版纳微型猪1型糖尿病模型的构建方法初探

目的构建1型糖尿病微型猪模型,并探索有效延长模型猪生存周期的术后护理方案。方法选取7头版纳微型猪进行胰腺切除手术。术后3~5 d通过补充葡萄糖、维生素及抗生素等方法帮助其恢复。每日早晚两次检测血糖、尿糖水平,据此调整胰岛素补充量。每日巡视模型猪并记录其饮食欲、精神状态、虚弱程度、皮肤破损情况、粪尿量等数据,每周称量体重,直至动物死亡。根据模型猪状态及时给予葡萄糖注射液和乳酸林格氏液等以补充营养并纠正电解质失衡。结果7头版纳微型猪在胰腺切除术后均表现为随机血糖浓度大于11.1 mmol/L,远超正常猪的平均血糖值(6.0 mmol/L),尿糖阳性,且其体重呈渐进性下降等典型的糖尿病临床表征,提示1型糖尿病模型构建成功。此外,存活时间超过8周的1型糖尿病猪还出现了渐进性被毛脱落及皮肤破溃的情况;在模型猪无法站立乃至无法自主进食时进行安乐死,并采集其肝脏、肾脏及皮肤等受累及的器官组织进行病理组织切片及HE染色,病理组织切片也可见长期高血糖导致的肝脏淤血、肝糖原大量蓄积、肝细胞气球样变和渐进性肝脏纤维化,肾小球淤血、肾小管上皮细胞空泡变性和蛋白尿,真皮层出现淤血、血管壁变薄以及不同程度的角化不全和角化不良等肝脏、肾脏及皮肤组织病变。本研究构建的版纳微型猪糖尿病模型平均生存期为44 d,最长可生存121 d。结论通过胰腺切除术可成功建立版纳微型猪的1型糖尿病模型,进一步通过术后精心护理可获得并发症明显的长期1型糖尿病微型猪模型,这为1型糖尿病治疗策略研究提供了稳定的大动物模型。

单次大剂量和多次小剂量STZ诱导昆明小鼠1型糖尿病模型的探究

目的通过研究单次大剂量和多次小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导昆明小鼠1型糖尿病的成模率和稳定性,探究理想的1型糖尿病小鼠建模方法。方法 60只昆明小鼠随机分为4组(15只/组):空白对照组、阴性对照组(注射磷酸盐缓冲液)、单次大剂量组(150 mg/kg,单次腹腔注射)、多次小剂量组(50 mg/kg,连续注射5 d)。末次注射后,每天测定小鼠摄食量和饮水量,每周测定小鼠空腹血糖及体质量1次,连续观察4周。结果 2个模型组小鼠均表现出糖尿病的"三多一少"症状,模型组小鼠的平均空腹血糖均明显高于2个对照组(P<0.05)。单次大剂量组和多次小剂量组的小鼠第1周时成模率分别为60%和53.33%,4周后分别为60%和80%,4周后的死亡率分别为33.33%和20%。且多次小剂量组中高血糖小鼠的血糖值从第2周始一直稳定上升并维持在较高水平。结论多次小剂量注射STZ(50 mg/kg连续注射5d)是较理想的建立昆明小鼠1型糖尿病模型的方法。

链脲佐菌素诱导C57BL/6J和昆明小鼠1型糖尿病模型的比较

目的比较相同剂量STZ处理时C57BL/6J和昆明小鼠1型糖尿病模型的成模率及稳定性,探究经济有效的糖尿病小鼠建模品系。方法健康雄性C57BL/6J和昆明小鼠分别随机分为3组(20只/组):正常对照组、150 m g/kg组(单次腹腔注射)、50mg/kg组(连续注射5 d)。末次注射STZ后每天测量小鼠摄食量和饮水量,每周测量小鼠空腹血糖及体重一次,连续观察4周。结果 2种建模方法均能使C57BL/6J和昆明小鼠表现出糖尿病的"三多一少"症状,且空腹血糖值比对照组显著增加(P<0.01),但2种小鼠的血糖差异无统计学意义。实验结束时,C57BL/6J和昆明小鼠的成模率没有差别,50 mg/kg组均为80%,150 mg/kg组均为65%。C57BL/6J小鼠的死亡率略低于昆明小鼠。结论相同剂量STZ处理下C57BL/6J和昆明小鼠1型糖尿病的成模率和模型稳定性基本一致,昆明小鼠是较C57BL/6J小鼠更为经济有效的建立糖尿病模型的小鼠品系。

