PCR-SSP法进行HLA分型的影响因素分析

目的 :探讨DNA模板质量、DNA聚合酶 (Taq)用量对人类白细胞抗原 (HLA)分型结果的影响 ,从而确定PCR 序列特异性引物 (PCR-SSP)技术的更加优化的扩增体系。方法 :采用PCR 序列特异性引物 (PCR-SSP)的方法 ,对山西地区 14 40 0名骨髓供者的血样进行了人类白细胞抗原 (HLA)基因分型 ,回顾性分析DNA模板的纯度、DNA用量、DNA聚合酶 (Taq)酶用量对HLA分型结果的影响。结果 :每个PCR反应的DNA模板量在 3 0ng～ 5 0ng之间时PCR扩增效果最优 ;每个PCR反应所用Taq酶为 0.2 3U时PCR扩增效果最优。结论 :DNA模板量和Taq酶用量是使用PCR-SSP技术进行HLA分型的主要影响因素 ;模板DNA的纯度对实验结果影响不大。

PCR-SSP法检测A^(1,2)BO^(1,2)血型基因型

目的 为了建立A1,2 BO1,2 血型系统基因分型的方法 ,以检测人群中A1、A2 、B、O1、O2 基因的频率。方法 采用盐析法进行样品DNA的抽提 ,采用PCR SSP法进行A1,2 BO1,2 血型基因分型。结果 15 8例中A1,2 BO1,2 系统基因频率分别是A1为 18 7% ,A2 为 0 6 % ,B为 17 4% ,O1为 6 2 3% ,O2 为 0 9%。结论 该方法可鉴定出A1,2 BO1,2 血型系统基因 ,中国人群中存在O2 基因。

PCR-SSP法检测胎儿、新生儿ABO血型

目的 研究用PCR SSP法鉴定胎儿、新生儿血型及基因型。方法 用PCR SSP法检测 5 6例 16周以上孕妇的胎儿、新生儿脐血红细胞基因型 ;用常规法检测双亲及胎儿、新生儿血红细胞ABO血型。结果 用PCR SSP法检测出全部 5 6例脐血ABO血型及基因型 ;PCR SSP法检测出的子代血型与由父母血型按孟德尔遗传规律推测的子代血型符合率达 10 0 % ;用常规法检测脐血ABO血型 ,检出率为 87.5 %。结论 PCR SSP法检测子代ABO血型方法可靠 。

流式细胞术与PCR-SSP法检测HLA-B27的比对及HLA-B27亚型的研究

目的探讨流式细胞术(FCM)与序列特异性引物聚合酶链式反应(PCR-SSP)在人类白细胞表面抗原-B27(HLA-B27)检测中的应用,并观察HLA-B27亚型在本地区的分布情况。方法采用PCR-SSP和FCM检测88例疑似强直性脊柱炎(AS)患者HLA-B27。结果 88例AS疑似患者中FCM法检测HLA-B27结果阳性82例,阴性6例,阳性率为93.2%;PCR-SSP法检测阳性83例、阴性5例、阳性率为94.3%。分型结果 B*2705型41例占49.4%;B*2704型37例占44.5%;B*2702型1例占1.2%;阳性但未分辨型别4例。结论 Kappa一致性系数K=0.905,PCR-SSP法与FCM检测HLA-B27结果具有较高的一致性。本地区易感HLA-B27等位基因亚型主要以HLA-B*2704和HLA-B*2705为主。

多重PCR-SSP方法在RHD基因检测中的应用

目的应用分子生物学诊断方法分析RhD阴性献血者的RHD基因。方法首先采用多重PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)方法扩增377名RhD阴性无偿献血者的RHD基因特异性内含子4和外显子7,对扩增结果为阴性的标本则继续采用PCR-SSP检测RHD基因启动子和外显子10。结果 337名RhD阴性无偿献血者中,24.92%(84/337)为RHD基因内含子4和外显子7阳性,余253例内含子4和外显子7阴性标本中的8.69%(22/253)为启动子和外显子10阳性;本组RhD阴性无偿献血者的RHD基因阳性率为31.45%(106/337)。结论多重PCR-SSP方法检测RHD基因简单易行,可用于对血清学RhD阴性者的RHD基因确认。

