Hedgehog信号通路在卵巢中的作用机制及研究进展

Hedgehog信号通路是进化过程中呈现高度保守性的一条信号途径,在雌性哺乳动物的性腺发育及功能维持中扮演着重要角色,参与调控卵巢中多种细胞的分化,维持着卵巢结构及功能的稳定,促进卵泡的发育成熟及排出。该文简要概述了Hedgehog信号通路在卵巢发育、卵巢生殖干细胞转化、卵泡发育与闭锁及卵巢癌症发生发展中的主要作用机制,以期为相关疾病的治疗提供些许思路。

肾安方对慢性肾脏病大鼠Hedgehog信号通路的影响

目的观察肾安方对慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)大鼠生化指标和Hedgehog信号通路的影响,探讨其对慢性肾脏病的保护机制。方法60只大鼠随机分为正常组10只和造模组50只,造模组大鼠采用腺嘌呤诱导法复制CKD模型,造模成功的40只大鼠随机分为模型组,肾安方低、高、中剂量组,环巴胺组,各8只。肾安方低、中、高剂量组大鼠分别给予肾安方(12.05、24.1、48.2 g·kg^(-1)·d^(-1))灌胃;环巴胺组大鼠予以环巴胺(6 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃;正常组和模型组大鼠给予生理盐水等体积灌胃。每日1次,持续给药28 d。第29天,测定各组大鼠血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、尿酸(uric acid,UA)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1);HE染色和Masson染色观察肾脏病理变化程度;Western blotting法检测信号通路关键蛋白下游核转录因子GLI家族(GLI1)、Hh分泌型糖蛋白配体(SHH)、成纤维细胞特异蛋白1(fibroblast-specific protein 1,FSP1)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白的表达水平;Real-time PCR法检测大鼠肾组织中GLI1mRNA、SHHmRNA、FSP1mRNA、AktmRNA表达水平。结果与模型组比较,肾安方中、高剂量组及环巴胺组BUN、Scr、UA、IL-6、TNF-α、TGF-β1、GLI1mRNA、SHHmRNA、FSP1mRNA、AktmRNA、GLI1、SHH、FSP1、p-Akt及肾脏纤维化程度显著降低(P<0.05);肾安方高剂量组肾功能及炎症指标改善情况与环巴胺组比较差异无统计学意义(P>0.05),但肾安方高剂量组GLI1mRNA、SHHmRNA、FSP1mRNA、AktmRNA、GLI1、SHH、FSP1、p-Akt表达略高于环巴胺组(P<0.05),且肾安方各组间上述指标差异有统计学意义(P<0.05)。结论肾安方可以改善慢性肾脏病大鼠肾功能,可能与抑制Hedgehog信号通路激活有关。

Hedgehog信号通路在肝细胞癌中的作用及其与肿瘤微环境的关系

Hedgehog(Hh)信号通路在肝细胞癌的发生发展和肿瘤微环境中发挥重要作用。Hh信号异常激活可加速肿瘤的生长。Hh信号通路和肿瘤微环境之间的相互串扰与肿瘤的生长和抑制性肿瘤微环境的形成密切相关。有证据表明,抑制Hh信号在抑制肝细胞癌生长中发挥重要作用。本文就Hh信号异常激活在肝细胞癌和肝癌肿瘤微环境中作用及机制的研究现状与潜在的治疗意义作一综述,为肝癌的治疗提供新的思路。

香叶木素调控Hedgehog信号通路对骨质疏松性骨缺损的影响

目的探究香叶木素调控Hedgehog信号通路对骨质疏松性骨缺损愈合的影响。方法将SD大鼠分为假手术组、模型组、低剂量组(50 mg/kg香叶木素)、高剂量组(100 mg/kg香叶木素)及高剂量+环杷明组(100 mg/kg香叶木素+10 mg/kg Hedgehog信号通路特异性抑制剂环杷明),10只/组,切除双侧卵巢构建骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠模型,并在此基础上构建骨缺损模型,造模结束后进行相应灌胃给药;双能X线吸收扫描仪检测大鼠骨痂部位骨密度(bone mineral density,BMD);HE染色观察大鼠骨缺损区域病理学情况;抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察大鼠骨缺损区域破骨细胞情况;qRT-PCR检测大鼠骨缺损区域组织成骨细胞特异性转录因子(Osterix)和Runt相关转录因子2(Runx2)表达;Western blot检测骨缺损区域组织音猬因子(SHH)、Gli家族锌指蛋白-1(GLI1)、跨膜蛋白受体1(Ptch 1)、Osterix和Runx2表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠骨痂部位BMD、骨小梁数、Osterix、Runx2、SHH、GLI1、Ptch1表达显著降低,TRAP阳性细胞数显著增加(P<0.05);与模型组相比,低剂量组、高剂量组骨痂部位BMD、骨小梁数、Osterix、Runx2、SHH、GLI1、Ptch1表达显著增加,TRAP阳性细胞数显著降低(P<0.05);环杷明可逆转香叶木素对骨质疏松性骨缺损愈合的影响。结论香叶木素可通过激活Hedgehog通路促进骨质疏松性骨缺损愈合。

