Galectin-9调控SHH信号通路影响结直肠癌HT29细胞凋亡

目的:探讨半乳糖凝集素9(galectin-9)对结直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:在结直肠癌细胞系HT29中分别转染galectin-9过表达载体pcDNA3.1-Galectin-9和对照载体pcDNA3.1,用real-time PCR和Western blot检测过表达效果。Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡变化,Western blot测定细胞中活化的caspase-3水平,以及SHH信号通路蛋白Smo、Gli1和SHH的表达变化。用SHH信号通路特异性抑制剂cyclopamine处理上调galectin-9表达的结直肠癌细胞,用上述方法检测细胞凋亡、细胞中活化的caspase-3水平,以及SHH信号通路蛋白Smo、Gli1和SHH的表达变化。结果:pcDNA3.1-Galectin-9可显著上调结直肠癌HT29细胞中galectin-9的mRNA和蛋白水平。上调galectin-9表达后的结直肠癌HT29细胞凋亡率升高,细胞中活化的caspase-3蛋白水平升高,同时细胞中SHH信号通路蛋白Smo、Gli1和SHH的表达水平降低(P<0.05)。Cyclopamine处理可以进一步诱导上调galectin-9表达的结直肠癌HT29细胞凋亡,促进细胞中活化的caspase-3蛋白水平上调,降低细胞中SHH信号通路的激活水平(P<0.05)。结论:Galectin-9通过抑制SHH信号通路诱导结直肠癌HT29细胞凋亡。

SHH信号通路对子痫前期患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响及其机制

目的:探讨激活SHH信号通路对子痫前期(PE)患者滋养细胞凋亡和侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法:将HTR8/SVneo细胞分为正常对照组、缺氧/复氧(H/R)处理组和purmorphamine+H/R处理组。Western blotting法检测PE胎盘组织和正常妊娠晚期胎盘组织及各组HTR8/SVneo细胞中SHH信号通路相关蛋白SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平,流式细胞术(FCM)检测各组HTR8/SVneo细胞的凋亡率,Transwell小室法检测各组HTR8/SVneo细胞的穿膜细胞数,Western blotting法检测各组HTR8/SVneo细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平。结果:PE胎盘组织HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达水平均明显低于正常妊娠晚期胎盘组织(P<0.05);H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显低于正常对照组,细胞凋亡率明显高于正常对照组(P<0.05);purmorphamine+H/R处理组HTR8/SVneo细胞中SHH、Ptch1、Smo、Gli1、Gli3、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及穿膜细胞数均明显高于H/R处理组(P<0.05),细胞凋亡率明显低于H/R处理组(P<0.05)。结论:激活SHH信号通路可减少PE患者胎盘组织中HTR8/SVneo细胞凋亡,并通过上调MMP-2和MMP-9表达提高细胞的侵袭能力。

Shh信号通路在骨髓增生异常综合征和转白血病患者骨髓CD34^+细胞中的表达及临床意义

目的:研究Shh信号通路相关基因Shh、Ptch1、Smo和Gli1在骨髓增生异常综合征(MDS)和MDS转白血病(AML-MRC)患者骨髓CD34^+细胞中的表达及其对预后的影响。方法:对53例MDS和30例AML-MRC患者采用流式细胞术检测骨髓CD34^+细胞数,磁珠分选CD34^+细胞,采用荧光实时定量PCR法检测CD34^+细胞上Shh、Ptch1、Smo和Gli1基因的表达,比较4种基因在MDS和AML-MRC患者中的表达及对预后的影响,并以25例缺铁性贫血患者作为对照。结果:Shh、Smo和Gli1在MDS组和AML-MRC组患者中的表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且表达水平随疾病进展呈递增趋势(P<0.05);Ptch1表达在3组间差异无统计学意义(P>0.05)。与相对低危组比较,Smo和Gli1在相对高危组和AML-MRC组中的表达水平均明显增高(P<0.05)。MDS组和AMLMRC组患者中位生存时间分别为12(7.5,16.5)和6(3.0,9.0)个月(P=0.000)。生存分析显示,MDS和AMLMRC组中Smo和Gli1高表达患者的中位生存时间明显短于低表达患者(P<0.05)。结论:MDS肿瘤干细胞中存在Shh信号通路的活化,其参与了MDS疾病进展并影响患者预后。

