岩黄连总生物碱抑制M2型巨噬细胞抗小鼠肝癌实验研究

目的:探讨岩黄连总生物碱能否通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制M2型巨噬细胞发挥抗小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤生长的作用。方法:建立小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤模型,岩黄连总生物碱高、中、低剂量(100、50、25 mg/kg)给药10 d后,称量瘤体及脾脏、胸腺质量,计算脏器系数,HE染色观察肿瘤组织病理学改变,RT-qPCR检测瘤组织M2型巨噬细胞标志物CD206 mRNA表达。体外培养RAW264.7细胞,用IL-4、IL-13(20 ng/mL)诱导细胞M2极化,岩黄连总生物碱高、中、低浓度(25、12.5、6.25μg/mL)干预24 h,流式细胞仪检测CD206阳性表达;RT-qPCR检测CD206、ARG-1、IL-10 mRNA表达;Western Blot检测RAW264.7细胞内PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达。结果:动物实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中剂量H_(22)肝癌细胞实体瘤的生长受到抑制,脾脏系数与胸腺系数显著升高(P<0.05),HE染色切片中肿瘤细胞浸润数减少,区域坏死肿瘤组织中CD206 mRNA表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果显示,岩黄连总生物碱高、中浓度组M2型巨噬细胞标志物CD206阳性表达及CD206、ARG-1、IL-10 mRNA和通路PI3Kp110、p-AKT、p-mTOR蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:岩黄连总生物碱可通过负调控PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞M2型极化发挥抗小鼠H_(22)肝癌细胞实体瘤生长作用。

黄连总生物碱通过调控CaMKII减轻局灶性脑缺血(MCAO)大鼠神经功能损伤的研究

目的:研究黄连总生物碱调节钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)对局灶性脑缺血(MCAO)大鼠神经功能损伤后的影响。方法:随机将50只雄性SD大鼠分为假手术组、对照组、黄连总生物碱(高浓度、中浓度和低浓度)治疗组,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血(MCAO)模型,假手术组不给予线栓处理,术后对大鼠进行神经功能评分。各治疗组给予黄连总生物碱灌胃治疗,按照人与大鼠等效剂量关系折算,假手术组用等量生理盐水灌胃;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠脑组织中CaMKII的含量;采用BCA法和WST-1法分别测超氧化物歧化酶(SOD)的活力和丙二醛(MDA)的含量;制备脑组织病理切片,HE染色观察脑组织形态学变化。结果:与假手组相比,模型组评分和脑梗死体积明显升高,各个实验组经过黄连治疗后神经功能评分和脑梗死体积都有明显降低(P<0.05)。模型组与假手术组的CaMKII的含量相比明显升高(P<0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠脑组织损伤程度加重,外周血氧化因子SOD活性降低,MDA含量升高;黄连治疗后,低、中、高剂量组SOD水平升高,MDA水平降低。HE染色观察脑组织病变程度,给药组大鼠的病变程度较模型组有明显改善。结论:黄连总生物碱通过调节脑缺血大鼠模型中CaMKII活性的影响,对海马细胞的神经损伤有一定的恢复和治疗作用。

黄连总生物碱对大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制研究

目的:采用幽门螺旋杆菌脂多糖诱导的胃炎动物模型考察黄连总生物碱(TA)对黏膜炎症反应的作用及可能机制。方法:幽门螺旋杆菌脂多糖(Helicobacter pyloriLPS)灌胃,连续4 d即可引起急性胃炎的黏膜反应症状,分组给予50,100,200 mg.kg-1TA后,组织学观察病变及用药后的改善情况;一氧化氮合酶检测试剂盒检测TA对组成型(cNOS)和诱导型(NOS-2)一氧化氮合酶的影响;肿瘤坏死因子(TNF-α)检测试剂盒测定TA对胃黏膜TNF-α生成的影响。结果:H.pyloriLPS可显著刺激胃黏膜上皮细胞凋亡,增强黏膜组织NOS-2的表达,并降低cNOS的表达,同时增加血清中TNF-α含量。高、中、低剂量TA可显著降低H.pyloriLPS诱导的胃黏膜上皮细胞凋亡发生,同时抑制NOS-2的表达,增强cNOS的表达,并抑制血清中TNF-α的含量。结论:TA对H.pyloriLPS引起的大鼠胃部炎症有保护作用,其机制可能是由于TA抑制胃炎时黏膜细胞的凋亡有关,同时TA可通过影响cNOS和NOS-2的表达调节NO的生成,并抑制TNF-α生成,从而减轻胃部炎症反应的发生。

