过量氟对小鼠髁突软骨损伤及自噬相关因子LC3、p62表达的影响

目的:研究过量氟对小鼠髁突软骨损伤及髁突软骨中自噬相关因子的表达。方法:将30只4周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组,每组15只,对照组自由饮用去离子水,实验组自由饮用含氟离子浓度为75 mg/L的去离子水,持续喂养8周。通过改良番红O-固绿软骨染色观察髁突纤维软骨层结构变化;免疫组织化学染色检测软骨细胞外基质降解标志物基质金属蛋白酶13(Matrix metalloproteinase 13,MMP-13)、Ⅱ型胶原蛋白的表达水平及自噬相关因子微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein light chain 3,LC3)、自噬底物蛋白p62的表达水平。采用SPSS 22.0软件包对免疫组织化学染色半定量结果进行双因素方差分析。结果:与对照组相比,实验组纤维软骨层变薄,软骨细胞体积变小,核变小,染色加深。免疫组织化学染色结果显示,实验组MMP-13表达量增加,Ⅱ型胶原蛋白表达量降低;LC3表达量增加,p62表达量下降。结论:用含氟离子浓度为75 mg/L的去离子水喂养小鼠8周,可导致髁突软骨退变,髁突软骨发生自噬。

自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在胸腔积液中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在良恶性胸腔积液中的表达,分析其临床意义。方法:通过液基薄层细胞学检查及免疫组化检查并结合患者临床资料纳入300例胸腔积液标本作为研究对象,分为group165例(漏出性胸腔积液组)、group2142例(非肿瘤炎性胸腔积液组)及group393例(非小细胞肺癌性胸腔积液组),通过RT-PCR方法及Western blot方法分别检测各组胸腔积液中mTOR、Beclin-1及LC3在基因及蛋白水平的表达。结果:在基因和蛋白表达水平,group1及group2相较于group3在Beclin-1和LC3的表达水平均升高,而mTOR的表达则显著减低,差异均有统计学意义;同时,group2较group1在Beclin-1和LC3表达中均降低,mTOR的表达则升高,差异均有统计学意义;此外在良、恶性胸腔积液相关性分析中发现,在蛋白水平Beclin-1相对表达值与LC3表达值呈正相关,而mTOR相对表达值与Beclin-1、LC3表达值呈负相关。结论:自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在不同性质胸腔积液中表达存在差异,可能与炎性及非小细胞肺癌引起的肿瘤性胸腔积液的发病机制有关,可为胸腔积液性质鉴定提供新的分子学依据。

结直肠癌患者外周血中LC3B^(+)EVs与MDSC及各细胞因子水平的临床相关性分析

目的:为探讨丹阳地区结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者外周血中LC3B^(+)EVs与髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)及各细胞因子的水平及其临床相关性。方法:流式细胞仪分别检测两组健康体检者和CRC患者外周血中LC3B^(+)EVs、MDSC及粒系髓源性抑制细胞(PMN-MDSC)和单核系髓源性抑制细胞(M-MDSC)的水平,讨论LC3B^(+)EVs与MDSC的临床相关性,并将CRC患者的血浆标本中的效应分子进行多因子检测(细胞因子芯片),讨论LC3B^(+)EVs与各因子的相关性。结果:与对照组相比,CRC患者外周血LC3B^(+)EVs数量显著上升(P<0.0001),且与患者年龄、性别无统计学差异(P=0.8690,P=0.9712)。CRC患者外周血中MDSC及PMN-MDSC、M-MDSC两个亚群的水平升高皆有统计学意义,并以PMN-MDSC增高为主(P<0.0001)。CRC患者外周血中LC3B^(+)EVs与MDSC及PMN-MDSC的水平无相关性(r=-0.002699,P=0.9891;r=-0.04435,P=0.8227),但与M-MDSC的水平呈显著正相关(r=0.4811,P=0.0096)。CRC患者外周血LC3B^(+)EVs与IL-1β、IL-2、IL-4、IL-8、IL-17、IFN-γ的水平呈正相关(r=0.7031、r=0.7827、r=0.4663、r=0.5901、r=0.4589、r=0.4655,P<0.05),尤其是与IL-1β呈显著正相关(P=0.0016);而与IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α的水平无统计学意义(P>0.05)。结论:CRC患者血浆中LC3B^(+)EVs数量与MDSC水平显著高于健康人,LC3B^(+)EVs与M-MDSC亚群及IL-1β的水平存在显著正相关,提示M-MDSC与IL-1β可能诱导CRC肿瘤细胞释放自噬小体增加,它们之间可能存在相互作用从而影响CRC的发生发展。

