H9N2 AIV灭活疫苗免疫SPF鸡攻毒后肺组织免疫相关基因表达变化研究

[目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡,随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗,3周后以10~6 EID_(50)的病毒量进行攻毒,采集拭子、血清、气管、肺组织等样品,通过血凝抑制(HI)试验、RT-PCR、荧光定量PCR(qPCR)等方法检测血清中HI抗体滴度、肺脏流感病毒M基因拷贝数以及免疫相关基因CD4、CD8、GATA3、T-bet、IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ、Perforin、Granzyme、FasL、Fas等的表达量;并利用HE染色、免疫组织化学的方法观察气管、肺脏的病理变化及病毒特异性抗原NP蛋白的分布特征。[结果]HI试验结果显示,SPF鸡疫苗免疫后可产生较高的H9N2 AIV抗体效价。免疫保护试验和RT-PCR结果显示,SPF鸡疫苗免疫后攻毒仍能检测到机体排毒和流感病毒M基因在肺脏组织中的表达。HE染色和免疫组化结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够明显减轻SPF鸡气管和肺脏的病理损伤,降低气管、肺脏中的病毒载量。荧光定量PCR结果显示,接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够提高SPF鸡肺脏中Th1、Th2细胞因子分泌水平,促进穿孔素/颗粒酶途径相关基因表达进而增强肺脏中细胞毒性反应。[结论]H9N2疫苗免疫鸡感染H9病毒后虽然仍存在排毒现象,但其抗病毒免疫系统活跃、其主要器官病毒载量降低,建议按照流感疫苗免疫程序进行免疫接种,提高对流感的防控水平。

一株鸡传染性贫血病毒对不同日龄SPF鸡的致病性研究

为评价鸡传染性贫血病毒AV1550株的致病性,取1日龄、7日龄和14日龄SPF鸡分别经胸部肌肉注射不同病毒含量的病毒液,同时设置正常对照,隔离饲养观察21 d。感染后14 d采血测定红细胞压积,21 d统计死亡率、体重变化以及胸腺、骨髓、法氏囊病变情况并测定1日龄SPF鸡感染后不同组织中的病毒载量。结果表明,1日龄SPF鸡感染AV1550株后,表现出精神沉郁、增重减缓、贫血等明显的临床症状,死亡率为53.9%;死亡鸡或观察期结束时存活鸡剖检,可见胸腺萎缩,骨髓变成淡黄色;不同剂量感染后14 d,均能引起红细胞压积显著下降;21 d时,胸腺病毒载量最高,可达10^(6.7) copies/mg。7日龄SPF鸡感染后,出现增重减缓,高感染剂量(100000EID_(50))出现贫血,部分鸡出现胸腺萎缩和骨髓病变,但病变率低于30%。14日龄SPF鸡感染后,不引起明显临床症状。研究证实,CAV对SPF鸡的致病性具有明显的日龄依赖性,红细胞压积降低、骨髓病变、胸腺萎缩以及胸腺病毒载量测定可作为评价CAV致病的指标。

裂纹SPF鸡蛋修补方法的研究

选择正常蛋形的小裂纹蛋90枚,均分为3组,每组3个重复,每个重复10枚,分别是对照组、固体石蜡组和胶带组。结果表明,在受精率方面,固体石蜡组、胶带组、正常组之间无显著差异(P>0.05),但3组的受精率均显著高于对照组(P<0.05);死胚率方面,由高到低分别为对照组>固体石蜡组>胶带组>正常组,其中胶带组与正常组差异不显著(P>0.05),但显著低于固体石蜡组和对照组(P<0.05);孵化率方面,由高到低分别为正常组>胶带组>固体石蜡组>对照组,4组之间均有显著差异(P<0.05);健雏率方面,除对照组之外,固体石蜡组、胶带组、正常组之间差异不显著(P>0.05)。通过多个指标的比较,认为用胶带对裂纹SPF鸡蛋修补是比较好的处理方法,有较好的经济效益。