基于Hedgehog信号通路的中医药干预慢性萎缩性胃炎的研究进展

慢性萎缩性胃炎是常见的胃癌前病变,不仅治疗过程漫长,治疗难度大,而且患者依从性欠佳。不仅会对患者的生理、心理健康和生活质量造成严重不良的影响,还会给患者家属造成负担,成为临床上不可忽视的难题。但是本病发病机制目前尚未完全明确,临床治疗还未达成共识。文章综述了近10年基于Hedgehog信号通路的中医药干预慢性萎缩性胃炎的研究概况。中医药调控Hedgehog信号通路辨证论治是治疗慢性萎缩性胃炎的一种独具特色的疗法,近年来有关基于Hedgehog信号通路的中医药干预治疗慢性萎缩性胃炎的报道越来越多。文章主要通过遵循疾病本虚标实的病性,以脾胃虚弱为本,瘀血、气滞、湿热、痰浊等为标,探讨选方治疗对慢性萎缩性胃炎的影响,认为中医药联合Hedgehog信号通路实行现代化发展能够有效干预治疗慢性萎缩性胃炎,以期为进一步临床研究与应用提供参考。

续断壮骨方对胫骨干骨折大鼠Hedgehog信号通路的影响

目的旨在探讨续断壮骨方对胫骨干骨折大鼠Hedgehog信号通路的影响。方法将60只健康雄性3月龄无特定病原(Sprague dawley,SD)大鼠采用随机数字表法将其分为空白组、模型组、低剂量续断壮骨方组、高剂量续断壮骨方组,每组各15只,除空白组外其余各组均制备成胫骨干骨折模型,术后24 h,对照组及模型组灌服3 ml/d生理盐水;低剂量续断壮骨方组灌服40 mg/(kg·d),高剂量续断壮骨方组灌服80 mg/(kg·d),观察比较骨折术后各组第14、28、42天骨矿物质密度值(Bone mineral density,BMD)及骨痂体积,各组末次给药后观察各组大鼠生物力学性能、血管新生情况,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测各组大鼠胫骨切片Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA表达及Westem blot法检测各组骨痂组织Ihh、Smo、Ptch、GliL蛋白相对表达量。结果与空白组比较,模型组骨痂体积、BMD指数、胫骨最大载荷、新生血管面积、新生血管数量、Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA、Ihh、Smo、Ptch、GliL水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,低、高剂量续断壮骨方组骨痂体积、BMD指数、胫骨最大载荷、新生血管面积、新生血管数量、Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA、Ihh、Smo、Ptch、GliL水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与低剂量续断壮骨方组比较,高剂量续断壮骨方组骨痂体积、BMD指数、胫骨最大载荷、新生血管面积、新生血管数量、Ihh mRNA、Smo mRNA、Ptch1 mRNA、GliL mRNA、Ihh、Smo、Ptch、GliL水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论续断壮骨方能够通过上调胫骨干骨折大鼠Hedgehog信号通路发挥促进骨折愈合的作用。

茶黄素通过调节Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路对HepG2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨茶黄素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路的影响。方法 肝癌HepG2细胞用0、2.5、5、10、20、40、80、160、320μmol/L的茶黄素分别培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测HepG2细胞活性。根据HepG2细胞活性实验结果将后续实验分为空白对照组,茶黄素低剂量(20μmol/L)组、中剂量(40μmol/L)组和高剂量(80μmol/L)组,细胞培养24 h。克隆形成实验检测HepG2细胞增殖;流式细胞术检测HepG2细胞凋亡;Western blot检测HepG2细胞中Ki67、PCNA、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HepG2细胞中GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量。结果 与空白对照组相比,茶黄素组HepG2细胞增殖显著降低(P<0.05)、凋亡率显著增加(P<0.05),GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1 mRNA相对表达量均显著下调(P<0.05),Ki67、PCNA、GLi1、SMO、PTch1、β-catenin、c-myc和Cyclin D1的蛋白表达量显著下调(P<0.05),而cleaved caspase-3和cleaved caspase-9的蛋白表达量显著上调(P <0.05)。结论 茶黄素可通过调控Wnt/β-catenin和Hedgehog信号通路抑制HepG2细胞的增殖并促进其凋亡。

