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RNAi在水稻病虫害防控中的应用研究进展
1
作者 饶玉春 吴日成 +1 位作者 刘富远 戴若惠 《浙江师范大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第4期361-369,共9页
近年来,来自病原微生物和各类害虫的威胁限制了水稻的生长发育和稳产,亟需一种绿色可控的技术进行有效的生物防治.RNAi技术能够使病虫害相关基因表达下调,具有特异性强、安全性高等优点,相较于化学农药防治,RNAi技术大大降低了非靶标生... 近年来,来自病原微生物和各类害虫的威胁限制了水稻的生长发育和稳产,亟需一种绿色可控的技术进行有效的生物防治.RNAi技术能够使病虫害相关基因表达下调,具有特异性强、安全性高等优点,相较于化学农药防治,RNAi技术大大降低了非靶标生物(non-target organisms, NTOs)的危害.在农业领域,RNAi技术被寄予厚望,被誉为“农药史上的第三次革命”.通过查阅国内外相关文献,并分析、归纳后,综述了近年来RNAi在水稻抗病毒中的作用研究进展,重点阐述了水稻抗病虫害领域应用的最新研究成果,并针对RNAi沉默效率低、稳定性差等问题提出了不同RNAi的增强策略,为实现水稻病虫害精准高效的防治提供现实依据. 展开更多
关键词 rnai 水稻 病虫害防控 作用模型 策略
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基于RNAi的生物农药研究进展
2
作者 路子琪 王静 +3 位作者 张震 王教瑜 孙国仓 林福呈 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期968-977,共10页
化学农药的大量使用产生的病虫害抗性、环境污染和农产品安全等一系列问题,使得新型可持续的植物保护策略成为农业绿色发展的必然要求。近年来,RNAi在植物病虫害防控中的应用潜力得到越来越多的关注,基于RNAi的生物农药(即核酸农药)的... 化学农药的大量使用产生的病虫害抗性、环境污染和农产品安全等一系列问题,使得新型可持续的植物保护策略成为农业绿色发展的必然要求。近年来,RNAi在植物病虫害防控中的应用潜力得到越来越多的关注,基于RNAi的生物农药(即核酸农药)的研发越来越迅速。核酸农药以喷雾诱导基因沉默(SIGS)为基础,通过外源施用针对靶标病原菌或害虫的dsRNA,即可触发RNAi从而抑制病原菌或害虫,实现对靶标病虫害特异性控制。由于核酸农药具靶标特异性、环境友好、不易产生抗性等优势,相关研究和开发进程日益加快,使之有望成为化学农药的重要补充或替代。文章对核酸农药的作用机制、研究进展、产品研发和应用现状,在商业化和使用过程中的风险以及需要注意的问题进行了综述,以期为相关研究提供参考。 展开更多
关键词 核酸农药 rnai DSRNA 病虫害防控
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甜菜BvPCNA基因RNAi载体构建
3
作者 王希 张西宁 +3 位作者 陶艳昵 张琦 李志烨 赵春雷 《中国糖料》 2024年第2期9-16,共8页
【目的】增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)在植物中广泛存在,但是其在植物中的功能研究较少。本研究可以为BvPCNA-like基因的功能分析奠定基础。【方法】课题组前期在甜菜基因组中克隆获得一个基因位点,命名为... 【目的】增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen, PCNA)在植物中广泛存在,但是其在植物中的功能研究较少。本研究可以为BvPCNA-like基因的功能分析奠定基础。【方法】课题组前期在甜菜基因组中克隆获得一个基因位点,命名为BvPCNA-like基因,本研究以BvPCNA-like基因的克隆载体为初始材料,选取适宜的靶序列,利用植物表达载体pFGC5941作为基础载体,使靶序列上游启动子为35 S,植物筛选标记为抗除草剂基因BlpR,设计靶序列特异性引物,采取PCR-酶切-连接方法,构建BvPCNA-RNAi载体。【结果】通过RCR鉴定表明已获得了预期目标载体,插入片段由正向靶序列BvPCNA-F、中间片段、反向靶序列BvPCNA-R组成,靶序列长度为320 bp。【结论】本研究所得载体适用于对双子叶植物进行遗传转化,可以作为BvPCNA-like基因理论研究或应用研究的载体材料。 展开更多