黄连总生物碱对乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用及其机制探讨

目的:研究黄连总生物碱对乙醇致大鼠胃黏膜损伤的保护作用,并对其机制进行探讨。方法:观察预先应用黄连总生物碱对乙醇所致的胃黏膜损伤的影响;分析幽门结扎5 h大鼠胃液、胃壁结合黏液和胃腔游离黏液;检测胃黏膜一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和.OH的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力。结果:黄连总生物碱呈剂量依赖性显著抑制乙醇性胃黏膜损伤(P<0.001),其损伤抑制率大于临床常用量的西米替丁,亦大于等量的小檗碱;黄连总生物碱亦显著阻遏乙醇性胃酸分泌,而对胃液量和胃黏液的分泌无明显影响;黄连总生物碱可显著阻遏乙醇性大鼠胃损伤胃黏膜组织内NO含量和SOD活力下降,明显抑制损伤胃黏膜MDA和.OH含量升高。结论:黄连总生物碱有明显抗乙醇性胃黏膜损伤作用。其机制可能与抑制胃酸过度分泌,抑制胃黏膜NO含量下降,阻遏胃黏膜.OH,MDA含量升高以及恢复SOD活力有关,而与胃黏液分泌无关。

黄连总生物碱对实验性糖尿病肾病大鼠肾功能保护作用的研究

目的观察黄连总生物碱对实验性糖尿病肾病大鼠肾功能的保护作用。方法雄性SD大鼠30只,随机分为5组,每组6只。一组作为正常对照组,其余4组分别以高糖高脂饮食加单肾切除、腹腔内注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型。造模后其中3组分别给予高中低剂量黄连总生物碱,另一组为模型对照组。各模型组及对照组每4周,测1次血糖及尿微量白蛋白。造模后12周,心脏取血,测肌酐、尿素、糖化血红蛋白等。结果模型组血糖、血尿素氮、血肌酐均显著高于正常对照组,P<0.05,尿肌酐、肾小球滤过率均低于正常对照组,P<0.05。尿微量白蛋白值升高。黄连总生物碱干预组大鼠血糖显著降低,肾功能显著改善,其中中剂量组降糖及肾功能改善效果最为显著。结论黄连总生物碱对糖尿病肾病大鼠有保护其肾功能,并延缓肾功衰竭过程的作用。

黄连总生物碱对铝致神经元退变的保护作用

目的采用铝负荷致小鼠脑损伤模型,探讨黄连总生物碱对铝致神经元退行性变的防治作用。方法以侧脑室注射0.25%Al溶液3μl(AlCl3.6H2O配制),以Al计算浓度,每日1次,连续5d;同时通过灌胃每日给予1次黄连总生物碱,直到实验结束(共29d)。用行为学、生物化学、免疫组织化学、等离子体原子发射光谱法和病理形态学评价小鼠的学习记忆能力、单胺氧化酶活性、线粒体铁蛋白水平、脑铁和铝水平及海马病理形态学变化。结果模型组小鼠学习记忆能力明显下降,大脑皮层、海马和纹状体MAO-B活力增加,脑铁水平明显升高,线粒体铁蛋白水平下降,而海马CA1区神经元核固缩和神经细胞丢失。黄连总生物碱(TCA)呈剂量依赖性阻遏铝负荷小鼠上述指标的改变;小檗碱和尼莫地平类也显示类似黄连总生物碱的作用。结论黄连总生物碱对铝过负荷致小鼠神经元退行性变有明显防治作用;其作用可能主要与其主要成分小檗碱有关。

