Dkk1在胃癌诊断、治疗及预后中的应用

胃癌(gastric cancer,GC)是一种高侵袭性和高致死性的恶性肿瘤,是第五大常见癌症和第四大癌症死亡的主要原因^([1])。根治性手术是可手术GC患者的主要治疗方法,早期GC患者若及时治疗5年生存率可达90%以上[2-3]。但由于许多GC患者早期症状不典型,在诊治过程中常与胃炎或胃溃疡相混淆,导致大多数患者在首次诊断时通常已处于中晚期阶段,失去了最佳治疗时机,直接影响GC患者的预后。因此,早发现、早诊断、早治疗是降低GC高发病率和高死亡率的重要手段。

阻断DKK1通过促进CD4^(+)T细胞Th1型极化改善抗肿瘤免疫应答

目的:探讨恶性肿瘤中Dickkopf-1(DKK1)表达对CD4^(+)T细胞极化的影响及其作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。方法:利用生物信息学方法分析DKK1在多种类型肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平,分析DKK1表达与肿瘤患者预后及肿瘤微环境免疫浸润间的相关性。利用流式细胞术检测DKK1蛋白对CD4^(+)T细胞表型变化的影响。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠皮下移植瘤模型,观察阻断DKK1对小鼠移植瘤生长和移植瘤组织中免疫细胞浸润与表型的影响。结果:DKK1 mRNA表达水平在多种肿瘤组织中显著高于癌旁组织,DKK1高表达与多数肿瘤患者的不良预后相关且在多数肿瘤中DKK1对CD4^(+)T细胞抗肿瘤免疫应答功能有重要负性调节作用(P<0.05或P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,DKK1蛋白刺激可显著降低CD4^(+)T细胞中T-bet、IFN-γ及CD107a表达水平(均P<0.01)。在小鼠皮下黑色素瘤模型中发现,阻断DKK1可以显著抑制小鼠移植瘤的生长(P<0.01),有效改善抗肿瘤免疫应答,表现为Th1细胞(T-bet+CD4^(+))占比显著升高(P<0.001),效应性CD8^(+)T细胞(CD44+CD62L-)占比显著升高(P<0.01),Th2细胞(GATA3^(+)CD4^(+))与Treg细胞占比显著下降(均P<0.01)。结论:阻断DKK1可有效促进CD4^(+)T细胞向Th1型极化,DKK1具有作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。

LncRNA TERC调控H3K27me3、DKK1在地塞米松干预间充质干细胞成骨细胞分化中的相关研究

目的 研究地塞米松干预骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化后,过表达LncRNA TERC对组蛋白H3K27三甲基化(H3K27me3)及DKK1表达的影响,从而进一步验证其对成骨分化的作用。方法 (1)地塞米松干预BMSCs成骨分化,实验分为对照组(单纯成骨诱导组)及干预组(地塞米松干预成骨组),第14天使用茜素红染色检测的成骨分化能力,RT-PCR检测第3、7、14、21 d各组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因的表达。(2)地塞米松干预BMSCs成骨分化,构建TERC过表达载体,分别设置:空白对照组(地塞米松干预成骨组)、空白载体组、TERC过表达组。RT-PCR检测第3、7、14、21 d各组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因的表达,Western blot实验检测各组细胞中H3K27me3、DKK1的蛋白水平。结果 (1)地塞米松干预BMSCs成骨分化后,茜素红染色显示其成骨能力下降(P均<0.05),且RT-PCR显示,随着地塞米松干预时间的延长,BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因均下调(P均<0.05)。(2)TERC过表达转染实验中,TERC过表达组细胞中BMP-2、SMAD-1、Dlx5、Dlx3等成骨相关基因与其他两组比较均上调(P均<0.05),其他两组以上成骨基因表达水平比较,差异无统计学意义(P均>0.05);TERC过表达组细胞中H3K27me3的蛋白表达水平较其他两组显著上升(P均<0.05),DKK1的蛋白水平较其他两组显著下降(P均<0.05)。其他两组中以上基因蛋白表达水平相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 过表达LncRNA TERC能够显著调高地塞米松干预BMSCs向成骨细胞分化能力,并与H3K27me3及DKK1在地塞米松干预BMSCs向成骨细胞分化中存在有相关性。

