荒漠植物花花柴HTR基因家族表达模式及其增强细菌抗逆性分析

【目的】荒漠植物花花柴具有耐盐碱、耐高温等优异的广谱抗逆性,是新疆珍贵的天然抗逆植物种质资源。挖掘花花柴耐极端温度和耐盐基因,系统分析其在高温、低温和高盐胁迫下表达模式以及抗逆性,对于利用该基因增强作物抗逆性、稳产性、丰产性,促进荒漠植物基因资源的发掘利用都具有重要意义。【方法】采用盆栽花花柴幼苗进行不同时长的高温(45℃)、低温(4℃)和高盐(400 mmol/L Na^(+))胁迫处理,采集幼苗的根、茎、叶组织,利用RT-PCR等技术克隆花花柴HTR基因家族(KcHTRs),分析KcHTRs基因表达情况,同时通过原核表达体系分析其抗逆性以及表达蛋白质的最佳诱导条件。【结果】(1)从荒漠植物花花柴高温转录组数据中筛选并克隆了KcHTR基因家族的7个成员,通过构建原核表达载体并诱导表达,明确其cDNA长度在708~789 bp之间,所表达的蛋白质分子量在27~29 kD之间;(2)发现在大肠杆菌BL21最适生长温度37℃下该家族蛋白的最佳诱导表达体系:OD600为0.8,IPTG诱导浓度为0.5 mmol/L,诱导时间为8~10 h;(3)通过对重组大肠杆菌的模拟高温、低温、盐胁迫处理,结果显示KcHTRs能够在一定程度上增强宿主对高温、低温和高盐的耐受性。【结论】KcHTRs具有优异的广谱抗逆性,主要具有耐极端温度的抗逆性,且能够积极响应花花柴植株应对逆境胁迫。

端粒酶hTR基因在口腔癌前病变及鳞癌中的表达

目的探讨端粒酶ｈＴＲ基因在口腔癌前病变及鳞癌中的表达。方法用原位杂交技术检测８２例标本，其中正常口腔粘膜７例，上皮单纯性增生７例，上皮异常增生３０例，原位癌、鳞癌３８例。结果正常口腔粘膜及上皮单纯性增生组织中ｈＴＲ表达较弱，阳性细胞主要位于基底层，检出率２８．５６％（４／１４）。癌前病变中随着异常增生程度的增加，ｈＴＲ表达逐渐增强，阳性细胞逐步由基底层向棘层波及，检出率６０％（１８／３０）。原位癌及鳞癌均有较强的ｈＴＲ表达，检出率为８１．５８％（３１／３８）。结论端粒酶的激活可能出现在口腔癌前病变的晚期阶段，在口腔鳞癌的形成过程中起了关键性作用。

hTR基因反义表达质粒构建及序列分析

从人的脐带血管内皮细胞中提取基因组 DNA,通过 PCR方法扩增得到了人端粒酶RNA成分 ( human telomere RNA,h TR)的基因片段 ,扩增产物经酶切克隆到逆转录病毒载体p LNCX上 ,构建了 h TR基因的反义表达质粒 .序列分析结果表明 ,PCR扩增得到的 h TR基因的 DNA序列与所发表的序列完全一致 .构建的反义表达载体中的目的基因正确地反向插入到逆转录病毒载体 p LNCX的克隆位点上 ,构成了 h