三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响

目的:探讨三物白散对胃癌细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3、p62表达的影响,探究三物白散抗胃癌的作用机制。方法:将28只SPF级雄性大鼠随机分为4组,每组7只,分别予以0.03125、0.0625、0.1250 g/(kg·d)三物白散及相同体积生理盐水灌胃,经腹主动脉采血制备含药血清。体外培养AGS细胞,设置空白对照组(空白组)、三物白散低剂量含药血清组(低剂量组)、三物白散中剂量含药血清组(中剂量组)、三物白散高剂量含药血清组(高剂量组)。采用CCK-8法检测不同浓度(5%、10%、15%、20%)三物白散含药血清对AGS细胞活性的影响;倒置显微镜下观察三物白散含药血清对AGS细胞形态的影响;RT-qPCR法检测Beclin1 mRNA、LC3 mRNA、p62 mRNA表达;Western blotting法检测Beclin1、LC3、p62蛋白表达。结果:与空白组比较,5%、10%、15%、20%三物白散高剂量含药血清可呈浓度-时间依赖性抑制AGS细胞活性;随着含药血清浓度升高,细胞形态逐渐不规则,细胞数量逐渐减少;中、高剂量组Beclin1 mRNA、LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量均高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01);低剂量组LC3-ⅠmRNA、LC3-ⅡmRNA相对表达量高于空白组,p62 mRNA相对表达量低于空白组(P<0.01)。高剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ均高于空白组,p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01);中剂量组Beclin1蛋白相对表达量及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ高于空白组(P<0.05或P<0.01),p62蛋白相对表达量低于空白组(P<0.01)。结论:三物白散对胃癌细胞的增殖有抑制作用,上调Beclin1、LC3表达、下调p62的表达、诱导胃癌细胞自噬可能是其抗胃癌作用机制之一。

怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠LC3及Beclin-1表达的影响

目的:探讨怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠肾脏LC3及Beclin-1表达的影响。方法:将64只雄性SD大鼠随机分为假手术组(16只)、UUO模型组(16只)、UUO模型+怡肾丸组(16只)、UUO模型+依那普利组(16只)。手术组大鼠游离并结扎左侧输尿管制备肾纤维化模型,假手术组只游离不结扎左侧输尿管。各给药组于造模当日开始给予相应药物,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃3周。于术后第3、7、21天分批处死各组大鼠,取血清及左肾标本,检测血清肌酐、尿素氮,HE染色、Masson染色观察其病理形态学改变,免疫组织化学法及qRT-PCR法分别检测肾组织LC3及Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素水平均升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组肾功能上升速度缓慢(P<0.05);假手术组大鼠肾脏未见明显病理改变。模型组大鼠肾小球硬化,肾小管高度扩张萎缩,小管基底膜变薄,间质区细胞大量增生及纤维化,并随梗阻时间延长而加重,治疗组病理损伤明显减轻,胶原纤维沉积减少(P<0.05);与假手术组相比,模型组的LC3、Beclin1水平升高(P<0.05);与模型组相比,治疗组的LC3、Beclin1表达水平显著上升(P<0.05)。结论:UUO大鼠肾损害过程中自噬被激活,而怡肾丸增强了LC3、Beclin-1自噬相关蛋白的表达水平,并减轻肾纤维化以保护肾脏。