葡聚糖硫酸钠饲喂SPF鸡诱导肠道炎症的研究

为深入探讨肠道炎症对鸡生长发育、肠道组织结构及微生物菌群等方面的影响,试验利用1%和4%两种浓度的葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液饮水诱导鸡肠道炎症,建立无特定病原(SPF)鸡肠道炎症模型,通过测定体重、器官指数、盲肠微生物菌群结构、组织病理、炎性细胞因子表达水平及炎症标识物钙卫蛋白(CALP)和脂质运载蛋白(NGAL)含量等,综合评价不同浓度DSS诱导的鸡肠道炎症对其生理功能的影响。结果显示:与对照组相比,DSS4组极显著抑制鸡增重(P<0.01),阻止鸡免疫器官脾脏和法氏囊的发育,盲肠微生物菌群多样性和丰度均极显著改变(P<0.01),肠杆菌科(Enterobacteriaceae)占比达到74.39%,组织病理学检测显示十二指肠、空肠、回肠和盲肠组织结构均发生显著病变,脾脏炎性细胞因子相对mRNA表达测定显示白细胞介素1β(IL-1β)表达水平极显著升高(P<0.01),而趋化因子生长调节基因1(CxCli1)和趋化因子生长调节基因2(CxCli2)极显著降低(P<0.01),白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)含量未见显著变化(P>0.05),血清和盲肠内容物CALP和NGAL含量均极显著降低(P<0.01)。DSS1组对测定指标的影响相对较小,仅少数指标出现显著改变。试验结果表明,利用口服DSS成功建立了急性肠道炎症模型,并鉴定了肠道炎症对鸡生理功能的影响。

竹集成材-SPF复合正交胶合木的研发及性能评估

运用相同工艺分别制备足尺垂直型竹集成材-SPF复合CLT(简称V-BWCLT)与足尺水平型竹集成材-SPF复合CLT(简称H-BWCLT)。依据国内外相关标准对两种BWCLT的胶层剪切强度、胶合耐久性、抗弯弹性模量(MOE)、抗弯强度(MOR)和层间剪切强度进行了测试,并用三维非接触式应变测量系统(DIC)对抗弯和层间抗剪试验过程中的受力变形情况进行记录。结果表明:在相同制备工艺条件下,两种BWCLT平均胶层剪切强度接近,浸渍剥离率均可达到相关标准要求。V-BWCLT的平均MOE与MOR分别为7941 MPa和56.7 MPa,而H-BWCLT的平均MOE与MOR分别为10144 MPa和54.0 MPa,H-BWCLT比V-BWCLT具有更高的弯曲刚度,但两者MOR较为接近。对比SPF-CLT,两种BWCLT的抗弯强重比均有显著提高,上述研究和分析为新型竹木复合CLT的实际工程应用提供了设计参考与理论依据。

SPF鸡的主要垂直传播性病原体及其检测标准分析

无特定病原体(specific pathogen-free,SPF)鸡在禽病及疫苗研究中应用广泛。垂直传播性疾病以垂直传播的方式传递给雏鸡,降低雏鸡成活率、增加生产成本、给整个养殖行业带来巨大经济损失的同时,严重影响SPF鸡的培育与使用。因此,需要加强研究及管理人员对鸡垂直传播性疫病病原的认识,并制定出行之有效的监测措施。质量监测是保证SPF鸡质量的重要环节,其中病原检测是首要环节。在此基础上,应结合净化方式以及生物安全防控手段来培育合格的SPF鸡群。本文综述了包括病毒性病原、细菌性病原和支原体在内的鸡主要垂直传播性病原和这些病原的检测方法,比较美国企业标准和中国国家标准中有关SPF鸡微生物检测项目及方法的差异。结果分析显示,在两种标准中,垂直传播性病原大肠埃希菌、奇异变形杆菌以及沙门菌、禽白血病等垂直传播性疾病均未被列入SPF鸡微生物检测项目。而这些病原存在混合感染特征,一旦爆发,将严重影响鸡群健康。为生产更高质量的SPF鸡群,有必要将其列入必检项目。本文旨在帮助人们了解SPF鸡微生物监测的相关标准以及垂直传播性病原的危害和防控策略,为SPF鸡病原检测及净化提供参考。

