基于高光谱成像技术与异构集成学习的龟甲药材生长年限鉴别

龟甲是常见的集药、食两用的中药之一,富含维生素、氨基酸、胶原蛋白及大量矿物质成分,被广泛应用于贫血、骨质疏松、免疫力低下等临床症状的医疗与日常饮片炮制。研究表明,龟甲的生长年限越长,其滋阴有效部位及微量元素含量越充足。由于对生长规律认识不足、培育不规范等因素,市场上普遍存在以次充好的现象。目前对龟甲生长年限的鉴别主要通过经验法与理化手段。经验法具有较强的主观性,不利于推广应用;理化技术操作周期长,会破坏样本的完整性。考虑到传统经验、理化检验等鉴别方法的局限性,该研究构建了一种基于高光谱成像技术的龟甲年限鉴别模型。以不同生长年限的龟甲药材为研究对象,采用高光谱成像系统采集原始龟甲药材在可见近红外(VNIR)与短波红外(SWIR)透镜下的高光谱图像,并建立基于支持向量机(SVM)、逻辑回归(LR)与K近邻(KNN)分类策略的异构集成学习模型。结果表明,基于VNIR与SWIR融合波段下的高光谱图像包含更丰富的光谱信息,采用异构集成学习模型可以有效地对龟甲年限实现精确鉴别。模型在龟甲背甲与腹甲样本的测试集准确率分别达到96.14%与93.82%,表明龟甲背甲对其生长年限的鉴别更有优势。考虑到快速性检测的因素,采用波段选择方法剔除冗余特征,降低龟甲药材图像的复杂度,并采用特征波段表征龟甲药材的光谱信息,进一步提升模型分类性能。结果表明,模型在波段数目为32时的背甲样本可以达到96.35%的分类准确率,超过了全波段光谱数据的鉴别精度,表明波段选择策略对提取有效光谱信息的可行性。基于高光谱成像技术的异构集成学习模型可以快速、准确地鉴别龟甲药材的生长年限,为龟甲及其他药材属性的检测提供新的技术参考。

基于Random Forest和UHPLC-QTOF-MS^(E)对不同来源龟甲基原的鉴定

目的:基于超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱(UHPLC-QTOF-MS^(E))分析并经数字量化处理,结合随机森林(Random Forest,RF)算法构建数据辨识模型,以实现中华草龟、巴西龟、台湾龟、鳄鱼龟、鳖甲基原的数字化鉴定。方法:经样品预处理后,对不同来源、不同批次的龟甲进行UPLC-QTOF-MS^(E)分析,并以混合样品为基准进行峰位校正、提取并经量化处理,获取反映多肽离子信息的精确质量数-保留时间数据对(Exact Mass Retention Time,EMRT)。然后基于信息增益率的特征筛选获取重要多肽离子信息,结合随机森林(RF)算法进行数据建模,同时基于内部交叉验证中的准确率(Acc)、精确率(P)、曲线下面积(AUC)等参数进行模型评价。最后基于最优模型进行龟甲基原的鉴定验证分析。结果:基于信息增益率的特征筛选,得到71个特征多肽信息,建立的RF模型具有优秀的辨识效果,准确率、精确率以及AUC均大于0.950且外部鉴定验证的正确率为100.0%。结论:基于UHPLC-QTOF-MS^(E)分析,并结合RF算法能够高效准确地实现不同来源龟甲基原的数字化鉴定,可为龟甲的质量控制及基原考证提供参考和帮助。

共同富裕背景下农业产业化发展路径研究——以江西省M县龟甲产业为例

共同富裕是社会主义的本质要求,促进共同富裕,最艰巨的任务在农村,最关键的环节是产业促进共同富裕的路径、机制。本文通过对M县龟甲产业的实地考察调研,采用文献阅读法等方法对其龟甲产业进行研究。M县以“龟鳖产业化联合体”为农业产业化发展载体,通过合约治理提升小农户组织水平,为联合体内的小农户提供农业社会化服务,构建了一个共利共享的乡村利益共同体,这种模式不仅提高了农业生产效率,还让农民真正享受到农业产业化发展的红利,提升了农民的收入水平,同时加速了农村地区共同富裕进程。M县龟甲产业化发展的经验对其他地区促进共同富裕有一定的借鉴价值。

