吴茱萸碱对H_(2)O_(2)诱导ARPE-19细胞的炎症反应、细胞凋亡和SIRT1表达的影响

目的 探究吴茱萸碱对H_(2)O_(2)刺激下人视网膜色素上皮细胞ARPE-19的炎症反应和细胞凋亡的影响,阐明去乙酰化酶1(SIRT1)在其中的作用和相关机制。方法 分别采用不同浓度的H_(2)O_(2)(0,25,50,100,200,400μmol/L)和不同浓度的吴茱萸碱(0,2.5,5.0,10.0,20.0,40.0μmol/L)处理ARPE-19细胞,CCK-8法筛选H_(2)O_(2)和吴茱萸碱的最佳作用浓度。使用H_(2)O_(2)(200μmol/L)与不同浓度的吴茱萸碱(2.5,5,10,20μmol/L)联合处理ARPE-19细胞,Western blot法检测细胞中SIRT1蛋白表达情况。按处理方式的不同将ARPE-19细胞分为二甲基亚砜处理的对照组、200μmol/L H_(2)O_(2)处理组(H_(2)O_(2)组)、200μmol/L H_(2)O_(2)与不同浓度吴茱萸碱处理组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组)及100μmol/L的SIRT1抑制剂Sirtinol拮抗组(H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组),处理24 h后,ELISA法检测各组ARPE-19细胞上清液中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)水平,Annexin V-FITC/PI染色检测各组ARPE-19细胞的凋亡率,Western blot法检测各组ARPE-19细胞中核因子-κB p65(NF-κB p65)、环氧化酶-2(COX-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、Caspase-3、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果 200μmol/L的H_(2)O_(2)对ARPE-19细胞的生长抑制相对稳定。0,2.5,5.0,10.0,20.0μmol/L的吴茱萸碱对ARPE-19细胞活力无明显影响(P均>0.05),40μmol/L吴茱萸碱可明显降低ARPE-19细胞活力(P均<0.05)。H_(2)O_(2)组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱各组ARPE-19细胞中SIRT1蛋白相对表达量均明显低于对照组(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱5μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中SIRT1蛋白相对表达量均明显高于H_(2)O_(2)组(P均<0.05),且H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组升高更明显。与对照组比较,H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组和H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显升高(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显降低(P均<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05);H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L+Sirtinol组中TNF-α、IL-1β、IL-6水平和COX-2、NF-κB p65、Bax蛋白相对表达量及Cleaved Caspase-3/Caspase-3、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值均明显高于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P均<0.05), Bcl-2蛋白相对表达量明显低于H_(2)O_(2)+吴茱萸碱20μmol/L组(P<0.05),各指标与H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+吴茱萸碱10μmol/L组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论 吴茱萸碱可在体外通过上调SIRT1表达来抑制NF-κB通路、线粒体介导的凋亡通路和PI3K/Akt通路,从而减轻H_(2)O_(2)刺激下ARPE-19细胞的炎症反应,减少细胞凋亡。

ARP协议仿真实验设计与实现

ARP协议是TCP/IP协议栈中重要的协议之一,掌握其工作原理对于理解局域网底层通信逻辑至关重要。文章不仅分析了同网段通信时ARP协议的工作原理,而且还分析了跨网段通信时ARP协议的工作原理,并给出了相关仿真实验过程。研究对于更好地理解和掌握ARP协议,解决在现实中遇到的网络问题具有实践指导意义。

基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达。结果选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升(P<0.01),凋亡率明显下降(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调(P<0.01)。结论滋阴明目方含药血清可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的凋亡,其分子机制与调控PERK-ATF4-CHOP信号通路有关。

红景天苷脂质体的构建及其对高糖诱导ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用

目的 构建红景天苷脂质体(SAL-LIPS),对其进行评价,并研究SAL-LIPS在高糖(HG)环境下对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞氧化损伤的保护作用。方法 采用乙醇注入法制备SAL-LIPS,通过透射电镜观察其形态,测定粒径、多分散系数(PDI)并考察制剂的体外释放及稳定性。HG诱导ARPE-19细胞建立氧化应激细胞模型,检测不同浓度的SAL-LIPS对损伤细胞活力的影响,并检测不同组别细胞ROS水平、MDA含量、血管内皮因子(VEGF)和缺血诱导因子(HIF-1α)的表达。结果 制备的SAL-LIPS呈圆球状,平均粒径为(112.1±2)nm,平均PDI为0.204±0.02,与红景天苷原料药相比具有缓释作用,稳定性较好。在50~100 μmol·L^(-1)内SAL-LIPS可以显著改善HG诱导的ARPE-19细胞的活力。与空白对照组比较,HG组显著升高ARPE-19细胞内ROS水平、MDA含量,同时增强了VEGF和HIF-1α的表达;与HG组ARPE-19细胞比较,HG+低浓度SAL-LIPS组和HG+高浓度SAL-LIPS组显著降低了细胞内ROS水平、MDA含量,同时减少了VEGF和HIF-1α的表达。结论 所构建的SAL-LIPS具有良好的缓释作用和稳定性,可以改善HG诱导ARPE-19细胞发生的氧化应激,发挥抗氧化作用。