糖脉康与伏格列波糖对1型糖尿病模型的降糖作用比较

目的:探讨中成药糖脉康颗粒与α-糖苷酶抑制剂伏格列波糖(倍欣)对大鼠1型糖尿病模型的降糖效果,确定上述两种药物是否可以作为1型糖尿病的阳性对照药物。方法:采用四氧嘧啶腹腔注射2次制备SD(Sprague Dawley)大鼠1型糖尿病模型,灌胃给药15天,给药期内测定空腹血糖变化。结果:与模型组相比,糖脉康能够显著降低大鼠体内的血糖(P<0.05),倍欣也能够显著降低模型大鼠的血糖(P<0.05),而中药糖脉康降低血糖的效能比倍欣更强(P>0.05)。结论:四氧嘧啶制备的SD大鼠糖尿病1型糖尿病模型在给药期间能保持稳定性,糖脉康与倍欣均有明显的降糖效果,可以作为1型糖尿病研究的阳性对照药。

1型糖尿病骨质疏松大鼠模型的建立及评价

目的建立I型糖尿病性骨质疏松大鼠模型,通过骨形态计量学观察该模型的改变。方法选取3月龄雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组(30只)和造模组(30只),造模组腹腔注射STZ60 mg/kg,诱导建立I型糖尿病性骨质疏松大鼠模型。结果从血糖、体重、骨密度、骨组织形态计量学证实该方法可以成功制备1型糖尿病性大鼠模型。结论该方法制备的I型糖尿病性骨质疏松大鼠模型,成模率高,模型稳定。

1型糖尿病大鼠模型的制备及建模失败后补救措施与效果

目的:研究通过链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导建立1型糖尿病大鼠模型的方法及首次建模失败后的补救措施及效果。方法:健康6-8周龄雄性Wistar大鼠30只,随机分为2组,建模组25只,非建模组5只。给予建模组大鼠一次性大剂量腹腔注射STZ(65mg/kg),同时对非建模组大鼠腹腔注射相同体积的柠檬酸缓冲液。72h后检测大鼠的血糖值判断建模是否成功。对首次建模失败的大鼠常规饲养一周,再次腹腔注射STZ(65mg/k g),观察其成模状况。分别在建模后第0、2、4、6、8周测量大鼠的体重与血糖并观察其一般情况。于第8周处死全部大鼠,取胰腺标本进行HE染色和胰岛素的免疫组化染色,观察胰腺组织的病理学改变。结果:建模组有21只大鼠首次注射STZ 72h后,血糖值达到成模标准,4只血糖值未达到成模标准,再次注射STZ72h后血糖值检测均达到成模标准。持续观察8周,首次建模成功及补救建模组大鼠均成模稳定,糖尿病症状明显,未见血糖转复正常。非建模组大鼠各项指标均未见异常。与非建模组相比,首次建模成功组及补救组大鼠胰岛形态不规则,体积萎缩变小,胰岛内分泌细胞数量明显减少。胰岛素胰腺免疫组化检测发现,与非建模组相比,首次建模成功组和补救组胰岛素分布面积显著减少。结论:一次性大剂量腹腔注射STZ可制备有效、稳定的1型糖尿病大鼠模型。首次建模失败后,适时再次注射STZ仍可制备高质量的1型糖尿病大鼠模型。

尾静脉注射链脲佐菌素构建幼龄小鼠1型糖尿病模型的实验研究

目的探讨利用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)快速高效建立幼龄C57BL/6小鼠1型糖尿病(T1DM)模型的方法。方法选择3周龄雄性C57BL/6小鼠为受试鼠,尾静脉注射不同剂量STZ,分别为30(V30)、50 mg/kg(V50),连续给药4 d;以腹腔注射70 mg/kg STZ(P70)连续给药5 d为阳性对照,观察各组小鼠体质量与血糖的变化,采用组织病理学法检测小鼠胰岛、肾及肺的改变,实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附实验检测小鼠体内炎症因子INF-γ和TNF-α的表达。结果尾静脉注射组V30、V50和腹腔注射组P70均出现体质量增加缓慢和血糖升高,其中以V50组和P70组表现显著,符合T1DM标准,成模率分别为87. 5%和75. 0%。组织病理学检测结果表明,V50组和P70组胰岛组织减少,形态不规则,胰岛素分泌量减少,肾纤维化病变明显,肺泡壁塌陷与炎性浸润显著。实时荧光定量PCR、酶联免疫吸附实验检测小鼠体内炎症因子INF-γ和TNF-α的表达亦上调。结论尾静脉注射STZ可快速高效建立幼龄小鼠T1DM模型,为深入研究儿童T1DM提供了一种简便可行的实验方法。