Hedgehog信号通路在下颌骨发育过程中作用机制的研究进展

下颌骨的发育来源及发育过程均与全身其他骨骼有着显著差异,其发育异常会导致各种骨相关疾病,严重影响了患者的生活质量。近年来Hedgehog信号通路在骨骼发育过程中的作用越来越受到关注。Hedgehog基因包括Sonic Hedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)和Desert Hedgehog(Dhh)3种亚型,其中Shh及Ihh可通过多种途径参与骨代谢调节,Shh主要参与肢体发育过程,而Ihh主要是在软骨内成骨过程中发挥关键作用。Hedgehog信号通路包括Hedgehog信号蛋白配体、Patched(Ptch)受体、Smoothed(Smo)受体、核内转录因子神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白(glioma-associated oncogene homologue,Gli)和下游靶基因等。典型Hedgehog信号通路由Gli激活调控,而非典型Hedgehog信号主要由Ptch、Smo等调控。Shh在早期脊椎动物胚胎形成过程中调控多种生物学行为,如器官的分化、神经干的形成、干细胞的分化增殖、四肢骨骼发育以及牙胚发育等;在骨细胞分化过程中,Shh、Ptch1和Gli1在成骨细胞中均有表达,进一步促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞和软骨细胞分化。Ihh对骨骼生长发育以及稳态维持具有不可或缺的功能作用,参与膜内骨领的形成、软骨细胞的增殖和成熟,Ihh在成熟的颅骨成骨细胞中表达,其可作为促成骨因子调控Ptch和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)的表达来诱导膜内骨化过程;脑和肌肉ARNT样蛋白1(brain and muscle ARNT-like 1,BMAL1)可通过与Ptch1和Ihh结合,调节Hedgehog信号通路,在颞下颌关节的软骨形成和软骨内成骨过程中发挥关键作用;而Hedgehog信号激活剂可以改善由BMAL1缺失引起的下颌骨骨量减少。Hedgehog信号失调会对骨发育过程产生重大影响,并导致一系列骨疾病如骨发育异常、骨折、骨质疏松和骨关节炎。然而,Hedgehog信号通路与下颌骨疾病的相关作用机制尚未完全阐明,未来研究可进一步探讨Hedgehog信号作为治疗下颌骨发育相关疾病的潜在靶点。

苦参碱通过Hedgehog信号通路对肺癌A549细胞顺铂化疗敏感性的影响

目的探讨苦参碱通过Hedgehog信号通路对肺癌A549细胞顺铂(cisplatin,DDP)化疗敏感性的影响。方法用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)检测苦参碱的浓度对A549细胞增殖的影响,计算20%致死浓度(20%lethal concentration,LC20);将对数期生长A549细胞分为对照组、苦参碱组(LC20苦参碱干预)、Hedgehog信号通路抑制剂(Hedgehog pathway inhibitor,HPI-4)组(5μmol·L^(−1) HPI-4干预)、DDP组(5 mg·L^(−1) DDP干预)、DDP+苦参碱组(5 mg·L^(−1) DDP和LC20苦参碱共同干预)、DDP+苦参碱+HPI-4组(5 mg·L^(−1) DDP、LC20苦参碱、5μmol·L^(−1) HPI-4共同干预),每组设置3个复孔。用MTT法和流式细胞术检测干预48 h后各组细胞的存活率和凋亡率,用蛋白印迹法(Western blotting)检测各组细胞Hedgehog信号通路相关蛋白音猬因子(sonic hedgehog,SHH)、补缀同源物1(patched1,Ptch1)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(glioma-associated oncogene homolog 1,Gli1)的表达。结果与对照组比较,不同质量浓度的苦参碱干预组细胞存活率均降低(P<0.05),且细胞存活率随苦参碱质量浓度升高而降低(P<0.05)。与对照组比较,苦参碱组、HPI-4组、DDP组、DDP+苦参碱组、DDP+苦参碱+HPI-4组的细胞存活率均降低,且DDP+苦参碱+HPI-4组<DDP+苦参碱组<DDP组<苦参碱组、HPI-4组(P<0.05);细胞凋亡率结果与细胞存活率结果相反。与对照组比较,苦参碱组、HPI-4组、DDP组、DDP+苦参碱、DDP+苦参碱+HPI-4组Hedgehog信号通路SHH、Ptch1、Glis1蛋白的相对表达量均降低,且DDP+苦参碱+HPI-4组<HPI-4组<DDP+苦参碱组<DDP组、苦参碱组(P<0.05)。结论苦参碱可增加肺癌A549细胞DDP化疗敏感性,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号通路有关。

