山羊AGRP基因克隆及在黑色素细胞中的表达研究

为了研究刺鼠相关蛋白(agouti-related protein,AGRP)基因在动物皮肤黑色素沉积中的作用,试验以酉州乌羊为研究对象,利用TRIzol法提取皮肤组织RNA,通过RT-PCR扩增AGRP基因编码区(coding region,CDS)序列,采用生物信息学软件预测AGRP蛋白质结构和功能,构建系统进化树分析山羊与其他哺乳动物AGRP基因的保守性;体外培养黑色素细胞,利用实时荧光定量PCR检测AGRP基因在细胞增殖和分化阶段不同时间点的相对表达量。结果表明:酉州乌羊AGRP基因CDS序列长度为405 bp,编码135个氨基酸,编码蛋白质分子量为14871.36 u,理论等电点为5.70;AGRP蛋白二级结构由3个α-螺旋和1个β-折叠以αααβ的顺序组成;AGRP蛋白的氨基酸序列在不同物种间高度相似;在构建的系统进化树中,酉州乌羊与绵羊和山羊的亲缘关系最近,与小鼠和人的亲缘关系最远。AGRP基因在黑色素细胞增殖和分化阶段的不同时间点均有表达,随着细胞培养时间的延长,AGRP基因的相对表达量在增殖阶段先逐渐降低再升高,在分化阶段逐渐升高,与0小时比较均差异极显著(P<0.01)。说明AGRP基因在黑色素细胞中具有时空特异性,在黑色素沉积过程中发挥重要作用。

哺乳动物毛色形成过程及黑色素细胞标志物研究进展

哺乳动物的毛色主要由黑色素细胞合成的黑色素决定。细胞着色过程包括黑色素细胞的发育、黑色素的合成与代谢及调节黑色素合成的信号通路等。黑色素细胞可被区分为多种类型,且这些类型可用多种黑色素细胞标志物来鉴定。毛色可以判断动物的身体状况和营养状况,并且毛色不同可能会对动物生产产生一定影响。文章综述了哺乳动物毛色形成的结构基础及其发育周期,描述了从神经嵴到驻留在几种组织中的成熟黑色素细胞的细胞色素化过程,总结了黑色素细胞的类型及各个类型黑色素细胞的标志物,讨论了动物毛色在动物生产中的应用,为解析哺乳动物毛色形成遗传机制提供帮助及为毛色影响的动物生产提供有效建议。

白斑冲剂含药血清对H_(2)O_(2)诱导的正常人表皮黑色素细胞氧化应激和抗氧化基因表达的影响

目的 研究白斑冲剂含药血清对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的正常人表皮黑色素细胞(PIG1)氧化应激(OS)和抗氧化基因表达的影响。方法 以适当浓度H_(2)O_(2)处理PIG1,建立体外黑色素细胞OS模型。配制白斑冲剂中药复方含药血清。将对数生长期的PIG1随机分为对照组(PIG1+正常大鼠血清)、模型组(PIG1+H_(2)O_(2))和白斑冲剂组(PIG1+白斑冲剂含药血清+H_(2)O_(2))。流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS);硫代巴比妥酸(TBA)法检测各组细胞内丙二醛(MDA);实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测抗氧化基因核因子E2相关转录因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA的表达。结果 与对照组比较,模型组细胞内ROS和MDA水平显著升高[ROS:(166.30±3.62)%比(100.00±3.20)%,P<0.01;MDA:(3.60±0.17) nmol/mg比(2.79±0.36) nmol/mg,P<0.01];与模型组比较,白斑冲剂组细胞内ROS和MDA水平显著下降[ROS:(137.10±13.38)%比(166.30±3.62)%,(P<0.05);MDA:(3.25±0.18) nmol/mg比(3.60±0.17) nmol/mg,P<0.01)];与对照组比较,模型组细胞中GPx和SOD2 mRNA的表达显著下降(GPx mRNA:0.26±0.01比1.00±0.12,P<0.01;SOD2 mRNA:0.25±0.02比1.00±0.09,P<0.01),Nrf2、HO-1和NQO1 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,白斑冲剂组细胞中GPx和SOD2 mRNA的表达显著升高(GPx mRNA:0.75±0.09比0.26±0.01,P<0.01;SOD2mRNA:0.62±0.10比0.25±0.02,P<0.01),Nrf2和HO-1 mRNA的表达也明显升高(Nrf2 mRNA:1.95±0.23比1.11±0.34,P<0.05;HO-1 mRNA:1.91±0.21比1.03±0.32,P<0.05),NQO1 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,白斑冲剂组Nrf2和HO-1 mRNA的表达明显升高(Nrf2 mRNA:1.95±0.23比1.00±0.07,P<0.01;HO-1 mRNA:1.91±0.21比1.00±0.23,P<0.01)]。结论 白斑冲剂含药血清能明显降低OS下PIG1内ROS和MDA的含量,有抗氧化损伤的作用。其作用机制可能是与激活Nrf2-ARE信号通路,提高下游抗氧化酶Gpx、SOD2和HO-1 mRNA的表达有关。