端粒酶hTR基因在石蜡包埋肝脏活检组织中的原位杂交检测

目的：探讨ｈＴＲ与肝细胞癌发生的关系，及与肝炎病毒感染的关系，扩大小样本检查在临床的应用，探讨端粒酶ｈＴＲ在肝细胞癌活检组织中的活性，并与手术切除的肝癌组织进行了比较。方法：６２例肝组织标本，其中４２例肝脏活检穿刺标本（１６例肝细胞癌，１４例肝硬化，１２例慢性肝炎），１８例手术切除的肝癌标本，２例尸解正常肝脏组织，均做了ｈＴＲ的活性检测。结果：外科手术切除的癌组织中，ｈＴＲ活性表达７２．２％（１３／１８），在针吸活检肝组织中，ｈＴＲ活性表达８１．３％（１３／１６），在高分化癌中７７．８％（７／９），中分化癌中９１．６７％（１１／１２），低分化癌中６２％（８／１３），在慢性肝炎、肝硬化中５３．８％（１４／２６）。６０例标本中有２６例病毒阳性标记，其中在病毒阳性及阴性标记的肝癌组织中ｈＴＲ阳性表达均为８３．３％（１０／１２），在病毒标记的慢性肝炎、肝硬化中ｈＴＲ活性表达５０％（７／１４），在肝癌旁组织中ｈＴＲ阳性表达８．３％（２／２４）。结论：端粒酶ｈＴＲ阳性表达与肝细胞癌的发生有关，与肝炎病毒标记状态无关，针吸活检标本在临床慢性肝脏疾病中，在小的不同类型结节性损伤的诊断中，端粒酶的分析是可行的。

端粒酶基因hTRT和hTR在胃癌组织中的表达及其意义

目的 :探讨端粒酶基因 h TRT和 h TR在胃癌组织中的表达及其意义。方法 :用原位杂交技术检测 48例胃癌组织、1 0例正常胃粘膜组织中端粒酶基因的表达。结果 :48例胃癌组织中 h TRT和 h TR阳性表达分别为 79.2 %和 85 .4% ;1 0例正常胃粘膜组织中除1例 h TR弱阳性表达外均为阴性表达 ,胃癌组织与正常胃粘膜组织中 h TRT、h TR的表达均有显著性差异。结论 :端粒酶基因 h TRT和 h TR在胃癌中均为高表达 ,且 h TRT和 h TR有相关性 。

端粒酶基因hTR在乳腺癌中的表达

用原位杂交的方法检测端粒酶基因 h TR在 4 6例乳腺癌及其癌旁组织、5 3例乳腺良性病变中的表达和分布情况。结果显示 ,4 6例乳腺癌中 h TR表达阳性率为 91.3% ;癌旁组织中为 0 ;5 3例乳腺良性病变中为3.9%。乳腺癌组织中 h TR的表达与癌旁组织、良性病变比较差异有显著性 (P均 <0 .0 1)。乳腺癌组织中 h TR的表达与肿瘤分期相关 (P<0 .0 5 ) ,与病理类型、淋巴结转移、肿瘤大小无相关性 (P均 >0 .0 5 )。认为端粒酶基因h

胃癌大肠癌端粒酶基因hTR表达

［目的］探讨胃癌和大肠癌中端粒酶基因ｈＴＲ表达与临床参数的关系 ,评价ｈＴＲ表达检测在胃癌和大肠癌诊断中的价值。［方法］用原位杂交的方法检测端粒酶基因ｈＴＲ在胃癌、大肠癌、胃癌和大肠癌癌旁组织、胃和大肠良性病变中的表达和分布情况。［结果］５７例胃癌中ｈＴＲ基因表达阳性率为９４．７% (５４／５７);５７例癌旁组织中ｈＴＲ基因表达阳性率为０(０／５７);６９例胃良性病变中ｈＴＲ基因表达阳性率为２．９% (２／６９)。胃癌组织中ｈＴＲ基因的表达与癌旁组织、胃良性病变比较差异有显著性(Ｐ均＜０．００１)。胃癌组织中ｈＴＲ的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关 (Ｐ均＜０．０５),与肿瘤分期无相关性 (Ｐ＞０．０５)。５１例大肠癌中ｈＴＲ基因表达阳性率为９４．１% (４８／５１);５１例癌旁组织中ｈＴＲ基因表达阳性率为０(０／５１);３１例大肠良性病变中ｈＴＲ基因表达阳性率为３．２% (１／３１)。大肠癌组织中ｈＴＲ基因的表达与癌旁组织、大肠良性病变比较差异有显著性(Ｐ均＜０．００１)。大肠癌组织中ｈＴＲ的表达与患者性别、病变部位、病理分类大体类型、淋巴结转移和临床分期无相关性 (Ｐ均＞０．０５)，与肿瘤病理分级相关 (Ｐ＜０．０５)。