不同周龄和性别的SPF级SD大鼠血液生理生化指标的测定与比较分析

目的探讨分析不同周龄和性别的SPF级SD大鼠血液生理生化指标。方法研究对象为SPF级SD大鼠80只,并随机将其分为4、12、24、48周龄4个实验组,每组内雌雄比例为1:1,所有SD大鼠均应用XFA6030型动物血液细胞分析仪对其血液生理指标展开分析,应用Beckman Coulter AU5800全自动生化分析仪对其血液生化指标展开分析。结果与12、24、48周龄SD大鼠相比较,4周龄的SD大鼠在WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT、PCT、BA#、BA%几方面具有较大差异,P<0.05,且各项指标达到峰值的时间均为24周,在雌雄的性别差异中,4周龄SD大鼠BA%具有差异;12、24周龄SD大鼠WBC、RBC具有差异;24周龄SD大鼠BA%具有差异;48周龄SD大鼠MCH、PCT具有差异,且所有差异P值均<0.05;与12、24、48周龄SD大鼠相比较,4周龄的SD大鼠在AST、CHOL、TP、GLU、CRE、ALT、ALP、BUN、TG几方面具有较大差异,P<0.05,在雌雄的性别差异中,4周龄SD大鼠CRE、ALP见具有差异;12周龄SD大鼠AST、CHOL、BUN具有差异;12周龄以及24周龄SD大鼠ALP具有差异,且所有差异P值均<0.05。结论在性别相同但周龄不同的SD大鼠中,其血液生理生化指标存在统计学差异,同样的,在同周龄但不同性别的SD大鼠中亦存在差异。

日粮添加胆汁酸对SPF蛋常规蛋品质、干物质、丙二醛和总胆固醇含量的影响

本试验旨在探究日粮添加胆汁酸对无特定病原(Specific pathogen free,SPF)蛋的常规蛋品质、干物质、丙二醛和总胆固醇含量的影响。采用单因素试验设计,将96只420日龄SPF鸡,随机分为2个处理,每个处理6个重复,每个重复8只鸡,对照组饲喂基础日粮,试验组在对照组基础上添加300 mg/kg胆汁酸,连续饲喂42 d后,每个重复,随机抽取4枚SPF蛋对常规蛋品质、干物质、丙二醛和总胆固醇含量进行测定。结果显示,日粮中添加300 mg/kg胆汁酸后蛋壳强度、蛋白高度和哈氏单位显著升高(P<0.05),蛋中干物质含量显著升高(P<0.05),蛋黄丙二醛和总胆固醇含量显著降低(P<0.05)。结果表明,300 mg/kg胆汁酸能够显著提高SPF蛋的蛋品质,减少蛋黄中的脂质氧化,有利于鸡蛋新鲜度的保持。本研究为胆汁酸在SPF蛋生产中的应用提供理论指导。

SPF级封闭群长爪沙鼠生长发育及繁殖性能研究

目的了解SPF级封闭群长爪沙鼠的生长发育及繁殖性能,进一步完善其生物学特性,为长爪沙鼠标准化研究及相关科研工作提供数据参考。方法从饲养在屏障环境中的SPF级封闭群长爪沙鼠群体中随机挑选44对繁殖性能良好的长爪沙鼠进行配种,记录并统计相关繁殖信息。随机挑选出生后的长爪沙鼠80只(雌雄各半),定期称重并绘制1~77日龄生长曲线。结果长爪沙鼠窝产仔数主要分布在4~9只,占总胎数的84.2%。胎间隔主要分布在24~35 d,占总胎数的72.1%。初产日龄主要分布在82~134 d,占总雌鼠量的77%。离乳率为100%的胎数占总胎数的79%。结论屏障环境中饲养的SPF级封闭群长爪沙鼠繁殖性能良好,母性良好且产后即可交配受孕。长爪沙鼠最适离乳日龄为25日龄。25~42日龄长爪沙鼠体质量增长最快。42~77日龄雄性长爪沙鼠体质量显著大于雌性。

SPF级屏障环境设施虚拟仿真实验教学平台建设与应用

SPF级屏障环境设施具有环境标准严、污染风险高、流程不可逆、运行成本大等特点,无法有效满足大规模现场实验教学,很大程度上制约了学生创新实践能力的培养和教师实验教学效果的提升.针对以上教学痛点和难点,运用Unity3D虚拟仿真技术构建沉浸式、游戏式、交互式的实验教学平台,学生能够全过程、深层次、多角度地参与实验教学,在实验教学培训、创新人才培养、社会开放服务等方面取得了阶段性应用成效.