白芍总苷对H_(2)O_(2)诱导下黑色素细胞的保护及作用机制

为了探究白芍总苷治疗白癜风的潜在作用机理,对人正常黑色素细胞PIG1进行体外培养,用不同浓度的白芍总苷对细胞进行预处理并施加H_(2)O_(2)刺激,用CCK-8法检测细胞活力,用流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧的产生,用蛋白免疫印迹法检测细胞色素c、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9含量以及MAPK家族成员p38及其磷酸化的表达.结果显示:①白芍总苷可有效抑制H_(2)O_(2)诱导的PIG1细胞毒性,且呈剂量依赖性;②白芍总苷减少了H_(2)O_(2)诱导的细胞活性氧的产生和细胞色素c的释放,下调了cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的激活;③白芍总苷有效阻碍了H_(2)O_(2)诱导的p38 MAPK磷酸化.上述结果表明,白芍总苷可作为一种有效的抗氧化剂,保护黑色素细胞免受H_(2)O_(2)诱导的氧化应激损伤.

视盘黑色素细胞瘤病例报道1例并文献回顾

视盘黑色素细胞瘤(MCOD)是临床罕见的疾病,容易和脉络膜黑色素瘤相混淆,两者治疗方式截然不同,MCOD为良性疾病,存在恶性转化可能,因此与恶性疾病进行鉴别,及时发现肿瘤恶性转化对后续治疗至关重要。本文报道1例体积较大的右眼MCOD,最佳矫正视力为20/20,眼底照相可见右眼视盘区近似椭圆形的黑色肿物,边界不清,呈羽毛状;眼部B型超声可见右眼视盘上圆顶状隆起占位病灶;视野弓形缺损;光学相干断层扫描成像提示右眼神经节细胞层变薄;光学相干断层扫描血管成像提示右眼血流密度增高,脉络膜血流缺损。诊断考虑为MCOD,未进行干预治疗,观察随访4个月后,瘤体无明显变化,嘱患者每年定期复查。分析检查结果发现:弓形视野缺损区域与患眼神经节细胞变薄区域有一致性,与脉络膜血流缺损、视网膜黄斑区血管密度增高具有相关性。通过对此病历进行总结归纳,并回顾文献研究,为临床医生提供诊断依据。

伴有黑色素细胞分化的Xpl1 易位性肿瘤2例临床病理观察

目的探讨伴有黑色素细胞分化的Xpl1易位性肿瘤的临床病理特征、诊断、鉴别诊断及预后。方法收集攀枝花学院附属医院诊断的2例伴有黑色素细胞分化的Xpl1易位性肿瘤,总结其临床资料、形态学特征、免疫表型及分子遗传学改变。结果女性2例,年龄分别为47岁、25岁。肿瘤最大径分别为10.3 cm和3.0 cm。组织学表现为肿瘤细胞呈上皮样,被纤维血管间质分隔呈巢团状或腺泡状。1例可见色素沉着。免疫表型:肿瘤细胞均弥漫表达TFE3、HMB45、MelanA。荧光原位杂交检测:2例均存在TFE3基因易位。随访:1例死亡;1例术后未见复发或转移。结论伴有黑色素细胞分化的Xpl1易位性肿瘤是一种罕见的间叶性恶性肿瘤,具有独特的形态学、免疫表型及分子改变,需要与多种组织来源肿瘤鉴别。

