结缕草属种质资源EST-SSR遗传多样性分析

本研究以43份不同来源的结缕草属种质为材料,利用表达序列标签-简单重复序列(Expressed Sequence Tag-Simple sequence repeat,EST-SSR)引物对其进行遗传多样性分析。结果表明:从125对EST-SSR引物中筛选出30对能稳定扩增、条带清晰的引物;共检测到124个标记,平均每对引物检测到4个,多态性标记有108个,多态性位点百分率为88.60%;种质间遗传相似性系数为0.530~0.864,平均为0.711;共检测到104个观察等位基因,平均每对引物检测到3个;有效等位基因数范围为0~5,平均为3;Shannon信息指数变化范围为0~1.593,平均为0.940。Nei’s基因多样性指数范围为0~0.793,平均为0.541;在遗传相似性系数为0.800时,利用非加权组平均法(Unweighted pair-group method with arithmetic means,UPGMA)法将43份种质划分为4个类群,聚类结果与种质地理位置有一定的关联,但联系不紧密。本研究结果表明43份种质的遗传多样性处于上等水平,EST-SSR标记能有效地评价结缕草属种质的遗传差异,为结缕草属种质资源的鉴定评价及分子标记辅助育种提供参考依据。

菜豆EST-SSR分子标记开发及部分种质分子身份证构建

为开发菜豆高效新型分子标记,从分子水平解析菜豆重要种质的遗传多样性及亲缘关系,基于菜豆转录组数据,设计EST-SSR引物,建立EST-SSR标记系统.利用PCR筛选出多态性引物,结合毛细管电泳,分析81份菜豆种质的亲缘关系,并构建分子身份证.通过MISA软件,在菜豆转录组数据85276条非冗余序列中,共挖掘出11649个EST-SSR位点.菜豆转录组SSR标记主要重复单元为1~3个碱基,其中单碱基为主要类型,占总量的56.7%;其次是三碱基重复,占总量的21.1%.从128对EST-SSR引物中筛选出18对多态性高、重复性好的引物进行PCR扩增.供试种质的多态性信息量(PIC)为0.50~0.95,平均为0.88;遗传相似性系数为0.15~0.65,以0.35为阈值可将81份种质分为3大类,其中贵州种质主要分布于第Ⅰ,Ⅲ类,而省外品种仅分布在第Ⅱ类.利用核心引物TDc9和TDc66可以有效区分81份菜豆种质,并构建其分子身份证.研究开发的EST-SSR标记系统,可用于菜豆种质的鉴定及亲缘关系分析.

基于EST指导的家庭管理模式在手外伤修复术后延续性护理中的应用效果

目的:探究基于生态系统理论(EST)指导的家庭管理模式在手外伤修复术后延续性护理中的应用效果。方法:以某院推行基于EST指导的家庭管理模式的延续性护理方案时间(2022年7月)为分界线,将推行前(2022年1月—2022年6月)的105例手外伤修复术后患者列为对照组,予以常规出院指导及延续性护理,推行后(2022年7月—2023年1月)的103例患者列为观察组,予以基于EST指导的家庭管理的延续性护理。比较2组心理状况[心理弹性量表(CD-RISC)]评分、自我护理能力[自我护理能力量表(ESCA)]评分、自我效能[一般自我效能感量表(GSES)]、日常活动能力[改良Barthel指数(MBI)]及手功能运动情况[手指总主动活动度(TAM)、Jamar握力]。结果:干预6个月后,观察组CD-RISC评分中能力[(20.56±2.79)分]、坚韧性[(17.18±1.47)分]、接受改变[(17.62±1.41)分]、控制[(9.87±1.51)分]、精神影响[(6.98±1.25)分]5个维度评分及总分[(72.21±5.41)分]均高于对照组[(19.23±2.57)分、(16.37±1.71)分、(16.44±1.38)分、(8.18±1.34)分、(5.49±1.28)分、(65.71±5.38)分](P<0.05);观察组ESCA评分中自我护理技能[(36.01±3.18)分]、自我护理责任感[(20.23±2.23)分]、自我护理概念[(25.68±1.91)分]、健康知识水平[(37.11±4.73)分]4个维度评分及总分[(119.03±11.35)分]均高于对照组[(31.58±2.74)分、(17.87±2.17)分、(22.02±2.03)分、(32.99±4.81)分、(104.46±13.38)分](P<0.05);观察组GSES、MBI评分分别为(35.43±4.18)分、(90.05±10.24)分,高于对照组的(32.13±4.44)分、(82.79±10.59)分;观察组TAM和Jamar握力分别为(77.01±12.23)°、(38.23±5.23)kg,高于对照组的(65.58±12.44)°、(30.87±5.17)kg,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:基于EST指导的家庭管理模式在手外伤修复术后延续性护理中应用效果显著,可有效改善患者心理状况、自我护理能力、自我效能及日常活动能力,对手功能运动的恢复具有积极意义。