PCR-SSP基因分型技术检出HLA-B新等位基因B＊5516一例

目的 识别确认中国人群的HLA新等位基因。方法 使用PCR SSP以及以测序为基础的分型技术 ,分析HLA新等位基因和B 5 5 0 2基因顺序的差异及血清学方法分析特异性。结果 在四川成都骨髓供者中检测出一例新的HLA B等位基因。该基因和B 5 5 0 2基因顺序的差异 ,只是在外显子 2区域中 97C >A一个碱基取代 ,导致相应的密码子 33由酪氨酸变为组氨酸。血清学分析表明B 5 5 16与B2 2特异性相关。并由此建立起PCR SSP方法鉴定B 5 5 16基因。结论 四川成都骨髓库中检出的HLA B等位基因是HLA新等位基因 ,2 0 0 3年 8月已被世界卫生组织 (WHO)命名为HLA B 5 5 16。在大约 14 0 0例随机骨髓供者中 ,未发现其他带有B 5 5 16基因的个体。

采用PCR-SSP方法检测强直性脊柱炎患者HLA-B27亚型

目的 建立序列特异性引物 聚合酶链方法 (PCR SSP)检测湖北地区人白细胞抗原B2 7(Humanleucocyteanti gen B2 7,HLA B2 7)阳性强直性脊柱炎患者的HLA B2 7亚型组成。方法 盐析法提取 10 0例HLA B2 7阳性的强直性脊柱炎患者外周血基因组DNA ,采用PCR SSP技术分别进行HLA B位点基因型检测和HLA B2 7基因亚型分析。结果 10 0例标本PCR SSP扩增均获成功 ,历时 3h。共检出 4种亚型 :HLA B 2 70 4、HLA B 2 711、HLA B 2 715、HLA B 2 72 2。其中HLA B 2 70 4纯合子 2 5例、HLA B 2 70 4杂合子 63例 ;HLA B 2 711杂合子 5例 ;HLA B 2 715杂合子 6例 ;HLA B 2 72 2杂合子 1例。四种亚型所占构成比分别为 90 4%、4%、4 8%和 0 .8%。结论 PCR SSP方法进行HLA B2 7亚型分析 ,快速、经济、简单 ;HLA B 2 70 4是湖北地区强直性脊柱炎患者HLA B2 7基因主要亚型。

血型血清学和PCR-SSP方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用

目的探讨血型血清学技术和聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)方法在ABO疑难血型鉴定中的互补性应用。方法采用血型血清学方法对14例ABO疑难血型标本做正反定型(必要时进一步做吸收放散试验),同时采用PCR-SSP方法对其做ABO基因分型。结果 14例ABO疑难血型标本的血清学检测:Bx型3例,B(A)、AB3型各2例,Bend、B3、AxB、ABx和Bel型各1例;另有2例为AB型伴抗原减弱(不排除疾病等因素影响)。PCR-SSP方法分型:得到7例ABO亚型基因,分别为Bx02O01、B(A)02O02、AB305、AB303、ABw12、Bw12O02和Bw12O01;7例正常的ABO基因,AB1、B1O01各3例,B1O02型1例。结论 PCR-SSP方法在疑难血型鉴定中的应用有助于输血前检查中ABO血型血清学结果的补充。

应用PCR-SSP进行HLA-AB基因分型及与血清学方法的比较

目的 建立HLAI类基因分型技术并应用于骨髓配型。方法 采用序列特异性聚合酶链反应 (PCR SSP)进行HLA AB基因分型 ,并与HLAI类血清学分型 (微量淋巴细胞毒试验 )进行比较。结果 运用PCR SSP技术共对 2 2例需骨髓移植的病人和 48例供者进行基因分型 ,2例病人确认了HLA完全匹配的亲缘骨髓供者 ,其中 1例已成功进行了骨髓移植 ;基因分型和血清分型比较 ,43例结果完全一致 (6 1.4% ) ,血清分型错误率高达 38.6 % (2 7/ 70 )。结论 PCR SSP分型技术具有准确性高 ,简便快速等优点 。