毛钩藤碱调控Shh信号通路对结直肠癌荷瘤鼠的抑瘤作用及CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的影响

目的:探讨毛钩藤碱对结直肠癌荷瘤鼠的抑瘤作用,并分析其对Shh信号通路关键蛋白及CD4^(+)、CD8^(+)T细胞的影响。方法:采用结肠癌SW480细胞接种于裸鼠右腋部皮下建立结直肠癌荷瘤鼠模型,将40只建模成功的裸鼠分为荷瘤鼠模型组、阳性药环巴胺(Shh信号通路抑制剂)对照组和毛钩藤碱低、中、高剂量组,每组8只。阳性药给予环巴胺(20μmol/L,0.2 ml),毛钩藤碱干预组分别腹腔注射5、10、20 mg/kg毛钩藤碱,1次/d,连续21 d,留取外周血后处死。观察各组荷瘤小鼠的自主活动次数、体质量及肿瘤体积,计算体质量增长率、相对肿瘤体积增长率和抑瘤率;免疫组化法(IHC)检测荷瘤鼠移植瘤中Glil、Gli2、Shh、Smo和Ptch1表达量;流式细胞术检测荷瘤鼠移植瘤和外周血中CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平。结果:与模型组比较,环巴胺及毛钩藤碱的干预显著改善了裸鼠的自主活动次数,环巴胺组及毛钩藤碱中、高剂量组的瘤质量、相对肿瘤体积增长率及Shh信号通路关键蛋白Glil、Gli2及Shh、Smo和Ptch1表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01),移植瘤和外周血中CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平均显著提高(P<0.05或P<0.01),但毛钩藤碱低剂量组上述指标与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与阳性药环巴胺组比较,毛钩藤碱各剂量干预组肿瘤质量、抑瘤率、相对肿瘤体积增长率差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。随着毛钩藤碱剂量的增加,Shh信号通路关键蛋白(Glil、Gli2及Shh、Smo和Ptch1)表达量显著降低(P<0.05或P<0.01),而移植瘤和外周血中CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平均显著增加(P<0.05或P<0.01)。结论:毛钩藤碱可显著改善结肠癌荷瘤鼠的自主活动状态,发挥较好的抑瘤作用,可能与其抑制Shh信号通路,提高CD4^(+)及CD8^(+)T细胞水平有关。

SHH信号通路激活对大鼠心脏微血管内皮细胞缺血再灌注损伤血管再生作用研究

目的探讨SHH信号通路激活对大鼠心脏微血管内皮细胞(CMECs)缺血再灌注损伤后促血管再生的作用及其潜在机制。方法2016年7月—2017年2月于青岛大学附属烟台毓璜顶医院进行实验。原代培养SD雄性大鼠CMECs,建立氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模拟体外缺血再灌注损伤模型,给予外源性重组人SHH蛋白、Cyclopamine(CYC)处理,应用MTT法检测CMECs细胞活力,应用ELISA和RT-PCR方法检测血管新生因子(VEGF、FGF、Ang-1)水平和mRNA表达水平;应用Western-blot方法分别检测SHH信号通路靶分子(SHH、SMO、Patched-1、Gli-1、Gli-2)蛋白表达水平。结果(1)与C组比较,正常氧糖条件下C+SHH组活力增加(P<0.05),但C+CYC组消减(P<0.05);当细胞在OGD/R条件下,OGD组CMECs活力与C组比较减弱(P<0.05),而OGD+SHH组与OGD组比较细胞活力增加(P<0.05);但OGD+CYC显著消减(P<0.05)。(2)与C组比较,正常氧糖条件下C+SHH组血管新生因子VEGF、FGF、Ang-1水平和mRNA表达增加(P<0.01),但C+CYC组上述指标水平和mRNA表达下降(P<0.01);与C组比较,OGD组VEGF、FGF、Ang-1血清水平和mRNA表达显著降低(P<0.01);OGD+SHH组VEGF、FGF、Ang-1血清水平和mRNA表达显著增加(P<0.01),OGD+CYC组上述指标水平和mRNA表达下降(P<0.05)。(3)与OGD组比较,OGD+SHH组在OGD/R条件下,SHH信号通路中靶分子SHH、SMO、Patched-1、Gli-1和Gli-2蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),但OGD+CYC组SHH信号通路靶分子蛋白表达水平下降(P<0.01)。结论SHH信号通路激活可增强细胞活力,上调血管新生因子VEGF、FGF和Ang-1的表达,在缺血再灌注损伤后血管再生过程中发挥重要作用。