黄连总生物碱对糖尿病大鼠降血糖作用研究

目的:探讨黄连总生物碱对糖尿病大鼠的降血糖作用。方法:采用链脲佐菌素50 mg/kg诱导SD大鼠形成糖尿病模型,筛选糖尿病大鼠空腹血糖的禁食时间,考察黄连总生物碱给药68d对糖尿病大鼠血糖、糖化血清蛋白、肌酐、尿素氮的影响,并测定其肝、胃、肾脏器指数,评价黄连总生物碱对糖尿病大鼠的降血糖作用。结果:(1)选择白天禁食6 h为糖尿病大鼠的禁食时间。(2)与模型组比较,黄连总生物碱高剂量组(含黄连总生物碱578.7 mg/kg)可明显降低糖尿病大鼠空腹6 h血糖及糖化血清蛋白(P<0.05);黄连总生物碱低剂量组(含黄连总生物碱192.9 mg/kg)可显著降低谷胱甘肽-过氧化物酶(P<0.01)。黄连总生物碱对糖尿病大鼠肌酐、超氧化物歧化酶、总胆固醇、甘油三酯及脏器指数总体上影响不明显(P>0.05)。结论:黄连总生物碱对糖尿病大鼠有降血糖的作用。

黄连总生物碱有效性和安全性的初步评价

目的对黄连总生物碱有效性和安全性进行初步评价。方法体外抑菌试验考察黄连总生物碱最小抑菌浓度,以及其对假丝酵母菌和光滑酵母菌的抑菌作用,进行初步有效性评价;通过家兔阴道黏膜刺激性试验和小鼠急性毒性试验,观察家兔阴道黏膜的改变情况,计算小鼠半数致死量,进行安全性评价。结果黄连总生物碱对白色念珠菌的MIC为4.69 mg/m L,黄连总生物碱口服给药对正常成年人的LD50为128.08 mg/kg,对阴道黏膜刺激性小。结论黄连总生物碱抑菌能力强于黄连水提物和醇提物,与盐酸小檗碱和克霉唑相比无显著差异,并且安全性较好。

黄连总生物碱对溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜损伤及p38-PPARγ/NF-κB通路的影响

目的:黄连总生物碱对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠肠黏膜损伤的保护作用,并初步探究其可能的作用机制。方法:将60只大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、黄连总生物碱低(0.1 g·kg^-1)、中(0.2 g·kg^-1)、高(0.3 g·kg^-1)剂量组、阳性对照组(柳氮磺吡啶,0.6 g·kg^-1)组,每组10只。建立UC大鼠模型,造模4 d后各组灌胃给药,1次/d,给药容积为每只10ml,正常对照组和模型组给予等量生理盐水,连续给药2周。观察大鼠一般情况,评估大鼠结肠组织大体形态学损伤情况;HE染色观察结肠组织病理损伤情况;Elisa法检测结肠组织匀浆液中白介素-6(IL-6)、白介素^-10(IL^-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测结肠组织中p38、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、核因子κB(NF-κB)蛋白表达;免疫组化法检测结肠组织中PPARγ、NF-κB蛋白阳性表达情况。结果:正常对照组大鼠无异常性改变;模型组大鼠毛发干枯、精神倦怠、肛周污秽、大便黏腻、体型明显消瘦,经黄连总生物碱干预后,大鼠体质量升高,精神状态好转,饮食增加,大便粘腻、出血情况得到有效改善。与正常对照组相比,模型组结肠组织大体形态损伤评分、肠黏膜损伤评分、IL-6和TNF-α水平、p-p38 MAPK和NF-κB蛋白表达水平、NF-κB蛋白表达阳性率显著升高,IL^-10水平、PPARγ蛋白表达水平和阳性率显著降低(P<0.05)。与模型组相比,黄连总生物碱各剂量组和阳性对照组结肠组织大体形态损伤评分、肠黏膜损伤评分、IL-6和TNF-α水平、p-p38MAPK和NF-κB蛋白表达水平、NF-κB蛋白表达阳性率显著降低,IL^-10水平、PPARγ蛋白表达水平和阳性率显著升高(P<0.05),黄连总生物碱组的作用呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:黄连总生物碱能够缓解溃疡性结肠炎模型大鼠肠黏膜损伤,激活PPARγ,抑制p38/NF-κB通路,减轻结肠组织炎症反应。