血清DKK1在肝细胞癌诊疗中的应用研究进展

肝细胞癌(HCC)是临床常见的恶性肿瘤,正确的早期诊断、科学的疗效判断在HCC癌的诊治中具有重要作用。近年来越来越多的研究证实,分泌性蛋白DKK1与HCC发生发展密切相关。血清DKK1作为一种简单易行的检测方法,在HCC诊疗中的应用价值日趋凸显。本文近年来国内外关于使用血清DKK1进行HCC诊断和鉴别诊断、病情评估和判断、治疗疗效分析等三方面的研究文献进行系统整理,供同行参考借鉴。

云克对类风湿关节炎患者骨代谢及Wnt/DKK1相关因子表达研究

目的:观察云克对类风湿关节炎患者炎症介导骨代谢的治疗效果及安全性,以及对Wnt/DKK1信号通路相关蛋白的影响。方法:选取2020年11月至2021年12月就诊于贵州中医药大学第二附属医院风湿免疫科的60例类风湿关节炎患者为研究对象,按照随机数字表法分为治疗组和对照组,每组30例。对照组给予甲氨蝶呤片联合来氟米特片口服治疗,治疗组在对照组基础上加锝(99Tc)亚甲基二膦酸盐注射液(商品名:云克)治疗。治疗前及治疗后第3个月、第6个月、第12个月检测骨密度,以观察骨密度变化百分比;治疗前、治疗后第12周检测Wnt/β-catenin相关因子[β-连环蛋白(β-catenin)、Dickkopf-1相关蛋白(DKK1)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(lLRP6)],细胞因子[白细胞介素(IL)-17、IL-6],骨代谢标志物[β-CTX、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tTRAP5b)]水平。结果:①治疗组ESR、DAS28-ESR评分、CRP、HAQ、VAS评分,在第4周至第12周均下降,且与对照组相比下降更为明显(P<0.05)。②治疗12周后,治疗组骨破坏标志物、炎症因子、Wnt信号通路抑制因子DKK1血清水平均较对照组低(P<0.05),治疗组Wnt通路活化因子β-catenin、LRP6较对照组血清含量高(P<0.05)。③治疗后,2组脊柱及髋部骨密度变化百分比比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2组髋部及脊柱骨密度变化百分比均在第12个月与第3个月比较增长明显(P<0.05)。结论:云克可以改善类风湿关节炎患者临床症状,降低疾病活动度,调节骨代谢,可能通过Wnt/DKK1信号通路介导类风湿关节炎患者骨破坏进展,且安全性较好。

重组DKK1及pCMV-HA2/DKK1重组质粒对宫颈癌细胞体外增殖作用的影响

目的观察人重组DKK1和pCMV-HA2/DKK1重组质粒对体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞增殖的影响。方法体外培养Hela细胞,非放射性细胞增殖(MTS)法检测重组DKK1、抗DKK1抗体和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞增殖作用的影响,western blot及ELISA法检测转染pCMV-HA2/DKK1重组质粒后Hela细胞中DKK1蛋白的表达情况。结果与对照组相比,10,50 ng/mL的DKK1对Hela细胞有明显抑制作用(F分别为162.31,184.65,P均<0.01);抗DKK1抗体对Hela细胞的增殖影响无统计学意义(P均>0.05);pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后对细胞增殖有明显抑制作用,加入抗DKK1抗体不能完全拮抗pCMV-HA2/DKK1对Hela细胞的抑制作用;pCMV-HA2/DKK1重组质粒转染Hela细胞后可检测到DKK1蛋白表达,经western blot证实为DKK1蛋白(Mr约为38 000),ELISA法结果表明,DKK1蛋白的分泌量随培养时间的延长而增加,第5天时达峰值(19.82 mg/L)。结论重组DKK1和人源DKK1真核表达质粒pCMV-HA2/DKK1可抑制Hela细胞的增殖,抗DKK1抗体可部分抵抗DKK1的抑制作用,提示DKK1在宫颈癌肿瘤发生中对肿瘤细胞具有抑制作用。

