QuEChERS/气相色谱-质谱法同时测定砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量

目的建立同时测定砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量的QuEChERS/气相色谱-质谱(QuEChERS/GC-MS)法。方法样品用无水乙醇提取,经N-丙基乙二胺、十八烷基硅烷键合硅胶、石墨化炭黑和硫酸镁吸附净化处理。色谱柱为HP-5 MS型色谱柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),程序升温,流速为1.0 mL/min,分流进样,分流比为20∶1,电子轰击离子源,选择性监测、全扫描模式,定量特征离子质荷比为95。比较QuEChERS/GC-MS法和气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)法含量测定结果的相对相差值,考察方法的可靠性。结果樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的质量浓度分别在50~2000μg/mL、5~200μg/mL、100~5000μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(R2≥0.997,n=6);检测限均为0.005 mg/kg,定量限均为0.015 mg/kg;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均低于3.0%;50%,100%,200%水平的加样回收率为93.37%~105.37%,RSD为1.38%~2.85%(n=6)。QuEChERS/GC-MS法和GC-FID法测定樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯含量的相对相差值分别为4.76%,4.64%,3.67%。结论该方法操作简便、灵敏度高、重复性好、结果准确,可用于砂仁中樟脑、龙脑、乙酸龙脑酯的含量测定。

龙脑樟叶粉对攸县麻鸭繁殖性能、血清免疫、抗氧化和肠道健康指标的影响

为了探究龙脑樟叶粉对攸县麻鸭繁殖性能、血清免疫、抗氧化和肠道健康指标的影响,试验按体重相近原则将100日龄健康的攸县麻鸭公鸭、母鸭各分为2个组,分别为对照组和试验组,每组各6个重复,每个重复6只。对照组饲喂基础日粮,试验组根据前期龙脑樟粉在肉鸡、蛋鸡日粮中的适宜添加浓度,选择在基础日粮中添加3%龙脑樟叶粉,预试期7 d,正试期42 d。试验结束后统计繁殖性能指标,每个重复随机选择2只鸭进行屠宰,测定免疫性能、抗氧化指标和肠道健康指标。结果表明:与对照组相比,母鸭试验组的卵巢重和卵巢指数均显著提高(P<0.05),公鸭试验组的肝脏重极显著降低(P<0.01),肝脏指数显著降低(P<0.05);母鸭试验组的血清免疫球蛋白A(IgA)质量浓度显著提高(P<0.05);公鸭试验组的空肠和十二指肠杯状细胞数显著提高(P<0.05);公母鸭试验组盲肠食糜中的大肠杆菌、公鸭试验组的乳酸杆菌、母鸭试验组的双歧杆菌的菌落数均极显著降低(P<0.01)。说明日粮中添加3%龙脑樟叶粉可提升攸县麻鸭公鸭肠道健康水平、母鸭免疫性能,促进母鸭卵巢发育,同时降低公母鸭肠道有益与有害菌菌落数量。

龙脑樟枝中一个新的桉叶烷型倍半萜内酯类化合物

研究龙脑樟Cinnamomum camphora chvar.Borneol枝的化学成分。利用硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、MCI等柱层析,结合制备型高效液相色谱技术从龙脑樟枝乙酸乙酯萃取段中分离纯化得到3个化合物,通过波谱学数据和文献报道确定了它们的结构,分别为campholactone A(1)、northalifoline(2)、N-苯乙基-苯甲酰胺(3)。其中化合物1为新的桉叶烷型倍半萜内酯类化合物,在C-11位上存在罕见的酰胺取代,化合物2、3为首次从龙脑樟中分离得到。采用MTT法对化合物1~3进行人肝癌HepG2细胞增殖毒性评价,通过脂多糖刺激RAW 264.7小鼠巨噬细胞建立的体外炎症模型,采用Griess法研究化合物1~3对炎症介质NO生成的影响。实验结果显示化合物1~3在浓度为20μmol/L时,对肿瘤细胞HepG2表现不同程度的抑制作用,抑制率分别为35.78%±0.15%、42.36%±0.58%、23.95%±0.40%;对脂多糖诱导的RAW 264.7小鼠巨噬细胞释放炎症因子NO的抑制作用弱,抑制率小于20%。