EST-SSR标记在竹亚科植物纤维资源评价中的应用

开发一批用于竹亚科(Bambusoideae)植物的EST-SSR分子标记,利用其判定样本亲缘关系,结合已有的纤维原料竹种的开发研究数据,给出竹亚科植物纤维资源评价方法与筛选建议。从纤维原料竹种毛竹(Phyllostachys edulis)和早竹(Phyllostachys violascens)转录组中挖掘EST-SSR位点并设计引物,利用PCR-PAGE对50对候选引物进行筛选验证。使用生物信息学软件对条带迁移信息进行处理,得到17份竹样本的亲缘关系。比对近缘种在文献中的竹纤维数据,得出竹亚科植物纤维资源评价方法和筛选建议。结果表明,筛选出14对高通用性和多态性引物;有6对竹样本有较近的亲缘关系,且亲缘关系较近的品种,其竹纤维性能也较为相似。得出结论,在开发竹亚科植物纤维原料新品种时,可以从备选品种中,优先考虑纤维性能优良的品种的近缘种。

基于EST-SSR分子标记的萱草亲缘关系分析

萱草是极具观赏价值的多年生宿根草本植物,在我国具有悠久的栽种历史。为了探明36个萱草品种间的亲缘关系,利用毛细管电泳荧光标记技术对36个萱草品种进行了EST-SSR分子标记检测,利用11对多态性良好的引物对36份供试萱草材料进行PCR扩增。结果显示:11对引物共获得40个多态性位点,样本平均有效等位基因数为2.58个,平均Shannon多样性指数为1.00,平均期望杂合度为0.57,平均观察杂合度为0.52;以遗传距离矩阵为分析对象,36个萱草品种间的遗传距离为0.05~0.70,利用NTSYS软件按UPGMA法聚类结果显示,遗传距离0.48为阈值时,36种萱草品种分为2个大类,遗传距离0.414为阈值时,可进一步将第1大类分为4个亚类。综上,供试的36个萱草品种之间具有较高的遗传多样性和较为丰富的遗传背景,为今后培养萱草优良新品种提供了一定的理论依据。

基于EST理念的中职《成本会计》课程混合式教学策略研究

《成本会计》作为中职会计电算化专业中理论性较高、理解力较难的课程,在学生学习、教师教学等诸多方面都存在一定的问题,一直是教学改革的重点。文章借助EST教学理念和方法,在教学目标、教学方法、课程考核、课程评价等方面提出了实践性较强的教学策略,重在深化课程深度、课堂饱和度和学业紧张度持续改革,以构建《成本会计》课程混合式教学实践能力创新模式。

EST理论框架下的混合式教学模式研究——以多元统计分析课程为例

概述EST理论框架的核心要素及其对混合式教学模式的指导意义,分析当前多元统计分析课程的教学现状与存在问题,如资源分散、学生参与度低、实践不足等问题。基于EST理论,提出多项改进措施,包括强化教学资源的有效整合、构建沉浸式学习体验、强化实践教学环节,以及构建全面的教学评价体系,旨在提升多元统计分析课程的教学效果,培养学生的创新思维与实践能力,为其未来的学术与职业发展奠定坚实基础。