葛根芩连方药中黄连总生物碱的含量测定

目的建立葛根芩连汤及其制剂中黄连总生物碱的含量测定方法。方法氧化铝柱纯化,紫外分光光度法350 nm处测定含量。结果葛根芩连汤水提物中总生物碱含量为32.4 mg/g,加样回收率为98.1 % (RSD =2.9%)。葛根芩连微丸中总生物碱含量为19.6 mg/g。结论该法测定黄连总生物碱方法简单、结果准确,可为葛根芩连微丸质量标准、葛根芩连方及其他含黄连的方剂中生物碱的含量测定提供参考。

小檗碱、巴马亭及黄连总生物碱对胆碱能神经的作用

目的:比较小檗碱、巴马亭及黄连总生物碱对胆碱能神经的作用。方法:观察各药物对离体豚鼠结肠平滑肌自发性收缩活动以及氯化乙酰胆碱和氯化钙引起离体豚鼠结肠平滑肌收缩增强的影响;同时还观察了各药物对小鼠的急性毒性作用和对小鼠血清胆碱酯酶活性的影响。结果:小檗碱、黄连总生物碱以及盐酸巴马亭在低浓度时对胃肠运动均具有兴奋作用,而高浓度时抑制之,他们在高剂量时均能拮抗氯化乙酰胆碱所致平滑肌痉挛,这种作用可为2倍量的氯化乙酰胆碱所部分拮抗。体内试验小檗碱对小鼠的急性毒性较黄连总生物碱为小,可显著降低小鼠血清胆碱酯酶的活性,新斯的明有增强其毒性的趋势,而阿托品不增加其急性毒性。黄连总生物碱对小鼠血清胆碱酯酶的活性无明显影响;阿托品和新斯的明均可显著增强其急性毒性。结论:小檗碱既有直接拮抗胆碱受体的作用,同时也可能通过抑制胆碱酯酶活性发挥其拟胆碱样作用;在黄连总生物碱中,由于含有相当一部分可对抗小檗碱抑制胆碱酯酶活性作用的生物碱,使得胆碱受体拮抗剂阿托品和胆碱酯酶抑制剂新斯的明均可显著增强其急性毒性,其相互作用机理还有待进一步研究。

岩黄连总生物碱对小鼠免疫功能的影响

本文研究了岩黄连总生物碱（ＣＳＢＴＡ）对小鼠免疫功能的调节作用，发现ＣＳＢＴＡ在体内增强溶血空斑值和增强小鼠的迟发型超敏反应。在体外增强同种异型小鼠脾细胞的混合培养反应和增强有丝分裂原刺激脾细胞的增殖反应，另外ＣＳＢＴＡ增强Ｔ细胞产生ＩＬ－２和ＩＦＮ－γ的水平，提示ＣＳＢＴＡ在免疫调节中是一种增强剂。

黄连总生物碱对糖尿病模型大鼠血管内皮功能的保护作用

目的观察黄连总生物碱对糖尿病模型大鼠血管内皮功能的保护作用。方法链脲佐菌素一次性腹腔注射复制糖尿病大鼠模型。黄连总生物碱高、中、低剂量及格列齐特分别灌胃,正常组和模型组给予等量生理盐水,每日1次,连续8周。实验结束后,分光光度法测定血清中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;放射免疫法测定血浆中内皮素(ET)-1、细胞间黏附分子(ICAM)-1的含量;HE染色法观察主动脉病理学改变。结果黄连总生物碱各剂量组不仅能显著降低糖尿病大鼠MDA、ET-1、ICAM-1水平,减轻主动脉病理损伤程度,还能升高NO、SOD水平。结论黄连总生物碱对糖尿病大鼠血管内皮功能具有一定的保护作用。

