农杆菌介导将Bt杀虫蛋白基因导入优良玉米自交系的研究

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系 34 0、4112为材料 ,用带有质粒pGBIL0 4(Pactin -Bt-Tnos)的根癌农杆菌LBA44 0 4转化其幼胚及其初始愈伤组织 ,共培养 3天后 ,在含PPT的培养基上连续筛选培养 3代 ,然后分化获得再生植株。PCR检测证明目的基因已整合到再生植株的基因组中。实验结果表明幼胚预培养后形成的新鲜的初始愈伤组织是比较适宜的转化受体 ,结果还发现将共培养温度降到 2 2℃可以提高农杆菌介导的玉米遗传转化的筛选频率。

转基因抗虫油菜中Bt杀虫蛋白基因稳定遗传和高效表达及抗虫性研究

通过对转 Bt杀虫蛋白基因油菜植株的后代进行卡那霉素抗性分析和 PCR技术检测 ,结果表明 :Bt杀虫蛋白基因是以单拷贝、杂合地整合到转基因植株 (T0 1、T0 2、T0 3、T0 5、T0 6、T0 7、T0 8)的基因组中 ,并稳定地遗传。EL ISA检测表明 :在第 3～第 9叶期 Bt杀虫蛋白基因在转基因油菜植株中高效地表达 ,Bt杀虫蛋白的表达量为 170～ 2 6 0 ng/ 2 5mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 6 7%～ 0 .10 5 % ,其抗虫效果高达 72 .0 %～ 94 .4 %。但从第 11叶期后 Bt杀虫蛋白表达量显著地降低 ,只有 7～ 5 0 ng/ 2 5 mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 0 3%～ 0 .0 2 %。

转Bt杀虫蛋白基因的抗棉铃虫棉花新种质

采用花粉管通道途径,将合成的 Bt 杀虫蛋白基因导入棉花优良品种泗棉3号和中棉所12号,获得了转基因植株。组织化学分析表明,GUS 标记基因已在 R_1代植株中得到表达。据对 GUS 阳性转基因棉株的 PCR 分析结果,证明 Bt 杀虫蛋白基因出现在 R_1代中,并通过自交传递至 R_2代。经鉴定,获得了5株对棉铃虫幼虫有高度毒杀作用的 R_1代单株S545、S591、S636、S1001(泗棉3号+Bt/GUS)及 Zh1109(中棉所12号+Bt/GUS),棉铃虫幼虫致死率分别达到91.6%、93.8%、92.3%、85.7%、75.0%。并由 R_1代自交后形成 R_2代抗虫棉群体,表明获得了抗棉铃虫棉花新种质。

以基因枪法将Bt杀虫蛋白基因导入常规玉米自交系的研究

以生产上大面积使用的优良玉米自交系 792 2为材料 ,以来源于其幼胚的Ⅱ型胚性愈伤为受体 ,经预实验选择标准制弹用量一半的金粉 ,通过基因枪轰击法 ,将Bt杀虫蛋白基因转入其细胞中 ,并再生了大量的转基因植株。抗性植株再生频率为 78 40 % ,PCR分子检测证明目的基因已转入玉米中 ,转化频率为 3 0 9%。

农杆菌介导法将Bt杀虫蛋白基因导入玉米自交系的研究

利用β 葡萄糖苷酸酶(gus)基因的瞬时表达和稳定表达对农杆菌转化玉米愈伤组织的条件进行优化,通过用带有Bt抗虫基因和bar抗除草剂基因的根癌农杆菌LBA4404(ACT)转化玉米自交系7922、H99和P2的胚性愈伤组织,获得了抗性愈伤组织,并分化出植株。PCR检测初步证明Bt杀虫蛋白基因已整合到玉米再生植株中。

Bt杀虫蛋白基因导入新疆棉花获得抗虫转基因植株

通过花粉管通道法将人工全序合成的Ｂｔ杀虫蛋白基因导入新陆早４号和Ｃ６５２４两品种中，收获注射过Ｂｔ杀虫蛋白基因的棉花种子２万余粒。经棉铃虫饲喂的抗虫性生物检测，得到高抗虫的１８株新陆早４号转化苗和３６株Ｃ６５２４转化苗；以Ｂｔ基因的一对引物进行ＰＣＲ分析，５４株抗棉铃虫的转化棉苗均扩增出部分Ｂｔ杀虫蛋白基因的目标带。未转化的对照棉苗则无此条带，证实Ｂｔ杀虫蛋白基因已整合到转化抗虫棉株的染色体上，首次获得了新疆转目的基因的高效抗虫棉。

转Bt杀虫蛋白基因植物及其抗虫性研究进展

利用遗传工程技术将苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂｅｒｌｉｎｅｒ简称Ｂｔ）杀虫蛋白基因导入植物是近年来的研究热点，本文就Ｂｔ基因的转化及其在植物中的表达与抗虫效果、转Ｂｔ基因植物的产量及品质以及存在的风险与安全性等方面的研究进展作一综述．

欧美杨108号转蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白嵌合基因的研究

以欧美杨108号为外植体材料,利用农杆菌介导法成功地将抗虫基因(蜘蛛杀虫肽+B t毒蛋白的嵌合基因)导入受体中。通过PCR检测,凝胶电泳结果显示8个卡那霉素抗性芽中,6个存在目的基因;经PCR-Southern印迹杂交检测,阳性率为50%,进一步表明目的基因成功整合到欧美杨108号基因组内。