锥栗优良无性系遗传多样性的EST⁃SSR分析

为促进锥栗新品种的选育、种质资源的鉴定和锥栗产业的健康发展,以福建省建瓯市栽培的22个锥栗优良无性系为研究对象,利用开发的6对多态性表达序列标签-简单重复序列(EST⁃SSR)引物对其遗传多样性进行研究,并构建指纹图谱。结果表明,22个锥栗无性系平均每对引物的等位基因数为2.667,平均有效等位基因数为2.038,平均观测杂合度为0.349,平均期望杂合度为0.447,平均Shannon信息指数为0.721,平均多态性位点数为11.500,平均多态性信息含量为0.434,表明锥栗无性系遗传多样性较高。遗传相似系数变化范围为0.754~1.000,平均值为0.856;在遗传相似性系数为0.860处,可将其划分为5个大类:第Ⅰ类仅包括HL19;第Ⅱ类包括HL5、HL6、HL8、HL21;第Ⅲ类包括HL17、HL18;第Ⅳ类包括HL12、HL13;第Ⅴ类包括HL1、HL2、HL3、HL4、HL7、HL9、HL10、HL11、HL14、HL15、HL16、HL20、HL22。利用3对多态性引物,共构建了22个锥栗无性系的指纹图谱。

基于EST-SSR标记的沙棘品种鉴定及指纹图谱构建

以沙棘(Hippophae rhamnoides)优良品种“实优1号”为材料,对其叶片进行转录组测序,利用微卫星识别软件(microsatellite identification tool,MISA)和Primer 3(version 2.3.4)对获得的序列进行简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)位点挖掘和引物设计,以收集的42份沙棘品种为研究材料,开展聚合酶链式反应(PCR)和毛细管电泳检测,旨在开发一套多态性高、稳定性好和通用性强的表达序列标签微卫星(express sequence tags from simple sequence repeat,EST-SSR)引物,构建沙棘指纹图谱,从而实现沙棘品种的快速准确鉴定,并对沙棘品种间亲缘关系进行分析。“实优1号”转录组测序共获得6196个SSR位点,其中,重复基元类型为182种,SSR基序长度主要分布在10~21 bp区间,占全部SSR的81.58%,主要SSR重复类型为单核苷酸重复(48.72%)、二核苷酸重复(22.68%)和三核苷酸重复(18.85%)。利用筛选出的28对引物在42份沙棘品种中共检测出193个等位基因,等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、观测杂合度(Ho)、期望杂合度(He)、多态信息含量(PIC)和Shannon信息指数(I)等遗传多样性参数的均值分别为6.964、3.495、0.617、0.671、0.623和1.384。UPGMA聚类分析表明,42份沙棘品种间的遗传相似性系数为0.601~0.990,当遗传相似性系数为0.694时,供试品种可分为2组;当遗传相似性系数约为0.7402时,供试品种可分为3组。优选6对引物构建指纹图谱,可以实现沙棘品种的快速准确鉴定。该研究可为沙棘的良种鉴定、指纹图谱构建以及遗传多样性和亲缘关系分析等提供分子水平的理论基础和数据支撑。

ERCP/EST联合LC微创治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床应用

目的探讨经内镜逆行性胰胆管造影术(ERCP)/经十二指肠镜Oddi括约肌切开术(EST)联合LC治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床疗效和手术时机选择.方法选取我科2020年6月至2022年10月收治的胆囊结石合并胆总管结石的患者38例,所有患者均先行ERCP/EST取石,胆总管无结石残留,病情稳定,术后1~5天行LC,1例术后1周LC.结果ERCP/EST术后部分患者感腹胀、恶心、呕吐,6例出现高淀粉酶血症,1例并发胰腺炎,LC术中中转2例,所有患者无损伤、出血、胆漏等并发症.结论ERCP/EST联合LC治疗胆囊结石合并胆总管结石具有创伤小、恢复快、瘢痕小、无需放置T管等,值得临床应用.