基于广泛靶向代谢组学的石金钱龟龟甲不同熬制时间的水提物成分差异分析

目的分析石金钱龟龟甲在不同熬制时间差异水提物的变化情况。方法本研究选取9个样品,分为3组进行代谢研究;首先通过非靶向代谢组技术检测混样,鉴定出样本中的水提物,然后将这些水提物与自建数据库结合,并基于广泛靶向代谢组学(TM)技术进行代谢分析,采用基于液相色谱与四级杆飞行时间质谱联用技术(LC/QTOF-MS/MS)检测平台、自建数据库以及重复相关性评估、主成分分析、正交偏最小二乘法判别分析等多元统计分析相结合的手段研究样品间的代谢组差异。结果共鉴定出1248个水提物,共鉴定出1248个水提物,共有8大类(氨基酸及其代谢物,杂环化合物,脂肪酰类,甘油磷脂类,醛、酮、酯类,辅酶和维生素,色胺、胆碱、色素、其他);熬制终期差异水提物相对含量最为丰富。结论该研究从TM广靶代谢组学角度初步解释了龟甲3个不同熬制时间的代谢产物的差异性及特征化合物,鉴于石金钱龟的代谢产物与人们的健康和营养有着密切的关系,可为金钱龟龟甲深加工产品开发与应用提供参考信息和理论依据。

鹿鞭龟甲药对滋阴补肾缓解体力疲劳作用机制

目的研究鹿鞭龟甲药对滋阴补肾缓解肾阴虚小鼠体力疲劳作用及机制。方法将70只健康雄性昆明小鼠适应性喂养1周后随机分为空白组、模型组、阳性药组、鹿龟药对低剂量组、鹿龟药对高剂量组、鹿鞭组、龟板组,共7组,每组10只,造模与给药同时进行,共计14天。第14天给药后30分钟测定各组小鼠力竭游泳时间;在第15天摘眼球取血分离血清测定血清中乳酸、尿素氮、睾酮、皮质酮、环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环鸟苷酸(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)含量;剖取肝脏测定肝糖原含量、肝组织中磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)和糖原合成酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3β)蛋白表达。结果与模型组相比,鹿龟药对低剂量组、鹿龟药对高剂量组、鹿鞭组、龟甲组体质量显著升高(P<0.01),力竭游泳时间增加(P<0.05,P<0.01),血乳酸含量降低及血尿素氮含量显著降低(P<0.01),肝糖原含量增加(P<0.05,P<0.01),睾酮含量显著上升(P<0.01),cGMP含量显著升高(P<0.01),cAMP/cGMP值显著下降(P<0.01),肝脏Akt蛋白表达明显增加(P<0.05),肝脏GSK-3β蛋白表达明显降低(P<0.05);鹿龟药对高剂量组及鹿鞭组能显著提高PI3K蛋白表达水平(P<0.05)。结论鹿龟药对可以通过调控PI3K/Akt/GSK-3β通路增加糖原合成,以起到滋阴补肾缓解体力疲劳的作用。

龟甲配方颗粒的高分辨熔解曲线技术鉴别研究

目的建立一种龟甲配方颗粒高分辨熔解曲线(HRM)技术鉴别方法。方法根据乌龟Chinemys reevesii及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(cytochrome oxidase subunitⅠ,COI)基因序列上的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)位点设计鉴别引物,扩增产物直接进行HRM分析,并优化反应体系,根据最佳条件进行适用性验证。结果在模板DNA质量浓度为0.62~374.88 ng/μL、引物浓度为0.1~0.4μmol/L、退火温度为62℃、循环数为45个的条件下,龟甲饮片和配方颗粒的熔解曲线为单峰,其Tm均值分别为(82.39±0.09)、(82.38±0.05)℃,而混伪品和醋龟甲配方颗粒未有扩增。结论该研究建立的高分辨熔解曲线鉴别方法可快速鉴别龟甲原料和配方颗粒的真伪,以及区分其生品和炮制品配方颗粒,为龟甲配方颗粒的质量标准研究提供了理论依据。