长链非编码RNAH19及自噬相关基因LC3Ⅱ在结直肠癌中表达及其意义

探讨长链非编码RNA-H19 (long noncoding RNA, LncRNA-H19)在结肠腺癌中的自噬及临床病理因素的相关性,研究其临床意义。方法 采用生物信息学分析探讨lncRNA-H19在结肠腺癌中的表达水平、临床相关性和预后。在76例结直肠腺癌及癌旁组织石蜡标本中,采用qRT-PCR方法检测LncRNA H19和LC3Ⅱ的表达情况,利用免疫组织化学方法检测LC3Ⅱ蛋白的表达,并进行数据分析。结果 生物信息学分析结果表明,LncRNA H19在结直肠腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织,无病间隔及无进展间隔预后均提示LncRNA H19的高表达在结直肠腺癌患者中预后相对较差,伴随肿瘤恶化,LncRNA H19的表达逐渐升高。根据qRT-PCR方法和免疫组织化学方法结果显示,结直肠腺癌中的LncRNA H19和LC3Ⅱ表达均有所增加,这与结直肠腺癌的发展进程密切相关。相关性分析揭示,LncRNA H19与LC3Ⅱ之间存在负相关关系。结论 在结直肠腺癌研究中,lncRNA-H19高表达,可能通过抑制自噬进而推动结直肠癌肿瘤的发生发展。

双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用

目的:探讨双荧光mRFP-e GFP-LC3(ptf LC3)体系在细胞自噬中的作用。方法:采用不同浓度雷帕霉素(50、100、200、500、1 000 nmol/L)处理人胚肾细胞(HEK293),蛋白印迹法检测不同浓度雷帕霉素组中自噬标记蛋白(LC3蛋白)的表达及LC3-II/LC3-I比值;单荧光GFP-LC3质粒和双荧光mRFP-e GFP-LC3质粒转染HEK293细胞,雷帕霉素(200 nmol/L)处理3 h,采用荧光显微镜统计,并比较两种方法转染后HEK293细胞内LC3亮点的变化。结果:不同浓度雷帕霉素处理HEK293细胞,LC3-II蛋白和LC3-II/LC3-I比值均增加;转染GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色亮点的数量增加;转染mRFP-e GFP-LC3质粒时,雷帕霉素处理HEK293细胞中绿色和红色亮点数量均增加。结论:双荧光mRFP-e GFP-LC3体系优于单荧光GFP-LC3体系,更能全面完整地反映细胞自噬水平,能够反映细胞内自噬流的变化,是自噬定量分析的可靠方法。

Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-Ⅱ mRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA的影响

目的探讨Salubrinal对大鼠脑缺血再灌注模型LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA表达的影响。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉脑缺血(MCAO)缺血再灌注模型。大鼠随机分为假手术组、模型组、Salubrinal组(Sal组),各组又分为再灌6、12、24、72 h 4个亚组。各组于再灌相应时间点行神经功能缺损评分,并断头取脑行HE染色及Real time-PCR检测。结果神经功能缺损:与假手术组比较,模型组、Sal组各时间点均有神经功能缺损(P<0.01);与模型组比较,再灌24、72 h Sal组神经功能缺损评分降低(P<0.05)。HE染色:模型组神经元减少、缺失,细胞肿胀,部分破裂,细胞核固缩、偏移、深染,胶质细胞增生,经Salubrinal干预后,再灌各时间点神经元增多,胞膜较完整,核固缩现象较轻,水肿轻微。Real time-PCR检测:与假手术组比较,模型组、Sal组各指标于再灌各时间点均增高(P<0.01)。与模型组比,Sal组LC3-ⅡmRNA表达于再灌12、24、72 h下降明显(P<0.05);Sal组LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA于再灌后各时间点下降均明显(P<0.01)。结论 Salubrinal通过下调LC3-ⅡmRNA及LC3-Ⅱ/LC3-ⅠmRNA比值,对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。