阴香龙脑含量对叶际细菌多样性的影响

为了解龙脑含量的高低对阴香Cinnamomum burmanni叶不同发育阶段叶际细菌群多样性的影响,文章以2个阴香品系(高龙脑含量—H和低含量—L)的2个发育时期叶片(嫩叶和成熟叶)为研究材料,利用气相-质谱联用仪检测4组样本的龙脑含量,利用16S测序结果比较分析叶际细菌结构和相对丰度的变化。结果表明:(1)相较于嫩叶,2个品系的成熟叶中龙脑含量均显著增加。(2)4组样本共检测出259个操作分类单元,其中H特有操作分类单元的数量最多。(3)基于这些H成熟叶的菌群α多样性指数在4组样本中最高,高龙脑含量品系的叶片中叶际细菌群落多样性随着叶片成熟而提升,低龙脑含量品系的叶际细菌群落多样性随着叶片成熟变化并不显著。4组样本之间菌群丰度的差异主要集中在鞘氨醇单胞菌属菌Sphingomonas sp.、短小杆菌属菌Curtobacterium sp.、假单胞菌属菌Pseudomonas sp.、肠杆菌科菌Enterobacteriaceae sp.、类芽孢杆菌属菌Paenibacillus sp.和芽孢杆菌属菌Bacillus sp.。研究结果表明阴香叶中龙脑含量的变化影响了叶际细菌菌群结构和丰度,阴香叶片中的龙脑含量越高则叶际细菌菌群多样性随着叶片成熟后越容易发生变化。

黎川县不同时期艾叶挥发油及桉油精、龙脑含量测定

目的:测定黎川县艾叶不同采收期间挥发油含量,比较其中指标性成分桉油精和龙脑的含量,为质量控制、全面开发利用艾叶提供基础。方法:采用20版药典中挥发油提取方式中的甲法,分别提取5月至10月不同采收期的艾叶挥发油,利用GC8890气相色谱分析仪,程序升温的方式,载气为五个9的高纯N2,分流进样,分流比例为10∶1。结果:每个时期的黎川县艾叶挥发油含量都不同,最高为1.26%(6月份),最低为0.71%(5月份);所有挥发油样品中都含有桉油精和龙脑,桉油精和龙脑的浓度分别在0.1 mg·mL^(-1)~1.4 mg·mL^(-1)和0.01 mg·mL^(-1)~0.3 mg·mL^(-1)范围内与对应的测定值线性关系良好,相关系数r也都在0.999以上;桉油精和龙脑的平均加样回收率和相对标准偏差(n=6)分别为93.00%、98.30%和1.67%、1.15%。桉油精和龙脑含量在6月份最高分别为1.5 mg·g^(-1)、0.7 mg·g^(-1)、10月份最低分别为0.8 mg·g^(-1)、0.2 mg·g^(-1)。结论:艾叶中挥发油含量及桉油精、龙脑含量最高均为6月,是艾叶的最佳采收期。

基于网络药理学和分子对接对龙脑精油镇痛作用的研究

基于网络药理学和分子对接探讨龙脑精油镇痛的靶点和作用机制。方法 通过GC-MS分析所得的龙脑精油成分,利用Swiss Target Prediction预测龙脑精油成分潜在作用靶点,利用DisGeNET数据库筛选出疼痛相关基因,交集获得龙脑精油镇痛潜在靶点,构建龙脑精油“成分-靶点-信号通路”网络;利用String数据库构建“蛋白相互作用”网络;利用Cytoscape中的Clue GO插件对靶点进行GO富集分析,利用KEGG数据库对靶点进行信号通路分析;利用AutoDock软件对筛选所得核心成分和作用靶点进行分子对接分析。结果 龙脑精油30个活性成分作用于21个靶点,主要通过调节痛觉感知、神经活性配体-受体相互作用、cGMP-PKG信号通路和TRP通道的炎症介质调节等途径发挥作用;PPI网络鉴定了以DRD2、OPRM1和OPRK1为主的12个关键蛋白,分子对接结果显示主要活性成分是龙脑、β-石竹烯、α-芹子烯、α-依兰烯、γ-萜品烯和柠檬烯对CNR2、NOS3和ADRA2B等靶点有较强的结合活性。结论 本文体现了龙脑精油多成分-多靶点-多途径的作用特点,为进一步研究其作用机制提供了理论依据。