CLEC1B、DKK1、DRD4在原发性肝癌病变组织中的表达及临床意义探究

目的分析C型凝集素结构域家族1成员B(C-type lectin domain family 1 member B,CLEC1B)、分泌型蛋白Dickkopf 1(DKK1)、多巴胺受体D4(dopamine receptor D4,DRD4)在原发性肝癌(primary hepatic cancer,PHC)患者病变组织中的表达及临床意义。方法回顾性选取2022年1月~2023年1月在四川大学华西医院接受肝癌切除术且经术后病理证实为PHC的138例患者,取其癌组织与癌旁组织石蜡病理标本,分析其CLEC1B、DKK1、DRD4表达情况及和临床病理特征关联性,Pearson法分析CLEC1B、DKK1、DRD4的相关性。结果肝癌组织中CLEC1B、DRD4表达水平均低于癌旁肝组织,肝癌组织中的DKK1蛋白表达较癌旁肝组织更高(P<0.05),且3者均主要分布于细胞浆;CLEC1B低表达、DKK1高表达、DRD4低表达分别97例(70.29%)、91例(65.94%)、78例(56.52%),PHC患者的CLEC1B低表达与术前AFP水平、血管侵犯、远处转移、肿瘤出血等密切相关(P<0.05),DKK1高表达与术前AFP水平、BCLC Kinki分期、肿瘤数目、肿瘤大小密切相关(P<0.05),DRD4低表达与术前AFP水平、肿瘤数目、肿瘤大小、卫星结节、血管侵犯密切相关(P<0.05);Pearson相关分析显示,PHC患者CLEC1B、DRD4与DKK1表达水平呈负相关(r=-0.809、r=-0.774,P<0.001),CLEC1B与DRD4表达水平呈正相关(r=0.748,P<0.001)。结论CLEC1B、DRD4在PHC患者癌变组织中呈低表达,而DKK1呈高表达,且与临床病理参数有关,CLEC1B、DKK1、DRD4可能参与PHC发生发展,有一定检测意义。

补肾健脾活血方干预过表达DKK1骨细胞对细胞活性及BMP2的影响

目的用补肾健脾活血方干预过表达的DKK1腺病毒转染的成骨细胞,通过观察细胞的活性及BMP2的表达,研究补肾健脾活血方治疗骨质疏松的分子生物学机制。方法将培养细胞分成NC对照组,Ad-DKK1组两组。NC对照组由空载腺病毒转染;Ad-DKK-1组由包装过表达的DKK1腺病毒转染。每组分别用含药血清和空白血清干预。采用CKK-8检测细胞增殖,蛋白印记法检测BMP2的表达。结果各组细胞活性变化:空白血清和含药血清干预均能提高细胞活性。与空白血清分别干预的两组比较,含药血清分别干预后的两组,在24 h,48 h,72 h的细胞活性的增加倍数都较多;在采用蛋白印记法检测后,BMP2在含药血清分别干预的两组的相对表达量较空白血清分别干预的两组的相对表达量高(P<0.01,P<0.01),在NC对照组中含药血清干预与空白血清干预无明显差异。结论补肾健脾活血方含药血清可以提高细胞活性,提高BMP2的相对表达量,有利于成骨细胞的矿化,尤其在过表达DKK1干预后。补肾健脾活血方可能通过调控DKK1进而影响成骨细胞的代谢。