黄连素调节Hedgehog信号通路对TGF-β1诱导的肝星状细胞增殖和活化的影响

【目的】观察黄连素调节Hedgehog信号通路对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞增殖和活化的影响。【方法】培养HSC-T6细胞,分为空白组,TGF-β1组,黄连素低、中、高剂量组及黄连素高剂量+purmorphamine(Hedgehog信号通路激活剂)组。分组处理后,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSC-T6细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光染色法检测细胞Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达变化,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达水平,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞Hedgehog信号通路相关因子Smo、Gli-1、Shh、Ptch蛋白表达水平。【结果】与空白组比较,TGF-β1组HSC-T6细胞增殖率,CollagenⅠ、α-SMA阳性蛋白表达,PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达水平及Smo、Gli-1、Shh、Ptch蛋白表达水平显著升高,凋亡率及Bax mRNA表达水平显著降低(均P<0.05);与TGF-β1组比较,黄连素低、中、高剂量组HSC-T6细胞增殖率,CollagenⅠ、α-SMA阳性蛋白表达,PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达水平及Smo、Gli-1、Shh、Ptch蛋白表达水平显著降低,凋亡率及BaxmRNA表达水平显著升高(均P<0.05),呈剂量依赖性;与黄连素高剂量组比较,黄连素高剂量+purmorphamine组HSC-T6细胞增殖率,CollagenⅠ、α-SMA阳性蛋白表达,PCNA mRNA、Bcl-2 mRNA表达水平及Smo、Gli-1、Shh、Ptch蛋白表达水平显著升高,凋亡率及Bax mRNA表达水平显著降低(均P<0.05)。【结论】黄连素通过调节Hedgehog信号通路促进TGF-β1诱导肝星状细胞凋亡,抑制其增殖和活化。

利拉鲁肽对2型糖尿病性骨质疏松大鼠骨钙素、Hedgehog信号通路及CaBp-D9k基因表达的作用机制

目的 研究利拉鲁肽对2型糖尿病性骨质疏松大鼠骨钙素、人类胚胎发育调控因子(Hedgehog)信号通路及钙调节蛋白(CaBp-D9k)基因表达的作用机制。方法 取60只SD大鼠随机分为健康组、糖尿病组、糖尿病+利拉鲁肽组、去势组、糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组,每组10只。糖尿病组、糖尿病+利拉鲁肽组、糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组建立糖尿病模型,去势组建立去势模型,糖尿病+去势组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组在糖尿病模型建立成功后建立去势模型。采用全自动化学分析仪检测空腹血糖值,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测胰岛素水平,HE染色观察病理形态,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨钙素(BGP)mRNA、CaBp-D9k mRNA水平,TUNEL检测成骨细胞凋亡,免疫印迹检测音猬因子(Shh)、细胞表面受体(Ptch)1、锌指蛋白(Gli)1蛋白表达。结果 HE染色结果显示:与健康组相比,糖尿病组和去势组中骨小梁排列紊乱,数量减少,变细,发生断裂,空洞增多,成骨细胞数量显著减少,糖尿病+去势组中这种病理变化更加严重;在经过利拉鲁肽干预后,糖尿病+利拉鲁肽组和糖尿病+去势+利拉鲁肽组新生骨量及成骨细胞增多。与健康组相比,糖尿病组、去势组、糖尿病+去势组空腹血糖值、成骨细胞凋亡指数升高,胰岛素水平、BGP、CaBp-D9k、Shh、Ptch1、Gli1水平降低,且以去势组与糖尿病+去势组水平变化最显著(P<0.05),经过利拉鲁肽干预后,与糖尿病组、去势组及糖尿病+去势组相比,糖尿病+利拉鲁肽组、糖尿病+去势+利拉鲁肽组空腹血糖值、成骨细胞凋亡指数显著降低,胰岛素水平、BGP、CaBp-D9k、Shh、Ptch1、Gli1显著升高(P<0.05)。结论 利拉鲁肽通过激活Hedgehog信号通路、提高骨钙素及CaBp-D9k水平,降低血糖水平,减少成骨细胞凋亡,促进骨形成,改善糖尿病骨质疏松病情严重程度。