醋龟甲配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

目的:建立一种醋龟甲配方颗粒特异性位点聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法:根据乌龟Chinemys reevesii(Gray)及其混伪品的细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列上的单核苷酸多态性位点设计醋龟甲的特异性鉴别引物,经过优化反应体系,确定最佳的PCR反应条件,并对该方法进行耐受性和适用性考察。结果:当退火温度为62℃、循环数为34时,醋龟甲饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒均可在约92 bp处得到清晰单一的特异性条带,其混伪品及阴性对照均无条带。结论:建立的位点特异性PCR鉴别方法可快速、准确地鉴别醋龟甲饮片、标准汤剂冻干粉和配方颗粒的真伪,为醋龟甲配方颗粒质量标准研究提供了参考。

龟甲健骨胶囊治疗老年骨质疏松性椎体压缩骨折的疗效及影像学评价

目的探讨龟甲健骨胶囊治疗老年骨质疏松性椎体压缩骨折(Osteoporotic vertebral compression fracture,OVCF)的疗效。方法选取2021年11月—2022年10月期间南充市中医医院收治的206例老年OVCF患者作为研究对象,按随机数字表法分观察组和对照组,每组各103例。两组患者均行经皮椎体成形术,对照组术后给予常规西药用药,观察组西药联合龟甲健骨胶囊。治疗3个月后,观察比较两组患者临床疗效、骨折愈合时间、并发症发生情况,手术前后病椎椎体前缘高度、椎体后缘高度及Cobb角,血清缺氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)水平,骨代谢指标[碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(Bone gamma-carboxyglutamic-acid-containing proteins,BGP)、骨密度(Bone mineral density,BMD)],Oswestry功能障碍指数(Oswestry Disability Index,ODI)评分。结果术后3个月两组患者椎体前缘高度、椎体后缘高度均较术前明显升高,Cobb角较术前明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组椎体前缘高度、椎体后缘高度均较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),Cobb角与对照组接近,差异无统计学意义(P>0.05)。术后3个月两组患者血清HIF-1α、VEGF水平均较术前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组血清HIF-1α、VEGF水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后观察组骨折愈合时间明显短于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。术后3个月两组患者ALP、BGP、BMD水平均较术前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组ALP、BGP、BMD水平均较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。术后3个月两组患者ODI评分均较术前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且观察组ODI评分较对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组总有效率92.23%(95/103)明显高于对照组75.73%(78/103),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间,两组患者均未发生骨水泥渗漏或硬膜外血肿;治疗后观察组二次骨折发生率1.94%(2/103)明显低于对照组12.62%(13/103),差异有统计学意义(P<0.05)。结论龟甲健骨胶囊辅助治疗老年OVCF可有效调节骨代谢,促进骨生成,提高骨密度,加快骨折愈合及术后椎体功能恢复,降低二次骨折风险。

新疆金龟甲的区系组成及食性(鞘翅目:金龟甲总科)

初步查明，新疆金龟甲昆虫计有１５４种，分隶于２科、１３亚科、４７属。区系组成含中亚细亚、中央亚细亚、欧洲—西伯利亚、地中海、特有种、泛古北种和全北种等多种成分，其中以中亚细亚种类最多，达７４种，约占４８５％。结合区系组成的分析，提出了新疆昆虫地理区划的划分意见。新疆金龟甲成虫的食性可分为粪食型、腐食型、角质物食型、尸食型、植食型和绝食型，其中粪食型达７５种，约占４９％，具有重要生态意义；植食型５５种，约占３６％，具有重要经济意义。

龟甲胶和速溶龟甲胶冲剂主要药效学比较研究

龟甲胶和速溶龟甲胶冲剂主要药效学比较研究聂淑琴，薛宝云，戴宝强，梁爱华，李桂琴，杨庆，叶文华，李泽琳，汤亚池（中国中医研究院中药研究所北京１００７００）龟甲胶为龟甲经煎煮浓缩制成的固体胶，服用需“烊化兑服”。速溶龟甲胶冲剂为新研制的颗粒剂（专利号ＣＮ...

