490组(40μmol/L AG490)。MTT法检测各组SCC25细胞活力;克隆形成实验检测SCC25细胞增殖情况;流式细胞术检测SCC25细胞凋亡情况;Western blotting检测SCC25细胞中增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况。结果:与对照组比较,低浓度鱼藤酮组、中浓度鱼藤酮组、高浓度鱼藤酮组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平呈剂量依赖性显著降低,而凋亡率、caspase-3、Bax表达水平呈剂量依赖性显著增加(P<0.05~P<0.01),AG490组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平显著降低,而凋亡率、caspase-3、Bax表达水平显著增加(P<0.05~P<0.01);与高浓度鱼藤酮组相比,AG490组细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、凋亡率、caspase-3、Bax表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:鱼藤酮对SCC25细胞增殖的抑制及凋亡的促进可能与抑制JAK/STAT3信号通路有关。

植物中鱼藤酮类化合物检测方法的改进

现有分析鱼藤酮的高效液相色谱方法是针对鱼藤酮的检测而建立的 ,因此它不适合于鱼藤酮类化合物的分析检测。比较鱼藤酮类化合物的UV吸收光谱发现 ,原方法中的检测波长 (2 80nm～ 30 0nm)不适于鱼藤素、毛鱼藤酮及其类似物的检测。通过试验确定适合鱼藤酮类化合物的检测波长为 2 40nm。用CHCl3 MeOH(体积比 9∶1)溶剂提取出的植物中的鱼藤酮类化合物 ,经C18柱进行色谱分离后 ,以MeOH H2 O(体积比 6 6∶34 )为洗脱剂对鱼藤酮类化合物进行等度洗脱。实验结果表明 ,改进的方法可一次性分离检测出鱼藤酮、鱼藤素、毛鱼藤酮及其 12a 羟基 和 6a ,12a 脱氢 类似物 ,各峰分离良好。

鱼藤酮乳油中鱼藤酮含量的反相HPLC-DAD法测定

建立反相HPLC-二极管阵列检测器(diode array detector,DAD)法测定了鱼藤酮乳油中鱼藤酮的含量.色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-超纯水(70:30);采用等浓度洗脱,流速为1.0 m L/min;柱温35℃;检测波长297 nm;进样体积10μL.该方法的线性范围是1~200μg/m L(R﹥0.999),最低检出浓度(LOD,S/N=3)为0.1μg/m L,定量限(LOQ,S/N=10)为0.25μg/m L,重复性实验中鱼藤酮峰面积的相对标准偏差(RSD,n=5)为2.51%,加标回收率为97.14%~98.11%.

液相色谱-串联质谱法同时检测水产品中苦参碱和鱼藤酮残留

建立了液相色谱-串联质谱同时检测水产品中苦参碱与鱼藤酮残留的方法。试样以乙酸铵缓冲液-乙腈提取,提取液中加入NaCl盐析后,以正己烷除脂净化。采用Agilent Zobax SB-C18色谱柱,以乙酸铵缓冲液-乙腈为流动相,梯度洗脱分离后,采用电喷雾电离源串联质谱的正离子模式测定。分析物在0.001~0.05 mg/kg范围内线性关系良好,线性相关系数大于0.99。在0.002~0.2 mg/kg浓度范围内,平均加标回收率为82.3%~96.1%;相对标准偏差为6.1%~12.6%。苦参碱和鱼藤酮的检出限分别为0.86和0.53 mg/kg。本方法可靠、稳定,满足水产品中苦参碱和鱼藤酮残留检测以及药代动力学研究的需要。

三氯化铝催化鱼藤酮异构化制备异鱼藤酮

为了优化鱼藤酮异构化制备异鱼藤酮的工艺。采用三氯化铝催化下异构化。合成收率高达90.5%,较文献提高56%。目标产物经核磁共振谱确证。实验结果表明,三氯化铝催化鱼藤酮异构化的方法可行,反应条件温和。

鱼藤酮致帕金森病大鼠行为学与黑质病理损伤的关系

目的研究鱼藤酮所致大鼠帕金森病模型行为学变化及与黑质多巴胺能神经损伤的关系。方法Wistar大鼠每日颈背部皮下注射鱼藤酮油乳液（2mg／kg），按所建立的评分标准记分，有记分即终止给药。中脑黑质病理切片行酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化染色。结果鱼藤酮用药36d，96％的大鼠出现行为学改变，记分为1-2分者51％，4-6分者15％，8～10分者30％。约3％不敏感。记2分及以上的动物，黑质细胞缺失显著。从黑质TH染色细胞胞体的形态及突起损伤程度见，随着行为学记分的增加损伤加剧。结论动物行为变化主要是黑质多巴胺能神经受损和缺失所引起。行为学记分能相应反映黑质多巴胺能神经元的损伤程度。