应用PCR-SSP方法检测HLA-B27亚型及其临床意义

[目的]通过PCR-SSP方法对HLA-B27亚型进行检测,探讨其与强直性脊柱炎(AS)的相关性,并对大连地区B-27分型情况进行研究。[方法]对40例确定为HLA-B27阳性的样本(临床诊断28例AS,12例非AS)采用序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)检测方法进行HLA-B27亚型分型。[结果]40例样本用PCR-SSP方法检测均获成功。共检出4种亚型:B2704、B2705、B2702和B2710。B2704 23例占57.5%(23/40例);B2705 14例占35%(14/40例);B2702 2例占5%(2/40例);B2710 1例占2.5%(1/40例)。28例AS标本与12例非AS标本中B2704、B2705所占比例统计学分析无显著差异(B2704χ2=0.5894,P>0.05;B2705χ2=0.02,P>0.05)。[结论]PCR-SSP方法对HLA-B27基因分型,分辨度高、特异性强、快捷、准确,适合于临床应用。HLA-B27亚型的检测可作为强直性脊柱炎诊断(AS)的重要的参考指标。大连地区HLA-B27亚型以B2704和B2705为主并出现1例B2710型。

用PCR-SSP分析HLA-B位点血清学分型困难标本

目的 :对血清学HLA B位点分型困难标本用PCR SSP方法分析 ,并寻找血清分型效果不佳原因。方法 :用本室建立的PCR SSP方法对 10 0株标准细胞及 91份血清学分型困难标本分别作HLA B位点分析 ,前者作为PCR SSP方法的参考对照品。结果 :10 0株标准细胞分析结果与已知结果一致 ;91份疑问标本均顺利地用PCR SSP分型 ,结果共有 70种等位基因格局 ,其中 36种与血清学完全不同 ,占 5 2 %。PCR SSP还检出了一些原先认为上海人中空白的基因 ,如B49。结论 :从PCR SSP分型结果推断血清学部分标本分型结果不佳的原因是缺少单价抗血清 ;同一交叉反应组内错检 ;反应强度不当 ,导致结果难辨 ;操作中跨孔污染。而PCR SSP就没有这方面的问题。证实了本室建立的PCR SSP法可作为准确可靠的HLA

用PCR-SSP方法对血小板抗原-1基因分型

人类血小板特异性抗原（ｈｕｍａｎｐｌａｔｅｌｅｔａｎｔｉ－ｇｅｎ，ＨＰＡ）的分型对于诊断同种免疫血小板减少性紫癜、输血后紫癜以及血小板输注无效等具有重要意义［１］。已发现的ＨＰＡ至少有１６个，其中血小板特异性抗原系统－１（ＨＰＡ－１）的对偶抗原有ａ、...

HLA-DRB1基因芯片与PCR-SSP分型的比较

目的 比较基因芯片和PCR SSP用于汉族南方人群HLA DRB1基因分型的结果 ,评价分型芯片的准确性。方法 77份待分型样本 ,分别用等位基因特异的PCR SSP和基因分型芯片对DRB1分型。芯片分型通过组间特异引物扩增基因组DNA ,扩增中用荧光标记。扩增标记后的产物与分型芯片的探针杂交 ,通过杂交产生的荧光信号确定样品的HLA DRB1基因亚型 ,比较两种方法分型所获得的结果 ,不吻合的样本全部经第三方验证或测序。结果 77份样本 ,两种方法分型全部成功。分型结果的吻合率为 93 %。不吻合样本 6份 ,其中SSP定型纯合子 4份 ,芯片分型全部为杂合子。经第三方验证 ,证实芯片对纯合子和杂合子的分型全部正确。另外 2份不吻合的样本经测序 ,证实SSP分型错误 1份 ,芯片分型错误 1份。芯片的重复率为 96%。结论 基因芯片是一种理想的分型方法 ,具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少。

HLA类基因PCR-SSP分型技术在骨髓移植配型中的应用

目的建立快速、准确的 HL A基因分型方法 ,满足临床移植配型的需要。方法通过序列特异性引物聚合酶链反应 (PCR- SSP) ,对拟行骨髓移植的 10例血液病患者及 12名相关供者的 HL A- 类基因 DRB1,DQB1位点扩增 ,琼脂糖凝胶电泳分析 PCR产物并确定其基因型。结果发现 2例患者与其相关供者 HL A- DRB1,DQB1基因全相同 ,其中 1例成功进行了骨髓移植。结论该方法具有快速准确、特异性高、简便省时的特点。