CBDE与EST+LC术对胆囊结石合并胆管结石患者术后康复、胆汁糖蛋白的影响及经济性

目的对比分析CBDE+LC与EST+LC术对胆囊结石合并胆管结石患者术后康复影响及经济性。方法将80例胆囊结石合并胆管结石患者根据治疗方式分为CBDE+LC组(n=38)和EST+LC组(n=42)。对两组的手术指标、术后康复指标、医疗经济学指标进行统计并比较。结果CBDE+LC组手术耗时较EST+LC组患者短、术中出血量低于EST+LC组(P<0.05);CBDE+LC组术后排气期时间、进食时间明显低于EST+LC组,术后并发症率低于EST+LC组(P<0.05);CBDE+LC组术后总住院时间较EST+LC组短,治疗总费用较EST+LC组低(P<0.05)。结论腹腔镜下胆总管探查联合LC手术治疗胆管结石合并胆囊结石患者在手术耗时、术中出血量及术后康复、医疗经济学指标方面均明显优于EST联合LC手术方案。

ERCP/EST联合LC微创治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床应用

目的探讨经内镜逆行性胰胆管造影术(ERCP)/经十二指肠镜Oddi括约肌切开术(EST)联合LC治疗胆囊结石合并胆总管结石的临床疗效和手术时机选择。方法选取我科2020年6月至2022年10月收治的胆囊结石合并胆总管结石的患者38例,所有患者均先行ERCP/EST取石,胆总管无结石残留,病情稳定,术后1~5天行LC,1例术后1周LC。结果ERCP/EST术后部分患者感腹胀、恶心呕吐,6例出现高淀粉酶血症,1例并发胰腺炎,LC术中中转2例,所有患者无损伤、出血、胆漏等并发症。结论ERCP/EST联合LC治疗胆囊结石合并胆总管结石具有创伤小、恢复快、瘢痕小、无需放置T管等,值得临床应用。

黍稷高基元EST-SSR标记开发及200份核心种质资源遗传多样性分析

为搞清黍稷核心种质资源的遗传背景,开发新的高基元EST-SSR标记用以评估国内不同生态区资源的遗传多样性,为加快黍稷育种进程和挖掘优异种质提供依据。本研究基于转录组测序开发了200个高基元EST-SSR标记并进行多态性筛选,利用筛选到的多态性标记评价200份黍稷核心种质资源的遗传多样性。结果表明,200个标记在6份地理来源差异显著的黍稷材料中有52个呈多态性,开发效率为26%,其中四、五和六碱基重复多态性标记分别为17个(32.7%)、17个(32.7%)和18个(34.6%)。利用52个高基元EST-SSR多态性标记对200份核心资源进行检测,共得到129个观测等位变异,每个位点检测到2~3个;Shannon多样性指数为0.3093~1.0910,平均为0.7277;多态性信息含量为0.1948~0.8211,平均为0.5104。基于UPGMA将200份资源划分为6个群组。基于Structure的遗传结构(K=7)将资源划分为7个类群,黍稷资源主要来自4个(东北地区、华北地区、黄土高原和北方地区)基因库。基于主成分分析将材料聚为6个类群,与其地理来源一致。构建了52个四–六碱基重复EST-SSR标记,开发率为26%;用其分析材料的遗传差异发现黍稷地方核心种质遗传多样性较为丰富。