端粒酶基因hTR在乳腺癌组织中的表达

目的研究端粒酶基因hTR在乳腺癌组织和乳腺纤维腺瘤中的表达及意义。方法应用原位杂交的方法检测端粒酶基因hTR在30例乳腺癌和25例乳腺纤维腺瘤中的表达。结果30例乳腺癌中hTR表达阳性率为90%,25例乳腺纤维腺瘤中为16%,乳腺癌组织中hTR的表达与乳腺纤维腺瘤比较差异有显著性(P<0.01)。乳腺癌组织中hTR的表达与肿瘤分型、淋巴结转移、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论端粒酶基因hTR表达检测在乳腺癌诊断中有一定价值。

端粒酶基因hTR在大肠癌中的表达及其临床意义

目的 探讨大肠癌中端粒酶基因hTR表达与临床参数的关系 ,评价hTR表达检测在大肠癌诊断中的价值。方法 用原位杂交的方法检测端粒酶基因hTR在大肠癌、癌旁组织和大肠良性病变中的表达和分布情况。结果 结果 5 1例大肠癌中hTR基因表达阳性率为 94 .1% (48 5 1) ,5 1例癌旁组织中hTR基因表达阳性率为 0 (0 5 1) ,31例大肠良性病变中hTR基因表达阳性率为 3.2 % (1 31)。大肠癌组织中hTR基因的表达与癌旁组织、大肠良性病变比较差异有显著性 (P均 <0 .0 1)。大肠癌组织中hTR的表达与患者性别、病变部位、病理分类大体类型、淋巴结转移和临床分期无相关性 (P均 >0 .0 5 ) ,但与肿瘤病理分级相关 (P <0 .0 5 )。结论 端粒酶基因hTR表达检测在大肠癌诊断中可能有一定的价值。

牛HTR1B基因的分子遗传特性研究

用PCR-SSCP技术研究了涉及肉牛和奶牛共计7品种HTR1B基因的编码区和3′侧翼区的多态性,以期为牛性情的标记辅助选择积累数据。扩增得到4个片段,有3个片段存在(SSCP)多态性。对不同的SSCP带型对应片段进行测序,共发现6个SNP多态位点(G205T、C507T、C546G、C744T、G816A和G942A)。各遗传群体内G205T、C744T、G816A和G942A位点均处于Hardy-Weinberg平衡,而C507T和C546G位点只有鲁西牛处于Hardy-Weinberg平衡。奶牛205T等位基因频率显著高于其他肉牛品种(χ2=6.87)。奶牛G205T位点多态信息含量为0.25,其余各位点在不同群体内均小于0.10,说明牛HTR1B基因较保守。

精神分裂症患者HTR2A基因多态性与帕利哌酮和利培酮临床疗效及安全性的关联研究

目的观察中国汉族精神分裂症患者的5-羟色胺2A受体(HTR2A)基因多态性与帕利哌酮和利培酮治疗精神分裂症患者临床疗效与安全性的关联。方法入组201名精神分裂症患者,133例门诊或住院患者,随机接受12周帕利哌酮棕榈酸盐(50～150 mg/4周)或利培酮长效注射针剂(25～50 mg/4周)治疗,每2周进行1次疗效和安全性的评定;68例住院患者,接受4周利培酮片(2～6 mg·d-1)治疗,每周进行1次疗效和安全性评定;以试验结束时阳性阴性症状评定量表(PANSS)总减分率为主要疗效评价指标。共选择3个多态性位点,采用限制性酶切片段长度多态性或直接测序,获得基因型。结果 rs7997012各基因型可能与临床疗效相关联(P<0.05),位点rs6313和rs6311的各基因型间临床疗效的差别无统计学意义(P>0.05);位点rs6313和rs6311的各基因型与BARS、SAS评分变化及血AST、ALT升高的水平相关联(P<0.05)。结论 HTR2A基因与帕利哌酮及利培酮治疗的临床疗效和安全性可能有关联。