关键词 甜菜 BvPCNA-like rnai 载体构建
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植物非细胞自主性RNAi及其应用研究进展
4
作者 李琳 吴风光 +3 位作者 何结旺 王豹祥 张明月 邱立友 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第11期1-4,共4页
非细胞自主性RNAi是发生于那些非应用或非产生dsRNA的细胞或组织中的RNAi,包括系统性RNAi和环境RNAi。系统性RNAi是沉默现象从一个细胞扩散到另一个细胞或从一个组织扩散到另一个组织的过程,环境RNAi是细胞从环境中吸收dsRNA而触发的RNA... 非细胞自主性RNAi是发生于那些非应用或非产生dsRNA的细胞或组织中的RNAi,包括系统性RNAi和环境RNAi。系统性RNAi是沉默现象从一个细胞扩散到另一个细胞或从一个组织扩散到另一个组织的过程,环境RNAi是细胞从环境中吸收dsRNA而触发的RNAi。近年来,植物非细胞自主性RNAi研究取得了较大进展,就其机制及应用进行了评述,首次提出在植物中也有环境RNAi存在。 展开更多
关键词 植物 非细胞自主性rnai 系统性rnai 环境rnai 机制 应用
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RNAi在药物研究中的研究进展
5
作者 朱联九 张盛周 《三明学院学报》 2009年第4期456-460,共5页
RNA干扰是双链RNA分子在mRNA水平上诱发的序列特异性的转录后基因表达沉默。随着RNAi分子机制研究的深入和应用的发展,RNAi已经应用在药物研究的各个领域,特别在药物开发上能够解决一些如药物靶点的鉴定、优化药靶等瓶颈问题,在节约研... RNA干扰是双链RNA分子在mRNA水平上诱发的序列特异性的转录后基因表达沉默。随着RNAi分子机制研究的深入和应用的发展,RNAi已经应用在药物研究的各个领域,特别在药物开发上能够解决一些如药物靶点的鉴定、优化药靶等瓶颈问题,在节约研发时间的同时加速药物的临床研究。RNAi是药物研究的领域具有很大潜力的新型技术工具。 展开更多
关键词 rnai SIRNA rnai药物 rnai修饰
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RNAi技术在烟粉虱基因功能和防控研究中的应用
6
作者 韦焕文 苏润馨 +1 位作者 吴屿瞳 史晓斌 《生物灾害科学》 2024年第3期321-330,共10页
烟粉虱(Bemisia tabaci)是一种世界性蔬菜害虫,可传播多种植物病毒,影响植物生长发育,导致蔬菜产量下降。烟粉虱的防治以化学防治为主,但过度使用杀虫剂导致烟粉虱的抗药性不断增强,绿色防控的需求日益增加。RNA干扰(RNA interference,R... 烟粉虱(Bemisia tabaci)是一种世界性蔬菜害虫,可传播多种植物病毒,影响植物生长发育,导致蔬菜产量下降。烟粉虱的防治以化学防治为主,但过度使用杀虫剂导致烟粉虱的抗药性不断增强,绿色防控的需求日益增加。RNA干扰(RNA interference,RNAi)是一项特异性沉默靶标基因技术,广泛应用于昆虫的基因功能研究和绿色防控。通过介绍RNAi作用原理和RNAi在烟粉虱的基因功能,总结了RNAi在烟粉虱的防控应用和RNA农药的应用现状,为烟粉虱的新靶点研究和开发RNA农药进行烟粉虱防控应用提供参考。 展开更多
关键词 rnai 烟粉虱 基因功能 RNA农药 生物防治
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RNAi技术在植物功能基因组学中的研究进展 被引量:24
7
作者 李丽文 朱延明 +2 位作者 李杰 柏锡 才华 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第1期119-124,共6页