1型糖尿病大鼠模型的建立及观察

目的探讨链脲佐菌素(STZ)建成可靠、稳定的1型大鼠糖尿病模型情况。方法选取SDF级雄性Wistar大鼠70只,分成3个实验组,各20只和对照组10只,实验组大鼠一次性腹腔注射STZ 30、65、100 mg/kg,对照组10只大鼠腹腔注射枸橼酸缓冲液,用拜安易血糖仪检测血糖,7 d后血糖>16.65 mmol/L判定为1型糖尿病动物模型。观察大鼠的血糖、体质量、饮水量、胰岛素和C肽等指标。结果大鼠注射STZ 65 mg/kg 7 d后,大部分血糖值达到成模标准,并出现糖尿病表现,持续观察7周,有18只大鼠成模,未见糖尿病转复,糖尿病症状明显。结论腹腔一次性注射STZ65 mg/kg剂量可成功制备1型糖尿病大鼠模型。

成纤维细胞生长因子21对1型糖尿病动物模型的肝糖代谢影响及机制研究

成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改良传统造模方法,诱导小鼠缓慢产生糖耐量异常,研究FGF-21对此类模型的糖代谢影响及肝糖代谢机制.通过检测FGF-21短期注射和长期注射后模型动物血糖的变化,研究FGF-21在模型动物上对血糖的调控效果.采用实时定量PCR检测FGF-21对模型动物肝脏中葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、4 mRNA的表达影响.利用蒽酮法检测模型动物肝脏中糖原合成量.实验结果显示,FGF-21能够调节1型糖尿病动物的血糖水平,并呈剂量依赖性.同时,首次在1型糖尿病动物模型上证实了低剂量FGF-21(0.125 mg/kg)与胰岛素的协同作用效果优于相同剂量FGF-21和胰岛素单独注射的效果.治疗结果表明,FGF-21能够维持1型糖尿病动物模型血糖在正常范围,效果优于胰岛素.实时定量PCR结果发现,与胰岛素上调GLUT4 mRNA表达量不同的是,FGF-21作用动物模型8周后,GLUT1 mRNA表达量显著提高,长期的FGF-21与胰岛素协同注射使GLUT1、4 mRNA表达量同时显著提高.长期FGF-21与胰岛素协同注射组和高剂量FGF-21注射均可显著提高模型动物肝糖原的合成.结果表明,FGF-21促进动物模型糖代谢机制与增加GLUT1表达、增加糖原合成作用有关.为临床应用FGF-21治疗1型糖尿病,增加胰岛素敏感性提供了理论依据.

1型糖尿病模型动物与药物临床前安全性评价

疾病模型动物主要应用于药理学方面的研究,在药物临床前安全性评价中没有得到广泛的应用。但对具有特殊药理作用(如降糖药、降血压药)药物的安全性评价中,疾病模型动物的引入可能更有利于具有特殊药理作用药物的安全性评价。本文就1型糖尿病模型动物自身特点研究的进展和在药物临床前安全性评价中存在的优势、应用前景和存在的问题作简要阐述。

1型糖尿病动物模型研究进展

1型糖尿病(T1DM)是以胰岛素极度缺乏为主要特征的自身免疫性疾病,其发病率和死亡率在全球范围内正在快速的增长,已被列为医学界三大疑难病之一,严重的威胁着人类的健康。目前,糖尿病发病的主要机制依然不明,研究者只能通过构建动物模型的方式来探求其主要的发病机理,但现有动物模型不能很好的模拟人类疾病的自然过程,相信实验性自身免疫性T1DM动物模型的提出,将为T1DM的治疗带来曙光。本文对国内外现有的T1DM动物模型进行了综述。