抗衰延年方对D-半乳糖致衰老大鼠海马自噬相关蛋白LC3的影响

[目的]研究抗衰延年方对D-半乳糖所致衰老大鼠海马自噬相关蛋白微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)的影响。[方法]采用皮下注射D-半乳糖的方法制备大鼠衰老模型,再按随机数字表法将造模成功的21只大鼠分为模型组、抗衰延年方组、吡拉西坦组,每组7只,另将7只健康大鼠设置为正常对照组。抗衰延年方组予抗衰延年方水煎剂灌胃治疗,吡拉西坦组予吡拉西坦灌胃治疗,正常对照组和模型组不予其他干预性治疗。治疗21 d后,采用Morris水迷宫检测各组大鼠的学习和记忆功能,免疫组织化学法和Western blot法检测大鼠海马组织LC3蛋白的表达。[结果]模型组大鼠搜寻平台时间与正常对照组相比明显延长(P<0.05或P<0.01),吡拉西坦组、抗衰延年方组与模型组比较均明显缩短(P<0.05或P<0.01);与正常对照组相比,模型组大鼠穿越平台次数明显减少(P<0.01),吡拉西坦组、抗衰延年方组较模型组明显增加(P<0.05);模型组大鼠脑海马组织LC3蛋白表达较正常对照组升高(P<0.05),吡拉西坦组、抗衰延年方组较模型组降低(P<0.05)。[结论]抗衰延年方可通过降低脑组织LC3蛋白水平,从而达到延缓衰老的目的,其作用效果与吡拉西坦相当。

电针预处理对心肌缺血大鼠心肌自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin 1、HIF-1α表达影响

目的观察电针内关预处理对心肌缺血(AMI)大鼠心肌自噬相关蛋白的影响。方法大鼠随机分成伪手术组、模型组、电针预处理组;构建AMI大鼠模型,造模前电针刺激14 d,刺激电流1 mA,频率为2 Hz,30 min/d。运用PowerLab 16导生理记录仪记录分析各组大鼠心电图,Western Blot检测心肌组织微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3Ⅰ)、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、Beclin 1基因(Beclin 1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,PCR检测LC3ⅠmRNA、LC3ⅡmRNA、Beclin 1 mRNA、HIF-1ɑmRNA。结果与伪手术组比较,模型组LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白及mRNA表达水平升高,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值上升(P<0.01),LC3Ⅰ、HIF-1α蛋白及mRNA表达水平显著下降(P<0.01);与模型组相比,电针组LC3Ⅱ、Beclin 1蛋白及mRNA表达水平明显下降,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低(P<0.01),LC3Ⅰ、HIF-1α蛋白及mRNA水平升高(P<0.01)。结论针刺预处理对AMI大鼠心肌保护作用可能与下调LC3Ⅱ、Beclin 1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,上调LC3Ⅰ、HIF-1α表达有关。

伊立替康、紫杉醇联合顺铂治疗对宫颈癌CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平的影响

目的:分析伊立替康、紫杉醇联合顺铂治疗对宫颈癌的治疗效果及对细胞角蛋白19片段抗原21-1(Cytokeratin 19 fragment 21-1,CYFRA21-1)、血管内皮生长因子C(Vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)及微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(Microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3-Ⅱ)水平的影响.方法:回顾性分析本院2020年3月至2023年4月收治的122例宫颈癌患者的临床资料,根据治疗方案不同将患者分为IP组(伊立替康+顺铂治疗,60例)和TP组(紫杉醇+顺铂治疗,62例).分析对比两组的临床疗效、CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平以及毒副反应.结果:IP组与TP组总疗效率分别为56.67%、79.03%,TP组总疗效率显著高于IP组(P<0.05).两组治疗后的CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平均显著下降,且TP组CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平均显著低于IP组(P<0.05).TP组0度、Ⅰ度例数占比显著高于IP组,Ⅲ度例数占比显著低于IP组(P<0.05).结论:与伊立替康联合顺铂比较,紫杉醇联合顺铂治疗宫颈癌临床疗效更为理想,可有效降低CYFRA21-1、VEGF-C及LC3-Ⅱ水平,且安全性高.