HSP70在毛囊源性黑色素细胞功能调控中的作用研究进展

目前,较多学者认为由热休克蛋白70(HSP70)引发的T细胞免疫反应攻击表皮中黑色素细胞是白癜风的主要病因。研究表明毛囊源性黑色素细胞不表达白癜风相关抗原,HSP70引发的免疫反应对毛囊源性黑色素细胞没有攻击性,使得毛囊黑色素细胞在白癜风中没有受损。在此综述近年来HSP70在毛囊源性黑色素细胞功能调控中的作用将有助于从不同角度理解HSP70、黑色素细胞及白癜风三者之间的关系,有望为白癜风的治疗提供新思路。

MC1R对白癜风黑色素细胞增殖和凋亡的影响研究

目的探讨黑素皮质受体1(MC1R)对白癜风黑色素细胞的作用和相关调控机制。方法体外培养人表皮黑色素细胞系PIG1和白癜风黑色素细胞系PIG3V,分别用MC1R siRNA和MC1R过表达载体处理,qRT-PCR和Western Blot检测各组细胞中MC1R的表达,MTT检测细胞增殖改变,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期改变,活性氧试剂盒检测活性氧(ROS)的产生情况,Western Blot检测p38促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Caspase 3、Bax和Bcl-2、p53、p21和Cyclin D1表达情况。结果敲减MC1R表达后MC1R表达下降,显著抑制黑色素细胞增殖,促进细胞凋亡,G2/M期细胞比例增高,ROS水平增加,Bcl-2、Cyclin D1蛋白降低,p-p38 MAPK、JNK、Caspase 3、Bax、p53和p21蛋白水平升高(P<0.05);而过表达MC1R后逆转上述改变(P<0.05)。结论调控MC1R表达可引起黑色素细胞生物学行为改变,可能参与白癜风黑色素细胞的病变过程。

小鼠黑色素细胞沉默及过表达色素上皮衍生因子对黑色素合成的影响

旨在研究色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)与黑色素合成调控因子之间的互作关系,探索PEDF对黑色素细胞活力和黑色素合成的调控作用,为研究动物毛色形成机制提供基础。本研究将PEDF siRNA及PEDF过表达载体分别转染小鼠黑色素细胞,对黑色素细胞活力、黑色素含量进行检测,采用qRT-PCR、Western blotting及细胞免疫荧光对PEDF、Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的表达和定位进行检测。黑色素细胞PEDF沉默后,黑色素细胞的细胞活力增强,黑色素含量增加,Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的mRNA和蛋白表达量升高;黑色素细胞PEDF过表达后,黑色素细胞活力减弱,黑色素含量减少,Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin的mRNA和蛋白表达量降低。细胞免疫荧光结果显示:PEDF、Wnt1、MITF、β-catenin表达于黑色素细胞的细胞质;Wnt3α表达于黑色素细胞的细胞质和细胞膜。本研究证实:PEDF使黑色素细胞活力减弱,可通过下调促黑色素生成相关的因子Wnt1、Wnt3α、MITF和β-catenin,从而抑制黑色素的生成。

巨型先天性黑色素细胞痣患儿及家长心理特征和心理干预的研究进展

巨型先天性黑色素细胞痣患者在围手术期间,患儿与家长会面临心理上的痛苦,引发不良情绪、认知和行为,对身心造成不利影响。因此,关注巨型先天性黑色素细胞痣患儿及其家长的心理特征并有针对性地开展心理护理干预具有重要的临床实践意义。目前,国内针对巨型先天性黑色素细胞痣患儿及家长的护理学研究比较有限,缺乏系统性的心理护理研究。本文对目前关于巨型先天性黑色素细胞痣患儿及家长的心理特征和心理干预的研究进展进行综述,以期对巨型先天性黑色素细胞痣患儿及家长的心理护理干预提供参考。

