金花茶种子诱导人子宫颈癌HelaS3细胞凋亡及其作用机理的研究

为探讨金花茶种子诱导人子宫颈癌HelaS3细胞凋亡的机制,以不同浓度金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物处理人子宫颈癌HelaS3细胞后,分别采用流式细胞仪、Western印记法等检测对细胞凋亡及Bax、Bcl-2、Bid等表达的影响。结果表明:金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物作用于人子宫颈癌HelaS3细胞后,细胞凋亡增加,Bax蛋白表达提高,Bcl-2蛋白表达降低,Bid蛋白活性减弱,线粒体膜电位下降及Caspase-8,Caspase-3活性增强。金花茶种子乙醇提取物的正丁醇萃取物为其重要的抗肿瘤活性有效部位,并可能通过激活Bax及Caspase-3,Caspase-8,抑制Bcl-2和Bid来诱导HelaS3细胞凋亡。

电离辐射对HelaS_3细胞凋亡与细胞周期的影响

研究了电离辐射对HelaS3 细胞凋亡和细胞周期的影响 ,进一步探讨细胞凋亡与细胞周期的关系 ,为肿瘤放化疗方案的制定提供基础资料。采用PI、Hoechst33342双染和PI单染 ,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果表明 ,给予 0 .5 - 4 .0GyX射线照射后 8h细胞凋亡开始增加 ,12h达最大值 ,12 - 2 4h有下降趋势 ,但 2 4h开始又逐渐增加 ,到 72h时又接近 12h水平。S期和G2 /M期细胞均明显增加 ,并呈剂量依赖性 ,G0 /G1期细胞则呈剂量依赖性减少 ,且这种变化在受照射后 2 4h最明显。说明一定剂量电离辐射可以诱导明显的G2 /M阻滞和S期阻滞 ,并可诱导HelaS3 细胞凋亡的产生 ,两者之间有一定的关系。

电离辐射诱导HeLaS_3细胞凋亡时程变化的影响

采用PI和Hoechst33342双染、流式细胞术 (FCM)和图像分析术 (ICM)检测了不同剂量电离辐射对HeLaS3 细胞凋亡的影响。结果表明 ,HeLaS3 细胞在分别受到 0 .5 - 4 .0GyX射线照射后 8h ,其细胞凋亡呈增高趋势 ,但无统计学意义。照射后 12h ,细胞凋亡显著增加 (p <0 .0 1) ,并达峰值。随后 ,细胞凋亡率迅速下降 ,4 8h ,又有所回升。且流式细胞术与图像分析术所得结果数据相近 ,趋势一致。

利用siRNA干扰MGMT基因表达的初步研究

目的采用RNA干扰(RNA interference,RNA i)技术,通过构建人O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O6-meth-ylguan ine-DNA methyltransferase gene,MGMT)基因的特异性siRNA(small interfere RNA)真核表达载体,体外观察对人MGMT(hMGMT)基因的沉默作用。方法将合成的发卡样特异性hMGMT RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体并转染体外HelaS3细胞株,以半定量RT-PCR法检测hMGMT mRNA的表达水平,以MTT法检测转染后HelaS3细胞对BCNU的敏感性变化。结果成功构建MGMT siRNA的真核表达载体;所构建的载体能够特异性降低hMGMT mRNA的表达水平,转染后HelaS3细胞对BCNU的敏感性增加。结论该RNA干扰真核表达载体可以特异性干扰hMGMT基因的表达。

导入人HeLaS 3细胞DNA提高XP细胞的紫外线抗性

用电脉冲介导和DNA-磷酸钙共沉淀两种基因转移方法,将人HeLaS 3细胞DNA及限制性核酸内切酶切割后的DNA片段,与选择标记基因一同导入XP细胞,经两次选择后得到转化的细胞。实验证明HeLaS3 DNA及经Bgl I、Xho I切割后的DNA片段可以修复XP细胞切除修复基因的缺陷,提高它们对紫外辐射的抗性。二次转化实验进一步证明,导入的HeLaS 3 DNA已在XP细胞基因组中整合,并得到稳定的表达。

不同剂量X射线对同步化HeLaS_3细胞周期的影响

目的 研究不同剂量Ｘ射线对同步化ＨｅＬａＳ３ 细胞周期的影响，为进一步探讨其分子调控机理和临床肿瘤放疗提供基础资料。方法 采用胸苷（ＴｄＲ） 双阻断法和流式细胞术（ＦＣＭ） 检测了ＨｅＬａＳ３ 细胞同步化后分别于其细胞周期各时相进行７５ ｍ Ｇｙ 和２－０ Ｇｙ Ｘ 射线照射以及于Ｇ２＋ Ｍ 期进行０－０２５～２－０ Ｇｙ 照射后其细胞周期进程的变化。结果 ２－０ Ｇｙ 照射时细胞无论处于Ｇ０／Ｇ１ 、Ｓ期还是Ｇ２ ＋ Ｍ 期，从释放点后９～１５ 小时内均发生明显的Ｓ期延迟和Ｇ２ 阻滞，但其中以Ｇ２ 期照射者阻滞最显著；于Ｇ０／Ｇ１ 和Ｇ２ ＋ Ｍ 期进行７５ ｍ Ｇｙ 照射，分别在９ 和１２ ｈ 时发生一过性的明显的Ｇ２ 阻滞，至１１ 和１５ｈ 时完全从这一阻滞中脱离，甚至促进了其细胞周期的进程；而在Ｓ期进行７５ ｍ Ｇｙ 照射时，并没有发生这种阻滞，反而加速了其细胞周期由Ｇ２ ＋ Ｍ→Ｇ０／Ｇ１ 的移行，其中尤以９ｈ 时最为显著。剂量效应关系研究表明，于Ｇ２ ＋ Ｍ 期进行０－０２５ ～２－０ Ｇｙ 照射后，在释放点后１１ ｈ 时均发生Ｇ０／Ｇ１ 期细胞数减少，Ｇ２ 阻滞，且有剂量依赖性，而Ｓ期细胞数的变化在０－０２５ ～０－１ Ｇｙ 和０－５ ～２－０

O^6-METHYLGUANINE-DNA METHYLTRANSFERASE AND HUMAN CANCER CHEMOTHERAPY

Two kinds of human tumor cell strains having different activity of O^6-methylguanine-DNA methyltransferase (O^6-MT) were transplanted into nude mice. Then the mice were inject-ed intraperitoneally with bifunctional alkylating agent 1--(4--amino--2-methyl--5--pyrimidinyl)methy1-3-(2-chloroethyl)-3-nitrosourea hydrochloride (ACNU). The tumors with low O^6-MTactivity were quickly suppressed or cured. The result suggests that some tumors, if previ-sionally determined with low O^6-MT activity, might be efficiently cured by treatment withACNU. This probably opens a new way for human cancer chemotherapy.