文章主要综述了RNA干涉(RNAi)技术在植物功能基因组学中的研究策略及研究现状,包括RNA干涉的作用机制及技术特征,引发植物RNAi机制的转基因RNAi技术以及病毒介导的基因沉默技术。转基因RNAi技术方面,包括载体结构的优化策略、高通量载... 文章主要综述了RNA干涉(RNAi)技术在植物功能基因组学中的研究策略及研究现状,包括RNA干涉的作用机制及技术特征,引发植物RNAi机制的转基因RNAi技术以及病毒介导的基因沉默技术。转基因RNAi技术方面,包括载体结构的优化策略、高通量载体的构建方法以及该技术的优缺点。病毒介导的基因沉默技术方面包括病毒载体及宿主种类,病毒感染方法,试验对照的建立、环境因素的影响以及该技术的优缺点。 展开更多
关键词 rnai 转基因rnai 病毒介导的基因沉默
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蓖麻毒蛋白A链基因RNAi转化研究 被引量:3
8
作者 陈永胜 王永佳 +3 位作者 王莹 黄凤兰 李国瑞 王文跃 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期39-42,共4页
通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡... 通过基因沉默技术调控蓖麻毒蛋白A链基因的表达,以期获得低毒蓖麻新材料。利用基因克隆技术获得蓖麻毒蛋白A链基因762bp片段,命名为RTA基因。进一步利用该基因构建了植物RNAi表达载体pBI-RTA-S-AS,通过农杆菌介导法转化蓖麻子叶节,用卡那抗性筛选转化再生植株,PCR进一步鉴定转基因植株。结果表明:克隆得到目的基因长762bp,与预期结果一致;卡那抗性筛选和PCR鉴定结果显示,获得了3株转基因阳性植株。 展开更多
关键词 蓖麻毒蛋白 rnai rnai表达载体 遗传转化
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RNAi技术研究进展 被引量:4
9
作者 陈克平 唐旭东 《江苏大学学报(自然科学版)》 EI CAS 2004年第4期336-340,共5页
RNAi是由双链RNA引起的基因沉默现象,它通过降解具有同源序列的mRNA起作用,特殊设计的siRNA能使目的基因发生特异性沉默.目前,获得siRNA已经非常方便,导入方式最常用的是微注射.RNAi技术有编码区RNAi和启动子区RNAi两大类,均可以产生类... RNAi是由双链RNA引起的基因沉默现象,它通过降解具有同源序列的mRNA起作用,特殊设计的siRNA能使目的基因发生特异性沉默.目前,获得siRNA已经非常方便,导入方式最常用的是微注射.RNAi技术有编码区RNAi和启动子区RNAi两大类,均可以产生类似基因敲除的功能,在家蚕功能基因的研究中已经使用了这种方法.随着RNAi技术的不断进步,RNAi可广泛地应用到功能基因组学,药物靶点筛选,疾病治疗等方面. 展开更多
关键词 rnai 基因功能 rnai技术
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RNAi的技术研究进展 被引量:2
10
作者 张金洲 项智锋 +1 位作者 李学斌 王清华 《河南科技学院学报》 2008年第3期57-60,共4页
RNA干扰是一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。本文对RNA i的发现过程及作用机理进行了综述,本技术已经成为最近生物医学... RNA干扰是一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。本文对RNA i的发现过程及作用机理进行了综述,本技术已经成为最近生物医学领域的焦点之一,将应用于基因功能和信号传导系统,上下游分子相互关系的研究可能为肿瘤基因治疗提供新的策略,在病毒性、寄生病原性、突变基因、癌基因和癌相关基因表达引起的疾病的基因治疗之中也有了新的突破。 展开更多
关键词 rnai 基因功能 rnai技术 基因沉默 扩增机制
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RNAi与RNAi技术
11
作者 黄雪梅 蔡军 《中学生物学》 2004年第1期1-2,共2页
关键词 基础知识 教学参考资料 rnai rnai技术 RNA干扰 生物学 高中
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纳米粒子载体对灰飞虱RNAi效率的影响 被引量:4
12
作者 周晨 朱先敏 +4 位作者 朱凤 张海波 韩召军 杨荣明 王康旭 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1153-1160,共8页