Dickkopf(DKK1)在肝癌组织及多种人肿瘤细胞系中的表达分析

目曲：检测dickkopf（DKK1）在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系中的表达情况。方法：采用酶联免疫吸附实验、real time PCR、RT—PCR及Western blot对DKK1在肝癌组织及多种恶性肿瘤细胞系的表达情况进行检测。结果：肝癌组织检测RT—PCR，10／15肝癌中高表达；Real—time PCR方法检测，8／8肝癌中高表达；Western blot方法检测，5／8肝癌中高表达。酶联免疫吸附实验检测到DKK1在多种恶性肿瘤细胞系的细胞培养液上清液中均有表达，蛋白质表达量波动于5～210ng／mL之间；10种人恶性肿瘤细胞系在mRNA水平和蛋白质水平DKK1的表达均能检测到。结论：DKK1高表达于肝癌组织及广泛表达于多种恶性肿瘤细胞系，提示DKK1可能在肿瘤的发生、发展中起到重要作用。

沉默DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞增殖、ALP活性和钙离子浓度影响研究

目的构建Wnt信号通路抑制因子Dickkopf1(DKK1)、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因沉默重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙离子浓度影响作用。方法设计出特异性针对DKK1、Sost和无关对照序列(Scr),构建DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,用q PCR法和蛋白印记(Western blot)法选出沉默效率最好的扩增DKK1、Sost沉默重组腺病毒载体,并用荧光显微镜观察计算病毒滴度。MG63细胞被分成空白对照组、沉默DKK1(Ad-sh DKK1)组、沉默Sost(Ad-sh Sost)组、沉默DKK1+Sost(Ad-sh DKK1+Ad-sh Sost)组4组,分别用优选出的沉默效率最好的sh DKK1和sh Sost腺病毒载体转染MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测观察细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度。结果 1DKK1 p Ad-sh DKK1-1和Sost p Ad-GFP-shRNA-2沉默效率最高;2与空白对照组对比,沉默DKK1组、沉默Sost组、沉默DKK1+Sost组的细胞光吸收值(OD)、ALP活性测定值均升高,而钙离子浓度均降低,以沉默DKK1+Sost组变化最明显,组间比较具有统计学差异(P<0.01和P<0.05)。结论 DKK1、Sost沉默可促进MG63细胞增殖、提高ALP活性,降低钙离子浓度,尤以二者同时沉默时的作用最强。

过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体的构建及其对MG63细胞和相关蛋白的影响

【目的】针对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)基因构建过表达重组腺病毒载体,观察其对MG63细胞和相关蛋白的影响。【方法】构建DKK1、Sost过表达重组腺病毒载体,将培养好的MG63细胞分为空白对照组、空载病毒组(NC对照组)、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组5组,根据组别不同分别用上述过表达重组腺病毒感染MG63细胞,观察细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性、钙离子浓度和骨调节蛋白表达情况。【结果】与空白对照组比较,过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的细胞光密度值、ALP活性值均显著降低,而钙离子浓度显著升高,以过表达DKK1+Sost组变化最明显(P<0.01)。与空白对照组比较,过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达DKK1+Sost组的骨保护蛋白(OPG)、低密度脂蛋白受体相关蛋白(Lrp)5、骨形态发生蛋白(BMP)2、结缔组织生长因子(CTGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)2、骨桥蛋白(OPN)表达量均降低,而肿瘤坏死因子(TNF)-α表达量则升高,以过表达DKK1+Sost组变化最明显,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】过表达DKK1、Sost可降低MG63细胞增殖和ALP活性,升高钙离子浓度,对骨调节蛋白有一定影响,尤以两者同时过表达时的作用最强。