基于Hedgehog信号通路探讨中医药治疗骨质疏松症的研究进展

骨质疏松症(OP)是一种导致骨强度降低、骨折风险增加的骨科疾病,主要危害中老年人。目前OP面临防治率低、疗效低和重经济负担的挑战。中药的特点是多样性、复杂性,其优势是原料来源广泛、副作用小及价格低。Hedgehog信号通路对维持骨骼稳态至关重要,其异常激活与OP的发展密切相关。中药通过调节多种信号分子和通路展现对Hedgehog信号的调控潜力,从而在OP防治中显示新的治疗方向。中药调控Hedgehog信号通路为OP的预防和治疗提供新的策略及科学依据。未来研究将继续探索中药的分子机制,优化中药在OP治疗中的应用。

基于Hedgehog信号通路探讨四神煎对膝骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用

目的探究四神煎对膝骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用及其可能的作用机制。方法40只大鼠分为假手术组、模型组、四神煎低剂量组及高剂量组,每组10只。分组后灌胃给药,每天1次,连续6周。采用HE染色检查膝关节组织形态学变化;采用Micro-CT检测软骨下骨的结构情况并对骨小梁形态学参数进行分析;用qPCR分析各组软骨组织中音猬因子(Shh)、神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)及Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)的mRNA表达变化。结果HE染色结果表明,模型组整体染色欠均匀,关节软骨表面破坏明显,且具有明显裂隙,软骨层变薄,软骨数量减少,软骨细胞分布排列紊乱,各层次界限不清晰,潮线明显不规则紊乱,而四神煎低剂量及高剂量组较模型组均有改善。Micro-CT显示模型组关节面破坏严重伴骨赘形成,软骨下骨骨量明显减少,四神煎低剂量及高剂量组均较之改善;与模型组比较,四神煎高剂量组大鼠骨小梁数量(Tb.N)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、软骨组织中CollagenⅡ的mRNA表达量显著增加(P<0.05),Shh、Gli1的mRNA表达量明显下降(P<0.001)。结论四神煎对膝骨关节炎大鼠关节软骨具有保护作用,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号通路调控CollagenⅡ的表达有关。

慢性阻塞性肺疾病与Hedgehog信号通路关系的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种以气流阻塞为特征的疾病,患病率、病死率较高。刺猬(HH)信号通路在调节控制机体组织形态发育及损伤修复中发挥关键作用。研究发现COPD与HH信号通路密切相关,在气道受损发生炎症反应时,该通路中的一些重要的信号分子可以改善炎症和纤维化。深入了解HH信号通路在COPD发生、发展过程中的作用,将有利于进一步发现和研究该疾病的治疗靶点。该综述通过介绍HH通路和重要信号分子影响肺的发育和调控COPD炎症反应,对COPD病理、生理过程具有重要意义,为HH信号通路治疗COPD提供理论依据。

Sonic hedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义

目的探讨Sonichedgehog信号通路Smo蛋白及其下游转录因子Gli1蛋白在胃癌组织中的表达及其意义。方法收集85例胃癌组织及25例正常胃粘膜组织构建成组织芯片,应用免疫组化S-P法检测胃癌组织中Smo蛋白及Gli1蛋白的表达,并以正常胃粘膜组织作对照,分析两者的相关性。结果Smo和Gli1蛋白均在正常胃粘膜中不表达或弱表达;在胃乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌中,两者的表达强度和阳性表达率显著高于正常胃粘膜(P<0.05,并随着胃腺癌分化程度下降而上升;相关分析显示Smo和Gli1蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关,相关系数为0.989,P<0.001。结论胃癌发生过程中的Sonichedgehog信号通路异常激活可能通过Smo蛋白高表达上调下游转录因子Gli1蛋白的表达参与部分胃腺癌的发生。

