应用PCR-SSP方法分析部分中国南方汉族人群HLA-DQB1位点等位基因的多态性

目的 :检测和分析部分中国南方汉族人群HLA DQB1位点等位基因的多态性。方法 :应用聚合酶链反应 -序列特异性引物法 (PCR SSP)对 10 1名健康、无血缘关系的中国南方汉族人进行HLA DQB1分型。结果 :所检测的 8个HLA DQB1靶等位基因均有检出 ;频率最高的为DQ 2 ,3 (7,9) ,其等位基因频率 (GF)为 41 14 % ;最低的为DQ4,其GF为 7 19%。结论 :中国南方汉族人的HLA DQB1等位基因的分布具有民族和地域特征 ,与白人、黑人和日本人的HLA DQB1等位基因分布有差异。

Mur血型分子诊断方法的建立与应用

目的建立Mur血型的分子生物学诊断方法。方法根据Mur血型的分子背景,设计特异性引物,采用PCR-SSP技术,优化反应体系及扩增参数,建立Mur血型分子检测方法;同时采用标准抗血清、标准细胞,用血清学方法予以验证并初步应用于献血者Mur血型的检测。结果建立了Mur血型PCR-SSP检测方法,用以检测14份已知抗-Mur阳性或阴性的献血者标本,同时用血清学方法平行检测:抗-Mur阳性11/11、抗-Mur阴性3/3,结果完全一致;用本法对随机抽取的107名献血者血样检测,检出2例阳性,同时采用标准抗血清用血清学方法所做的复核结果也完全一致。结论所建立的Mur血型PCR-SSP检测方法可以准确地检出Mur抗原,弥补了Mur血型血清学检测方法的局限性,有助于Mur血型检测方法的标准化、规范化。

福建汉族系统性红斑狼疮与HLA-DR基因的关联研究

目的 探讨 HL A- DR多态性与 SLE的易感性关系。方法 用聚合酶链反应 -序列特异引物 (PCR- SSP)方法 ,对 80例 SLE患者和 1 0 4例健康人 HLA- DR基因进行研究。结果 SL E患者 DR1 5基因频率明显升高 (P<0 .0 0 1 ,RR=3.86) ,DR3、 DR4基因频率显著下降 (P<0 .0 5,RR=0 .48;P<0 .0 5,RR=0 .38) ,DR1 5阳性的患者中狼疮性肾炎发病率高于其它患者 (P<0 .0 5,RR=3.1 5) ,抗 SSA抗体也明显升高 (P<0 .0 5,RR=3.46)

基因分型在疑难血型中的诊断意义

ABO血型抗原在某些疾病状况下会出现减弱或消失等情况,血型鉴定困难,用血清学方法有时不能完全准确定型,造成不能及时准确配型延误救治。采用PCR-SSP方法对疑难血型准确定型有效解决疑难血型鉴定困难问题,是对血型学方法的有益补充。我们收集2010年10月-2011年9月共10例疑难血型,进行基因分型并正确定型,报告如下。

参照链介导的构象分析策略在HLA-B位点分型中的临床应用研究

目的建立并稳定HLAB位点的参照链介导的构象分析(RSCA)系统,并鉴定RSCA分型策略的优势。方法提取27例造血干细胞移植患者及63名供者的外周血DNA,采用RSCA进行HLAB位点分型,并与序列特异性引物聚合酶链反应技术(PCRSSP)分型结果进行比较,对于疑难标本采用测序鉴定。结果在90份标本中,87份(96.7%)可明确判定结果,其中有1份标本与PCRSSP结果不一致,经测序鉴定RSCA结果正确;67份(74.4%)可直接指定等位基因型别。此外,1份标本(1.1%)因PCR扩增结果太弱而未能获得RSCA分型结果,2份标本只能确定1条等位基因,经测序发现另1条等位基因为已知等位基因,但RSCA数据库中没有其数据。随机选择20份标本进行RSCA重复性实验,重复率为100%。在PCRSSP方法分型中,约有10%的标本需要重复1～3次方能判定结果。结论RSCA具有灵敏、特异、分辨率高、重复性好、可发现变异基因及新的等位基因、大规模和低成本等优点,适用于大规模的无关移植供、受者的选择。

中国北方汉族人群强直性脊柱炎与HLA-B27亚型关联性研究

强直性脊柱炎（AS）患者131例，根据患者民族、籍贯挑选出北方汉族群体，临床均符合1984年AS纽约修订诊断标准。男女比例2．68：1，年龄5～69岁，平均25岁；采用微量淋巴细胞毒实验，筛选出118例HLA-B27阳性样本；正常对照组，从4202名中国北方汉族群体，主要包括北京、河北、河南、山东、辽宁、黑龙江、山西、陕西等近10个省市造血干细胞供者中，采用流式反向PCR-SSO（One Lambda ，RSSO1B，RSSO281）方法检测出150名HLA-B27阳性样本。采用PCR-SSP方法，以中国北方汉族HLA-B27（＋）的AS患者为研究对象。150例北方汉族HLA-B27（＋）正常健康人为对照，对B27基因亚型与AS关联性进行分析。