谷子(Setaria italica)ARP基因家族成员的鉴定及生物信息学分析

肌动蛋白相关蛋白(Actin-related proteins,ARPs)是一类和肌动蛋白同源的蛋白,其中核定位的ARP基因主要是以染色质重塑复合体成员被研究,染色质重塑复合体成员参与基因的表达调控进而影响生物体的生长发育过程。为揭示ARPs在谷子中的功能,将拟南芥中核定位的5个成员在谷子中进行同源比对,获得了5个谷子ARP基因,分别是SiARP4、SiARP5、SiARP6、SiARP7、SiARP9。然后对这5个成员的基因结构、理化性质、蛋白保守基序等信息进行分析预测,同时利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)对逆境胁迫下SiARP4和SiARP7表达情况进行了检测。结果表明,这5个成员均为亲水性蛋白质,保守基序的组成存在一定差异,都含有Actin-like ATPase结构域。系统进化分析显示,谷子ARPs与玉米和高粱ARP蛋白的亲缘关系较近。启动子元件分析结果显示,上述5个基因的启动子含有光响应、激素响应、应激响应及其他类生长调控元件。RT-qPCR分析表明,ARP4和ARP7基因在干旱胁迫和盐胁迫下发生了不同程度的表达量变化,说明ARP4和ARP7基因参与到逆境胁迫响应过程中,研究为染色质重塑组分ARPs参与谷子抗逆过程的分子机制解析奠定了理论基础。

非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响

目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。

arp攻击下多数据链医院网络终端信息加密系统

arp攻击下,医院网络安全风险较高。为保证患者隐私信息安全,该文设计一种arp攻击下多数据链医院网络终端信息加密系统。该系统以B/S三层结构为基础设计系统整体框架,客户机层负责在网络终端截取信息并完成分块、上链处理,应用服务层负责对每个区块的隐私数据实施加密;数据库服务层负责控制加密流程并储存加密后的数据。以嵌入式的Linux操作系统、ARM开发板为核心搭建系统硬件后,通过终端信息接口模块获取待加密信息,通过Rossle混沌映射设计信息加解密模块,将加密后的信息上传到区块链,完成多数据链医院网络终端信息加密。结果表明,该系统的DST指标值较高,说明该系统抗arp攻击的能力更强;该系统密钥敏感性和密文复杂度更高,说明该系统加密后信息安全程度更高。

ARP沥青混合料在国省干道车辙处治中的应用研究

本文依托某国省干道养护工程,对ARP外掺剂对沥青混合料性能影响进行了探究,并与常规的SBS改性沥青混合料进行对比。首先基于Sup25级配,对ARP沥青混合料和常规SBS沥青混合料进行了配合比设计,确定其级配和最佳油石比;然后对其常规路用性能(高温性能、低温性能、水稳定性)进行测试;最后铺筑了ARP沥青混合料试验路段,总结了其施工工艺。结果表明,ARP掺量为沥青混合料质量的0.45%;ARP沥青混合料的高温性能和水稳定性均优于改性沥青混合料Sup25,但前者的低温性能略低;ARP沥青混合料施工方便,各项施工指标均满足设计要求,且经过半年跟踪检测,实际路用性能较好;ARP沥青混合料Sup25的价格相较于SBS改性沥青混合料,每吨可节约400元,具有明显的经济性。研究成果可为ARP外掺剂的推广应用提供依据和基础。

ARP欺骗的监测与防范技术综述

目前已经提出许多针对ARP欺骗的安全技术,根据所起作用的不同,将其分为ARP欺骗监测、ARP欺骗防御和改进ARP协议的ARP欺骗避免技术。主要对这些技术进行分析和总结,比较其优缺点,并提出研究改进ARP协议需要综合考虑的因素。

ARP欺骗攻击与硬件防御研究

针对现有ARP欺骗攻击防御手段配置繁琐、成本高昂等问题,文章设计了基于FPGA的硬件防御设备并在真实网络环境中进行了测试。首先搭建真实的局域网环境,利用arpspoof工具对局域网中的目标主机实施ARP欺骗攻击;然后设计了基于FPGA平台的网络安全防御设备,通过对上下行链路中的网络报文进行解析,并与设置的安全防御策略相应报文的字段进行比对过滤,实现对ARP欺骗报文的识别与过滤;最后将网络安全防御设备接入局域网,并通过VIVADO的ILA抓取ARP欺骗攻击报文的相关字段波形。波形数据表明,网络安全防御设备可有效识别ARP欺骗攻击报文的MAC地址和IP地址等内容并实施有效拦截,同时可对接入系统的网络链路带宽、攻击拦截率和被攻击主机系统资源使用率进行统计。

