益景汤对糖尿病大鼠视网膜Occludin、CⅣ及PDGF-B的影响

目的:探讨益景汤对糖尿病(DM)大鼠视网膜微血管的保护效应及机制。方法:18只大鼠被随机分为3组:正常对照组、糖尿病对照组(DM对照组)、益景汤治疗组,每组6只。采用链脲佐菌素对DM对照组、益景汤治疗组大鼠进行DM造模。正常对照组和DM对照组采用生理盐水进行灌胃干预,益景汤治疗组采用益景汤灌胃干预。12周后处死所有大鼠,RT-PCR法检测Occludin mRNA、CⅣmRNA、PDGF-B mRNA的表达量,Western Blot法检测视网膜组织结构蛋白Occludin、Ⅳ型胶原蛋白表达。结果:视网膜Occludin、CⅣ及PDGF-B mRNA的表达:DM对照组大鼠视网膜中Occludin mRNA表达量降低,CⅣ及PDGF-B mRNA表达量上升,与正常组相比,差异均具有统计学意义(均P<0.05);益景汤能抑制DM大鼠视网膜Occludin mRNA表达量降低,抑制CⅣmRNA及PDGF-B mRNA表达量上升,益景汤治疗组上述mRNA的表达量与DM对照组相比,差异具有统计学意义(均P<0.05)。视网膜Occludin、CⅣ蛋白表达:DM对照组Occludin蛋白表达量下调、CⅣ蛋白表达量上升,与正常组相比差异均具有统计学意义(均P<0.05);益景汤能抑制DM大鼠视网膜Occludin蛋白表达量的下降、CⅣ蛋白表达量的上升,益景汤治疗组上述蛋白的表达量与DM组相比差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论:益景汤能抑制DM大鼠视网膜Occludin下降、调控结构蛋白CⅣ上升、抑制PDGF-B表达,保护微血管完整性,降低BRB的损害。

大麻二酚对创伤性脑损伤大鼠脑皮质Occludin、ZO-1表达水平及血脑屏障通透性的影响

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)中紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达及变化趋势,探讨大麻二酚(CBD)对BBB的干预作用。方法采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型,将大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、模型组(TBI+vehicle组)和CBD干预组(TBI+CBD组),每组24只;每个组又分为损伤后8 h、1、2、3、5和7 d共6个时间点,通过免疫组化和免疫荧光染色,Western blot检测与BBB通透性密切相关的Occludin和ZO-1在不同时间点的表达情况;通过荧光素钠实验检测BBB通透性。结果免疫组化实验结果表明,与假手术组相比,TBI后随着时间推移Occludin和ZO-1蛋白阳性表达减少(P<0.05),2 d达到最低;CBD干预1 d后Occludin和ZO-1蛋白表达水平均上调(P<0.05);免疫荧光染色实验与Western blot结果趋势近似,与假手术组相比,TBI后Occludin和ZO-1荧光表达强度及蛋白表达量减少(P<0.05),CBD干预2 d后Occludin和ZO-1表达水平上调(P<0.05);荧光素钠实验结果表明,TBI后脑组织BBB完整性遭到破坏,通透性升高(P<0.01),CBD干预后BBB通透性下降(P<0.05)。结论TBI后紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达下降,BBB通透性升高,CBD干预可逆转TBI对BBB的破坏。

壳聚糖对仔猪肠黏膜通透性及Occludin和ZO-1表达的影响

旨在探讨日粮中添加壳聚糖对早期断奶仔猪肠道屏障功能的影响。将30头21d断奶仔猪((6.62±0.59)kg)随机分为3组,预试期采用大肠杆菌攻毒(109细胞.头-1),对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加50mg.kg-1金霉素和300mg.kg-1壳聚糖,饲养期21d。结果表明,与对照组相比,壳聚糖能降低血浆中D-乳酸(D-Lactate)含量(P<0.05)、二胺氧化酶(DAO)活性(P<0.05)和血清内皮素-1(ET-1)水平(P<0.05),但对血清一氧化氮(NO)含量无明显影响(P>0.05);免疫组化结果显示,壳聚糖组空肠黏膜Occludin(P<0.01)和ZO-1(P<0.05)蛋白表达提高;荧光定量PCR结果表明,壳聚糖组空肠黏膜Occludin(P<0.01)和ZO-1(P<0.05)mRNA表达丰度升高。结果说明,日粮中添加300mg.kg-1的壳聚糖能降低早期断奶仔猪小肠黏膜屏障功能的损伤作用。

紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加

目的探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tight junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac-tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制。方法利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组。透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变。γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(125I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变。结果透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接。缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙。直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙。缺氧缺血组125I-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变。结论缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一。

乌司他丁对急性重症胰腺炎患者血清ZO-1、occludin、IL-18水平影响的多中心研究

目的通过多中心研究,探究乌司他丁对急性重症胰腺炎患者血清ZO-1、occludin、IL-18水平的影响。方法选取2012年4月~2014年6月河北省承德医学院附属医院、隆化县医院以及平泉县医院内科收治的急性重症胰腺炎患者150例,采用随机数字表法分为2组。对照组76例,予西医常规治疗;实验组74例,在常规药物治疗的基础上,加用乌司他丁治疗,比较2组患者治疗前后血清ZO-1、occludin、IL-18水平的变化以及患者疼痛、发热等临床症状。结果治疗后,2组患者血清ZO-1蛋白均有所增加,且实验组(+++)显著高于对照组(+),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组患者血清occludin含量均有所升高,且实验组(128.36±18.21)ng/L显著高于对照组(115.21±12.51)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组患者血清IL-18水平均有所下降,实验组为(36.79±10.31)ng/L,显著优于对照组的(42.69±12.35)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,2组患者腹痛、发热症状均有所改善,实验组有效率分别为90%、88%,显著高于对照组的83%、80%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论乌司他丁可有效改善急性重症胰腺炎患者血清ZO-1、occludin、IL-18水平,改善患者腹痛、发热症状,是治疗急性重症胰腺炎的有效药物。

早期断奶对仔猪肠通透性和肠上皮紧密连接蛋白Occludin mRNA表达的影响

本文旨在研究早期断奶仔猪的肠通透性变化并探讨其机制。试验采用32头21日龄断奶仔猪,并于仔猪21、28和35日龄取样测定血浆D-乳酸含量、二胺氧化酶(DAO)活性和尿中乳果糖/甘露醇比率观察肠通透性改变,同时检测肠上皮紧密连接蛋白Occludin mRNA表达水平。结果显示:与断奶前相比,28日龄时血浆D-乳酸含量、DAO活性和乳果糖/甘露醇比差异达到显著水平(P<0.05),且至35日龄时,肠道仍然维持这种较高的通透性;仔猪断奶后Occludin mRNA相对表达量下降明显,与断奶前相比差异显著(P<0.05),35日龄时,表达量有所恢复,但仍然低于断奶前表达水平。试验结果提示,早期断奶后仔猪肠道的通透性增加,肠屏障功能破坏,可能归因于肠上皮细胞紧密连接蛋白Occludin mRNA表达下降。

调胃承气汤灌胃与灌肠对肠源性脓毒症大鼠肠上皮细胞occludin和ZO-1蛋白表达的影响

【目的】观察和比较调胃承气汤灌胃与灌肠对肠源性脓毒症(GOS)大鼠肠黏膜屏障的影响。【方法】将48只大鼠随机分为假手术组,模型组,中药灌胃高、低剂量组(分别给予调胃承气汤9.450、4.725 g/kg灌胃),中药灌肠高、低剂量组(分别给予调胃承气汤9.450、4.725 g/kg灌肠),每组8只。采用盲肠结扎穿刺法(CLP)复制GOS大鼠模型。各组在造模后2、10、24 h分别对应给药。采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测血清降钙素原(PCT)、D-乳酸(D-LA)水平,逆转录实时定量PCR(RT-qPCR)法检测小肠组织occludin、闭锁小带蛋白(ZO-1)基因及肝脏组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(INF-γ)基因表达水平,免疫组化法检测小肠组织occludin、ZO-1蛋白的表达,苏木素—伊红(HE)染色观察小肠病理组织结构的变化。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠小肠组织结构有明显损伤,血清PCT和D-LA水平显著升高(P <0.01),小肠组织occludin、ZO-1基因相对表达水平明显下调(P <0.01),肝脏组织TNF-α、INF-γ基因相对表达水平显著上调(P <0.01),小肠组织occludin、ZO-1蛋白免疫组化阳性表达明显减少(P <0.05);与模型组比较,中药各治疗组能明显改善小肠的损伤程度,显著降低血清PCT和D-LA水平(P <0.05或P <0.01),上调小肠组织occludin和ZO-1基因相对表达水平,下调肝脏组织TNF-α和INF-γ基因相对表达水平(P <0.05或P <0.01),并且能提高小肠组织occludin和ZO-1蛋白免疫组化阳性表达(P <0.05或P <0.01);与灌胃组比较,中药灌肠组的治疗效果更为明显(P <0.05或P <0.01)。【结论】调胃承气汤可上调GOS模型大鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin、ZO-1及下调体内炎性因子TNF-α、INF-γ的表达,从而修复肠黏膜屏障,治疗GOS,且灌肠疗法要优于灌胃疗法。