【目的】筛选针对灰飞虱Laodelphax striatellus RNAi的dsRNA高效纳米递送载体。【方法】使用壳聚糖、碳量子点(carbon quantum dot,CQD)和lipofectamine 2000作为代表性纳米粒子,分别与dsRNA进行混合,形成稳定的3种不同复合颗粒,利用... 【目的】筛选针对灰飞虱Laodelphax striatellus RNAi的dsRNA高效纳米递送载体。【方法】使用壳聚糖、碳量子点(carbon quantum dot,CQD)和lipofectamine 2000作为代表性纳米粒子,分别与dsRNA进行混合,形成稳定的3种不同复合颗粒,利用光谱法检测其dsRNA装载率。以灰飞虱膜结合型海藻糖酶基因LsStre为靶标基因来测试3种纳米粒子的RNAi效率。用不同纳米粒子包裹的dsLsStre喂食后,通过荧光实时定量PCR(qPCR)检测喂食后2 d灰飞虱2龄若虫中LsStre mRNA表达水平,并检测和计算灰飞虱2龄若虫在6 d内的校正死亡率,以裸dsLsStre引起的2龄若虫死亡率为对照,评价3种纳米载体对LsStre的RNAi增效作用。【结果】3种纳米载体均能负载dsEgfp,且这3种纳米载体复合dsEgfp的效率均在95%以上。3种纳米材料对灰飞虱2龄若虫的毒性均较弱。同未用纳米粒子包裹的裸dsLsStre喂食组(对LsStre表达量的抑制率为46%)相比,壳聚糖和CQD能够显著提高LsStre的RNAi效率(对LsStre表达量的抑制率分别为78%和84%),而lipofectamine 2000不能显著提高LsStre的RNAi效率(抑制率为52%)。壳聚糖和CQD可以有效提高喂食dsLsStre对灰飞虱2龄若虫的致死效应,在连续喂食6 d后,灰飞虱2龄若虫的校正死亡率分别达到76%和82%,与直接用裸dsLsStre处理的对照组校正死亡率(35%)相比,增效系数分别达到2.17和2.34,lipofectamine 2000的增效能力最弱,其与dsLsStre的复合颗粒处理引起灰飞虱2龄若虫死亡率为38%,增效系数为1.09。【结论】壳聚糖和CQD纳米载体能够显著提高灰飞虱对于喂食dsRNA的敏感性,而lipofectamine 2000的RNAi增效作用较弱。研究结果有助于评价纳米载体在灰飞虱RNAi中的增效作用,为进一步开发和筛选有效的RNAi纳米载体,实现害虫绿色防控,提供了理论依据和应用策略。 展开更多
关键词 灰飞虱 海藻糖酶 rnai 纳米粒子 DSRNA rnai效率 增效系数
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RNAi技术及其在病毒性肝炎中的研究进展
13
作者 张法红 蔡建庭 《国外医学(消化系疾病分册)》 2005年第5期297-299,共3页
RNAi技术被《科学》杂志评选为2002年度世界十大科技发展之首,在各种疾病的基因治疗研究中发挥出了巨大的潜力。在抗肝炎病毒领域,RNAi技术可以抑制病毒复制,阻断病毒蛋白表达,且对RNA病毒和DNA病毒均有效。
关键词 rnai siRNA 病毒性肝炎 rnai技术 病毒性肝炎 《科学》杂志 抑制病毒复制 抗肝炎病毒 DNA病毒 RNA病毒 基因治疗 蛋白表达
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利用RNAi技术研究果蝇心脏发育基因的功能 被引量:30
14
作者 袁婺洲 Bodmer R +3 位作者 朱传炳 王跃群 李永清 吴秀山 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第1期34-38,T001,共6页
RNAi是近两年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法。它通过导入一段与内源基因同源的双链RNA序列(dsRNA) ,使内源mRNA降解 ,从而达到阻抑基因表达的目的。目前已在线虫、果蝇、臭虫、真菌及植物等生物中建立RNAi技术 ,用于研究某些特定... RNAi是近两年发展起来的一种阻抑基因表达的新方法。它通过导入一段与内源基因同源的双链RNA序列(dsRNA) ,使内源mRNA降解 ,从而达到阻抑基因表达的目的。目前已在线虫、果蝇、臭虫、真菌及植物等生物中建立RNAi技术 ,用于研究某些特定基因或已知基因在特定发育时期的功能。对于难于获得突变体的基因或生物体 ,RNAi技术尤其有效。