Hedgehog信号通路阻断剂环巴胺体外对佐剂性关节炎大鼠的关节软骨细胞增殖的影响

目的探讨Hedgehog(Hh)信号通路抑制剂环巴胺体外对佐剂性关节炎大鼠(AA)模型的关节软骨细胞增殖的影响和部分机制。方法弗氏完全佐剂诱导AA大鼠,测量关节炎指数和继发性足肿胀度,HE染色观察两组软骨组织生长情况;取AA大鼠踝关节软骨组织,采用胰蛋白酶-胶原酶法分离、培养、鉴定,环巴胺(0、0.05、0.5、5、20μmol/L)体外给药,MTT法检测AA大鼠踝关节软骨细胞增殖,Annexin V-FITC/PI双染检测AA大鼠踝关节软骨细胞凋亡,Western blotting检测AA大鼠踝关节软骨细胞Shh、Ptch1、Gli1的蛋白表达。结果弗氏完全佐剂诱导后,与正常大鼠相比,AA大鼠关节炎指数和继发性足肿胀度明显升高,HE染色显示,AA大鼠踝关节软骨组织有破坏;甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原鉴定体外成功培养AA大鼠踝关节软骨细胞;体外给药环巴胺(0.05、0.5、5、20μmol/L)可升高AA模型关节软骨细胞增殖,流式细胞检测结果显示,环巴胺能降低AA模型软骨细胞凋亡率;与未用环巴胺组相比,环巴胺(0.5、5、20μmol/L)给药对AA软骨细胞中Hh信号通路相关蛋白(Shh、Ptch1、Gli1)表达显著下降。结论弗氏完全佐剂诱导建立AA大鼠模型成立,体外给药环巴胺可抑制AA大鼠软骨细胞的增殖,抑制软骨细胞的凋亡,该作用与抑制AA大鼠软骨细胞Hh信号有关。

HIF-1α、ALDH1和Hedgehog信号通路协同促进三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性研究

目的:探讨HIF-1α、ALDH1和Hedgehog信号通路在三阴性乳腺癌中癌症干细胞活化的相关性及其临床意义。方法:采用免疫磁珠法从三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞中分选出ALDH1+乳腺癌干细胞和ALDH1-乳腺癌细胞,采用qRT-PCR方法比较HIF-1α和Hedgehog信号传导通路主要分子SHH、PTCH1、SMO、GLI1在这两种细胞中的表达差异;采用免疫组化方法了解HIF-1α和ALDH1在三阴性乳腺癌组织中的表达以及与干细胞信号传导通路Hedgehog的相互关系。结果:HIF-1αmRNA、SMO mRNA和GLI1 mRNA在ALDH1+乳腺癌干细胞中的表达均明显高于ALDH1-乳腺癌细胞,差异具有显著统计学意义(P均<0.05)。在三阴性乳腺癌与非三阴性乳腺癌组织中HIF-1α的阳性表达率分别为90.0%和70.0%,ALDH1的阳性表达率分别为93.3%和66.7%,差异均具有显著统计学意义(P均<0.05)。在三阴性乳腺癌组织中HIF-1α和ALDH1的表达呈正相关(r=0.53,P<0.01)。HIF-1α的表达与三阴性乳腺癌的淋巴结转移和TNM分期有关(P均<0.05),ALDH1的表达与组织学分级和TNM分期有关(P均<0.05)。HIF-1α与Hedgehog信号通路分子SHH(r=0.584,P<0.01)、SMO(r=0.467,P<0.01)和GLI1(r=0.439,P<0.05)的表达呈正相关,ALDH1与SHH(r=0.426,P<0.05)和GLI1(r=0.394,P<0.05)的表达呈正相关。结论:HIF-1α和Hedgehog信号通路在ALDH1^+乳腺癌干细胞中活化,HIF-1α、ALDH1与Hedgehog信号传导通路可能相互协同激活癌症干细胞从而促进三阴性乳腺癌的恶性进展。

LncRNA HAGLR靶向miR-143/Hedgehog信号通路对HPV16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制