212例头颈部恶性肿瘤患者HTR3B基因多态性与化疗后出现恶心呕吐的关系

目的探讨HTR3B基因多态性与头颈部恶性肿瘤患者化疗后出现恶心呕吐的关系。方法采用方便抽样的方法,选择行TPF方案化疗的头颈部恶性肿瘤患者212例。从NCBI数据库或既往相关文献中筛选有临床意义的HTR3B基因rs3758987、rs1176744、rs12795805、rs2276305位点,化疗前采集患者外周静脉血3 m L,检测各位点的基因型。分析各位点基因型与化疗后出现恶心呕吐的关系。结果 212例患者化疗后出现恶心呕吐113例,出现恶心呕吐与rs3758987位点有关(P<0.05),与rs1176744、rs12795805、rs2276305位点无关(P均>0.05)。HTR3B基因rs3758987位点TT基因型者化疗后恶心呕吐的发生率明显低于CC+CT基因型者(P<0.05)。结论HTR3B基因rs3758987位点与头颈部恶性肿瘤患者化疗后出现恶心呕吐有关,其CC、CT基因型者化疗后出现恶心呕吐的风险明显高于TT基因型者。

HTR1A基因-1019C/G多态性与重性抑郁障碍及氟西汀疗效的关联研究

目的探讨5羟色胺1A受体(HTR1A)基因多态性与重性抑郁障碍的相关性及与氟西汀治疗疗效之间的关系。方法采用聚合酶链式反应扩增技术与限制性片段长度多态性分析技术(PCR-RFLP)检测重性抑郁障碍患者(病例组,n=142)和正常人(对照组,n=154)HTR1A基因-1019C/G多态性的基因型和等位基因频率。氟西汀治疗前及治疗6周末,用17项汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评价疾病严重程度及其变化,分析疗效与基因型之间的关系。结果 HTR1A基因-1019C/G多态性,病例组G等位基因的频率(74.3%)明显高于对照组(65.6%)(P<0.05)。病例组HAMD总分各基因型组间总体比较差异有统计学意义(P<0.05),C/C基因型组高于C/G、G/G基因型组(P<0.05)。氟西汀治疗6周末,各基因型之间疗效比较差异无统计学意义,不同性别患者各基因型之间疗效比较差异无统计学意义。结论 HTR1A基因-1019C/G多态性与重性抑郁障碍之间存在关联,G等位基因可能是抑郁障碍的危险因子;C等位基因与重性抑郁障碍患者的病情严重程度存在关联,携带C/C基因型的患者病情可能较严重;该基因多态性与氟西汀的抗抑郁疗效可能无关。

HTR2A基因多态性与精神分裂症的关系

目的:探讨5-羟色胺2A(HTR2A)基因多态性与精神分裂症的关系。方法:在54个汉族精神分裂症核心家系中,以PCR和限制性片段长度多态性(RFLP)方法对HTR2A基因编码区序列第102碱基(rs6313位点)单核苷酸多态性(SNP)进行检测。结果:HTR2A基因的rs6313位点基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡;单倍型相对风险分析(HRR)表明,HTR2A基因rs6313位点与精神分裂症无关联(χ2=1.852,df=1,P=0.174);传递不平衡检验(TDT)显示,健康的杂合子父母及其患精神分裂症子女之间不存在显著的传递不平衡(2χ=1.786,df=1,P=0.181),即杂合子父母传递给患病子女的等位基因无差异;HTR2A基因的rs6313位点等位基因频率与精神分裂症的怪异行为(χ2=5.576,df=1,P=0.018)和意志贫乏(2χ=8.322,df=2,P=0.016)两种临床症状相关。结论:HTR2A基因的rs6313位点多态性可能与精神分裂症无关,但不能排除该位点与精神分裂症临床症状相关联。