局灶缺血性脑卒中大鼠侧脑室下带Shh信号通路成分的动态表达

通过研究Sonic hedgehog(Shh)信号通路成分在局灶缺血性脑卒中大鼠侧脑室下带(subventricular zone,SVZ)的动态表达,初步探讨该通路在局灶性缺血性脑卒中后神经再生的调控作用.将84只健康成年雄性SD大鼠随机分为正常组(n=12)、假手术组(n=12)、缺血6、12、24 h和3、7 d,共7组(n=12).采用线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉阻断(middle cerebral artery occlussion,MCAO)模型.分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、免疫印迹法检测局灶脑缺血大鼠侧脑室下带Shh、Gli1 mRNA和蛋白变化.与正常组比较,Shh、Gli1mRNA和蛋白在假手术组表达变化不明显(P>0.05),模型组6 h表达增高(P<0.01),24 h达峰值(P<0.01),3 d时接近正常水平(P>0.05),7 d表达又升高(P<0.01).缺血性脑卒中可以上调Shh信号通路成分在SVZ区的表达,提示Shh信号通路可能参与卒中后神经再生机制的调控.

Shh信号通路对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨激活Shh信号通路对结肠癌细胞侵袭转移的影响。方法常规培养结肠癌细胞株HT-29细胞,分设对照组(培养液中加入PBS)、信号通路活化组(培养液中加入重组Shh配体,实验组)、信号通路阻断组(培养液中加入Shh信号通路抑制剂KADD-cyclopamine);采用MTT实验、Transwell侵袭小室法,建立人结肠癌术后局部复发裸鼠动物模型、人结肠癌术后肝转移动物模型,分别经尾静脉注射PBS、Shh配体和KADD-cyclopamine,分析Shh配体及Shh信号通路抑制剂KADD-cyclopamine干预Shh信号通路对结肠癌术后局部复发和肝转移的影响。结果 Shh配体激活Shh信号通路后检测到结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力较对照组得到明显促进、增强且变化有统计学意义(P<0.05)。信号活化组与对照组和信号阻断组比较,裸鼠结肠癌术后复发率(50%比30%、30%,P<0.05)、肝转移率(100%比30%、23%,P<0.05)、平均肝转移瘤数目[(23.4±8.8)、(17.6±8.6)、(38.6±3.6)个,P<0.05]均显著升高。结论 Shh信号通路参与了结肠癌转移过程,激活Shh信号通路能够促进结肠癌术后局部复发和肝转移;抑制Shh信号通路能够降低结肠癌术后局部复发和肝转移。

局灶性脑缺血大鼠纹状体区域Shh信号通路成分的表达变化及对髓鞘修复的影响

目的检测Sonic Hedgehog(Shh)信号通路及其转录因子Gli1在局灶性脑缺血后不同时间点的表达变化,探讨该通路对脑缺血后髓鞘再生的影响。方法线栓法建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,使用免疫组化和RT-PCR的方法观察脑缺血后1 d,3 d,7 d和14 d Shh,Gli1的表达变化。碱性髓鞘蛋白(myelin basic protein,MBP)是髓鞘的组成成分,用作髓鞘的标志物,观察脑缺血后上述各时间点MBP的表达变化。结果正常大鼠Shh和Gli1广泛分布于脑白质和灰质,如皮质,胼胝体和纹状体等区域。Shh和Gli1的表达在脑缺血后3 d^14 d呈逐渐上升趋势。MBP的表达在脑缺血后1 d^28 d逐渐下降。结论脑缺血性损伤可激活Shh信号通路,激活的Shh可能通过调控细胞的增殖参与神经修复,针对Shh的表达量进行干预治疗将为脱髓鞘疾病的治疗提供理论依据。