SPF级比格犬在生命科学研究中的应用

比格犬作为科学研究工作中常用的实验动物之一,具有生物学性能稳定的特点,适用于医学各学科的研究。比格犬器官功能一致,血液循环系统发达,差异性小,是医学界和生物学界公认的最标准、最理想的实验用犬,也是安全评价的首选犬种,在药品、疫苗开发及人畜共患病的研究中得到广泛应用。本文讨论了SPF级比格犬在生命科学中相关的应用,为推进SPF级比格犬模型的建立以及在基础医学等领域的研究提供新的思路。

基于加权混合SPF主动轮廓的SAR图像水陆分割

针对现有主动轮廓模型(Active Contour Model,ACM)无法进行准确高效的SAR(Synthetic Aperture Radar)图像水陆分割的难题,提出一种基于加权混合符号压力(Signed Pressure Force,SPF)主动轮廓的新模型.该模型将中值拟合中心和均值拟合中心结合起来,建立新的混合符号压力函数,以抑制干扰边缘的影响.通过设计基于绝对中位差的自适应权重,实现自动调节内外拟合中心的比例系数,以更合理地描述灰度差异.此外,计算平滑后图像梯度信息构建边缘引导函数并引入到SPF函数中,以进一步提高分割性能和演化效率.在实际SAR图像上进行分割实验,结果表明:与相关实验模型相比,提出模型在保持高效的同时能获得更加准确的分割结果,其中Dice相似系数(Dice Similarity Coefficient,DSC)至少提高6%.

不同月龄SPF级与普通级比格犬血常规指标的比较

目的研究不同月龄不同级别比格犬血常规指标的动态变化。方法采集2月龄、6月龄和9月龄普通级和SPF级比格犬的血液样本,分析测定各组样本的血液生理指标数据。结果6月龄SPF级比格犬的平均红细胞血红蛋白量和白细胞计数低于普通级,差异有统计学意义(P<0.05);9月龄SPF级比格犬的平均红细胞体积、平均红细胞血红蛋白量以及平均血小板体积低于普通级,差异有统计学意义(P<0.05)。随着月龄的增加,同级别比格犬的血常规指标趋于稳定。结论不同等级环境对比格犬的血液指标具有一定的影响。

不同毒力传染性支气管炎病毒诱导SPF鸡炎症反应的免疫机制

以specific pathogen-free(SPF)鸡为研究对象,通过滴鼻点眼方式感染传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)强毒株(CK/CH/LDL/140520)和IBV弱毒株(γCoV/ck/China/I0718/17)。分别在感染后12、36 h和3、7、14 d,采集法氏囊、脾脏、肾脏和气管,运用实时荧光定量PCR法,检测感染不同毒力IBV后,SPF鸡各脏器组织中免疫相关因子表达差异,初步探讨SPF鸡对不同毒力IBV免疫反应机制。结果表明,IBV弱毒株感染早期主要上调Toll样受体15(Toll-like receptors 15,TLR15)基因表达水平,提高白细胞介素(Interleukin,IL-1β)、IL-8基因表达量。法氏囊是介导启动获得性免疫反应的主要器官;脾脏是介导调控获得性免疫反应的主要器官,IBV强毒株在感染后期持续诱导提高TLR7、TLR15、TLR21基因和IL-6基因表达水平。可知,不同毒力IBV诱导SPF鸡炎症反应的免疫活化机制及介导调控获得性免疫反应的器官存在一定差异,为进一步揭示IBV强弱毒株致病性差异及诱导宿主不同免疫反应激活机理提供新的参考依据。

关于SPF鸭产业发展的思考与建议

无特定病原(Specificpathogenfree,SPF)鸭和鸭胚是为农业研究而计划生产的原材料,对鸭生产、生命科学和生物制品研发具有重要意义。本文综述了我国SPF鸭目前的发展现状及存在的若干问题,并简要提出了相应的建议。

SPF级动物实验室运行管理的总结与探讨

本文以滨州医学院SPF级动物实验室为例,分别从管理制度与SOP制定、屏障系统运行、日常管理等方面记录了SPF级动物实验室的运行及管理模式,以期为高等院校及科研单位SPF级动物实验室的日常管理和运行提供相应的参考。