中华(江苏)骨髓库人群HLA-Ⅰ类抗原的PCR-SSP分型

目的分析中华(江苏)骨髓库HLAⅠ类抗原的分布特点。方法采用序列特异性引物(PCR SSP)基因分型技术,对中华(江苏)骨髓库初期的骨髓捐献志愿者的HLA A、B位点上的等位基因作低分辨基因分型,计算HLA A、B的基因频率、由基因分型结果指定的抗原特异性频率(以下简称抗原频率)、HLA A、B位点单倍型频率和连锁不平衡参数,获取中华(江苏)骨髓库HLAⅠ类抗原多态性分布的初步资料。结果中华(江苏)骨髓库志愿者中,A位点抗原频率较高的是A2、A11和A24,分别为0.5087,0.3505和0.3056;而A74的频率最低(0.0009);B位点抗原频率较高的是B13、B46和B60,分别为0.2372,0.1772和0.1603,频率较低的是B78(0.0002)。连锁不平衡参数>0的单倍型有80余种,最常见的单倍型有A33B58、A2B62、A2B13、A33B44、A30B13等。结论了解中华(江苏)骨髓库志愿者HLA遗传学分布特点,为器官或干细胞移植配型和疾病相关性分析提供了有价值的基础性资料。

PCR-SSP法在ABO 疑难血型鉴定中的临床应用

目的应用PCR-SSP法对临床ABO疑难血型的标本做血型基因的检测,为临床准确、快速的确认患者血型提供依据和实验室检测方法,保障输血的安全性和有效性。方法从本院临床科室2016年1月—2017年2月,送检输血科经常规血清学检测为疑难血型的标本中,选择典型的20例,采用PCR-SSP法作ABO基因分型,根据基因分型的结果,结合血清学的反应格局,分析正反定型不符产生的原因和提出处理对策。结果 20例ABO疑难血型通过PCR-SSP方法确证了其中5例为亚型,其余的15例血型基因表达正常而血清学难以判断的原因是由于疾病、多次输血等原因,造成抗原或抗体减弱或增多所致。通过检出的基因型证实了相应基因的存在并得以最终确定血型。结论 PCR-SSP方法用于临床ABO疑难血型,能在较短时间内,对血清学无法判别的疑难血型做出准确的定型。

利用PCR-SSP法研究肺腺癌细胞系A549、Calu-6的HLA-ABDR等位基因

背景和目的已有的研究表明人类白细胞抗原(HLA)在抗原呈递及T细胞识别抗原的过程中起关键作用,此外还与肿瘤细胞的免疫杀伤及免疫逃避有着密切的关系。本研究探讨了人肺腺癌细胞系A549、Calu6中HLA-A、HLA-B、HLA-DR等位基因的存在状况。方法分离A549、Calu6细胞DNA,分别行PCRSSP法扩增、电泳后紫外透射扫描,根据反应格局表对HLA-A、HLA-B、HLA-DR进行判定。结果A549与Calu6细胞中HLAA、HLAB基因较杂合子均有缺失,而HLA-DR基因无缺失。A549细胞HLAABDR的基因分型为HLA-A30、HLA-B44、HLA-DR7/HLADR53。Calu6细胞HLAAB-DR的基因分型为HLAA01、HLAB08、HLADR17/HLADR52。结论肺腺癌中存在HLAⅠ和HLAⅡ基因。HLAⅠ基因可能在肿瘤细胞传代过程中发生选择性丢失,而HLA-DR基因完整保留。检测肿瘤HL-A对了解其免疫学行为及建立肿瘤特异性杀伤淋巴细胞(CTL)模型具有重要意义。

PCR-SSP法检测华南地区汉族人群Duffy血型的基因分型研究

目的 填补Duffy血型基因型分布在国内的空白。方法 采用分了生物学技术(PCR-SSP)进行DNA水平的检测。结果 华南地区汉族人群Duffy基因型的基因频率分别为Fy^a=0.95,Fy^b=0.05;检出2例Fy(a-b-)个体。结论 PCR-SSP法检测Duffy基因型准确且成本降低;进一步的调查对Fy基因可望有新的认识。

PCR-SSP法在ABO疑难血型鉴定中的应用

目的采用PCR-SSP法检测ABO基因型。方法 ABO血型血清学正反定型不符样本10个,用PCR-SSP法检测其基因型。结果 10个疑难血型标本PCR-SSP法均得出明确的ABO血型结果。结论 PCR-SSP法检测ABO血型方法可靠,可应用于临床输血。