白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响

目的探讨白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响。方法实验分为对照组和白藜芦醇组。白藜芦醇处理NIH3T3细胞24 h。CCK-8法测定细胞活力,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-tu)、Smo和Gli-1的表达,Western blotting法检测Shh、Ptc、Smo、Gli-1蛋白的表达。结果 1.0.5和1μmol/L白藜芦醇组(0.679±0.047,0.774±0.054)细胞活力分别较对照组(0.585±0.039)明显增强(P<0.05),其中以1μmol/L白藜芦醇组最强。之后随白藜芦醇浓度(10、20、40、80μmol/L)的增高,细胞活力逐渐降低(0.428±0.043,0.395±0.031,0.373±0.017,0.361±0.016),且均较对照组明显减弱(P<0.05),而0.1μmol/L(0.602±0.065)和5μmol/L组(0.556±0.041)细胞活力与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。2.NIH3T3细胞表达Ac-tu、Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1从蛋白,有1根初级纤毛,Smo和Gli-1蛋白位于细胞质。白藜芦醇处理24 h时,Gli-1从细胞质进入细胞核,Smo从细胞质进入初级纤毛,且Shh(0.756±0.659比0.441±0.769,P<0.05)、Ptc-1(0.655±0.347比0.351±0.026,P<0.05)、Smo(0.779±0.064比0.451±0.035,P<0.05)和Gli-1(0.856±0.044比0.560±0.058,P<0.05)蛋白表达较对照组高。结论白藜芦醇可能通过激活Shh信号通路增强NIH3T3细胞的活力。

Shh信号通路抑制剂Jervine对骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞的作用

目的:研究Shh信号通路中SMO抑制剂(Jervine)对骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞株的增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能的作用机制。方法:应用CCK-8法检测Jervine对MUTZ-1细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染色流式细胞术检测Jervine对MUTZ-1细胞凋亡及细胞周期的作用;Western blot法检测Shh信号通路效应蛋白BCL2和CyclinD1的表达水平;荧光实时定量PCR法(RT-qPCR)检测Jervine作用于MUTZ-1细胞后Shh通路中Smo和Gli1基因的表达。结果:不同浓度Jervine对MUTZ-1细胞生长具有抑制作用,且抑制率呈剂量依赖性增加(24 h,r=-0.977);Jervine能有效促进细胞凋亡,并且细胞凋亡率与Jervine剂量成呈相关(r=0.997);加入不同浓度Jervine后G1期细胞所占比重增多,S期细胞减少(P<0.001),Jervine可使MUTZ-1细胞周期阻滞于G1期,抑制细胞增殖。Jervine作用MUTZ-1细胞后Smo和Gli1基因表达水平及下游靶基因的BCL2和CyclinD1蛋白表达水平都明显下降(P<0.05)。结论:SMO抑制剂能有效抑制MUTZ-1细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与下调BCL2和CyclinD1蛋白表达水平相关。

激活Shh信号通路影响结肠癌细胞上皮间质表型转化的研究

目的阐释激活Shh信号通路对结肠癌上皮间质表型转化(EMT)的影响。方法常规培养结肠癌细胞株HT-29细胞,设立对照组(培养液中加入PBS)、实验组(即信号通路活化,培养液中加入重组Shh配体);采用Westen-blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达水平的变化;RT-PCR检测上皮间质转化标志物E-cadherin和Vimentin在mRNA水平的变化;行HE染色观察细胞形态变化的改变。结果 Westen-blot检测蛋白提示,结肠癌HT-29细胞中,Shh信号通路激活可促进Vimentin蛋白表达(P<0.05),抑制E-cadherin蛋白表达(P<0.05);RT-PCR检测:实验组中E-cadherin和Vimentin的mRNA表达量差异具有统计学意义(P<0.05),与对照组相比较,实验组的Vimentin的mRNA表达量显著升高(P<0.05),E-cadherin的表达量明显降低(P<0.05);HE细胞染色提示对照细胞呈梭形,细胞间更紧密地连接,并与信号通路阻断组细胞无显著差异,而实验组细胞呈椭圆形或圆形,连接疏松,部分细胞呈团簇集群样生长。结论 EMT在结肠癌转移过程中起着重要的作用,而Shh信号通路的激活可促进结肠癌细胞EMT的发生、发展。