2017~2021年陕西省实验动物使用单位SPF级大、小鼠质量监测结果分析与评估

目的分析2017~2021年陕西省部分实验动物使用单位无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级大、小鼠微生物和寄生虫质量检测结果,了解各单位大、小鼠病原微生物学质量状况,为实验动物质量管理与监测提供参考依据。方法按照现行国家标准GB 14922.2-2011、GB/T 14926-2001和GB/T 14926.21-2008,由陕西省实验动物质量监督检测中心对大、小鼠进行病原微生物和寄生虫抽样检测并分析质量状况。结果2017年~2021年累计抽检109家单位的小鼠2549只,45家单位的大鼠503只。检测结果显示,小鼠体外寄生虫(螨虫)检出率由5.26%降为0.15%,肠道鞭毛虫由10.53%降为0.45%,肠道蠕虫由0.40%升至2.39%,沙门菌由2.78%降至无检出,泰泽病原体抗体阳性率由1.38%降至无检出;大鼠体外寄生虫(螨虫)检出率由7.07%降至无检出;肠道鞭毛虫由11.50%降为0.83%,蠕虫由3.79%升至7.50%,金黄色葡萄球菌由1.77%降至无检出。小鼠病毒血清抗体阳性率,2017年检出小鼠肝炎病毒(4.71%)、仙台病毒(1.39%)和小鼠细小病毒(2.22%),2021年出小鼠肝炎病毒(0.30%)和仙台病毒(0.15%),小鼠肺炎病毒阳性率则由1.11%升至2.39%,小鼠呼肠孤病毒Ⅲ型由0.17%升至0.45%。大鼠仙台病毒阳性率由7.07%降为0.83%,大鼠细小病毒和大鼠冠状病毒仅2017年和2018年在个别单位有检出,大鼠肺炎病毒则由0.88%增长为10.00%。结论近5年的检测结果表明,陕西省实验动物使用单位的大、小鼠病原微生物质量逐年提升,但仍存在一定问题,应持续采取严格的生物安全防控措施,加强动物实验过程,确保各单位在实验周期内动物质量合格。

SPF级实验动物屏障环境设施技术指标的检测及分析

目的:对皖南医学院SPF级实验动物屏障环境设施技术指标进行检测及分析,以确保达到保障实验动物和动物实验质量的目的。方法:以GB14925-2010为检测依据和综合判定原则,选用专业检测仪器进行屏障环境相关指标采集和评判。结果:屏障环境设施各项技术指标,如温度、相对湿度、噪声、工作照度、动物照度、换气次数、气流速度、静压差、空气洁净度、沉降菌、氨浓度等均符合国家标准。结论:皖南医学院SPF级实验动物屏障环境设施可以有力保障实验动物和动物实验的质量,为科学研究提供高品质的实验材料,确保实验结果的科学性、准确性与可重复性。

BWEL-SPF鸡基因组内源禽白血病病毒基因插入位点识别和验证

为了探究生物信息学软件识别禽白血病病毒E(Avian leukosis virus subgroup E, ALVE)基因插入位点的准确性,试验采用obsERVer流程和位点特异性PCR方法,测定了3只BWEL-SPF鸡全基因组测序数据中的ALVE基因插入位点,并验证了obsERVer流程预测的准确性。结果表明:在3只BWEL-SPF鸡中共识别到4个ALVE基因插入位点,分别为ALVE1、ALVE3、ALVE9和ALVE15;插入位点上下游序列存在规律性,是由6个碱基的基序构成的重复序列;并且这4个插入位点均可以通过位点特异性PCR方法验证,吻合率为100%。说明obsERVer流程可以准确预测测序数据中的ALVE基因插入位点,在BWEL-SPF鸡中存在多个ALVE基因插入位点。

SPF动物房消毒与空调系统设计中相关问题探讨

在简要介绍SPF动物房消毒工艺的基础上,指出了从消毒的需求角度出发,需要进一步完善空调系统的方案设计。结合设计中遇到的工程实例,阐述如何实现既满足系统中部分动物房需要进行单独消毒,又不影响同一空调系统中其他动物房间的温湿度及净化级别、压差的要求。同时对未来集中消毒消毒、空调系统以及工艺系统等系统化、集成化和智能化提出了粗浅的想法。