猪DKK1基因启动子区的克隆及其活性分析

旨在初步探索DKK1基因转录调控机制,本研究利用启动子在线预测软件分析了该基因启动子区序列特征,根据Ensembl数据库已公布的猪DKK1基因的5′侧翼区序列,设计特异性PCR引物进行扩增、测序,进而构建启动子区不同缺失片段的pGL3-DKK1双荧光素酶表达载体,分别转染293T细胞和Hela细胞,并进行双荧光素酶报告基因检测。结果显示,DKK1基因启动子中含有1个TATA-box、多种转录因子和1个CpG岛;DKK1基因启动子对239T细胞具有偏好性,其中p-1 679/+292bp启动子片段活性最高,且显著高于其他缺失片段(P<0.01)。-953^-1 679bp为核心启动子区域,-586^-953bp区域可能存在负调控元件,在-953^-1 679bp区域可能存在正调控元件。本试验通过对DKK1基因进行生物信息学分析并结合不同长度启动子片段双报告基因活性检测,证实了DKK1基因的5′侧翼区序列具有启动子转录活性,并初步确定了该基因的启动子区域,找到了启动子的核心区域和主要调控区域,为进一步研究DKK1基因转录调控机制奠定基础。

C-MET、Golph2、EZH2及DKK1蛋白在肝细胞肝癌中的表达及相关性

目的探讨肝细胞生长因子受体(C-MET)、高尔基磷酸化蛋白2(Golph2)、组蛋白甲基转移酶(EZH2)及Dickkopf-1蛋白(DKK1)在原发性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及癌旁组织中的表达,进一步明确其在肿瘤诊断与进展中的作用。方法采用免疫组化En Vision两步法对75例HCC及癌旁组织的组织芯片分别进行C-MET、Golph2、EZH2及DKK1检测,进一步分析其表达特点及与肿瘤分期、分级之间的相关性。结果 C-MET、Golph2、EZH2和DKK1在HCC组织中的阳性率分别为90.67%(68/75)、93.33%(70/75)、42.67%(32/75)和84.00%(63/75);在癌旁组织中的阳性率分别为88.00%(66/75)、89.33%(67/75)、6.67%(5/75)和68.00%(51/75)。EZH2蛋白对HCC的诊断特异性达93.33%。C-MET、Golph2、EZH2、DKK1蛋白表达与HCC患者年龄、性别、肿瘤最大径、结节数量及脉管侵犯均无明显相关性(P>0.05)。在不同分级HCC组织中C-MET、Golph2、EZH2表达差异具有统计学意义(P<0.05);在不同分期HCC组织中C-MET、Golph2、EZH2、DKK1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EZH2在HCC中的表达具有较高特异性,其可作为诊断HCC的辅助标记,但其敏感性略低。C-MET、Golph2、EZH2、DKK1表达与肿瘤分级具有一定的相关性,其表达与肿瘤进展无显著相关性。C-MET、Golph2、DKK1三者之间具有相关性,共同促进HCC的进展。

肝癌DKK1基因的表达及突变分析

目的:探讨中国地区人肝癌发生发展过程中有无DKK1基因突变。方法:Northernblot方法分析12例肝癌患者癌和癌旁肝组织DKK1mRNA表达水平。采用PCRSSCP方法,检测20例肝癌患者(包括癌和癌旁肝组织)及8种人肝癌细胞株中有无DKK1基因突变,并采用DNA测序对PCRSSCP突变分析结果加以验证。结果:Northernblot显示12例肝癌患者中7例存在癌组织DKK1mRNA高表达而癌旁肝组织微弱表达或不表达。突变检测发现20例肝癌患者及8种人肝癌细胞株中仅1例肝癌患者存在DKK1基因的同义突变(单核苷酸多态现象)。结论:DKK1在中国人肝癌中存在高表达,但未发现突变发生,提示DKK1基因参与肝癌的癌变过程可能并不依赖于该基因的突变。