抑制Shh信号通路增加胰腺癌细胞对紫杉醇敏感性的实验研究

目的研究抑制音猬因子(Shh)信号通路对胰腺癌细胞紫杉醇敏感性的影响。方法给予人胰腺癌SW1990细胞0、10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇刺激,MTT测定细胞增殖情况,计算其半数抑制浓度约为50 nmol/L。用Western blot方法测定0、50 nmol/L紫杉醇处理后细胞中Shh信号通路蛋白Shh、锌指转录因子1(Gli1)、补丁蛋白1(Ptch 1)的表达水平。分别用紫杉醇、Shh信号通路抑制剂cyclopamine处理SW1990细胞,用紫杉醇和cyclopamine共同处理SW1990细胞,MTT测定增殖,克隆实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平。结果 10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、80 nmol/L、160 nmol/L的紫杉醇抑制SW1990细胞的增殖,50 nmol/L的紫杉醇可以抑制细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白表达。紫杉醇和cyclopamine单独处理后的细胞增殖能力和克隆形成能力降低,细胞凋亡增多,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平升高。与紫杉醇和cyclopamine单独处理的细胞比较,紫杉醇和cyclopamine共同处理后的细胞增殖和克隆能力下降更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平更高,细胞中Shh、Gli1、Ptch 1蛋白水平更低。结论抑制Shh信号通路能够增加胰腺癌细胞对紫杉醇的敏感性。

Shh信号通路阻断对人结肠癌细胞HT-29增殖、侵袭的影响及机制探讨

目的观察阻断Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对人结肠癌细胞HT-29增殖和侵袭的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期HT-29细胞分为A、B、C、D组,分别置于含0、5、10、20μmol/L Shh信号通路特异性抑制剂Cyclopamine的培养基中培养。采用MTT法检测各组干预24、48、72 h时细胞增殖抑制率,采用Transwell法检测各组干预48 h时体外侵袭能力,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞Shh、下游转录因子GLI1 mRNA。结果干预24、48、72 h时各组细胞增殖抑制率为B组<C组<D组,P均<0.05;A、B、C、D组的穿膜细胞数分别为(55.670±6.506)、(35.330±7.371)、(28.330±4.041)、(23.330±2.309)个,B、C、D组穿膜细胞数均低于A组,P均<0.05,但B、C、D组间比较差异无统计学意义。HT-29细胞Shh、GLI1 mRNA的相对表达量均为A组>B组>C组>D组,P均<0.05。结论阻断Shh信号通路可抑制HT-29细胞增殖、降低体外侵袭能力,可能与其降低Shh、GLI1表达有关。

SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌细胞凋亡诱导作用的实验研究

目的:探讨Sonic Hedgehog(SHH)信号通路是否参与转录因子叉头框Q1(FOXQ1)基因诱导的胃癌细胞凋亡。方法:采用q RT-PCR检测永生化胃黏膜上皮细胞及不同胃癌细胞系中FOXQ1的表达情况,FOXQ1 siRNA转染人胃癌SGC-7901细胞设为si-FOXQ1组,同时设置转染正常对照组(Normal)和阴性对照组(si-Control),q RT-PCR和Western blot检测FOXQ1基因和蛋白表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测Bax和Cleaved Caspase3蛋白及SHH信号通路相关蛋白SHH、Smo及下游分子Gli1和Gli3蛋白表达水平。结果:FOXQ1在胃黏膜上皮细胞GES-1中的表达显著低于胃癌细胞(P<0.05),胃癌SGC-7901细胞中FOXQ1的表达最高,作为后续实验研究对象。转染FOXQ1 siRNA后SGC-7901细胞中FOXQ1的表达显著下降(P<0.05)。si-FOXQ1组凋亡率及Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达显著高于si-Control组(P<0.05),而SHH、Smo、Gli1和Gli3蛋白表达显著低于si-Control组(P<0.05)。Normal组和si-Control组间以上各指标差异无统计学意义(P>0.05)。SHH特异性激活剂purmorphamine能够逆转转染FOXQ1 siRNA诱导的SGC-7901细胞凋亡。结论:FOXQ1基因在胃癌细胞中呈高表达,SHH信号通路参与FOXQ1基因对胃癌SGC-7901细胞凋亡的诱导作用,通过上调Bax和Cleaved Caspase3蛋白表达来实现。