胆囊癌hTR反义RNA基因真核表达载体的构建

目的采用RT-PCR法,提取胆囊癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因,并针对其序列设计反义RNA切割基因序列,并将其构建入真核表达载体pTriEx-4内。方法 根据hTRcDNA序列,设计引物,经RT-PCR法从体外培养的胆囊癌细胞内调取hTR模板区基因,根据其测序结果,合成反义RNA基因,与经相应酶切的真核表达载体连接,酶切鉴定重组体的正确性。结果经RT-PCR从细胞内调出68bp序列,与hTRcDNA比较,与模板区域碱基序列一致。反义RNA基因重组子经酶切鉴定序列正确。结论 RT-PCR法可调出胆囊癌hTR基因有效片段,成功构建了针对hTR模板区的反义RNA基因的真核表达载体,为胆囊癌的基因治疗奠定了良好的基础。

绵羊HTR4基因的生物信息学分析

利用生物信息学数据库及软件,对绵羊羟色胺受体4基因(hydroxytryptamine receptor 4,HTR4)进行生物信息学分析,以初步了解其结构并进行功能预测。结果表明,绵羊HTR4基因所含最大长度的开放阅读框为1317 bp,编码438个氨基酸残基。HTR4基因编码的蛋白分子质量为49437.09 KDa,理论等电点(pI)为8.32。亚细胞定位结果表明其编码产物主要定位于质膜(60.9%),且不属于分泌蛋白。HTR4蛋白不存在信号肽序列,存在7段跨膜结构且无低复杂性段区域,该蛋白的二级结构以α螺旋为主,且三级结构主要由α折叠缠绕形成。

反义hTR对人胃癌细胞株SGC-7901恶性表型的逆转作用

目的 探讨反义hTR基因转染对胃癌细胞系SGC 790 1恶性表型的逆转作用及其在肿瘤基因治疗中的价值。方法 构建包含端粒重复序列模板区的反义hTR基因真核表达载体 ,用脂质体法将其转染至胃癌细胞系SGC 790 1,比较观察反义hTR基因转染后 790 1细胞的hTRRNA表达、端粒酶活性、体外生长增殖特性和裸鼠体内致瘤能力的变化。结果 反义hTR基因转染的 790 1细胞hTRRNA表达和端粒酶活性明显降低、体外生长增殖能力降低、接触抑制恢复、细胞凋亡率增加、软琼脂集落形成能力和裸鼠体内致瘤能力完全消失。结论 反义hTR基因转染能使 790 1细胞的端粒酶活性明显下调并逆转其恶性表型 ,提示端粒酶是肿瘤治疗的较理想靶点 ,端粒酶抑制剂具有良好的临床应用前景。

hTR-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用

目的探讨人端粒酶RNA(hTR)-siRNA腺病毒对裸鼠人宫颈癌移植瘤的治疗作用及其机制。方法将HeLa细胞注射到裸鼠的右腋皮下建立肿瘤模型,27d后将荷瘤裸鼠随机分为4组,采用瘤体内多点注射方式,分别向各组荷瘤鼠注射0.1mL的DMEM、Ad-NT-siRNA(1013pfu/L)、Ad-hTR-siRNA(1013pfu/L)或顺铂(1.20g/L),以后每隔3d注射1次,连续15d。观察注射腺病毒后移植瘤的体积变化、毒副作用。治疗结束后间隔7d处死动物,剥离出肿瘤组织称重。切取瘤组织做TUNEL染色测定组织的凋亡指数。结果将HeLa细胞移植到裸鼠皮下,成瘤率为100%。与Ad-NT-siRNA处理组相比,Ad-hTR-siRNA处理组的裸鼠移植瘤的体积和质量分别降低45.48%和34.68%,TUNEL分析显示凋亡细胞量约11.8%;但是Ad-hTR-siRNA的抗肿瘤作用不及顺铂。结论hTR-siRNA腺病毒能够明显抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的生长,其抗肿瘤机制与诱导肿瘤细胞凋亡、坏死有关。