黄芩苷抑制鱼藤酮帕金森病大鼠黑质铁积聚及作用机制

目的研究PD大鼠中脑黑质多巴胺(DA)神经损伤、铁积聚、铁转运蛋白表达及氧应激水平改变之间的关系,探讨铁积聚在PD发生发展中的作用及黄芩苷保护DA能神经、抑制铁积聚的机制。方法实验采用鱼藤酮PD模型大鼠,观察黑质铁含量及TH、DMT1、FP1的表达,检测血清、肝脏铁含量以及大脑皮层GSH和MDA含量。结果鱼藤酮PD大鼠DA能神经元明显缺失,同步发生了脑内氧化应激水平增加、GSH降低;血清铁降低而肝铁增高;黑质铁大量积聚发生在DA能神经元大量脱失和铁转运蛋白DMT1、FP1表达改变之后;黄芩苷可调节DMT1、FP1表达,减少黑质铁积聚,降低脑内氧应激水平,增加GSH含量。结论研究证明铁转运蛋白DMT1表达增加和FP1表达降低参与了黑质铁积聚;铁积聚及过高的氧应激反应促进了黑质DA能神经细胞损伤的发展;黄芩苷对PD大鼠DA能神经细胞具有保护作用,机制与抑制铁积聚、调节铁转运蛋白DMT1、FP1表达、降低氧应激有关。

鱼藤酮对神经瘤细胞线粒体膜电位的影响

[目的 ]探讨农药鱼藤酮对神经细胞线粒体的毒性作用机制。 [方法 ]采用 0 5、0 75、1 0 0 μmol/L三种浓度的鱼藤酮对神经瘤细胞 (SH SY5Y)染毒 2 4h ,通过线粒体特异性染料罗丹明 1 2 3进行荧光标记 ,利用激光扫描共聚焦显微镜观察染毒细胞线粒体的膜电位变化 ,并与未染毒的细胞对照组进行比较。 [结果 ]经图象扫描每个细胞得到 1 6个荧光强度变化数值 ,并对其荧光变化值进行分析。表明鱼藤酮可引起线粒体膜电位的改变 ,高、中剂量组荧光强度变化值(1 2 4 84±0 2 4 0 5、1 2 4 86± 0 30 5 7)与低剂量组、溶剂对照组、空白对照组荧光强度变化值 (1 52 3 0± 0 442 0、1 770 1±0 391 9、1 72 5 4±0 2 70 5)差异均存在显著性 (P <0 0 5) ,且随剂量增高 ,有降低趋势。 [结论 ]提示线粒体膜电位的改变是鱼藤酮神经细胞毒性作用的重要环节之一。

重复注射鱼藤酮对中枢多巴胺神经元的毒性作用

目的 研究小剂量鱼藤酮长期暴露对大鼠和小鼠中枢多巴胺能神经元的损伤特点。方法 昆明小鼠和Wistar大鼠每日腹腔注射鱼藤酮 (Rotenone) ,连续 40d。用小鼠攀爬笼检测阿扑吗啡 (APO)诱导的定型行为 ,以HPLC法检测血浆和脑组织鱼藤酮浓度以及脑皮层和纹状体多巴胺 (DA)、二羟基苯乙酸 (DOPAC)含量。结果 注射鱼藤酮 2 0d ,大鼠脑皮层和纹状体鱼藤酮明显蓄积 ,APO诱导的小鼠攀爬行为显著下降 ,纹状体DA和DOPAC含量也显著降低。鱼藤酮暴露 2 0d和 40d ,纹状体DA和DOPAC含量均显著下降 ,且有明显的量效和时效关系。

印楝素与鱼藤酮及其复配混剂对斜纹夜蛾的毒效研究

用印楝素和鱼藤酮及其复配混剂对斜纹夜蛾3龄幼虫进行毒力测定。结果表明,印楝素和鱼藤酮单剂的毒力作用为一种剂量依赖关系;其复配混剂的触杀最佳配比为2∶6,此时印楝素和鱼藤酮浓度分别为200μg/mL和100μg/mL,共毒系数为423.15;其复配混剂的拒食最佳配比为3∶5,此时AFC50为1.2 mg/L,发育抑制率达90%以上只需35 mg/L。

黄芩苷对鱼藤酮致帕金森大鼠黑质多巴胺能神经的保护作用

目的观察黄芩苷对鱼藤酮致帕金森(PD)大鼠黑质多巴胺能神经的保护作用。方法Wistar大鼠每日颈、背部皮下注射2mg/ml鱼藤酮葵花油乳化液(2mg/kg/d)3～5周制备鱼藤酮致PD大鼠模型;黄芩苷治疗组造模成功后灌胃4周,防治组与鱼藤酮同步每日灌胃黄芩苷(78mg/kg/d)9周;大鼠行为变化分6个等级记分,最终统计各组不同分值动物出现的例数、发生百分率及总记分;脑切片黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化染色分析黑质损伤;HPLC法分析纹状体DA含量;分光光度法测定脑组织MDA、GSH、GR的含量。结果黄芩苷防治PD实验见:(1)黄芩苷组行为学记分动物的百分率、总记分均低于模型组;(2)模型组黑质TH细胞数量呈现大量明显丢失,而黄芩苷防治组没有明显丢失。黄芩苷治疗PD实验见:(1)模型组停给鱼藤酮30d见纹状体DA显著降低,黄芩苷治疗能阻止这种降低,使纹状体多巴胺保持在正常水平;(2)黄芩苷不能抑制PD大鼠脑组织增加的脂质过氧化反应。结论行为学、病理学和DA递质的研究均证明黄芩苷防治和治疗给药对鱼藤酮致PD大鼠黑质纹状体多巴胺能神经有保护作用。但黄芩苷不能抑制PD大鼠脑组织增加的脂质过氧化反应。