大豆球蛋白对仔猪小肠上皮细胞Occludin mRNA表达的影响

旨在研究纯化的大豆球蛋白对离体培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC细胞)通透性以及对细胞间紧密连接蛋白Occludin mRNA表达的影响。将不同浓度的大豆球蛋白(0～5.0mg·mL-1)与肠上皮细胞共同培养24h后,检测跨上皮细胞电阻值并用实时荧光定量PCR方法研究Occludin mRNA表达的变化规律。结果表明,与对照组相比,除大豆球蛋白浓度为0.5mg·mL-1时无明显变化,其他各浓度跨上皮细胞电阻值和Occludin mRNA相对表达量均呈显著下降趋势(P<0.001)。由此可知,大豆球蛋白使仔猪小肠上皮细胞通透性增加并使OccludinmRNA表达量下降,进一步明确了大豆球蛋白影响细胞增殖且对肠上皮细胞造成直接损伤,并破坏了肠上皮细胞完整性。

大鼠局灶性脑缺血再灌注血脑屏障超微结构及紧密连接蛋白Occludin变化的研究

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注模型血脑屏障(BBB)超微结构和Occludin的变化,探讨BBB的结构改变及Occludin的表达异常在再灌注损伤中的作用。方法雄性Wistar大鼠,随机分成假手术组、缺血2h再灌注3h、12h、24h、72h组,应用透射电镜、RT-PCR、免疫组化和Western Blot等方法观察再灌注后不同时相缺血区皮质BBB的超微结构,Occludin mRNA和蛋白水平的变化。结果局灶性脑缺血再灌注后,缺血区皮质BBB的超微结构受损,Occludin mRNA和蛋白表达水平下调。上述变化开始于再灌注后3h,再灌注24h达到高峰,72h开始减弱。结论脑缺血再灌注过程中,BBB的超微结构损伤及Occludin的表达下降加重了缺血再灌注损伤。

紧密连接蛋白Occludin在非酒精性脂肪肝大鼠肠上皮细胞中的表达及其与TNF-α的关系

目的:研究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠肠上皮细胞中紧密连接蛋白Occludin的表达及与肿瘤坏死因子α(TNF-α)的关系.方法:30只♂SD大鼠平均分为2组,对照组普通饮食,模型组给予高脂饮食,喂养12wk后处死.模型组肝脏HE染色显示脂肪肝造模成功.采用放免法检测血清TNF-α水平,取肝脏组织行免疫组织化学检测TNF-α的表达,取空肠组织应用免疫组织化学检测肠上皮细胞间紧密连接蛋白Occludin表达并电镜下观察肠上皮细胞间紧密连接部位的变化.结果:模型组血清TNF-α水平较对照组明显增高,差异具有统计学意义(3.21μg/L±0.45μg/Lvs2.10μg/L±0.29μg/L,t=-6.157,P<0.01).模型组大鼠肝脏TNF-α阳性物质主要分布在肝细胞的胞质,呈棕黄色细颗粒状,而对照组仅个别散在肝细胞阳性.对照组Occludin蛋白主要沿大鼠空肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,而模型组阳性染色较之明显减弱,呈非连续性分布.电镜下模型组紧密连接明显短于对照组,具有显著性差异(0.50μm±0.21μmvs0.78μm±0.19μm,P<0.05).结论:TNF-α可能抑制了空肠上皮细胞中紧密连接蛋白Occludin的表达,从而破坏了肠黏膜机械屏障,促进NAFLD的发生及发展.