目的 研究LncRNA HAGLR靶向miR-143/刺猬因子(Hedgehog)信号通路对人乳头瘤病毒(HPV)16/18感染的宫颈癌细胞活性作用机制。方法 CaSki细胞购自美国标准生物品收藏中心。选取宫颈癌患者的癌组织(符合宫颈癌确诊标准)与癌旁5 cm宫颈组织标本各10例。将LncRNA HAGLR转染到宫颈癌细胞中后分为宫颈癌组、NC组及转染组。实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)检测LncRNA HAGLR、miR-143水平。噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖。流式细胞仪检测细胞凋亡。Western印迹检测音猬因子重组蛋白(Shh)、神经胶质瘤相关基因同源蛋白(Gli)1蛋白水平。双荧光素酶报告检测LncRNA HAGLR、miR-143、Shh、Gli1靶向。结果 宫颈癌组织中LncRNA HAGLR表达明显高于在癌旁组织(P<0.05)。宫颈癌组与NC组各指标对比无明显差异(P>0.05)。与NC组相比,转染组LncRNA HAGLR、增殖能力、Shh、Gli1水平明显降低,miR-143、凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 LncRNA HAGLR靶向升高miR-143及抑制Hedgehog信号通路可降低HPV16/18感染的宫颈癌细胞的增殖并诱导凋亡。

Hedgehog信号通路与“肾虚血瘀”骨代谢失常的实验研究

目的观察去卵巢骨质疏松症模型大鼠的骨组织和肾组织中Hedgehog信号通路细胞表面受体Patched-1(PTCH1)和Gli3mRNA和蛋白含量变化及补肾填精、活血化瘀中药复方对其影响,探讨中药组方治疗绝经后骨质疏松症的可行性以及绝经后骨质疏松症的发病机制与Hedgehog信号通路的关系。方法采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症模型,分别给予补肾填精中药复方、活血化瘀中药复方、骨疏康对模型大鼠灌胃12周。然后将大鼠分为补肾填精组、活血化瘀组、阳性对照组、正常组和模型空白组,其中骨疏康作为阳性药物为阳性对照组。运用RT-PCR检测各组大鼠骨组织和肾组织PTCH1和Gli3mRNA相对表达量;通过ELISA法检测各组大鼠骨组织和肾组织PTCH1和Gli3蛋白含量。结果各组大鼠股骨和肾组织中PTCH1mRNA及蛋白表达方面:与正常组比较,模型组显著升高(P<0.01);与模型组比较,补肾填精组、活血化瘀组、阳性对照组显著降低(P<0.01);各个用药组间比较,补肾填精组下调优于活血化瘀组,具有显著性差异(P<0.01)。各组大鼠股骨和肾组织中Gli3mRNA及蛋白表达方面:与正常组比较,模型组显著升高(P<0.01);与模型组比较,补肾填精组、活血化瘀组、阳性对照组显著下降(P<0.01);各个用药组间比较,补肾填精组下调优于活血化瘀组,具有显著性差异(P<0.01)。结论PTCH1mRNA及蛋白含量和Gli3mRNA及蛋白含量在去卵巢骨质疏松症模型大鼠骨组织和肾组织中显著升高,提示PTCH1和Gli3可能参与绝经后骨质疏松症骨代谢失衡的发生和进展。补肾填精中药复方和活血化瘀中药复方可下调PTCH1和Gli3mRNA相对表达量及其蛋白含量,这可能是起到防治绝经后骨质疏松症的作用机制之一,并且补肾填精法优于活血化瘀法。

卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog信号通路的表达

目的探讨正常卵巢和卵巢肿瘤中Hedgehog信号通路的表达。方法采用RT-PCR和免疫组织、细胞化学染色检测26例卵巢肿瘤组织、3例卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780和COC1)和7例正常卵巢组织中Hedgehog信号通路的信号分子SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白表达情况;通过实时定量RT-PCR对随机抽取的11例卵巢肿瘤组织和5例正常卵巢组织进行PTCH和GLI1 mRNA水平的比较。结果SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在卵巢肿瘤组织中均有表达;SHH mRNA在正常卵巢组织中不表达,而IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA在正常卵巢组织中有表达;在卵巢肿瘤组织中,PTCH和GLI1的mRNA表达水平高于正常组织(P<0.05)。SHH、IHH、PTCH、SMO和GLI1蛋白在卵巢肿瘤组织中均呈阳性表达,在正常卵巢组织中不表达。卵巢癌细胞株SKOV3、A2780和COC1均有IHH、PTCH、SMO和GLI1的mRNA和蛋白的表达;SHH仅在SKOV3和A2780中表达。结论卵巢肿瘤中存在Hedgehog信号通路,在部分卵巢肿瘤中有Hedgehog信号通路过度激活的现象。