大麻EST-SSR遗传结构分析及指纹图谱构建

大麻是一年生草本植物,一种多用途、可持续的作物。迄今为止,关于大麻遗传结构的研究还很少。本研究通过EST-SSR分子标记分析大麻的遗传多样性和种群结构。结果表明,20对引物共扩增出113个清晰条带,其中113个(100%)是多态性的;共检测到232个等位基因,平均每对引物检测到4.0176个等位基因;观测杂合度(Ho)平均为0.7102,期望杂合度(He)平均为0.6935;200个个体香农信息指数介于0.7204~2.4625之间,平均值为1.5368;多态信息含量(PIC)变化范围为0.3519~0.8801,平均为0.6558;平均基因流(Nm)平均值为13.6525。基于种群遗传结构、主成分分析和未加权的算术平均对组法(UPGMA)分析,将大麻材料聚类为3组。不同聚类方法之间结果相似,但3种模型的少数个体植株分布不同。聚类结果、基因多样性和遗传相似系数表明,大麻个体总体亲缘关系较为密切。同时用5对核心引物能够区分参试种质,并为每份种质构建了指纹图谱。研究结果为今后的大麻育种、遗传改良和核心种质资源收集提供了参考。

从棉花ESTs数据库中筛选微卫星标记的初步研究

利用生物信息学方法在含有94709条棉花EST序列的数据库中进行微卫星标记筛选,共发现微卫星序列4396个,占整个EST数据库的4.64%。其中双碱基重复序列1282个、三碱基序列2411个,分别占在EST数据库中发现微卫星序列总数的29.27%和54.8%。根据筛选到的微卫星序列设计并合成引物25对,其中24对引物有扩增产物,17对产物条带比较清晰,对这些条带比较清晰的产物作了一系列的分析。

基于EST-SSR标记的60份苇状羊茅遗传多样性分析

苇状羊茅(Festuca arundinacea Schred)是多年生冷季型禾草,作为草坪草、牧草、生态修复草种在温带有着广泛的应用。本研究以60份不同来源的苇状羊茅种质为材料,利用表达序列标签-简单序列重复(EST-SSR)引物对其进行遗传多样性分析,对其构建指纹图谱,对种质资源进行鉴定与评价。结果表明:20对EST-SSR引物共扩增出173条带,多态性条带163条,多态性位点百分率94.220%;所有引物均可识别种质,不同的引物组合可以区分60份种质;聚类结果与地理区划有一定的关联,但不明显;60份参试材料最佳亚群数为3。研究结果表明:60份种质的遗传多样性处于中等水平;SSR标记可以有效地鉴定苇状羊茅种质并评价其遗传差异,为苇状羊茅核心种质的构建、新品种的选育奠定基础。

水涝胁迫下辣椒转录组特征分析及EST-SSR标记开发

为开发适当的生物学工具以探索辣椒对水涝胁迫应答的分子机制,该研究对不同淹水处理的辣椒样本进行转录组分析,获得了丰富的序列数据,并在此基础上对SSR分子标记进行挖掘。结果表明:(1)辣椒转录组检测共获得128939个Unigene,其总长度、平均长度和GC含量分别是55082725、1101 bp和40.57%。与七大功能数据库进行比较,分别有102123个(NR,79.20%)、110157个(NT,85.43%)、70203个(SwissProt,54.45%)、73539个(KOG,57.03%)、77646个(KEGG,60.22%)、77442个(GO,60.06%)以及68216个(Pfam,52.91%)Unigene获得功能注释。发现脂质代谢、碳水化合物代谢、氨基酸代谢、环境适应、次级代谢物生物合成、信号转导和翻译等途径在辣椒水涝胁迫应答中起重要作用。(2)从辣椒转录组数据中发掘到26574个SSR位点分布在24889个Unigene中。SSR的出现频率为20.61%,其中单核苷酸重复所占比例(37.26%)最高,其次是三核苷酸(31.00%)和二核苷酸(25.44%)重复类型,三者占EST-SSR总数的93.70%。在单核苷酸与二核苷酸中最多的基序类型为A/T、AG/CT和TC/GA,其次是AT和TA;三核苷酸中最常见的基序类型是TTG/CAA和ACA/TGT。(3)用Primer 3在线工具设计了10002对EST-SSR引物,随机选择30对引物进行PCR扩增,均可获得有效扩增。对3份辣椒材料进行扩增,其中7对引物可以扩增出目标条带。综上所述,在辣椒中优势SSR重复类型的基序结构和其他品种基本相近,并初步探索了辣椒水涝胁迫应答的分子机制,开发了EST-SSR标记,为辣椒耐涝遗传育种提供了参考。