正交法优选龟甲胶原料龟甲的炮制提取工艺

目的:优选制备龟甲胶过程中龟甲的炮制方法以及煎煮次数,提高龟甲胶中氨基酸含量。方法:以龟甲胶中L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸等氨基酸含量总和为指标,正交设计法考察不同炮制方法及煎煮次数对制备龟甲胶的影响。结果:龟甲通过蒸制去除腐肉后,不烫淬煎煮3次后的氨基酸含量最高。结论:建立龟甲胶中龟甲的炮制处理方法,确定煎煮次数,提高L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸4种氨基酸含量,稳定龟甲胶质量。

甘薯腊龟甲的识别与防治

甘薯腊龟甲(图1)又称甘薯褐龟甲、甘薯大龟甲,属鞘翅目铁甲科,是为害空心菜的主要害虫。该害虫除为害空心菜、甘薯等旋花科植物外,还可为害蚕豆、豌豆等蔬菜。现将该害虫为害特点及防治要点介绍如下。

UPLC-ESI-QTOF-MS检测巴西龟龟甲胶中牛皮特征肽的研究

目的:以巴西龟为来源的龟甲胶中牛皮特征肽成分的检测。方法:采用胰蛋白酶进行酶解,利用超高效液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱法分别对以巴西龟为来源的龟甲胶和以中华草龟为来源的龟甲胶进行测定,选定牛皮特征肽离子m/z 604.8、m/z 641.3、m/z 790.8作为检测对象。结果:巴西龟来源的龟甲胶中只检测出牛皮特征肽离子m/z 641.3信号,其MS/MS裂解规律与黄明胶标准品酶解产物所含牛皮特征肽GEAGPSGPAGPTGAR一致,而中华草龟来源的龟甲胶中均未检测出牛皮特征肽信号。结论:该方法专属性强,灵敏度高,可区别巴西龟龟甲胶和掺杂牛皮成分的龟甲胶,可用于龟甲胶的质量控制。

龟甲炮制加工历史沿革与临床应用

龟甲为传统中药材,本文对龟甲炮制加工的历史沿革、现代研究及临床应用进行概述,以促进龟甲临床合理应用。

中药材龟甲及原动物的高特异性PCR鉴定研究

目的:建立一种简便、实用的龟甲药材DNA 分子鉴定方法。方法:根据22 种亚洲产龟类的线粒体12SrRNA 基因片段序列,设计一对专用于鉴定中药材龟甲原动物乌龟的鉴别引物,用该对引物扩增从乌龟和其他18 种龟共48 个样品的DNA 模板。结果:在72℃的复性温度下进行PCR,4 个乌龟的模板DNA 均得到约180 bp 的阳性扩增带,而其他各龟的模板DNA,在同样条件下无扩增产物,用这对鉴别引物经一次PCR 反应便可准确地鉴定受试原动物是否为乌龟。同法对江苏省药品检验所提供的17 块样品龟甲进行了鉴定,结果表明只有4 块样品为正品,其余皆为伪品,与性状鉴定和DNA序列分析鉴定结果完全一致。结论:所设计的鉴别引物对乌龟有高度特异性。