秦川牛DKK1基因SNPs检测及其与体尺、肉质性状的关联分析

旨在对秦川牛DKK1基因进行SNPs检测,并研究其与秦川牛体尺、肉质性状的相关性。本研究随机选择相近饲养条件下447头18～24月龄的秦川牛母牛,采用DNA直接测序技术并结合PCR-SSCP方法进行DKK1基因全区段遗传变异检测。运用SPSS16.0程序中最小二乘法拟合线性模型对DKK1基因不同基因型与秦川牛体尺(体斜长、体高、腰高、尻长、腰角宽、胸深、胸围和坐骨端宽)和肉质性状(背膘厚、眼肌面积和肌间脂肪含量)进行关联分析。经DNA测序发现秦川牛DKK1基因存在5个突变位点,分别为第一内含子G523A突变;第二内含子A999G和A1 169G突变;第三内含子C1858T突变;第四外显子A2355G突变,其为第247位氨基酸Cys→Arg的错义突变。PCR-SSCP方法检测得到G523A和A2355G位点仅存在2种基因型;A999G、A1169G和C1858T位点存在3种基因型。卡方检验显示,G523A、A1169G和A2355G位点则处于Hardy-Weinberg极度不平衡状态(P<0.01),而A999G和C1858T位点于检测群体中处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。关联分析表明,秦川牛DKK1基因不同突变位点的不同基因型与体斜长、体高、腰高、尻长、坐骨端宽和背膘厚、眼肌面积、肌间脂肪含量差异显著相关(P<0.05或P<0.01)。DKK1基因对秦川牛部分体尺、肉质性状有显著的影响,可以尝试作为秦川肉牛新品系培育的主效候选基因。

左归丸调控DKK1靶点防治糖皮质激素性骨质疏松

背景:中医药可有效防治糖皮质激素性骨质疏松,但其防治机制尚不明确。DKK1是Wnt/β-catenin信号通路的抑制剂,糖皮质激素可诱导其上调。因此,DKK1蛋白是防治糖皮质激素性骨质疏松的重要靶点。目的:探讨左归丸防治糖皮质激素性骨质疏松中对DKK1的调控作用。方法:18只3月龄雌性SD大鼠随机均分为3组:空白组、模型组和左归丸组。模型组和左归丸组大鼠皮下注射地塞米松建立糖皮质激素性骨质疏松模型;空白组给予等体积生理盐水;左归丸组皮下注射地塞米松同时给予左归丸水提液灌胃。1个月后取大鼠腰椎进行micro-CT检测骨量及骨微细结构、压缩试验检测生物力学性能,q PCR测定腰椎DKK1、Runx2和CTSK m RNA表达;血清检测碱性磷酸酶活性。结果与结论:(1)与空白组比较,模型组体积骨密度、相对骨体积、骨小梁数量和骨小梁厚度显著降低(P<0.05),骨小梁间距和结构模型指数较空白组显著增大(P<0.05),血清碱性磷酸酶活性较空白组呈降低趋势,DKK1 m RNA表达显著上调(P<0.05),成骨相关因子Runx2 m RNA表达呈下调趋势,破骨相关因子CTSK m RNA呈上调趋势;(2)与模型组比较,左归丸组体积骨密度、相对骨体积和骨小梁数量显著提升(P<0.05),结构模型指数显著降低(P<0.05),骨小梁间距有减小趋势但差异无显著性意义,血清碱性磷酸酶活性较模型组呈升高趋势,DKK1 m RNA表达显著下调(P<0.05),Runx2 m RNA表达呈上调趋势,CTSK m RNA呈下调趋势;(3)与模型组比较,左归丸组椎体压缩强度显著提升(P<0.05);(4)结果说明,左归丸可能通过下调DKK1的表达防治糖皮质激素性骨质疏松。

山羊Dkk1基因的结构、启动子区的多态性及其与生产性状的关联分析

本研究拟克隆山羊的Dkk1基因并对其多态性及其与山羊产绒量的关系进行分析,寻找与山羊产绒量有关的DNA标记。山羊Dkk1基因的获得采用同源克隆的方法,根据产绒量的高低混成2个基因组DNA池,PCR扩增测序寻找差异的核苷酸,然后采用PCR-SSCP方法检测Dkk1基因的多态性。结果,获得了山羊Dkk1基因3491bp的序列,由4个外显子和3个内含子组成,编码265个氨基酸残基,与其它哺乳动物的对应序列有较高的同源性。共发现33处单核苷酸替代和一处内含子2中四碱基的插入。对启动子区2个邻近的多态性位点(T593C-C603A)的分析表明,在所检测的5个山羊群体中,A均为优势等位基因,在该位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);不同基因型的白绒山羊个体在产绒量、单位体表面积产绒量、初生体质量、出生到断奶体增质量上差异不显著(P>0.1),但A等位基因(T593-603C)对产绒量较为有利。结果表明,山羊Dkk1基因与其它哺乳动物相应序列高度同源,非编码区具有较高的多态性,启动子区的2个多态性与绒山羊的生产性状无显著关联。