黑色素细胞Toll样受体在色素性皮肤病中的作用

Toll样受体(TLR)作为一类跨膜蛋白在固有免疫和获得性免疫中均发挥着重要作用。黑色素细胞功能性表达TLR2、3、4、7和9,参与黄褐斑和白癜风的发病。在黄褐斑的发病中,TLR2可促进黑色素合成及转运,并参与固有免疫反应;TLR4可诱导局部炎性反应促进色素沉着,可能与黄褐斑发病中的炎性反应相关。TLR3和TLR9分别通过促进黑素小体转移到角质形成细胞和激活核转录因子-κB(NF-κB)促进黑色素合成,引起皮肤色素沉着。在白癜风的发病中,TLR3在病毒双链核糖核酸(dsRNA)的激活下可诱导黑色素细胞凋亡,并可诱导促炎基因表达。TLR7和TLR9均被证明在白癜风黑色素细胞中表达增加,可能参与了白癜风的发病。因此,TLR在皮肤色素代谢中发挥重要作用,参与了色素性皮肤病的发病。

先天性黑色素细胞痣伴弥漫性黑色素细胞增多症恶性变1例报道并文献复习

先天性黑色素细胞痣（congenital melanocyticnevus,CMN）是出生时即有的一种先天性色斑样痣,绝大多数患者均能健康地正常生活,仅极少部分可演变为恶性黑色素瘤（malignant melanoma,

椎管内原发性黑色素细胞肿瘤的诊断和治疗

椎管内原发性黑色素细胞肿瘤十分罕见,根据其生物学行为和病理学特征,可以分为:恶性黑色素瘤和良性脑脊膜黑色素细胞瘤,二者在治疗方式和预后上截然不同,本文就此种罕见肿瘤的临床特征做一文献复习。

先天性黑色素细胞痣伴弥漫性黑色素细胞增多症恶性变1例并文献复习

目的探讨先天性黑色素细胞痣(CMN)伴弥漫性黑色素细胞增多症恶性变的治疗方法及效果。方法回顾性分析1例CMN伴弥漫性黑色素细胞增多症恶性变病人的临床资料,行显微手术切除病变组织,送病理检查。并对该病进行文献复习。结果病变达镜下全切除,病理检查结果符合恶性黑色素瘤(MM),综合临床特征,病理诊断考虑为弥漫性黑色素细胞增多症恶性变。病人术后未行进一步治疗,于术后3个月死亡。结论 CMN是一种先天性色斑样痣,仅极少部分可演变为MM和神经皮肤黑色素细胞增多症(NCM)并恶性变,大型CMN病人存在大量复合卫星痣是发生MM和NCM最重要的危险因素。临床上一旦出现颅内MM,治疗应以外科手术为主,放、化疗及免疫治疗仅可使极少部分病人受益,预后极差。

几种天然活性物对黑色素细胞毒性及美白功效的比较

为比较几种天然产物的美白效果及细胞毒性大小,采用小鼠B16黑色素细胞为受试细胞,分别研究了熊果苷及两种不同的海藻多糖对黑色素细胞的细胞毒性、酪氨酸酶活性和黑色素合成的影响。结果表明:熊果苷具有明显的细胞毒性,与之相比,海藻多糖对黑色素细胞活力几乎无影响;3种药物对细胞内酪氨酸酶活性及黑色素合成均有浓度依赖性的抑制作用,且熊果苷的抑制作用高于海藻多糖。