不同基质对龙脑樟大田扦插育苗的影响

为解决龙脑樟苗木繁育过程中生产工序多、成本高、生产上难以推广等问题,笔者于2019年开始采用多种基质进行龙脑樟大田扦插育苗试验,以便寻找替代蛭石的廉价扦插基质,并探索扦插当年出圃的可能性。结果表明:红壤土和紫色冲积土是两种非常适合龙脑樟扦插育苗的优良基质,大田扦插成活率可达到70%以上,且这两种基质资源丰富、价格低廉,可以使龙脑樟扦插育苗成本大幅降低;大田扦插育苗当年即可出圃,省时、省工,平均合格苗率可达到70%以上。

龙脑樟根际土壤理化性质及细菌群落结构分析

选取4处长期采收龙脑樟的林地,基于土壤成分分析与高通量测序技术,比较不同品质龙脑樟根际土壤的理化性质和细菌群落组成、分布等特点。结果表明,龙脑樟生长指标最好的林地,虽然根际土壤有机质和大量元素含量不高,但是硼、锰、铜、锌、钼等微量元素含量均普遍高于其它样地,并且细菌群落丰富度和多样性指数最高,f_Koribacteracea、Candidatus_Koribacter、Candidatus_Solibacter等酸杆菌门细菌丰度最高。

中国龙脑香科植物新纪录种——盈江柳安

2023年3月,云南铜壁关省级自然保护区管护局与中国科学院西双版纳热带植物园谭运洪研究团队在保护区开展植物资源调查中,发现一株枝头挂满圆球状果实的高大乔木。其高大的树干、似曾相识的叶片、独特的果实立刻引起调查人员的注意。经专家鉴定。

不同产地龙脑樟枝叶化学成分分析及体外抑菌研究

龙脑樟为目前国内提取天然冰片效益最高的植物,为助力其道地产区的确定,本研究根据龙脑樟的习性,拟选取国内8个产地的龙脑樟枝叶为材料,采用水蒸汽蒸馏法分别提取天然冰片;通过气质联用法(GC-MS)测定其中化学成分的相对含量;通过纸片法测定其对大肠杆菌、伤寒沙门氏菌以及肠炎沙门氏菌的抑菌圈直径;运用96微量孔板测定最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。结果表明:各个产地龙脑樟枝叶提取的天然冰片中化合物含量具有差异性,其中以右旋龙脑、樟脑、d-柠檬烯、α-葎草烯、4-萜烯醇、桉叶油醇、莰烯以及d-α-蒎烯等为共有成分,且以右旋龙脑含量最高,樟脑次之,各产地中以湖北远安的右旋龙脑含量最高(82.47%),以广东乳源的右旋龙脑含量最低(41.63%);各个产地提取的天然冰片对3个供试菌种均有一定抑菌作用,且抑菌圈直径范围为14.60~27.95 mm;最低抑菌浓度(MIC)范围为250~1250μg/mL;最低杀菌浓度(MBC)范围为0~1000μg/mL,总体以湖北远安和江西吉水的综合抑菌效果最佳,广东乳源最差。由此可见,右旋龙脑含量最高的产地抑菌效果最佳,反之抑菌效果欠佳,因此,龙脑樟枝叶提取物的抑菌活性与其主要成分含量有一定相关性,本研究为龙脑樟枝叶提取物的品质评价及天然冰片的资源开发提供依据。

低级脂肪酸与莰烯酯化反应的影响因素及C1～C5羧酸异龙脑酯的制备

本文讨论C1～C5低级脂肪酸与莰烯酯化反应制备脂肪羧酸异龙脑酯中催化剂硫酸的用量、反应时间、反应温度等几个因素对反应的影响,并叙述了甲酸异龙脑酯、乙酸异龙脑酯、丙酸异龙脑酯、丁酸异龙脑酯、异丁酸异龙脑酯、异戊酸异龙脑酯等一些低级脂肪酸酯的制备方法。