DKK1在大鼠骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化早期的差异性表达

目的分析DKK1在大鼠骨髓间充质干细胞成脂、成骨分化早期的表达,探讨其调节机制。方法 Real-time PCR检测骨髓间充质干细胞在成脂、成骨诱导培养早期DKK1基因表达的水平;检测激素处理骨髓间充质干细胞DKK1基因的表达水平。结果成脂组与正常对照组,在成脂诱导6、12、24、48时DKK1基因表达水平较对照组增高,差异有统计学意义,P<0.01。成骨组与正常对照组,0.5、6两个时间点DKK1基因表达量较对照组明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。骨髓间充质干细胞激素处理3、6、12、24时检测,结果显示激素作用下,骨髓间充质干细胞DKK1表达明显增加,差异有统计学意义,P<0.05。结论 DKK1在骨髓间充质干细胞成脂、成骨分化早期可能起重要的调节作用,激素可能通过调节DKK1的表达而发挥调节成脂、成骨分化的作用。

基因转染DKK1对17β-雌二醇促进子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞VEGF和MMP-9表达的影响

目的利用基因转染pcDNA3.1-DKK1阻断Wnt/-βcatenin信号通路,观察对17β-雌二醇(17-βE2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(ESCs)中血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表达的影响,探讨Wnt/-βcatenin信号通路在介导雌激素促进异位内膜粘附、侵袭和转移中的作用。方法体外分离培养内异症患者ESCs,利用LipofectamineTM2000,分别将pcDNA3.1-DKK1质粒,pcDNA3.1空载质粒转入ESCs。选用10-10mol/L 17β-E2处理ESCs不同时间,RT-PCR和Western blot检测转染DKK1前后ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达。结果 17-βE2能明显促进内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白的表达,于10-10mol/L作用48 h最明显(P<0.05)。转染pcDNA3.1-DKK1质粒组内异症患者ESCs VEGF和MMP-9 mRNA及蛋白表达较空白组和空载体组均显著下降(均P<0.05)。结论阻断Wnt/-βcatenin信号通路能明显抑制17-βE2对内异症患者ESCs VEGF、MMP-9 mRNA及蛋白表达的促进作用。雌激素可能通过激活Wnt/-βcatenin信号通路促进内异症患者在位子宫内膜的异位种植。

分泌蛋白DKK1(Dickkopf-1)在胃癌患者血清及组织中的表达及其意义

目的探讨DKK1(Dickkopf-1)在胃癌患者血清及组织中的表达及其意义。方法检测153例胃癌患者与173名健康志愿者血清中DKK1含量。免疫组化检测144例胃癌患者(从153例胃癌患者中选取)和265例回顾性胃癌患者肿瘤组织中DKK1表达情况。结果胃癌组血清DKK1含量明显高于健康人群组(P<0.05)。当把血清DKK1浓度31.9150 pg/mL设为诊断胃癌的阈值时,其诊断特异性和敏感性分别为87.9%和87.6%。血清DKK1浓度大于60.0 pg/mL胃癌患者生存期明显低于血清DKK1浓度较低患者(P=0.033)。胃癌组织中DKK1高表达与血清DKK1含量有密切相关性。结论低浓度阈值的DKK1可以作为胃癌诊断标志物,而高浓度阈值的DKK1可以作为胃癌预后预测标志物。血清和组织中DKK1表达水平可以帮助诊断胃癌,预测胃癌患者预后。