暴发性肝衰竭时肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降

目的:研究暴发性肝衰竭小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达的变化.方法:BALB/c小鼠150只随机分为生理盐水对照组(n=30)、内毒素(LPS)对照组(n=30)、D-氨基半乳糖(D-GalN)对照组(n=30)和暴发性肝衰竭(LPS+GalN)组(n=60).采用D-GalN和LPS联合ip制备暴发性肝衰竭小鼠动物模型.应用免疫组织化学技术、Westernblot及实时定量PCR检测暴发性肝衰竭进程中,小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin的定位、表达及mRNA的变化.结果:occludin蛋白主要沿小鼠大肠黏膜上皮细胞膜的顶端呈线状分布,在暴发性肝衰竭组小鼠,6h时occludin的阳性染色开始减少,9h时更为明显.Westernblot结果与免疫组织化学结果相一致,6h时开始下降(0.48±0.07),9h达到最低值(0.36±0.05),与生理盐水对照组(0.71±0.09)相比差异显著(P<0.05).实时定量PCR结果显示,暴发性肝衰竭小鼠2h时occludinmRNA即开始下降(0.85±0.12),6h时达到最低值(0.72±0.04),与生理盐水对照组(1.00±0.05)相比有明显差异(P<0.05),9h时有所恢复(0.93±0.10).结论:在暴发性肝衰竭过程中,大肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降,其mRNA也呈下调趋势.

新葛根芩连汤对糖尿病脑病大鼠血脑屏障通透性及occludin/Claudins-5蛋白表达的影响

目的观察新葛根芩连汤对糖尿病脑病大鼠海马血脑屏障功能及occludin/Claudins-5蛋白表达的影响。方法以高脂饮食加链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病脑病模型,以新葛根芩连汤干预,8周后髂静脉注射Evans Blue观察血管神经屏障渗透状况,并检测紧密连接蛋白occludin/Claudins-5。结果模型组大鼠海马区Evans Blue外渗明显,药物治疗后中剂量组Evans Blue含量明显减低。模型组紧密连接蛋白occludin/Claudins-5表达均明显降低,治疗后表达明显增强。结论新葛根芩连汤可保护糖尿病脑病大鼠海马区血脑屏障,减少血脑屏障损害,机理可能与保护紧密连接蛋白occludin/Claudins-5有关。

Occludin表达与胃癌发生发展的相关性

目的:探讨Occludin mRNA、蛋白表达水平与胃癌发生发展、侵袭转移的关系。方法:应用组织芯片免疫组化染色和实时荧光定量PCR的方法,检测occludin在胃腺癌组织中的表达并分析其与临床特征的相关性。结果:免疫组织化学检测显示,Occludin在癌旁正常胃黏膜上皮中阳性表达率高于胃腺癌组织(96.9%vs85.4%,84.6%,89.2%,78.5%)(P<0.05);Occludin的表达水平与胃腺癌TNM分期和分化程度有关(P<0.05)。实时荧光定量PCR的检测结果显示,Occludin mRNA在胃癌组织和癌旁正常胃组织中的表达无明显差异(P>0.05)。结论:Occludin蛋白的表达水平与胃腺癌的发生发展和侵袭转移呈负相关。