虽然果蝇心脏发育基因wingless和tinman在果蝇心脏发育的早期功能已经清楚 ,它们都与果蝇心脏前体细胞的形成有关 ,但它们在果蝇心脏发育的后期功能仍有待进一步研究。实验运用RNAi技术 ,分别将tinman和wingless的dsRNA注入果蝇的早期胚胎 ,得到了这两个基因的dsRNA干扰表型 ,与两个基因的突变体表型非常相似 ,都表现为果蝇心脏前体细胞不能形成或心脏管缺失。尤其是tinman基因的dsRNA ,还引起了肠中胚层缺失和体壁肌肉组织的紊乱 ,而wingless基因的dsRNA却只影响心脏的形成 ,而不影响肠中胚层 ,说明dsRNA干扰具有非常强的特异性 ,因而不失为研究果蝇心脏发育基因功能的有效方法。 展开更多
关键词 rnai DSRNA 果蝇 心脏发育 调控基因 功能
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花椰菜ACC氧化酶基因的克隆及其RNAi对内源基因表达的抑制作用 被引量:24
15
作者 陈银华 张俊红 +2 位作者 欧阳波 李汉霞 叶志彪 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期764-769,共6页
根据亲缘关系较近的几种作物ACC氧化酶氨基酸序列,设计一对简并引物,从花椰菜(Brassicaoleraceavar.botrytis)基因组中获得长1202bp的候选片段。序列分析表明该基因含有3个外显子(Exon)、2个内含子(Intron),编码区序列长756bp,编码252... 根据亲缘关系较近的几种作物ACC氧化酶氨基酸序列,设计一对简并引物,从花椰菜(Brassicaoleraceavar.botrytis)基因组中获得长1202bp的候选片段。序列分析表明该基因含有3个外显子(Exon)、2个内含子(Intron),编码区序列长756bp,编码252个氨基酸。同源性分析发现其与青花菜(Brassicaoleraceavar.Italica)上已发表mRNA序列同源率为99%(GenBank序列号:X81629),推断该基因为花椰菜ACC氧化酶基因,命名为BoACO(GenBank登录号:AY676466)。在此基础上,用BP克隆的方法构建BoACO的RNA干涉(RNAi)载体pHBACO,对花椰菜进行遗传转化,获得卡那霉素抗性转化植株5棵,分子检测证实外源片段成功导入其中3棵花椰菜基因组中。Northern杂交分析显示:转基因植株内源ACO基因转录的mRNA被降解。ACC氧化酶活性分析进一步表明,外源基因的导入大大地降低了ACC氧化酶活性。 展开更多
关键词 花椰菜 ACC氧化酶基因 rnai 遗传转化
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RNAi技术在昆虫功能基因研究中的应用进展 被引量:16
16
作者 杨中侠 文礼章 +3 位作者 吴青君 王少丽 徐宝云 张友军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1077-1082,共6页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象,它作为一种有效的工具用来产生转录后沉默,从而抑制特定基因的表达,成为基因功能研究的一种新方法,除了在模式昆虫如果蝇Drosophila中广... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指外源或内源的双链RNA(dsRNA)特异性地引起基因表达沉默的现象,它作为一种有效的工具用来产生转录后沉默,从而抑制特定基因的表达,成为基因功能研究的一种新方法,除了在模式昆虫如果蝇Drosophila中广泛应用之外,也在非模式昆虫中得到成功应用。近年来,RNAi技术在导入方法和基因功能分析方面都取得了飞速发展,且与转基因技术相结合成功应用于害虫防治领域。本文综述了RNAi技术在导入方法、昆虫功能基因组功能分析及害虫防治等领域新近的研究成果,并展望了该技术的应用前景。 展开更多
关键词 RNA干扰(rnai) 双链RNA(dsRNA) 昆虫 基因功能 应用
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油菜基因BnWRI1的克隆及RNAi对种子含油量的影响 被引量:16
17