微管相关蛋白LC3和自噬基因Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达及其意义

背景与目的:有研究表明自噬活性的改变与肿瘤的发生、发展有关。诱导自噬性细胞死亡已经成为杀死肿瘤细胞的新策略。本研究检测微管相关蛋白LC3和自噬基因Beclin1在不同卵巢肿瘤组织中的表达情况,探讨其与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性及意义。方法:用免疫组化法检测25例良性卵巢肿瘤、25例交界性卵巢肿瘤及75例上皮性卵巢癌组织的LC3和Beclin1表达,并结合临床病理因素进行分析。结果:良性肿瘤组LC3和Beclin1的阳性率(100%、100%)和交界性卵巢肿瘤组LC3和Beclin1的阳性率(96%、84%)都明显高于上皮性卵巢癌组(57%、57%),且差异具有统计学意义(P均<0.001)。LC3在上皮性卵巢癌中的表达与FIGO分期和肿瘤分化程度相关(P=0.017;0.001)。Beclin1表达与上皮性卵巢癌患者FIGO分期相关(P=0.04)。LC3和Beclin1在卵巢上皮癌中的表达无相关性(P=0.875)。结论:LC3和Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,自噬活性的改变可能与上皮性卵巢癌的发生、发展相关。

妊娠早期稽留流产患者绒毛组织中HIF-1α、BNIP3、LC3的表达

目的:检测妊娠早期稽留流产患者绒毛组织中HIF-1α、BNIP3、LC3的表达,探讨滋养层细胞自噬异常与稽留流产的关系。方法:收集正常早孕妇女及稽留流产妇女绒毛组织各30例,采用实时荧光定量PCR法检测HIF-1α、BNIP3 mRNA的表达;采用免疫组化SP法及蛋白印迹法检测HIF-1α、BNIP3及LC3蛋白的表达。结果:两组绒毛组织中均可见HIF-1α、BNIP3及LC3蛋白的表达,HIF-1α主要定位于滋养细胞胞核及胞质,BNIP3及LC3主要定位于滋养层细胞胞质中。与正常早孕组相比,稽留流产组HIF-1α与BNIP3 mRNA和蛋白表达水平以及LC3Ⅱ/Ⅰ均明显下降(P<0.05)。结论:绒毛组织滋养层细胞中HIF-1α/BNIP3信号通路调节的低氧诱导自噬水平下降可能是稽留流产发生的重要机制。

五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后第12天灌胃给药,连续12 d。实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平。结论五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关。

乳腺癌中自噬相关基因LC3与凋亡相关基因XIAP的表达及意义

目的观察自噬相关基因LC3和凋亡相关基因XIAP在乳腺癌组织中的表达,探讨其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用组织芯片平台,应用免疫组化法检测121例乳腺癌组织中LC3、XIAP的表达,并结合临床病理因素进行分析。结果乳腺癌组织中,LC3和XIAP的高表达率分别为84.2%(102/121)和90.9%(110/121)。LC3的高表达与HER-2过表达呈显著正相关(P<0.05),XIAP的高表达与Ki-67和HER-2过表达呈显著正相关(P均<0.05),但均与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移、ER和PR表达无关(P均>0.05)。经Spearman秩相关检验,LC3和XIAP在乳腺癌中的表达呈显著正相关(P<0.05)。结论在乳腺癌中,高自噬活性与低凋亡现象并存,HER-2可能参与其中。

Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠再灌注中的表达及意义

目的研究自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠脑缺血再灌注海马中的表达及意义。方法根据Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血后处理组再按不同缺血后处理时间分为15 s、30 s、1 min 3个亚组。缺血2 h再灌注24h后用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达情况,透射电镜观察神经细胞中自噬和溶酶体的激活以及细胞超微结构的变化。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组神经行为学评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积明显减小(P<0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达细胞数明显增加(P<0.01),自噬体形成和溶酶体激活量增加;缺血30 s亚组相比较15 s和1 min亚组上述指标(神经行为学评分除外)(P>0.05),差异亦有显著性(P<0.01)。结论脑缺血后处理的抗缺血再灌注损伤作用可能与上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达有关。