谷氨酰胺对大鼠急性全脑缺血再灌注损伤后小肠黏膜Occludin蛋白表达的影响

目的:探讨谷氨酰胺对急性全脑缺血再灌注损伤时小肠黏膜Occludin蛋白表达的影响。方法:采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注动物模型。实验分4组,分别为假手术组、盐水对照组、奥扎格雷组和谷氨酰胺组,每组24只大鼠。建模成功后,盐水对照组立即腹腔注射2mL生理盐水;奥扎格雷钠组按33.67mg/kg腹腔注射奥扎格雷钠;谷氨酰胺组按33.67mg/kg腹腔注射奥扎格雷钠和按0.4g/kg腹腔注射体积分数20%的L-丙氨酸-L-谷氨酰胺双肽注射液。再灌注6、12及24h,每组各处死大鼠8只,取脑和小肠,光镜下观察脑组织海马区病理改变,免疫组化SP法测定小肠黏膜Occludin蛋白表达。结果:盐水对照组、奥扎格雷钠组和谷氨酰胺组于再灌注6、12和24h海马锥体细胞结构紊乱、边界模糊,在12和24h各时间点,4组大鼠肠黏膜Occludin蛋白表达差异有统计学意义(H=15.175和20.234,P均<0.001)。与假手术组比较,其余3组Ocdudin蛋白表达下降(P<0.05);与谷氨酰胺组相比,盐水对照组和奥扎格雷钠组表达下降(P<0.05)。结论:谷氨酰胺可以提高全脑缺血再灌注大鼠小肠组织中Occludin蛋白表达水平,从而减轻全脑缺血再灌注对小肠黏膜的损伤。

低氧对原代支持细胞增殖能力和occludin蛋白表达的影响

目的:观察低氧对原代大鼠睾丸支持细胞生长活性、occludin蛋白表达的影响。方法:18～22日龄Wistar大鼠,通过两步酶消化法,建立原代支持细胞培养体系,经油红O、免疫荧光法鉴定。传代后随机分为以下氧浓度组进行培养:20%、15%、10%、5%和1%。分别培养至6、12、24、48、72 h,CCK-8测定细胞增殖活性,West-ern印迹测定occludin蛋白表达量,并进行差异性分析。结果:油红O染色见胞质内脂滴染成红色,免疫荧光见FasL蛋白表达阳性,细胞纯度>95%。与20%氧浓度相比,细胞在15%和10%氧浓度下增殖率逐渐降低,5%和1%氧浓度下,细胞增殖率明显下降(P<0.01);从12 h开始,随着氧浓度降低和时间延长,occludin表达量明显下降(P<0.01)。结论:低氧会抑制支持细胞生长,并减少occludin蛋白表达。推测低氧环境损伤支持细胞参与的血睾屏障完整性,影响睾丸的生精过程。

大鼠脑缺血时紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5表达的变化

目的研究脑缺血后血脑屏障通透性和紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的变化。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,采用伊文氏兰(EB)法检测缺血后血脑屏障通透性的变化。应用免疫组织化学的方法观察occludin和claudin-5在缺血脑组织中的分布,采用RT-PCR、Wesrern blot法检测大鼠缺血脑组织occludin和claudin-5的mRNA和蛋白的表达变化。结果脑缺血2h后血脑屏障通透性显著增加(P<0.01),紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5在脑微血管内皮细胞上呈阳性表达,occludin和claudin-5的mRNA和蛋白均比正常对照组显著降低(P<0.01)。结论脑缺血时血脑屏障通透性的增加可能与紧密连接相关蛋白occludin和claudin-5的降低相关。

食管鳞状细胞癌中紧密连接蛋白occludin、ZO-1的表达及其临床意义

目的探讨紧密连接蛋白occludin及ZO-1在食管鳞状细胞癌及手术切缘正常食管黏膜组织中的表达及其临床意义。方法采用组织芯片和免疫组化法检测49例食管鳞状细胞癌患者的癌组织及手术切缘正常食管黏膜组织(距肿瘤组织>5 cm)中occludin和ZO-1的表达,分析食管鳞状细胞癌癌组织中occludin、ZO-1表达与肿瘤的增殖、侵袭和转移之间的关系。结果食管鳞状细胞癌组织中occludin及ZO-1的阳性表达明显低于手术切缘正常食管粘膜组织(P<0.01),且癌组织中occludin、ZO-1的表达与其分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌的occludin和ZO-1的表达下调或缺失与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移有关,在食管癌的进展中起重要作用。

阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其机制研究

背景:研究显示ERK信号通路激活可促进细胞生长,上调紧密连接蛋白occludin表达,而阿司匹林可抑制ERK的磷酸化激活。目的:探讨阿司匹林对人胃黏膜上皮细胞生长和occludin蛋白表达的影响及其可能机制。方法:建立人胃黏膜上皮细胞株GES-1单层细胞模型,MTT法检测阿司匹林(5～20 mmol/L)和MEK抑制剂U0126(10～40μmol/L)对GES-1细胞的生长抑制作用。将GES-1细胞分为阿司匹林(8.78 mmol/L)组、U0126(14.91μmol/L)组、联合组(U0126+阿司匹林)和阴性对照组,倒置相差显微镜下观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测p-ERK1/2、occludin蛋白表达。结果:阿司匹林和U0126均能剂量依赖性地抑制GES-1细胞生长,联合组细胞凋亡较两药单用更为显著,贴壁细胞数量减少更为明显,细胞变圆、悬浮。阿司匹林组、U0126组和联合组p-ERK1/2、occludin蛋白表达量均显著低于阴性对照组,U0126组和联合组降低更为明显。结论:阿司匹林可抑制人胃黏膜上皮细胞生长,下调occludin蛋白表达,其机制至少部分与抑制ERK信号通路激活有关。

法舒地尔通过诱导EAE小鼠Occludin表达抑制其炎性细胞浸润

目的观察法舒地尔(Fasudil)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型的治疗效果并探讨其作用机制。方法采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)免疫建立国际标准的小鼠EAE模型。将免疫后的42只雌性C57BL/6小鼠随机分为EAE组、Fasudil早期治疗组和Fasudil晚期治疗组。Fasudil早期治疗组即免疫后第3天按体质量40mg/(kg.d)腹腔注射Fasudil,1次/d,至免疫后30d;Fasudil晚期治疗组即免疫后首只小鼠出现症状即开始腹腔注射Fasudil,注射方法和剂量同Fasudil早期治疗组;与晚期治疗组给药同一时间,给予EAE组等量生理盐水作为对照。免疫后隔天观察各组小鼠临床评分和体质量变化。于免疫30d后处死动物,分离小鼠脊髓腰膨大和脑冠状位中部1/3处做冷冻切片,行HE染色和免疫荧光染色。同时提取小鼠脊髓蛋白检测Occludin蛋白的表达。结果 Fasudil可改善EAE的临床症状,抑制脑血管内皮细胞Rho激酶(ROCK)活性。与EAE组相比,Fasudil早期治疗组和晚期治疗组CD31阳性内皮细胞上p-MYPT1表达均减弱(P<0.01,P<0.05),起病时间均延长(P<0.01,P<0.05),脊髓Occludin蛋白表达均增加(P<0.05)。结论 Fasudil对EAE具有治疗的潜能,其机制可能为通过抑制血管内皮细胞ROCK活性,参与诱导内皮细胞紧密连接蛋白Occludin的表达,从而抑制炎性细胞的中枢浸润,最终阻止疾病的发生和发展。

感染后肠易激综合征小鼠IL-17、occludin和ZO-1的动态改变

【目的】观察感染后肠易激综合征小鼠肠组织中IL-17、occludin和ZO-1的动态改变。【方法】40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、感染组(感染后2、4、6、8周组)。感染组小鼠用0.2 mL含400~500条旋毛虫的生理盐水灌胃。于感染后2、4、6、8周,记录小鼠体质量,检测腹壁撤退反射(AWR),连续8 h收集小鼠粪便,计算粪便含水百分数。HE染色观察肠道病理改变,免疫组织化学法及Western blotting检测回盲部和结肠中IL-17、occludin和ZO-1的表达。【结果】感染后第2周小鼠肠道出现急性炎症反应,体质量显著降低(P=0.000);至第8周肠道炎症和小鼠体质量基本恢复至正常。结直肠扩张容量为0.35和0.5 mL时,感染组AWR评分均高于对照组(P<0.01)。感染组粪便含水百分数均高于对照组(P<0.05)。免疫组化及Western blotting结果显示:与对照组相比,感染后2周组IL-17降低(P<0.05),感染后8周组IL-17增高(P<0.05);感染组occludin和ZO-1均低于对照组(P<0.05)。【结论】IL-17的动态改变及紧密连接蛋白occludin和ZO-1的减少可能是导致PI-IBS小鼠内脏高敏感性和粪便含水百分数增高的原因之一,参与了PI-IBS的发生。