作者 柴国华 白泽涛 +5 位作者 蔡丽 郭学兰 张学江 石磊 董彩华 刘胜毅 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期1512-1518,共7页
【目的】阐明油菜基因BnWRI1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到BnWRI1基因编码区内384bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-WRI1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体... 【目的】阐明油菜基因BnWRI1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到BnWRI1基因编码区内384bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-WRI1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体品种中双9号中,【结果】获得3棵转基因植株,PCR扩增和基因组Southern杂交证实外源片段已整合在受体油菜基因组中。利用半定量RT-PCR和改进的索氏提取法分别检测转基因T1代植株的BnWRI1基因表达量和种子含油量,结果表明:与非转基因对照相比,转基因植株的BnWRI1基因均受抑制,种子含油量有所降低。【结论】采用RNAi技术可使油菜内源基因BnWRI1沉默,表明油菜基因BnWRI1能有效调控种子含油量。 展开更多
关键词 油菜 含油量 WRI1基因 花粉管通道法 rnai
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飞蝗表皮蛋白Obstructor家族基因的分子特性及基于RNAi的功能分析 被引量:9
18
作者 王燕 李大琪 +4 位作者 刘晓健 李涛 马恩波 范仁俊 张建珍 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期73-82,共10页
【目的】获得飞蝗(Locusta migratoria)表皮蛋白Obstructor(Obst)家族基因的c DNA序列,并研究其序列特征和m RNA表达特性,探讨其生物学功能,为害虫防治提供新的分子靶标。【方法】采用生物信息学方法搜索飞蝗转录组数据库获得Obst家族基... 【目的】获得飞蝗(Locusta migratoria)表皮蛋白Obstructor(Obst)家族基因的c DNA序列,并研究其序列特征和m RNA表达特性,探讨其生物学功能,为害虫防治提供新的分子靶标。【方法】采用生物信息学方法搜索飞蝗转录组数据库获得Obst家族基因c DNA片段,并进行BLAST分析得到Obst家族基因的c DNA序列;采用RACE技术扩增该家族基因的3′c DNA序列,拼接后获得全长;Signal P在线软件分析蛋白的信号肽,SMART网站预测其功能域,并使用Mega 5.10软件中Neighbor-Joining方法,与黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)Obst家族基因和赤拟谷盗(Tribolium castaneum)CPAP3家族基因(Obst家族基因的同源基因)氨基酸序列进行聚类分析;采用real-time quantitative PCR(q PCR)方法检测Lm Obst家族基因在5龄若虫不同组织部位和不同龄期体壁的表达情况,绘制表达图谱;采用RNA干扰(RNAi)技术探讨Lm Obsts对飞蝗发育的影响。【结果】在飞蝗转录组数据库中搜索得到8个Obst家族基因的c DNA片段,通过NCBI进行BLAST分析显示与赤拟谷盗CPAP3、黑腹果蝇Obst高度同源,属于Lm Obst家族基因片段,其中5个是全长序列,3个序列缺失3′端;采用RACE技术获得3′末端c DNA序列;将得到的8个Lm Obst家族基因全长序列进行功能域分析,发现具有Obst家族表皮蛋白的特点,即有1个信号肽与3个几丁质结合域Cht BD2;并与黑腹果蝇、赤拟谷盗同源基因进行进化树的构建,根据进化树分析结果,分别命名为Lm Obst-A1、Lm Obst-A2、Lm Obst-B、Lm Obst-C、Lm Obst-D1、Lm Obst-D2、Lm Obst-E1和Lm Obst-E2。