萸黄连提取物中吴茱萸的鉴别与黄连总生物碱含量测定

目的：鉴别萸黄连总生物碱提取物中吴茱萸的成分，并对黄连总生物碱进行含量测定。方法：采用硅胶薄层层析法，以环己烷-乙酸乙酯-甲醇-三乙胺（19：5：1：1）为展开剂，以10％硫酸乙醇溶液为显色剂，在365nm紫外灯下观察，鉴别提取物中吴茱萸成分；用紫外分光光度法，在波长349nm处测定提取物中黄连总生物碱的含量。结果：萸黄连供试液色谱在与吴茱萸对照溶液色谱相应的位置显相同颜色的荧光斑点，阴性对照溶液色谱无此斑点；用紫外分光光度法测定黄连总生物碱，盐酸小檗碱的线性范围为1．04—11．44μg/ml，r^2=0．99999，平均回收率为99．2％，RSD为1．0％。结论：采用硅胶薄层层析法可简便而准确地鉴别出萸黄连总生物碱提取物中吴茱萸的成分；采用紫外分光光度法测定黄连总生物碱方法简便，结果准确，在实际生产中可作为萸黄连提取物中黄连总生物碱盐含量监测的有效手段。

小檗碱、巴马亭及黄连总生物碱对大鼠胃条的作用比较研究

目的:比较黄连生物碱类物质对大鼠胃条作用的异同,了解各主要成分之间可能存在的协同作用。方法:观察黄连总生物碱及其主要单体成分对离体大鼠胃条平滑肌自发性收缩活动以及肾上腺素、去甲肾上腺素引起离体鼠胃条平滑肌舒张的影响,同时还观察各药物对5-羟色胺引起大鼠胃条收缩的影响。结果:黄连总生物碱、盐酸巴马亭以及小檗碱在较高浓度时均能引起离体大鼠胃条平滑肌舒张,均能对抗5-羟色胺引起大鼠胃条收缩,但以黄连总生物碱的作用最强。三种药物对肾上腺素引起大鼠胃条舒张的作用均无明显影响;小檗碱对去甲肾上腺素无明显对抗作用,巴马亭与去甲肾上腺素有协同作用,而黄连总生物碱可显著对抗肾上腺素的作用。结论:黄连总生物碱可能含有与小檗碱、巴马亭作用不同的其他物质,也可能小檗碱和巴马亭在某些方面存在一定的协同作用。

黄连总生物碱Pluronic/SWCNTS给药系统的制备及初步评价

目的:优化黄连总生物碱的提取工艺,构建功能化Pluronic/SWCNTS负载黄连总生物碱的给药系统,并对其进行质量评价。方法:采用星点设计-效应面法优化黄连总生物碱提取工艺;采用超声法制备载药体系,以载药量为指标,通过单因素考察优化处方工艺,并对给药系统的形态、粒径及稳定性等进行评价。结果:黄连总生物碱Pluronic/SWCNTS给药系统的载药量为9.5%,平均粒径为(220.1±1.5)nm,放置15 d可长期稳定存在。结论:黄连总生物碱Pluronic/SWCNTS给药系统制备成功,具有作为口服纳米给药系统的潜力。

黄连总生物碱对结核菌PhoPR双组份系统基因转录水平影响的研究

为研究黄连总生物碱对结核菌Pho PR双组份系统基因转录水平的影响,对不同药物作用的菌液提取总RNA并进行反转录,根据Gen Bank中H37Rv的Pho P(0757)基因、PhoR(0758)基因和Sig A的基因序列,应用Primer6.0软件设计荧光定量引物并进行荧光定量PCR分析。结果显示:在高浓度黄连生物碱作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,并且黄连总生物碱与RPF联合作用时,多药耐药结核菌MT-7、MB-1的Pho P和PhoR的基因的表达水平明显下降,表明黄连生物碱是RFP抗菌增效剂。本试验为结核菌抗菌增效作用机制研究奠定了理论基础。