SHH信号通路在髓母细胞瘤治疗中的研究进展

髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)是小儿中枢系统常见的恶性肿瘤。SHH(sonic hedgehog signaling pathway)信号通路是小脑的发育形成过程中重要的信号通路,它可以调控神经细胞发育和增殖,维持小脑正常的功能结构。该通路异常激活会导致小脑细胞异常增殖而出现MB,是MB形成过程中最具有特异性通路之一。SHH信号通路的靶向抑制剂目前得到了广泛的研究,在许多与SHH信号通路相关的肿瘤治疗过程中取得了良好的治疗效果,但是这些靶向抑制还是存在耐药性和药物不良反应等问题。因此,本文就MB发病机制中的SHH信号通路和针对该信号通路靶向治疗做一综述。

Shh信号通路对结肠癌细胞EMT作用的研究

目的观察Shh信号通路活化及阻断后结肠癌细胞形态及上皮间质表型转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)相关标志物上皮型钙黏着蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达的改变,进一步探讨Shh信号通路对结肠癌细胞上皮间质表型转化(EMT)的作用。方法通过常规培养结肠癌细胞株HT-29,设为三组,分别是:培养液中加入PBS(对照组)、培养液中加入重组Shh配体(信号通路活化组)、培养液中加入Shh信号通路抑制剂KADD-cyclopamine(信号通路阻断组)。通过应用RT-PCR、Westen-blot试验来检测上皮间质转化标志物E-cadherin和Vimentin在m RNA水平及蛋白表达的变化。结果RT-PCR试验显示:与对照组相比较,活化组的Vimentin的m RNA表达量明显升高(P<0.05)、E-cadherin的表达量明显降低(P<0.05),信号活化组与阻断组之间的两种蛋白表达有差异且具有统计学意义(P<0.05);Westen-blot试验检测蛋白显示:激活Shh信号通路后,活化组结肠癌细胞E-cadherin蛋白表达减弱,蛋白vimentin表达增强,而阻断组结肠癌细胞E-cadherin蛋白表达增强,蛋白vimentin表达减弱,且两组相比较有统计学意义(P<0.05)。结论激活Shh信号通路能够使结肠癌细胞发生上皮间质转化,抑制其活化可以降低结肠癌细胞的转变作用,结肠癌的转移可能与EMT的发生密切相关。

白藜芦醇介导SHh信号通路在佐剂性关节炎大鼠肾脏损伤中的作用研究

目的探讨白藜芦醇（resveratol，RES）对佐剂性关节炎（AA）大鼠关节炎症及肾脏损伤的治疗效果及其分子机制。方法将56只SD大鼠随机分为空白组（n=8）、溶剂组（n=8）、AA模型组（n=10）、AA＋RES低剂量组[n=10，5mg／（kg·d）]，AA＋RES中剂量组[n=10，10mg／（kg·d）]，AA＋RES高剂量组[n=10，15mg／（kg·d）]。采用弗氏完全佐剂建立AA大鼠模型，通过足爪肿胀度测量、动物全身炎症反应和关节炎症评分的方法进行模型建立评价。各组大鼠肾脏生化功能改变采用生化法检测，Westemblot法检测各组大鼠肾脏SHh蛋白表达水平，实时定量PCR法染色检测各组大鼠肾脏Glil、Smo和PtchlmRNA表达情况。结果RES高剂量组的足爪肿胀度和关节评分明显低于模型组和溶剂组，生化检测发现RES能改善肾脏肌酐（cr）和尿素氮（BUN）的表达水平，Westernblot检测结果高剂量RES能够降低AA大鼠。肾脏组织SHh蛋白表达水平，实时定量PCR检测发现RES能够降低大鼠肾脏组织Glil、SmomRNA表达，升高PtchlmRNA表达。结论RES能够明显改善AA大鼠的关节炎症和肾脏损伤程度，其机制可能为下调SHh信号通路活性。