q PCR结果显示Lm Obst-E1和Lm Obst-E2在前肠和后肠高特异性表达,Lm Obst-D1在体壁和前肠高表达,其他Lm Obsts在体壁或外胚层内陷形成的前肠和后肠高表达,在胃盲囊、中肠、马氏管和脂肪体中低表达;Lm Obst家族基因在5龄若虫不同天数体壁的表达趋势比较接近,在5龄前期高表达,中期降到最低,蜕皮前又上升到高水平。采用RNAi技术研究基因的生物学功能,5龄若虫第5天分别注射ds Lm Obst,对照组注射等量ds GFP,48 h后检测沉默效率,发现目的基因表达量显著降低;进一步观察发现,注射ds Lm Obst-E1的5龄若虫80%无蜕皮迹象,在5龄若虫状态下死亡,剩余20%若虫蜕皮延迟1—2 d,并且蜕至成虫后,16 h内全部死亡;其余注射双链的试虫普遍发生蜕皮延迟1—3 d的现象,但未发现其他可见的异常表型。【结论】获得8个飞蝗Lm Obst家族基因,所有Obst家族蛋白功能域保守,均有1个信号肽与3个几丁质结合域Cht BD2;Lm Obsts主要参与飞蝗体壁和前、后肠等外胚层发育来源组织器官的形成。Lm Obst-E1是飞蝗发育所必需的,该基因沉默可导致飞蝗死亡,其他7个Lm Obsts的沉默导致飞蝗发育延迟1-3 d,但无致死效应。 展开更多
关键词 飞蝗 表皮蛋白 Obstructor real-time QUANTITATIVE PCR rnai
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RNAi在药物研究中的应用 被引量:3
19
作者 王丽娜 袁崇刚 《生命科学》 CSCD 2007年第5期557-561,共5页
RNA干扰是双链RNA分子在mRNA水平上诱发的序列特异性的转录后基因表达沉默。在哺乳动物细胞里,RNAi可以由21-25个核苷酸长度的小干扰RNA(siRNA)触发,在后基因组时代的基因功能研究和药物开发中具有广阔的应用前景。现针对近年RNAi在药... RNA干扰是双链RNA分子在mRNA水平上诱发的序列特异性的转录后基因表达沉默。在哺乳动物细胞里,RNAi可以由21-25个核苷酸长度的小干扰RNA(siRNA)触发,在后基因组时代的基因功能研究和药物开发中具有广阔的应用前景。现针对近年RNAi在药物研究中的应用包括应用RNAi发现新药靶、辅助确认药靶、RNAi药物、RNAi与耐药性等方面作一综述。 展开更多
关键词 rnai 药物靶点 高通量筛选 rnai药物 多药耐药性
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大豆类受体蛋白激酶基因(rlpk2)RNAi双元表达载体的构建及其转基因 被引量:12
20
作者 李小平 邓楠 +4 位作者 马媛媛 李鹏丽 王勇 张韧 王宁宁 《分子细胞生物学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第1期1-8,共8页
植物类受体蛋白激酶(plant receptor-like kinases RLKs)以其特有的结构在植物的生长、发育和防御等多种生理生化过程中发挥着重要的作用。利用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)来研究RLKs的功能已日趋成熟。本文根据植物中hpRNA(hai... 植物类受体蛋白激酶(plant receptor-like kinases RLKs)以其特有的结构在植物的生长、发育和防御等多种生理生化过程中发挥着重要的作用。利用RNA干扰技术(RNA interference RNAi)来研究RLKs的功能已日趋成熟。本文根据植物中hpRNA(hairpin RNA)的原理,以大豆类受体蛋白激酶基因rlpk2为靶基因,在rlpk2-cDNA序列3'端选择312bp作为构建RNAi的序列,借助中间克隆载体,经过三次亚克隆,最后形成含rlpk2-RNAi表达盒的双元表达载体pART27-R2,并转入农杆菌LBA4404。采用农杆菌介导大豆子叶节转化方法,共获得了三株转基因植株。转基因植株 RT-PCR分析表明rlpk2基因已被成功敲减(knock-down),并且发现敲减大豆叶片中的rlpk2基因表达明显改善大豆叶片的光合能力,结合前期研究结果,表明rlpk2基因可能在维持叶绿体的结构及保护叶绿体膜系统的完整性方面起负调节作用。 展开更多
关键词 大豆 类受体蛋白激酶 rnai 双元表达载体
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