黄连总生物碱提取物稳定性、理化性质的考察

目的考察黄连总生物碱提取物稳定性及其理化性质。方法根据《原料药物与制剂稳定性试验指导原则》,对提取物进行高湿(92.5%、75%)、高温(60℃)、强光照(4 500 lx)试验,考察其外观、含量变化。采用指标分析法,分别测定黄连总生物碱在pH 2.3、3.5、4.2的磷酸盐缓冲液,超纯水,0.1 mol/L HCl,甲醇,乙醇,乙酸乙酯,正辛醇中的溶解性。采用摇瓶法,分别测定黄连总生物碱在不同正辛醇-水、磷酸盐缓冲液、人工肠液、人工胃液中的表观油水分配系数。结果黄连总生物碱含量在高温、高湿、强光条件下无明显变化,在pH=2.3磷酸盐缓冲液中溶解度最高,正辛醇中最低,lgP均在-1~0范围内。结论黄连总生物碱提取物性质稳定,水溶性好,脂溶性差,渗透性理想,pH可影响其溶解性。

黄连总生物碱与三七皂苷组合物对大鼠糖尿病心肌缺血再灌注损伤的影响

目的明确黄连总生物碱与三七总皂苷组合物(简称HS组合物)对糖尿病心肌缺血再灌注损伤的治疗效果,初步探讨其作用机制。方法选用Wistar大鼠,以链脲佐菌素注射结合冠脉结扎制备糖尿病心肌缺血再灌注损伤模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、二甲双胍组、HS组合物组,检测大鼠血清胰岛素、血糖、糖耐量、SOD、MDA及CK-MB水平;HE染色观察大鼠胰腺与心肌组织病理变化;Western Blot检测大鼠心肌组织NOX2、NOX4、NLRP3、IL-1β、Caspase-1、Bax、Caspase-3与Bcl-2蛋白表达水平。结果HS组合物能降低糖尿病心肌缺血再灌注损伤大鼠血糖,提高胰岛素水平(P<0.001),改善大鼠口服糖耐量、氧化应激及心肌酶变化,降低大鼠心肌NOX2、NOX4、NLRP3、Bax与Caspase-3蛋白的表达,升高Bcl-2蛋白的表达,减轻大鼠胰腺组织与心肌组织损伤。结论HS组合物能通过降低血糖、提高胰岛素水平,下调NOX2、NOX4以及NLRP3蛋白的表达,抑制氧化应激与炎症反应,从而改善心肌细胞凋亡,减轻糖尿病心肌缺血再灌注引起的心肌损伤。

基于网络药理学的黄连总生物碱防治糖尿病的作用机制研究

目的:基于网络药理学相关技术系统研究中药黄连防治糖尿病的主要活性成分及相关靶点通路,为黄连总生物碱防治糖尿病作用机制的揭示提供依据。方法:采用TCMSP数据库、KEGG数据库、MAS 3.0生物分子功能注释系统及ChemMapper数据库等数据库对黄连总生物碱成分进行系统分析,同时结合Lipinski类药性五原则筛选出黄连的主要药效成分,筛选相关靶点信息,靶点信息通过MAS 3.0系统完成基因功能和通路注释分析,并运用Cytoscape v3.6.1制作化合物-靶点-疾病网络模型进行分析。结果:研究共筛选出符合要求的黄连生物碱活性成分6个,模拟预测得到直接或间接与糖尿病相关的靶点累计89个,通路53条。推测出在黄连总生物碱防治糖尿病及其并发症的作用中,总生物碱中化合物小檗碱、黄连碱、小檗红碱、表小檗碱、巴马汀、甲基黄连碱等占据主导地位。这些生物碱成分可能通过协同调节PPAR、PI3K-Akt、GSK-3β、VEGF等信号转导通路从而抑制与糖尿病相关的炎症反应、改善胰岛素抵抗及糖脂代谢、恢复胰岛β细胞功能。结论:基于网络药理学的研究表明,黄连总生物碱通过协同调节与炎症反应、胰岛素抵抗、糖脂代谢、胰岛β细胞功能相关的靶点及通路,综合发挥抗糖尿病作用。