阿胶、鹿角胶、龟甲胶圆二色谱鉴别

本文通过圆二色谱(CD)法可以将阿胶、鹿角胶、龟甲胶及其伪劣品区分开,并建立标准图谱及数据。本方法简便易行,快速准确。

金龟甲对蓖麻叶挥发物的触角电位和行为反应

为了探明金龟甲偏爱选择有害非寄主植物蓖麻的原因,应用触角电位(EAG)仪和"Y"型嗅觉仪,分别测定了华北大黑鳃金龟、暗黑鳃金龟和铜绿丽金龟雌、雄虫对5种蓖麻叶挥发物的触角电位和选择行为反应。EAG测定结果表明,3种金龟甲雄虫对各处理挥发物的EAG反应值均比参照挥发物顺-3-己烯-醇强。华北大黑鳃金龟对邻苯二甲酸二丁酯和肉桂醛的EAG反应值相对较高,暗黑鳃金龟对苯甲醇的EAG反应值相对较高,铜绿丽金龟对邻苯二甲酸二丁酯和苯甲醇的EAG反应值相对较高。选择行为反应测定结果表明,当顺-3-己烯-醇与其他挥发物配对测试时,华北大黑鳃金龟对邻苯二甲酸二丁酯和肉桂醛2种蓖麻叶挥发物表现出明显的选择偏好,暗黑鳃金龟对蓖麻叶挥发物苯甲醇表现出明显的选择偏好,铜绿丽金龟则更偏好选择蓖麻的绿叶气味物质顺-3-己烯-醇。总之,蓖麻叶的挥发性物质与引诱金龟甲偏爱选择密切相关,且偏爱的挥发物因金龟甲的种类而异。

异硫氰酸苯酯衍生化-HPLC法测定龟甲中胶原蛋白

目的 采用异硫氰酸苯酯衍生化法分析龟甲中胶原蛋白。方法 龟甲中胶原蛋白经酸水解后分解为含有羟脯氨酸的氨基酸混合物，经异硫氰酸苯酯衍生化后，以0．1mol／L醋酸钠溶液-乙腈（94：6，pH6．5）与乙腈-水（80：20）为二元流动相，经C18色谱柱分离，254nm处测定羟脯氨酸。通过测定样品中羟脯氨酸的量来计算样品中胶原蛋白的量。结果 羟脯氨酸在0．02～0．20mg／mL时与峰面积呈良好的线性关系，回收率为102．0％。结论 建立的龟甲中胶原蛋白的HPLC分析方法分离效果好、准确、快速、干扰少。

中药材龟甲的分子鉴定研究

用ＰＣＲ产物直接测序法对中药材龟甲（板）进行鉴别。从乌龟Ｃｈｉｎｅｍｙｓｒｅｖｅｓｉ和其他２０种产地为中国或东南亚国家的龟类的组织材料中提取ＤＮＡ，扩增约１１０ｂｐ的线粒体１２ＳｒＲＮＡ基因片段并进行序列分析，构建了２１种龟类的１２ＳｒＲＮＡ基因片段序列数据库。序列比较的结果表明乌龟与其它２０种龟类的这段序列均有差别，序列差异在３７～１５７％之间。从江苏省药品检验所提供的１９块龟甲检品上各取样０１～０５ｇ提取ＤＮＡ，扩增与上述相同的基因片段，与构建的数据库进行比较，结果表明１９块龟甲中只有３块的原动物为乌龟，其余的龟甲均为混淆品。本文的结果为药材龟甲的鉴定找到了有效、可靠的分子遗传标记方法。

阿胶、鹿角胶和龟甲胶的理化性质比较研究

目的：研究中药阿胶、鹿角胶和龟甲胶的理化性质，寻求各自内在特征。方法：采用红外、紫外、原子吸收光谱、氨基酸自动分析色谱及ＰＣ，ＴＬＣ，ＨＰＬＣ，ＳＤＳＡＰＧＥ电泳法进行定性鉴别。结果：３种胶的ＵＶ光谱图、ＨＰＬＣ指纹图及ＳＤＳＰＡＧＥ电泳分析的分子质量分布差别显著。结论：ＵＶ光谱图、ＨＰＬＣ指纹图及蛋白质的分子质量分布可作为鉴别３种胶真伪优劣的依据。