肠炎沙门氏菌rpoH基因缺陷株的构建及其热激响应特性

构建肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis IFO3313株的rpoH基因缺陷株IFO3313-ΔrpoH,比较不同温度下缺陷株与野生株的热激响应特性。利用λ-Red重组系统对Salmonella enteritidisIFO3313的rpoH基因进行缺失突变,并使用PCR方法对其进行验证,在此基础上使用不同培养基对缺陷株与野生株进行不同温度下的热激应答结果和亚致死热损伤修复能力的考察:野生株比缺陷株有更强的热激耐受能力,在DHL平板上对亚致死热损伤的肠炎沙门氏菌的分离检测可能具有假阴性,野生株比缺陷株在TSYA平板上有更强的修复能力。利用λ-Red重组系统敲除了肠炎沙门氏菌rpoH基因,有助于了解肠炎沙门氏菌的热激亚致死及其修复机制,对亚致死状态食源性病原微生物的检测做出初步研究。

伤寒沙门菌长链非编码RNA AS-RpoH分子鉴定

目的:探讨伤寒沙门菌非编码RNA AS-RpoH的分子特性,为进一步研究其调控功能和机制奠定基础。方法:在AS-RpoH表达高峰区设计特异性探针,运用RNA印迹检测AS-RpoH的表达;通过PCR寻找AS-RpoH可能的转录起始位点和终止位点;在yhhk编码区设计特异性探针,运用RNA印迹分析yhhk的转录产物。结果:RNA印迹结果显示,AS-RpoH在沙门菌中确实存在,长约3 000 nt;PCR结果表明,AS-RpoH的转录终止位点位于rpo H基因起始密码子上游191~238 nt之间;而其转录起始位点可能位于yhh K上游;RNA印迹分析结果表明yhh K基因的转录产物与AS-RpoH的长度一致。结论:长链非编码RNA AS-RpoH在伤寒沙门菌中存在表达,可能为yhh K的3'非翻译区。

热休克转录因子（σ^（32））基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ方法获得大肠杆菌热休克蛋白转录因子σ３２的编码基因ｒｐｏＨ，并将其克隆至含有Ｐｔａｃ启动子的表达载体ｐＵＨＥ中。经ＩＰＴＧ诱导，在ｒｐｏＨ缺陷菌株ＳＧ１３００９中高效表达Ｃ－端融合有６个组氨酸的σ３２，表达量为菌体总蛋白的７．６％。３５Ｓ细胞内掺入实验表明：即使在较低的温度下，表达产物σ３２－（Ｈｉｓ）６也能导致热休克蛋白如ＧｒｏＥＬ、ＤｎａＫ。

大肠杆菌Small RNA EsrE的转录调控

【背景】大肠杆菌中Small RNA EsrE调控琥珀酸脱氢酶的表达并影响细胞生长,对其调控机制的探究有利于加深EsrE对细胞生长影响的认识。【目的】探究大肠杆菌Small RNA EsrE的转录调控机制。【方法】通过双质粒报告系统筛选转录调控因子,并通过凝胶迁移实验(electrophoretic mobilityshiftassay,EMSA)和qRT-PCR研究方法验证转录调控因子。【结果】双质粒报告系统证明RNA聚合酶亚基σ^32(RpoH)上调PesrE,β-羟酰-ACP脱水酶(FabZ)下调PesrE。EMSA结果和体内实验显示RpoH结合PesrE片段,FabZ不结合PesrE片段。【结论】RpoH直接结合启动子序列参与调控,FabZ以其他方式间接参与Small RNA EsrE的转录调控。