Shh信号通路在儿童急性淋巴细胞白血病中的活化及临床意义研究

目的 探讨Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的表达及意义。方法 采取RT-PCR法检测107例ALL患儿化疗前骨髓细胞Shh、Ptch1、Smo和Gli-1基因的表达情况,结合患儿危险度分级,探讨以上4个基因与疾病危险程度及早期疗效相关性,并以33例骨髓良性改变患儿作为对照组。结果 Shh、Smo和Gli-1基因在ALL初治组中的表达高于水平显著高于对照组(P<0.05),Ptch1在ALL初治组中的表达水平显著低于对照组(P<0.05);Smo和Gli-1基因表达水平与疾病危险程度正相关,且与早期治疗反应负相关;Shh和Ptch1基因表达水平与疾病危险程度及早期治疗反应均无相关性。结论 急性淋巴细胞白血病患儿Shh信号通路存在异常活化,靶向Shh信号通路的治疗有望成为新的方向。

半夏泻心汤调控Shh信号通路对BMSCs外泌体诱导的人胃癌细胞BGC-823增殖的影响

目的观察半夏泻心汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体诱导的人胃癌细胞BGC-823增殖的影响,探讨其相关作用机制。方法利用Transwell小室将BMSCs外泌体与BGC-823细胞进行非接触共培养,实验分为空白组、模型组、阳性对照组和半夏泻心汤高、中、低剂量组,荧光染料Dil标记BMSCs外泌体,激光共聚焦显微镜观察BGC-823细胞对BMSCs外泌体的摄取,计算平均光密度(MOD);实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;RT-qPCR检测Shh、Ptch1、Smo、Gli1及C-myc mRNA的表达。结果与空白组比较,模型组细胞内可见大量红色荧光标记,MOD值显著增加(P<0.05);模型组20~50 h细胞指数(CI)显著增加(P<0.05),G1、G2期细胞比例降低,S期细胞比例升高(P<0.05),Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,半夏泻心汤各剂量组红色荧光标记减弱,其中半夏泻心汤高、中剂量组MOD值明显减少(P<0.05),半夏泻心汤各剂量组20~50 h CI显著减少(P<0.05),G1、G2期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P<0.05),Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达显著降低(P<0.05)。结论半夏泻心汤可抑制BMSCs外泌体诱导的BGC-823细胞增殖,其机制可能与下调Shh、Smo、Ptch1、Gli1及C-myc mRNA表达,抑制Shh信号通路有关。

肾衰灵方作用于SHH信号通路对UUO大鼠肾间质纤维化的影响

目的探讨当代名医国医大师郑新经验方—肾衰灵方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的抑制作用。方法1.50只雄性SD大鼠随机分为五组:假手术组、模型组、肾衰灵方低剂量组、肾衰灵方中剂量组、肾衰灵方高剂量组。除假手术组,其余各组结扎单侧输尿管建立肾间质纤维化动物模型,肾衰灵方低中高剂量组予肾衰灵方(5、15、25 mg·kg-1)连续灌胃14天。检测各组大鼠血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),乳酸脱氢酶(LDH)。采用real-time PCR检测结缔生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)核酸水平,采用Masson染色方法检测肾组织观察肾小管和间质病理形态变化。2.根据结果选择肾衰灵中剂量组为治疗组,再将30只雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、肾衰灵方治疗组共3组。用Western blot方法检测音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Glioma related cancer gene homologous proteins 1,Gli1)、锌指转录因子(Snail Family Zinc Finger 1,Snail)蛋白的表达。结果与模型组相比,模型组和肾衰灵各剂量组大鼠血清SCr和BUN的表达水平均明显下调,其中肾衰灵中剂量组疗效最佳(P<0.05);Masson染色发现相较模型组,肾衰灵方各剂量组肾间质纤维化明显减轻,其中肾衰灵中剂量组疗效最佳(P<0.05);real-time PCR结果发现肾衰灵各剂量组CTGF核酸水平均较模型组下调,其中肾衰灵中剂量组核酸水平最低(P<0.05)。相较假手术组,模型组与肾衰灵方组SHH、Gli1、Snai1蛋白的表达均升高(P<0.05);与模型组相比,肾衰灵方组SHH、Gli1、Snai1蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型中,肾衰灵方可以通过抑制肾间质纤维化改善大鼠肾功能,其作用可能与其阻断SHH信号通路相关。