单次大剂量链脲佐菌素诱导的糖尿病模型β细胞凋亡的研究及意义探讨

目的详细阐述单次大剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的SD大鼠1型糖尿病模型中β细胞凋亡的时相变化。方法 SD大鼠腹腔一次性注射大剂量STZ(65 mg/kg),观察血糖及胰岛素水平的动态变化,在指定时间点处死大鼠,对胰腺行HE染色、免疫荧光染色及TUNEL染色。结果注射STZ后,SD大鼠血糖呈现出一个高-低-高的三相反应,伴随着胰岛素水平低-高-低的变化以及相应的病理学改变。STZ注射后6 h,β细胞凋亡率(由TUNEL染色衡量)大幅度上升,β细胞凋亡较为同步,此后β细胞凋亡率急剧下降,直到STZ注射后48 h,几乎检测不到β细胞的凋亡。结论单次大剂量STZ诱导的SD大鼠1型糖尿病模型β细胞凋亡在病程早期(STZ注射后6 h)即达高峰,且较为同步,相应出现了血糖水平、胰岛素水平以及胰岛病理结构的变化。

链脲佐菌素诱导1型糖尿病的发生机制

目的探讨链脲佐菌素(STZ)注射诱导的1型糖尿病(T1DM)模型鼠胰岛细胞的损伤机制。方法STZ对清洁级雄性7周龄Balb/C小鼠胰岛细胞的直接细胞毒试验;应用小剂量STZ、多次腹腔注射方法,诱导1型糖尿病小鼠模型。然后,脱颈处死1型糖尿病模型鼠,无菌制备模型鼠脾淋巴细胞与无菌制备的预先小剂量STZ致敏的同系鼠正常胰岛细胞体外混合培养,以同系正常鼠脾淋巴细胞为对照,观察模型鼠脾淋巴细胞及STZ对胰岛细胞的影响,MTT法检测OD值,化学发光法检测各组胰岛细胞所分泌的胰岛素量。结果细胞毒试验显示以0.2 mg/ml STZ与正常Balb/C小鼠的胰岛细胞混合培养后,胰岛细胞损伤与对照组比较无明显变化(P>0.05),可用于体外胰岛细胞致敏;在脾淋巴细胞浓度为5×106个/ml时,混合培养72h和144 h的结果:无STZ致敏组、24hSTZ致敏组和48hSTZ致敏组与其各自对照组比较胰岛细胞的损伤及胰岛素的分泌量均无明显变化,而混合培养216h的结果:无STZ致敏组和24hSTZ致敏组与其各自对照组比较具有明显差异(P<0.05),48hSTZ致敏组与其对照组比较具有显著差异(P<0.01)。在脾淋巴细胞浓度分别为5×107/ml时,混合培养72 h的结果:无STZ致敏组和24 hSTZ致敏组与其各自对照组比较具有明显差异(P<0.05);48h STZ致敏组与其对照组比较具有显著差异(P<0.01),而混合培养144 h和216 h的结果:无STZ致敏组2、4 h STZ致敏组和48 hSTZ致敏组与其各自对照组比较具有显著差异(P<0.01)。结论T1DM模型鼠脾淋巴细胞对同系正常鼠的胰岛细胞具有一定的免疫损伤作用;糖尿病模型鼠脾淋巴细胞明显加强对低剂量STZ致敏的同系正常鼠胰岛细胞的免疫损伤作用。胰岛细胞的免疫损伤的程度与1型糖尿病模型鼠激活的脾淋巴细胞数量、低剂量STZ致敏同系鼠胰岛细胞的时间以及上述两者混合培养的时间密切相关。

壮族民间处方药对1型糖尿病大鼠的影响

目的研究壮族民间处方药对1型糖尿病大鼠的影响。方法给健康6~8周龄雄性SD大鼠一次性腹腔注射1%STZ(50 mg/kg)诱导建立1型糖尿病大鼠模型。在造模成功的基础上,血糖稳定1周后,随机分为糖尿病模型对照组、给药组,未注射STZ的健康6~8周龄雄性SD大鼠做为正常对照组,每组各10只。给药组灌胃处方药2 mL/只,1次/d,连续灌胃14天,糖尿病模型对照组和正常对照组灌胃等体积生理盐水。各组分别于给药前及给药后第7天、第14天,测定大鼠空腹12 h(不禁水)血糖。给药组与糖尿病模型对照组及正常对照组做对比,得出结论。结果糖尿病模型对照组大鼠血糖降低不明显,血糖值较正常对照组大鼠高,出现"三多一少"症状。给药组与糖尿病模型组相比,大鼠血糖值降低明显,并始终在正常血糖值范围内,"三多一少"症状明显改善。结论壮族民间处方药能降低1型糖尿病大鼠血糖。