玉米赤霉烯酮吸附剂对后备母猪子宫中LC3、PCNA分布和表达的影响

【目的】已有研究证实玉米赤霉烯酮(ZEA)在动物体内可通过雌激素受体激活雌激素敏感基因,产生生殖毒性,影响子宫内膜细胞的生长、卵母细胞的成熟及卵泡颗粒细胞的增殖。探讨玉米赤霉烯酮吸附剂(沸石+蒙脱石等复合制剂)对后备母猪子宫的LC3与PCNA的分布和蛋白表达量的影响,从组织化学角度探讨该ZEA新型吸附剂的脱毒效果。【方法】选择体重30±2.11kg左右的(杜×长×大)健康三元杂交后备母猪48头,随机分为6组,每组8头,对照组饲喂基础饲粮、玉米赤霉烯酮组(ZEA)饲喂含有1.008 mg·kg^(-1)玉米赤霉烯酮的饲粮、0.1%新型吸附剂组(ZEA0.1)饲喂含有1.0 g·kg^(-1)吸附剂的ZEA组日粮、0.25%新型吸附剂组(ZEA0.25)饲喂含有2.5 g·kg^(-1)吸附剂的ZEA组日粮、0.5%吸附剂组(ZEA0.5)饲喂含有5.0 g·kg^(-1)吸附剂的ZEA组日粮、蒙脱石组(ZEA-M)饲喂含有2.5 g·kg^(-1)蒙脱石的ZEA组日粮。预试期7 d,正试期21 d,试验结束进行屠宰取样。【结果】ZEA引起子宫器官指数增加,添加0.25%与0.5%新型吸附剂降低子宫器官指数效果明显。免疫组化结果显示子宫中LC3和PCNA阳性细胞主要分布在子宫腺上皮细胞内,腔上皮细胞的LC3免疫阳性反应弱于腺上皮细胞。LC3阳性反应在对照组的子宫腺上皮细胞和腔上皮细胞胞质内呈强阳性表达;ZEA组明显弱于对照组,新型吸附剂组的LC3的免疫阳性反应及阳性细胞数量明显较ZEA组增加,且有剂量依赖趋势,但ZEA-M组效果不明显,略多于ZEA组。各组的子宫腔上皮和腺上皮中PCNA的观察结果与LC3变化趋势相反。WB和qRT-PCR结果也显示添加0.25%与0.5%新型吸附剂可促进LC3的表达,增强了自噬,降低了PCNA表达。这些结果提示ZEA抑制了LC3的表达,抑制细胞自噬,破坏子宫内膜细胞和腺上皮细胞的稳态。但新型吸附剂使LC3蛋白表达上调,PCNA表达降低,可以促进细胞自噬,并抵抗由ZEA引起的子宫内膜细胞异常增殖(PCNA表达增加),通过双向调节对细胞起到很好的保护作用。该结果为新型吸附剂的应用提供了理论依据。【结论】本试验条件下,ZEA可引起后备母猪子宫发生增殖反应,新型吸附剂一定限度内能够对抗ZEA对子宫正常生理机能的副作用。以添加0.25%与0.5%剂量的新型吸附剂较为合适。

长期耐力训练对大鼠心肌细胞自噬相关因子Beclin1和LC3的影响

目的:通过实验研究自噬相关因子Beclin1和LC3的表达变化,探讨长期耐力训练对大鼠心肌细胞自噬发生程度的影响,为长期耐力训练诱导自噬的发生机制提供实验依据。方法:选取24只健康雄性SD大鼠,随机分为安静对照组、中等强度训练组和大强度训练组,每组8只。分别以15.2m/min速度5°坡度和28m/min速度10°坡度进行16周跑台训练,每周训练5天,每次训练1h。训练16周后,进行超声心动图检测。取左心室壁用于HE染色,观察心肌组织形态,制备超薄切片进行透射电镜观察,检测自噬发生程度。RT-PCR、Western Blot技术检测大鼠心肌细胞自噬相关基因Beclin1和LC3的mRNA及蛋白表达。数据应用SPSS 19.0统计软件处理,以P<0.05具有显著性差异。结果:1)超声心动图显示,大鼠经过16周跑台训练后,大强度组EF值显著低于对照组(P<0.05)。2)HE染色结果显示,大强度组心肌细胞损伤严重。3)透射电镜检测提示,长时间大强度耐力训练使自噬小体增多,自噬程度增加。4)16周跑台训练后RT-PCR结果提示,自噬相关基因Beclin1和LC3表达水平上调(P<0.05)。5)Western Blot结果表明,与对照组相比,中等强度训练组和大强度训练组Beclin1表达水平及LC3-II/LC3-I比值均显著升高(P<0.05),且大强度训练组显著高于中等强度训练组(P<0.05)。结论:1)中等强度耐力训练可引起心肌组织细胞良好的适应性重塑,促进心肌细胞适当自噬水平及活性,从而有效上调Beclin1和LC3的表达,提高LC3-II/LC3-I比值,增强心肌细胞代谢能力,有利于心肌能量代谢和收缩功能。2)大强度长时间耐力训练会导致心肌纤维受损,自噬体异常增多,Beclin1和LC3出现过表达的现象,构成心肌细胞损伤的结构与分子病理基础。