用花粉管通道法将Bt杀虫基因导入玉米自交系的研究

本文利用花粉管通道技术 ,以生产上优良玉米自交系 792 2、3 4 0、4 4 4、4 112、吉 85 3、890 2、吉 83 5、吉 84 6、Mo17为材料 ,将Bt杀虫蛋白基因导入这 9个玉米自交系中 ,在D1代对转基因的 80 0株植株进行PPT( 3 0 0X)筛选 ,转基因植株成活率为 3 0 % ,对其中 60株进行PCR分子检测 ,得到 3株抗性转化植株 ,证明目的基因已转入玉米中 ,转化率为 0 3 75 %。

转Bt基因植物中外源基因时空动态表达的研究现状

在转Bt基因植株中 ,外源基因的时空动态表达对于害虫的防治和转基因安全评价管理具有重要意义。利用生物测定法和酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,对植物不同组织在同一发育阶段、同一组织在不同的发育阶段以及不同转基因植株的外源基因的时空动态表达进行研究。本文综述了转基因植物中外源基因时空动态表达的研究进展和现状。

转基因抗虫油菜的ELISA分析

为选育高效抗虫油菜新品种 ,采用酶联免疫吸附法检测 Bt杀虫蛋白基因在转基因油菜植株中的表达 .结果表明 ,Bt杀虫蛋白基因在转基因抗虫油菜植株的表达随植株生长时期不同而发生变化 .在第 3～ 9叶期 Bt杀虫蛋白基因稳定、高效地表达 ,Bt杀虫蛋白的表达量为 6 .6 8～ 10 .5 2 ng/ m g(以鲜叶计 ) ,占植物可溶性蛋白的0 .0 6 7%～ 0 .10 5 % .但从第 11叶期后 Bt杀虫蛋白表达量显著地降低 ,只有 0 .2 8～ 2 .0 0 ng/ mg,占植物可溶性蛋白的 0 .0 0 3%～ 0 .0 2 0 %

人工合成Bt基因对棉花的遗传转化

采用子房注射法，将构建在植物高效表达载体上的全序人工合成的Ｂｔ杀虫基因ＧＦＭＣｒｙＩＡ转入棉花品种（系）“中棉所１９”、“华农９１６”、“５４１”和“３５１７”中，获得对棉铃虫幼虫致死率在８０％以上的植株２９株。用ＰＣＲ法检测，结果表明这些植株均呈阳性。在这２９株阳性植株中，对棉铃虫致死率为１００％，且自身只有轻微伤害的植株有２６株。这说明Ｂｔ基因经改造，增加其提高转录与翻译能力的表达调控元件后，对棉铃虫的毒杀作用明显提高。

水稻抗虫基因工程研究新进展

水稻抗虫基因工程为防治水稻害虫开辟了一条崭新的道路。尽管目前已经有许多优良的抗虫转基因水稻株系(种)被批准进入中间试验或环境释放 ,但是其抗虫水稻基因还存在着许多令人不满的缺点 ,如外源基因的表达水平不高 ,转基因植株的抗虫持久性不长等问题。因此 ,本文对近年来水稻抗虫基因工程所取得的最新研究进展进行了比较全面的综述 ,特别是对目前已广泛用于水稻抗虫基因工程的Bt杀虫晶体蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因和外源凝集素基因等单基因策略进行了一一详述 ,并对水稻抗虫基因工程中的多基因策略进行了简单的介绍。

转双价抗虫基因Bt-CpTI提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性

目的将外源苏云金芽孢杆菌杀虫蛋白基因CryIA(c)和豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI共同转入四倍体菘蓝以获得鳞翅目昆虫小菜蛾抗性。方法构建了以CaMV 35S为启动子,新霉素磷酸转移酶(Npt-Ⅱ)为选择标记,带有CryIA(c)基因和CpTI基因的植物表达载体pGBI121S4ABC并转入根癌农杆菌LBA4404。采用叶盘法遗传转化四倍体菘蓝。转基因再生植株经PCR和Southern杂交检测,并进行抗小菜蛾实验。结果T0代转化四倍体菘蓝的双基因阳性转化率达到16.67%。Southern杂交检测结果表明外源CryIA(c)基因和CpTI基因均已经随机整合到转基因菘蓝的基因组中。与野生对照相比,转基因四倍体菘蓝对小菜蛾显示出明显抗性。结论转双价抗虫基因Bt-CpTI是提高四倍体菘蓝对小菜蛾抗性的有效手段。

子房注射法与农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的比较研究

以甘蓝型油菜湘油 1 3号为试验材料 ,运用根癌农杆菌介导法和子房注射法成功地将Bt杀虫蛋白基因导入油菜 .在特定的条件下 ,以子叶柄作为转化受体进行农杆菌介导转化 ,其转化效率受侵染时间和共培养时间的影响 ,最佳侵染时间为 3～ 5min,最佳共培养时间为60～ 72 h;子房注射法的最佳注射时间为授粉后第 2 0～ 30 h,最适注射部位为子房中部 ,DNA注射量为 0 .5～ 1 .5μg.在最佳转化条件下它们分别获得抗卡那霉素植株的频率为 8.3%、1 2 .8% .分子检测实验证明 ,Bt杀虫蛋白基因已整合到油菜基因组中 .农杆菌介导法获得转基因植株的频率为 1 .1 8% ,子房注射法的转化频率为 2 .66% ,可见子房注射法是一种有效、实用的油菜遗传转化方法 .