西瓜霜清咽含片中薄荷酮、薄荷脑、异龙脑、龙脑的含量测定

建立一种西瓜霜清咽含片中薄荷酮、薄荷脑、异龙脑、龙脑的气相色谱分析方法。采用交联键和聚乙二醇作为固定相的毛细管柱,设定柱温程序升温条件:初始温度70℃,保持4 min,然后每分钟升温5~100℃并保持一段时间,随后以2℃/min的速率升温至140℃并保持3 min。进样使用1∶1分流比,进样口温度为40℃。氢气流速为40 mL/min,空气流速为400 mL/min,检测器温度为270℃。根据薄荷脑峰计算,理论板数应不低于1×10^(5)。结果表明西瓜霜清咽含片中薄荷酮、薄荷脑、异龙脑和龙脑的线性范围分别为0.034 05~0.544 7μg(r_(1)=1.000 0);0.118 2~1.892 0μg(r_(2)=1.000 0);0.023 95~0.383 2μg(r_(3)=1.000 0);0.040 45~0.647 4μg(r_(4)=1.000 0)平均回收率分别为:100%;102%;102%;101%。该方法的操作难度较小、方法可靠,结果准确、灵敏度高、重复性好,可作为西瓜霜清咽含片质量控制的方法。

硫酸钛/柠檬酸催化合成乙酸异龙脑酯工艺

为克服乙酸异龙脑酯合成中催化剂难制备、易失活和不易重复利用等问题,以莰烯、冰乙酸、硫酸钛和柠檬酸为原料,开展不同条件下催化合成乙酸异龙脑酯的研究。结果表明,合成乙酸异龙脑酯的最佳反应条件为m(乙酸)∶m(莰烯)=2.5∶1.0,m(硫酸钛)∶m(莰烯)=0.06∶1.00,m(柠檬酸)∶m(莰烯)=0.02∶1.00,反应温度为55℃,反应时间为7 h。在该条件下,莰烯转化率为93.18%,乙酸异龙脑酯含量为88.17%,乙酸异龙脑酯选择性为97.49%。

龙脑樟叶粉对10~19周龄湘东鸡生长性能、屠宰性能、血清生化指标、免疫指标及抗氧化性能的影响

试验旨在研究龙脑樟叶粉对10~19周龄湘东鸡生长性能、屠宰性能、肉品质、血清生化、免疫指标和抗氧化性能的影响。选取同一批出雏、体重相近的240只10周龄健康湘东鸡(公母各半)随机分为4组,每组6个重复,每个重复10只。对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加2%、3%、4%龙脑樟叶粉,预试期7d,正试期63d。结果显示:与对照组相比,4%龙脑樟叶粉组末重和平均日增重显著提高(P<0.05);2%、3%和4%龙脑樟叶粉组屠宰率显著提高(P<0.05);3%和4%龙脑樟叶粉组血清中总蛋白(TP)和球蛋白(GLB)含量、3%龙脑樟叶粉组白蛋白(ALB)及4%龙脑樟叶粉组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著降低(P<0.05);4%龙脑樟叶粉组血清IgA含量显著提高(P<0.05),2%、3%和4%龙脑樟叶粉组IgM和IgG含量显著提高(P<0.05),且含量随添加量增加而升高。综上所述,饲粮中添加龙脑樟叶粉可提高湘东鸡平均日增重、屠宰率,促进脂质代谢,增强机体免疫力,建议添加量为4%。