自噬相关基因Beclin1和LC3在卵巢浆液性癌中的表达及临床意义

目的检测Beclin1和LC3在卵巢浆液性癌(ovarian serous carcinoma,OSC)中的表达,探讨两者与OSC临床病理特征及预后的关系。方法采用免疫组化Max Vision两步法检测63例OSC和20卵巢浆液性囊腺瘤组织中Beclin1和LC3蛋白的表达,分析两者与OSC临床病理特征及预后的关系。应用RT-PCR和Western blot法检测10例新鲜OSC组织和相应癌旁组织中Beclin1和LC3 mRNA和蛋白的表达。结果在OSC组织中Beclin1和LC3蛋白阳性率(36.51%、33.33%)均低于卵巢浆液性囊腺瘤组织(65.00%、60.00%),差异有统计学意义(P=0.025,P=0.034)。Beclin1蛋白表达与临床FIGO分期和病理分级有关(P=0.001,P=0.001),与患者年龄、发病部位、肿瘤大小及有无盆腔淋巴结转移无关(P>0.05)。LC3蛋白表达与临床FIGO分期和盆腔淋巴结转移有关(P=0.013,P=0.041),与患者年龄、发病部位、肿瘤大小和病理分级均无关(P>0.05)。Beclin1和LC3在OSC中的表达呈显著正相关(r_s=0.373,P=0.03)。10例新鲜OSC组织中Beclin1和LC3 mRNA的相对表达量(0.581±0.091、0.650±0.090)低于癌旁组织,两者比较差异有统计学意义(t=8.083,t=6.614;P=0.016,P=0.022)。新鲜OSC组织中Beclin1和LC3蛋白的相对表达量明显低于癌旁组织,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,Beclin1和LC3表达与OSC患者预后相关(P=0.028 3,P=0.018 5)。结论自噬相关基因Beclin1和LC3在OSC组织中的表达下降,导致自噬功能减弱,可能与OSC的发生、发展和预后不良相关。

自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在进展期胰腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在进展期胰腺癌组织中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学法检测64例胰腺癌组织及相应癌旁正常组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达情况;分析自噬蛋白表达水平与胰腺癌临床病理特征的关系.结果:免疫组织化学法检测提示Beclin1蛋白在胰腺癌组织及癌旁正常组织中阳性表达率分别为28.1%(18/64)、90.6%(58/64),LC3蛋白阳性表达率分别为34.4%(22/64)、75%(48/64)P 6 2蛋白表达阳性率分别为7 5%(4 8/6 4)、4 6.9%(3 0/6 4),均P<0.0 5;胰腺癌组织中Beclin1与LC3的表达水平呈正相关(r=0.572P<0.05),Beclin1、LC3的表达与肿瘤分化、TNM分期相关(P<0.05),Beclin1、LC3和P62的表达均与性别、年龄、有无门脉浸润、淋巴结转移无明显相关(P>0.05).结论:自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62在胰腺癌组织中的异常表达及Beclin 1与LC3两者表达呈正相关提示自噬活动下降可能参与了进展期胰腺癌的发展.