使用链脲佐菌素造模对1型糖尿病大鼠调节性T细胞的影响

目的研究使用链脲佐菌素造模1型糖尿病大鼠发病机制与调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)数量和功能变化的关系。方法使用链脲佐菌素(streptozocin,STZ)对健康SD大鼠造模,分别选取造模成功大鼠和健康大鼠各12只,各项体征均符合成模标准后,分别选取模型和健康大鼠各6只(雌雄各半)解剖,取脾脏、胸腺和外周血使用流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+(Tregs)水平状况,剩余大鼠解剖取脾脏分选CD4+CD25+细胞后检测其免疫抑制功能。结果两组大鼠脾脏、胸腺和外周血CD4+CD25+Foxp3+水平比较无统计学差异(P>0.05),自体和异体大鼠CD4+CD25-细胞增殖率比较无统计学差异(P>0.05)。结论使用链脲佐菌素造模的1型糖尿病大鼠调节性T细胞数量和功能无显著变化,其发病机制与Tregs无直接关系。

1型糖尿病大鼠胰岛α细胞胰高血糖素及神经肽Y的表达

目的:测定并比较实验性1型糖尿病大鼠模型与正常对照组大鼠胰岛α细胞中胰高血糖素(GLC)、神经肽Y(NPY),β细胞中胰岛素蛋白表达,明确T1DM大鼠胰岛中α、β细胞的功能改变及相互关系。方法:用普通饮食/大剂量链脲佐菌素制备T1DM大鼠模型;测定两组大鼠生化代谢指标及胰岛面积;采用荧光双标及单标法分别对两组大鼠胰岛GLC、NPY,INS定位分析及α细胞中NPY,GLC,β细胞中INS定量分析。结果:实验性T1DM鼠模型的生化代谢指标与临床疾病表现一致;与正常对照组相比,T1DM组胰岛面积缩小,β细胞中INS表达减少,而α细胞中的NPY,GLC表达明显增高(P<0.01)。表达NPY及GLC的α细胞分布方式发生由正常的外周向中央分布的改变。结论:本实验证明T1DM发生时,INS表达减少与NPY,GLC表达增多同时并存,为T1DM的发病机理的研究及防治提供新思路。

ERIC-PCR指纹图谱技术分析糖尿病小鼠肠道细菌群落变化

目的通过比较1型糖尿病模型组和空白对照组雄性小鼠肠道菌群结构的变化,探索糖尿病造模与肠道菌群的关系。方法收集造模2周后空白对照组(n=5)、STZ造模成功组(n=5)和造模不成功组(n=3)ICR小鼠的新鲜粪便样品,提取粪便样品的总DNA,ERIC-PCR扩增形成DNA指纹图谱,借助多变量统计分析方法研究各组样品肠道菌群结构上的异同。结果ERIC-PCR指纹图谱结合偏最小二乘法(PLS-DA)分析表明造模成功组和造模不成功组小鼠的肠道菌群结构显著区别于空白对照组,而造模不成功组小鼠的肠道菌群结构与造模成功组仍有一定的区别。结论STZ诱导的1型糖尿病会造成小鼠的肠道菌群结构的变化,而部分小鼠造模失败可能与这些小鼠的肠道菌群结构有关。

1型糖尿病大鼠模型心肌中环氧化酶-2表达的研究

目的探讨1型糖尿病大鼠心肌病理改变和心肌中环氧化酶-2（COX-2）的表达。方法30只SD大鼠随机分为糖尿病模型组和正常对照组，糖尿病模型组一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）（60mg／kg）和枸橼酸钠溶液，正常对照组腹腔注射枸橼酸钠溶液。8周后观察两组大鼠的体质量和平均血糖浓度，并切取大鼠心室肌组织，进行组织切片和免疫组织化学实验观察。结果以STZ注射后3d血糖浓度≥16．7mmol／L为糖尿病大鼠，模型组共有15只，其中有2只大鼠死亡。成模后大鼠出现明显多饮、多食、多尿和体质量下降，HE染色显示糖尿病组心肌细胞肿胀肥大，变性，核明显增大，心肌纤维断裂、溶解，收缩呈波浪状，排列紊乱。免疫组化糖尿病大鼠心肌见明显COX-2的表达，而对照组大鼠心肌偶见COX-2的表达。结论STZ诱导的1型糖尿病大鼠模型制作方法成功率高，血糖值稳定，8周后出现明显的心肌病变。COX-2在糖尿病大鼠心肌组织中表达活性明显增强。