龙脑樟副产物粉对蛋鸡生产性能和血清生化指标的影响

为开发蛋鸡中草药保健原料和开拓面临困境的龙脑樟产业新市场,试验首先分析了龙脑樟枝叶粉与副产物粉的常规营养成分和氨基酸组成,并将常规营养成分与玉米和苜蓿草粉进行比较;然后将60只同一批出雏、产蛋率接近、平均体重为1.5 kg的460日龄海兰灰蛋鸡随机分为3组(对照组、1.5%组和2.5%组),每组20只,4个重复,每个重复5只,对照组仅饲喂基础日粮,1.5%组和2.5%组分别饲喂在基础日粮中添加1.5%和2.5%副产物粉的试验日粮,预试期7 d,试验期42 d,测定各组生产性能(产蛋性能、蛋品质)和血清生化指标。结果表明:与玉米和苜蓿草粉比较,龙脑樟枝叶粉和副产物粉的干物质含量和总能量较高,粗蛋白、粗灰分和粗纤维含量居中,粗脂肪含量较低;龙脑樟枝叶粉和副产物粉之间比较,副产物粉的粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和粗纤维含量略高,干物质含量和总能略低,二者常规营养成分差异不大。龙脑樟枝叶粉和副产物粉均含有17种氨基酸,其中必需氨基酸7种,非必需氨基酸10种,谷氨酸和天冬氨酸含量相对较高,但蛋氨酸含量较低,并缺乏色氨酸。3个组中,1.5%组的平均日产蛋重、平均蛋重、产蛋率、蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位均最高,料蛋比最低;1.5%和2.5%组的蛋白高度、蛋黄颜色、哈氏单位和蛋壳厚度略高于对照组,但各组间差异不显著(P>0.05);2.5%组的平均日采食量和产蛋率极显著低于对照组和1.5%组(P<0.01),平均日产蛋重显著低于对照组和1.5%组(P<0.05);其他生产性能指标各组间均差异不显著(P>0.05)。1.5%组血清尿酸浓度显著低于对照组(P<0.05),2.5%组血清尿酸浓度略低于对照组但差异不显著(P>0.05);1.5%组和2.5%组血清总蛋白、白蛋白、球蛋白水平,三酰甘油、总胆固醇浓度略低于对照组,但各组间差异不显著(P>0.05);其他血清生化指标各组间均差异不显著(P>0.05)。说明日粮中添加适当水平的龙脑樟副产物粉可提高海兰灰蛋鸡的产蛋性能和蛋品质,促进海兰灰蛋鸡的尿酸排泄,对海兰灰蛋鸡的肝肾功能和机体代谢无不利影响,但过量的龙脑樟副产物粉对海兰灰蛋鸡产蛋性能的提升不利。在本试验条件下综合来看,添加水平为1.5%时效果最好。

基于转录组数据挖掘阴香右旋龙脑生物合成相关基因

右旋龙脑又名天然冰片,是珍贵的传统中药材和高级香料,具有抗菌、消炎、促进药物透过血脑屏障等作用。为阐明右旋龙脑的生物合成途径,收集了2种化学型的阴香,利用Illumina Novaseq测序平台进行转录组测序,使用Trinity软件对Clean reads进行组装,共获得40449条Unigene,N 50长度为1679 bp,Q 30质量值均在92%以上,说明测序质量较好,可用于后续分析。分别有23613(58.38%)、21743(53.75%)、16372(40.48%)、15384(38.03%)、17993(44.48%)、19753(48.83%)个基因在NR、eggNOG、Swiss-Prot、KEGG、Pfam、GO数据库获得注释。KEGG富集分析表明,柠檬烯和蒎烯降解、二苯醚类、二芳庚烷类和姜辣素生物合成被富集,类黄酮生物合成、苯基丙烷生物合成、二萜生物合成等次生代谢物质的合成通路也被富集。GO分析发现,生物学过程类别主要集中在生物过程、转录,DNA模板化;细胞组分类别主要涉及细胞核、细胞质、质膜等细胞组分;分子功能类别主要集中在分子功能、蛋白质结合和序列特异性DNA结合。鉴定出参与右旋龙脑生物合成相关酶基因38个,包括35个参与萜类骨架生物合成有关的酶基因,3个单萜合酶基因,其中MEP途径可能编码5种酶的7个基因和MVA途径可能编码4种酶的7个基因表达量上调。此外与单萜生物合成相关的5个转录因子(bHLH家族2个、MYB家族1个、bZIP家族1个)显著上调。