ERCP联合EST序贯中药治疗肝外胆管结石术后肝阴亏虚型患者60例临床观察

目的:观察ERCP联合EST序贯应用一贯煎加减治疗肝外胆管结石术后肝阴亏虚型患者的临床疗效。方法:选择符合标准的2019年1月—2021年12月因诊断为肝外胆管结石就诊于安徽中医药大学第一附属医院普外科的60例患者,并按随机数字表法分为观察组和对照组,每组各30例,对照组予以ERCP联合EST治疗,术后常规予西药治疗;观察组在对照组的基础上,予一贯煎加减口服。观察对比2组患者治疗后的疗效及鼻胆管引流量、胆汁细菌培养结果;炎性指标、肝功能指标、血清胆汁生化指标改善程度及术后复发率。结果:2组患者无临床疗效差异(P>0.05)。治疗前2组患者的炎性指标、肝功能指标及血清胆汁生化指标比较无差异(P>0.05),治疗后2组患者各项指标均改善,观察组改善程度显著优于对照组(P<0.05)。观察组术后第5、7天鼻胆管引流量分别为(336.50±91.06)mL和(456.23±110.02)mL,与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。治疗后对照组细菌培养阴性率63.33%,观察组86.67%,比较有统计学意义(P<0.05)。观察组术后结石复发率(6.67%)与对照组(26.67%)比较有统计学意义(P<0.05)。结论:ERCP、EST联合一贯煎加减治疗能够提高手术成功率,起到抑制术后胆道炎症、加快肝功能恢复、调节胆汁成分、防治术后结石复发的作用。

基于EST-SSR分子标记的广西海伦兜兰遗传多样性研究

海伦兜兰(Paphiopedilum helenae)具有极高的观赏价值,为国家一级重点保护野生植物。本研究利用EST-SSR分子标记技术对广西海伦兜兰的5个居群(71个样品)的遗传多样性和遗传结构进行分析,旨在为该种质资源的有效保护与利用提供参考依据。结果表明:海伦兜兰具有中等遗传多样性,多态位点百分比(PPB)为90%-100%,期望杂合度(H_(e))平均值为0.451,香农信息指数(I)平均值为0.801。海伦兜兰绝大多数(93%)遗传变异存在于居群内,仅有7%遗传变异存在于居群间,居群内的遗传变异大于居群间的变异,基因流(N_(m))平均值为4.916。非加权组平均法(UPGMA)、主坐标分析(PCoA)和Structure分析结果表明,聚类并未严格按照地理位置划分,广西邦亮长臂猿国家级自然保护区靖西市(JX)和龙州县下冻镇春秀村(LZ)居群的遗传多样性较高,应作为海伦兜兰重点保护单元进行保护。

绵羊EST-SSR分子标记的鉴定及特异性分析

通过SSR Finder软件及MISA技术从NCBI系统中的绵羊表达序列标签(EST)数据库中筛查SSR位点,利用Primer 3.0设计绵羊EST-SSR荧光引物,对宁夏滩羊肉、新疆细毛羊肉和藏绵羊肉进行区分。以3种绵羊的肝脏DNA为模板,对设计的EST-SSR引物进行PCR扩增并使用毛细管电泳检测SSR分型。结果显示,通过EST-SSR标记设计的荧光引物p2105.1:248-559、p2025.1:896-1059和p2104.1:704-1015在宁夏滩羊肉、新疆细毛羊肉和藏绵羊肉中具有良好特异性,可实现3个绵羊品种的区分。通过EST-SSR标记技术可准确判断3个纯种绵羊肉的品种,这对绵羊遗传资源的开发利用、品种鉴别以及丰富分子标记类型具有重要的意义。