大菱鲆早期变态发育和体表黑色素细胞形态学观察

对大菱鲆早期变态发育及体表黑色素细胞的形成过程进行了研究。绘制了 1～ 6 0日龄大菱鲆鱼苗形态发育图 ,同时观察拍摄不同发育时期体表黑色素细胞的形态变化。 14～ 17℃水温时 ,大菱鲆早期变态发育约需6 0d。 1～ 14日龄主要为器官发育 ;14～ 40日龄主要为形态变化 ,2 5日龄左右开始变态 ;40～ 6 0日龄变态基本完成。变态前 ,鱼苗体表的幼体黑色素细胞对称分布 ,色素细胞密度先增加后减少。变态开始后 ,鱼体两侧体色出现不对称。有眼侧体表幼体黑色素细胞减少 ,逐渐由成体黑色素细胞替代 ,体色变深 ;无眼侧幼体黑色素细胞逐渐消褪 ,未出现成体黑色素细胞 ,体色逐渐变为白色。若有眼侧体表成体黑色素细胞的出现受阻 ,则形成白化。

构建含黑色素细胞组织工程皮肤的研究

目的 探讨运用组织工程方法构建含有黑色素细胞的组织工程皮肤。 方法 以包皮组织作为细胞来源 ,采用消化法获得角朊细胞、成纤维细胞和黑色素细胞 ,在自行设计的组织工程皮肤培养系统构建组织工程皮肤。行Dopa染色、透射电镜和 S- 10 0免疫组织化学检测构建的皮肤中黑色素细胞的分布和状态。 结果 构建的组织工程皮肤结构完整 ,细胞状态良好 ,Dopa染色、透射电镜和 S- 10 0免疫组织化学检测均显示含有大量黑色素细胞并处于良好状态。 结论 构建了含黑色素细胞的组织工程皮肤 ,可用于下一步的动物实验和临床实验。

脑脊膜黑色素细胞瘤的临床病理分析

目的 :探讨脑脊膜黑色素细胞瘤的临床病理特征、组织发生及预后。方法 :报道 2例罕见的椎管内软脊膜黑色素细胞瘤(0 0 5 % ) ,并结合国内外文献中报道的 5 8例脑脊膜黑色素细胞瘤进行讨论。结果 :2例均为女性 ,分别为 14岁和 4 6岁 ,肿瘤均发生于脊髓软脊膜 ,大体上呈黑色 ,包膜完整。光镜下见瘤细胞由上皮样细胞和梭形细胞混合而成 ,细胞无异型 ,大部分瘤细胞质内含有多量黑色素颗粒 ,核分裂象无或偶见 (0～ 1个 / 10HPF) ,无出血坏死。免疫表型HMB4 5和S 10 0蛋白呈阳性表达。 1例颈髓单发者全切除术后生存 14个月 ,无肿瘤复发。另 1例开始为颈髓单发性 ,全切除术后 12年复发 ,为颈、胸髓多发性 ,再次行肿瘤部分切除术。结论 :脑脊膜黑色素细胞瘤生物学行为相对良性 ,好发于后颅凹及脊髓的软脑脊膜 ,具有明确的临床和组织学特征。免疫组化和电镜检查有助于本瘤与其他黑色素性肿瘤的鉴别诊断早期完全切除有望治愈或减少复发 。

CDK5对羊驼皮肤黑色素细胞TYR和MITF mRNA表达的调节

为了证实CDK5是否参与羊驼毛色的形成,本研究主要对CDK5在羊驼黑色素细胞中调节TYR和MITF的表达进行了研究。本研究首先采用免疫组织化学方法检测CDK5在羊驼皮肤黑色素细胞中的定位,再通过脂质体将CDK5转染于羊驼皮肤黑色素细胞,之后通过Western blot和qRT-PCR的方法检测转染后黑色素细胞中CDK5蛋白、TYR和MITF mRNA的表达。免疫组化结果显示CDK5位于黑色素细胞的胞质和细胞核内;West-ern blot结果显示转染组黑色素细胞中CDK5蛋白表达量明显高于对照组;qRT-PCR结果显示CDK5可下调MITF的表达,同时上调TYR的表达,转染组黑色素细胞中MITF和TYR mRNA的表达水平分别是对照组细胞的0.264 9和3.931 3倍。结果揭示CDK5可能通过调节黑色素细胞核中TYR和MITF mRNA的表达,从而参与调控羊驼毛色形成。