阴香叶片精油中右旋龙脑含量近红外预测模型构建研究

为建立阴香Cinnamomum burmannii叶片中精油右旋龙脑含量的近红外光谱预测模型,使用波通(PERTEN)公司的DA7250近红外光谱分析仪,在950~1650 nm的光谱范围内,分析了76个阴香叶片样本的光谱数据,经过光谱预处理,并比较选择最佳预处理方法、最佳光谱波段范围和最佳主成分数,采用偏最小二乘法(PLS)建立阴香叶片精油中右旋龙脑含量近红外光谱模型。结果表明:采用一阶导数-标准正态变量转换法(FD-SNV)对光谱进行预处理且当最佳主成分数为16时,得到最优模型,其校正集均方根误差(RMSEC)为7.4071,校正集相关系数(R_(C))为0.9314,交互验证集均方根误差(RMSEV)为13.4822,交互验证集相关系数(R_(V))为0.7759。说明预测值与测量值具有显著的相关性,该预测模型具有一定的准确性,可以用于阴香叶片精油中右旋龙脑含量进行快速预测。

稀土复合固体超强酸SO_(4)^(2-)/ZrO_(2)-MoO_(3)-Yb_(2)O_(3)催化合成乙酸异龙脑酯的研究

通过沉淀-浸渍方法制备稀土复合固体超强酸SO_(4)^(2-)/ZrO_(2)-MO_(3)-Yb_(2)O_(3),加入稀土元素Yb以改良固体超强酸的性能,通过Hammett酸指示剂法检测固体酸的酸强度。以莰烯和乙酸为原料,由自制的固体超强酸催化合成乙酸异龙脑酯。通过CG-MS对酯含量进行测定,研究了催化剂用量、MoO_(3)/ZrO_(2)、焙烧温度、反应时间和反应温度等对酯化率的影响。结果表明:经600℃焙烧的MoO_(3)/ZrO_(2)为8%的催化剂,在其用量占总反应物的质量分数为3%,反应温度80℃,反应时间6 h的条件下,酯化率可达到76%。

α—蒎烯合成N—烷基—N—(α—龙脑烯基)乙酰胺类化合物及香气特征

以α-蒎烯为原料合成了系列新型的N-烷基-N-(α-龙脑烯基)乙酰胺类芳香化合物,并探索了氮原子上取代基的不同结构与产物香气间的构效关系。α-蒎烯经环氧化得到2,3-环氧蒎烷,再经催化异构化反应得到α-龙脑烯醛;α-龙脑烯醛与伯胺缩合、NaBH4选择性还原得到N-烷基-α-龙脑烯胺,再经乙酰化后得到N-烷基-N-(α-龙脑烯基)乙酰胺类化合物。采用1H-NMR、13C-NMR、FT-IR、MS等对合成酰胺类化合物进行了结构表征,对合成产物的香气特征进行了鉴定。结果表明:N-正丁基-N-(α-龙脑烯基)乙酰胺和N-叔丁基-N-(α-龙脑烯基)乙酰胺具有良好的香气特征,作为新型芳香化合物具有较好的开发价值。

基于转录组学探讨右旋龙脑对顺铂耐药非小细胞肺癌的增敏作用及机制

目的采用转录组测序(RNA-sequencing,RNA-seq)技术挖掘右旋龙脑联合顺铂对顺铂耐药的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞的作用关键靶点,并验证其机制。方法将顺铂耐药的人大细胞肺癌细胞(H460/CDDP)接种于4周龄雄性BALB/c裸鼠右侧腋下,构建异种移植肿瘤模型,将其分为对照组、溶剂组、顺铂组、联用组(右旋龙脑+顺铂),每组6只,药物干预14 d。末次给药24 h后,取肿瘤组织,转录组测序;实时反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法(IHC)检测细胞周期相关分子表达。结果顺铂组与联用组在基因表达水平存在差异,且明显富集于细胞周期。RT-PCR和IHC结果显示,右旋龙脑联合顺铂组能明显抑制细胞周期蛋白(CCNA2,CCND3)和细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK2,CDK6)的表达量,并促进其上游分子细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂CDKI(P21,P27)的表达(P<0.05,P<0.01)。结论右旋龙脑联合顺铂通过上调P21、P27表达,抑制cyclinA2/D3及CDK2/6表达,诱导细胞周期阻滞,抑制H460/CDDP细胞的恶性增殖,进而达到抗耐药增敏的作用。