ARP协议分析及攻防技术研究

随着计算机网络技术的广泛应用,有很多在当时看来没有问题的协议随着科技信息的进步逐渐开始暴露出问题,其中最具代表性的就是ARP协议。ARP协议在设计之初,一方面为了通信的效率考量,另一方面也受限于当时硬件设备的算力,协议本身并没有考虑到安全因素。文章详细地对ARP协议的报文格式、工作原理及相关缺陷进行论述,模拟攻击者对ARP协议常见的攻击手段逐一进行测试,以网络攻击者的视角对ARP协议给出相应的防护意见,便于应对接下来网络安全将面临的挑战。

ARP欺骗研究综述

近年来,ARP欺骗已成为网络安全的首要威胁,ARP欺骗的相关研究已成为网络安全领域的热点课题。本文分析ARP协议的工作原理以及ARP欺骗原理,阐述ARP欺骗的主要类型:欺骗主机、欺骗网关和双向欺骗,并在此基础上,研究近几年来ARP欺骗主要的检测和防御方法,如IP与MAC地址匹配方法、SACT检测方法、改进或扩展ARP协议和S_UARP协议等,分析这些方法的工作原理及其优缺点。改进和完善ARP协议将成为ARP欺骗防御的发展趋势。

GLS1通过激活Nrf2/HO-1轴抑制过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡

目的探究GLS1对过氧化氢诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡的影响及机制。方法ARPE-19细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+Vector组、H_(2)O_(2)+GLS1组,对照组细胞不做任何处理,H_(2)O_(2)组细胞用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48h,H_(2)O_(2)+Vector组和H_(2)O_(2)+GLS1组细胞转染Vector和GLS1质粒后用200μmol/L H_(2)O_(2)诱导48 h,比色法测定各组细胞SOD、GSH和MDA浓度,透射电镜观察各组细胞自噬小体,流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,Western blot检测各组细胞Nrf2、HO-1、LC3-Ⅱ、p62的表达。结果与对照组比较,H_(2)O_(2)组ARPE-19细胞SOD、GSH表达显著下降,MDA显著增加,自噬小体数目显著增加,细胞凋亡显著增加,LC3-Ⅱ表达显著上调,P62、抗核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶1(heme Oxygenase-1,HO-1)表达显著下调。与H_(2)O_(2)+Vector组比较,H_(2)O_(2)+GLS1组细胞SOD、GSH表达显著增加,MDA显著降低,自噬小体数目显著减少,细胞凋亡显著减少,LC3-Ⅱ表达显著下调,P62、Nrf2、HO-1表达显著上调。结论GLS1可抑制H_(2)O_(2)诱导的ARPE-19细胞氧化应激、自噬与凋亡,其机制为激活Nrf2/HO-1信号通路。

局域网ARP攻击原理与防范

局域网ARP攻击会导致网络大面积的瘫痪,威胁整个网络的安全。该文通过对ARP攻击的分析,详细讨论了ARP攻击原理,提出几种常用的防范ARP攻击的方法。

试谈ARP欺骗与防范

由常见的ARP欺骗攻击问题,通过对ARP基本概念的认识和对ARP攻击的原理及方法的分析,提出了ARP欺骗攻击的相关防范方法及技术。

ARP协议漏洞攻击实现与防范

目前网络上的黑客针对ARP协议漏洞对计算机进行攻击轻则导致网络不能正常工作,重则成为黑客入侵跳板,从而给网络安全造成极大隐患。本文从ARP协议的工作原理、漏洞描述、攻击实现与防范手段四个方面对ARP协议漏洞攻击实现与防范进行了详细阐述。

ARP攻击和ARP欺骗的原理及其解决方案

从ARP协议入手,深入分析了ARP攻击的工作原理并对ARP欺骗的原理和攻击方式做了详细阐述,最终找到了ARP攻击和ARP欺骗后的解决方案。

校园ARP欺骗分析及其对策初探

由于ARP协议的固有缺陷,网络中存在着利用该特性进行ARP欺骗的现象。本文阐述了ARP欺骗的相关技术原理以及校园网络预防ARP欺骗的综合对策手段。

ARP攻击现状分析及一种应对ARP攻击的方法

针对局域网ARP攻击普遍存在并对网络安全构成较大威胁的现状,通过对ARP协议的原理、ARP攻击方法以及现有解决方案进行分析,提出将DHCP及设置静态ARP缓存结合的一种应对ARP攻击的方法,通过多个VMware虚拟机和VLAN构建虚拟局域网进行测试,结果表明该方法能有效应对点对点局域网ARP攻击。

ARP协议漏洞分析

近年来,ARP欺骗攻击已经成为危害网络正常稳定运行的主要问题。详述了ARP协议的工作原理,剖析了ARP协议的漏洞所在之处,给出了相应的防范措施。